Набор реагентов иммуноферментного выявления антигена ротавируса человека

Обновлено: 28.03.2024

Тест-система обладает способностью выявлять антигены коксиелл Бернета (Ку-антиген) за счет их связывания с поликлональными антителами, сорбированными на поверхности лунок стрипов. Образующийся комплекс антитело-антиген выявляется с помощью пероксидазного коньюгата на основе поликлональных антител по появлению желтого окрашивания на этапе ферментативного превращения субстратного раствора.

Несмотря на то, что входящие в тест-систему контрольные образцы (К+ и К-) инактивированы, с системой следует обращаться как с потенциально инфекционным материалом:

  • работать в резиновых перчатках;
  • не пипетировать ртом;
  • все использованные материалы подвергать обработке дезинфицирующими растворами (6 % раствором перекиси водорода или монохлорамина);
  • использованные наконечники обрабатывать 20 % раствором этилового спирта.

Назначение

Тест-система предназначена для выявления Ку-антигена в объектах внешней среды, (смывы) и материалах биологического происхождения (органы животных, клещи).

Состав набора

Подготовка реагентов

  1. Все растворы и реагенты необходимо выдержать перед началом работы при температуре (18 — 25) o С в течение 30 мин. Иммуноферментный анализ (ИФА) рекомендуется проводить с использованием новых, не подвергавшихся обработке наконечников для пипеток.
  2. Растворы каждого компонента тест-системы и каждого исследуемого образца необходимо брать с помощью индивидуального наконечника для пипеток.
  3. В зависимости от числа исследуемых проб отбирают необходимое количество стрипов. Остальные стрипы вынимают из рамки-держателя и хранят в закрытом полиэтиленовом пакете с молнией при температуре (4 — 6) °С.
  4. Материал для исследования. а) Внутренние органы животных, клещей растирают в стерильной фарфоровой ступке и готовят 25 % суспензию в 0,9 % растворе хлорида натрия. Полученную суспензию подвергают трехкратной процедуре замораживания-оттаивания, инактивируют в водяной бане при температуре 100 °С в течение 20 мин. и центрифугируют при 1000 об./мин. в течение 15 мин. Дальнейшее исследование проводят с супернатантом. б) Смывы берут ватным тампоном, смоченным 0,9 % раствором хлорида натрия, с поверхности не менее 200 –– 300 см 2 . Тампон помещают в пробирку, содержащую 2 –– 5 мл 0,9 % раствора хлорида натрия. Перед исследованием тампон тщательно отжимают, содержимое пробирки инактивируют на водяной бане при температуре 100 °С в течение 20 мин.
  5. Раствор ФСРТ. Для получения рабочего раствора содержимое флакона с концентратом ФСРТ доводят до 500 мл дистиллированной водой. Раствор хранят до 4 мес. при температуре (4 — 6) o С.
  6. Раствор конъюгата. Концентрат конъюгата разводят на растворе РРК 1 : 80. Необходимый объем раствора конъюгата определяется числом используемых стрипов (см. пример 1). Хранят до 4 ч при температуре (4 — 6) o С.
  7. Субстратный раствор. Готовят перед проведением ферментативной реакции. Необходимый объем раствора субстрата определяется числом используемых стрипов (см. пример 1). Хранению не подлежит.

Пример № 1. Таблица расхода компонентов тест-системы.

Количество одновременно используемых стрипов Коньюгат (мкл) Разводящий буфер для коньюгата (РРК) (мл) ТМБ (мл) ЦБП (мл)
1 15 1,2 0,2 0,8
2 30 2,4 0,4 1,6
3 40 3,2 0,6 2,4
4 50 4,0 0,8 3,2
5 60 4,8 1,0 4,0
6 70 5,6 1,2 4,8
7 80 6,4 1,4 5,6
8 90 7,2 1,6 6,4
9 100 8,0 1,8 7,2
10 110 8,8 2,0 8,0
11 120 9,6 2,2 8,8
12 130 10,4 2,4 9,6

Проведение иммуноферментного анализа

Учет и интерпретация результатов ИФА

При правильном проведении всех стадий анализа содержимое лунок с контролем субстрата и К- должно оставаться БЕСЦВЕТНЫМ или БЛЕДНО-ЖЕЛТЫМ, а содержимое лунок с К+ должно приобрести ЖЕЛТУЮ окраску.

Визуальный учет

Исследуемый образец оценивается как положительный, если имеются отчетливые различия в интенсивности его окрашивания по сравнению с растворами в лунках с контролем субстрата и К-.

Инструментальный учет

Измерение оптической плотности (ОП) проводится при длине волны 450 нм непосредственно в лунках планшета с помощью вертикального фотометра. В качестве кюветы сравнения служит лунка А1 с контролем субстрата. При правильном проведении анализа среднее значение в лунках с К+ должно быть не менее (0,60 ± 0,10) единиц ОП, а в лунках с К- – не должно превышать (0,15 ± 0,05) единиц ОП.

Оценка результатов производится следующим образом: если отношение (А) среднего значения ОП (ОПсред) исследуемого образца к ОПсред К- больше или равно 3 (А ≥ 3), то этот результат следует оценивать как положительный, если отношение ОПсред исследуемого образца к ОПсред К- меньше 3 (А < 3), то этот результат следует оценивать как отрицательный. Положительный результат ИФА свидетельствует о наличии антигенов коксиелл Бернета в исследуемом материале, отрицательный – о том, что данным методом антигены не обнаружены.

Пример № 2.

Образец ОП при 450 нм Среднее значение ОП при 450 нм Значение А (ОПсред / ОПсред К-)
К- 0,17 0,18
К- 0,19
К+ 0,92 0,90
К+ 0,88
Проба 1 0,98 0,96 0,96/0,18 = 5,3
Проба 1 0,94
Проба 2 0,24 0,22 0,22/0,18 = 1,2
Проба 2 0,20

Проба 1: А = 0,96/0,18 = 5,3 – результат следует оценивать как положительный.

Проба 2: А = 0,22/0,18 = 1,2 – результат следует оценивать как отрицательный.

Форма выпуска

Тест-систему выпускают в виде комплекта, упакованного в коробку. Один комплект рассчитан на проведение от 1 до 96 анализов, включая контроли.

Условия хранения и транспортировки

Комплект тест-системы хранить при температуре (4 — 6) o С. Транспортировку осуществлять всеми видами крытого транспорта при температуре не выше 25 о С не более 2 недель.

Срок годности тест-системы — 6 мес. со дня выпуска.

При нарушении условий хранения, транспортировки и схемы постановки ИФА рекламации не принимаются.

Инфекционных заболеваний - Аденовирус/Ротавирус, ИХ экспресс-тест, 20 тест-кассет - Аденовирус/Ротавирус, ИХ экспресс-тест, 20 тест-кассет

Набор реагентов RIDA Quick Rotavirus/Adenovirus Combi для одностадийного иммунохроматографического теста включает одноразовые пипетки, буфер для экстракции и тестовые устройства на 20 определений. В основе метода моноклональные специфичные антитела, связанные с окрашенными латексными частицами к ротавирусам и к аденовирусам и специфичные антитела к патогену, прикрепленные к мембране. Если образец содержит антигены, то происходит образование комплекса антигенов с латексными частицами через специфические антитела; этот комплекс при прохождении через мембрану связывается со специфическими антителами, закрепленными в тестовом стрипе. В зависимости от присутствия антигена в образце появляются характерные окрашенные полосы

Функциональное назначение

Диагностикум in vitro позволяет за 5 минут провести качественное раздельное определение присутствия аденовируса и ротавируса в образцах кала. Чувствительность составляет 100%, специфичность - 99%.
Оценка и интерпретация результата теста происходит через 5 минут после внесения супернатанта суспензии образца в тестовое окно кассеты. Синяя поперечная линия одновременно с зеленой контрольной свидетельствует о положительном результате тестирования на аденовирус. При появлении с зеленой красной полосы - положительный результат на ротавирус. В случае двойной инфекции появляются все три полосы - синяя, красная, зеленая

Технические характеристики

*Набор реагентов, предназначенный для качественного определения антигенов аденовируса и ротавируса в клиническом образце.
Метод анализа: иммунохроматография.
Количество определений в наборе: не менее 20.
Назначение: для ручной постановки с визуальным учетом результата.
Тип образца: кал – единственный тип образца, в котором определение антигенов аденовируса и ротавируса имеет диагностическое значение при неинвазивной диагностике.
Комплектация набора содержит необходимые расходные материалы для подготовки образца пациента и выполнения анализа: буфер для образца, одноразовые пипетки для образца в количестве, эквивалентном количеству определений: наличие.
Условия хранения (температурный диапазон): +2. 30°C, избегать замораживания.
Требуемое минимальное количество биоматериала: не более 50 мг.
Время анализа: не более 5 мин.
Наличие внутреннего контроля правильности проведения процедуры анализа для каждого теста (Исключает возможность получения неверного результата в результате технической ошибки).
Срок годности: 2 года с даты производства, указан на этикетке.
Наличие регистрационного удостоверения МЗ РФ

Вирусные инфекции - Ротавирус, определение антигенов в кале, 96х01 - Ротавирус, определение антигенов в кале, 96х01

В иммуноферментном тесте RIDASCREEN® Rotavirus используют принцип сэндвич-метода. На поверхности лунок микропланшета сорбированы моноклональные антитела к капсидному белку-продукту шестого вирусного гена (VP6) ротавирусов, который является группоспецифичным антигеном для всех известных патогенных для человека ротавирусов. В лунку вносят аликвоту тестируемой суспензии кала и инкубируют одновременно с другими моноклональными антителами к ротавирусу, конъюгированными с пероксидазой хрена. В результате инкубации образуется сэндвич-комплекс, в котором антигены ротавируса находятся между твердой фазой лунок и антителами, конъюгированными с ферментом. Несвязавшиеся меченные ферментом антитела в дальнейшем удаляют промывкой. В лунки вносят субстрат. Если тест положительный, фермент, связавшийся с лунками, превращает бесцветный субстрат в окрашенный в синий цвет продукт. Добавление стоп-реагента меняет окраску с синего цвета на желтый. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству антигена ротавируса, присутствующего в образце

Функциональное назначение

Диагностическое качественного определения in vitro антигена ротавируса в образцах кала методом иммуноферментного анализа.
Ротавирус является наиболее частой причиной небактериальных гастероэнтеритов у детей и взрослых, передается орально-фекальным путем, вызывает внутрибольничные вспышки заболеваний.
Первым методом, который успешно использовался для обнаружения ротавирусов в кале и биоптатах кишечника пациентов, была электронная микроскопия, которая до сих пор используется в качестве референтного метода исследования. Идентификация ротавирусов in vitro после изолирования в культурах клеток – трудоемкий процесс, требующий много времени. Серологический анализ может только дополнительно свидетельствовать о диагнозе ротавирусного гастроэнтерита, так как антитела класса IgM можно обнаружить самое раннее через 5 дней после появления клинических симптомов, что является ограничением данного метода. Набор ИФА RIDAScreen® Rotavirus представляет собой простой и высоко чувствительный тест для раннего и надежного обнаружения антигенов ротавируса

Технические характеристики

Регистрационное удостоверение № РЗН 2019/8718 от 06 августа 2019 года.

Назначение

Потенциальными потребителями набора реагентов являются специалисты учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (центры гигиены и эпидемиологии в субъектах Российской Федерации, противочумные учреждения, научные организации, санитарно-эпидемиологические службы министерств и ведомств), а также специалисты медицинских учреждений, имеющие специальность врача клинической лабораторной диагностики или биолога согласно требованиям Приказов Минздравсоцразвития №415н от 7.07.2009 г. и №541н от 23.07.2010 г.

Состав набора

Набор рассчитан на исследование 93 образцов сывороток крови в варианте скрининга, включая контроли (табл. № 1).

Таблица № 1. Состав набора.

Наименование реагента Описание Количество в наборе
Сыворотка крови, содержащая IgG-антитела к коксиеллам Бернета (К+) Прозрачная жидкость красного цвета 1,2 мл – 1 пр.
Сыворотка крови, не содержащая IgG-антитела к коксиеллам Бернета (К–) Прозрачная жидкость зелёного цвета 1,2 мл – 1 пр.
Концентрат моноклональных антител к IgG человека, меченных пероксидазой хрена (концентрат конъюгата) Прозрачная жидкость синего цвета 0,6 мл – 1 пр.
Фосфатно-солевой буферный раствор с твином (ФСРТ, концентрат) Прозрачная бесцветная жидкость 20 мл – 1 фл.
Цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБП) Прозрачная бесцветная жидкость 10 мл – 1 фл.
Раствор для разведения конъюгата (РРК) Прозрачная бесцветная жидкость 11 мл – 1 фл.
Раствор для разведения исследуемых проб (РИП) Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета 10 мл – 2 фл.
Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) Прозрачная жидкость слегка голубоватого цвета 2,5 мл – 1 фл.
Раствор серной кислоты (Стоп-реагент) Прозрачная бесцветная жидкость 5 мл – 1 фл.
Иммуносорбент 96-луночный планшет, цельный или разборный с прозрачными лунками, с иммобилизованными антигенами коксиелл Бернета 1 шт.
Хлорид натрия Кристаллы белого цвета 10 г – 1 уп.

Анализируемые образцы

Исследуемые образцы сыворотки крови хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 3 суток от момента взятия крови. Допускается хранение сыворотки в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 ºС не более 1 года. Перед использованием образцы размораживают при температуре от 16 до 25 ºС и перемешивают встряхиванием. Образцы проб сывороток, содержащие агрегаты и осадок, необходимо осветлять центрифугированием 10 мин. при 6000 об./мин.

Не допускается использование исследуемого материала, прошедшего термообработку, консервированного азидом натрия, с выраженным гемолизом, гиперлипидемией и бактериальным проростом ввиду возможной интерференции гемоглобина, липидов и бактериальных продуктов с коксиеллезными антителами, что может привести к ложноположительным результатам. Обязательным условием является разбавление анализируемой сыворотки перед использованием в 400 раз, что гарантирует нивелирование действия возможных интерферентов, присутствующих в следовых количествах.

Повторное замораживание сыворотки не допускается.

Проведение анализа

Подготовка сывороток

Провести предварительное разведение (1:20), смешав 5 мкл исследуемой сыворотки с 95 мкл РИП (разведение – 1:20). Для этого используют дополнительный 96-луночный планшет. В случае необходимости титрования сывороток разводить их раствором РИП с шагом 2. Разведённые сыворотки хранению не подлежат.

Подготовка раствора ФСРТ

Для получения рабочего раствора ФСРТ содержимое флакона с концентратом ФСРТ перенести в мерную колбу ёмкостью 500 мл и довести объём до метки дистиллированной водой. Перелить содержимое колбы в стакан, добавить содержимое пакета с хлоридом натрия и перемешивать до полного растворения последнего. Полученный раствор следует хранить не более 5 суток при температуре от 16 до 25 ºС и не более 30 суток при температуре от 2 до 8 ºС.

Подготовка раствора конъюгата

Концентрат конъюгата развести на растворе РРК 1:20. Необходимый объём раствора конъюгата определяется числом используемых стрипов (см. табл. № 2). Полученный раствор следует хранить не более 4 ч при температуре 4 — 6 °С.

Подготовка субстратного раствора

В зависимости от количества используемых стрипов готовят необходимый объем субстратного раствора путем смешивания соответствующих объемов реагента ТМБ и ЦБП перед проведением ферментативной реакции. Полученный субстратный раствор должен оставаться бесцветным или слегка голубоватым. Необходимый объём раствора субстрата определяется числом используемых стрипов (табл. № 2). Полученный субстратный раствор хранению не подлежит.

Таблица № 2. Расход компонентов тест-системы.

Количество стрипов Концентрат конъюгата (мл) РРК (мл) ТМБ (мл) ЦБП (мл)
1 0,05 0,95 0,05 0,95
2 0,10 1,90 0,10 1,90
3 0,13 2,47 0,13 2,47
4 0,17 3,23 0,17 3,23
5 0,21 3,99 0,21 3,99
6 0,25 4,75 0,25 4,75
7 0,29 5,51 0,29 5,51
8 0,33 6,27 0,33 6,27
9 0,37 7,03 0,37 7,03
10 0,44 8,37 0,44 8,37
11 0,46 8,74 0,46 8,74
12 0,50 9,50 0,50 9,50

Проведение иммуноферментного анализа

Регидратация сорбированного Ку-антигена. Перед использованием иммуносорбент промыть раствором ФСРТ: в лунки внести по 250 мкл раствора ФСРТ и выдержать в течение 5 мин. при температуре 20 ± 2 °С. Затем раствор из лунок удалить с помощью автоматического промывателя (вошера) или вытряхнуть.

Одну из лунок (А1) оставить незаполненной в качестве контроля субстрата, другую (В1) оставить незаполненной для контроля конъюгата, в две лунки (А2 и В2) внести по 100 мкл раствора К+, в две другие (А3 и В3) – по 100 мкл раствора К–. В остальные лунки внести по 95 мкл раствора ФСРТ и по 5 мкл предварительно разведённой в РИП в 20 раз исследуемой сыворотки. Таким образом, исследуемая сыворотка в лунке разбавляется, в конечном счёте, в 400 раз. Планшет закрыть крышкой и выдержать во влажной камере при температуре 37 ± 1 °С в течение 1 ч. После инкубации содержимое лунок удалить автоматическим отсасывателем в сосуд, заполненный до половины 6 % раствором перекиси водорода, затем лунки промыть, внося в каждую не менее 250 мкл раствора ФСРТ и удаляя раствор автоматическим отсасывателем. Промывать 3 раза. После последней промывки удалить остаточную влагу постукиванием перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.

Связывание конъюгата. Во все лунки, за исключением А1, внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Планшет закрыть крышкой или поместить во влажный полиэтиленовый пакет и инкубировать при температуре 37 ± 1 °С в течение 1 ч во влажной камере. Затем содержимое лунок удалить автоматическим отсасывателем и промыть 5 раз.

Проведение ферментативной реакции. Перед проведением ферментативной реакции планшет промыть дистиллированной водой для удаления остатков ФСРТ. Для этого во все лунки внести по 250 мкл дистиллированной воды и выдержать 5 мин. при температуре 20 ± 2 °С, затем воду удалить автоматическим отсасывателем. Во все лунки планшета внести по 100 мкл субстратного раствора. Планшет поместить в защищенное от света место и выдержать 20 ± 2 мин. при 15 – 25 °С.

Остановка ферментативной реакции. Во все лунки внести по 50 мкл Стоп-реагента.

Учет и интерпретация результатов

Оценка результатов производится следующим образом. Если отношение среднего значения ОП (ОПср) исследуемой сыворотки к ОПср К– ≥ 3, и при этом ОПср исследуемой сыворотки имеет значение выше 0,50 о.е., то этот результат следует оценивать как положительный, и сыворотка содержит антитела класса IgG к антигену коксиелл Бернета. Если отношение ОПср исследуемой сыворотки к ОПср К– меньше 3 или ОПср исследуемой сыворотки ≤ 0,50 о.е., то этот результат следует оценивать как отрицательный, и сыворотка не содержит антител класса IgG к антигену коксиелл Бернета.

Положительный результат ИФА, то есть выявление антител к C . burnetii , может свидетельствовать как о текущем заболевании Ку-лихорадкой, так и об инфицированности (или иммунизации) C . burnetii в прошлом.

Для дифференциации положительных результатов ИФА анамнестического характера от текущего заболевания следует сравнить титры сывороточных антител к коксиеллезным антигенам в динамике болезни с интервалом 10 – 12 дней в ранний период её клинических проявлений.

Титром антител считают наибольшее разведение сыворотки, при котором результаты ИФА оцениваются как положительные. Нарастание титров в 4 и более раз подтверждает наличие текущей коксиеллёзной инфекции. В случае отсутствия возможности исследования парных сывороток, обнаружение коксиеллёзных антител при значительных разведениях сыворотки (1:3200 и выше) может свидетельствовать в пользу недавно перенесённой Ку-лихорадки.

Для постановки окончательного диагноза Ку-лихорадки необходим комплекс серологических, клинических и эпидемиологических данных.

Условия хранения и эксплуатации

Хранение

Набор ИФА-анти-Ку-G следует хранить в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 °С в течение всего срока годности. Допускается кратковременное (до 10 суток) хранение и транспортирование набора реагентов при температуре до 25 °С.

В случае дробного использования (независимо от кратности) после вскрытия первичной упаковки компоненты набора необходимо хранить следующим образом:

При необходимости возможно использование компонентов ЦБП, ТМБ, РРК, РИП, Стоп-реагент из других серий набора реагентов.

Срок годности набора реагентов

Гарантийный срок годности составляет 6 месяцев с даты утверждения ОБТК и указан на этикетке набора реагентов. По истечению срока годности набор реагентов использованию не подлежит.


Заказная позиция Фасовка: 12х8 шт. Регистрационное удостоверение: ФСР 2012/13864 Сертификат/декларация соответствия: Не подлежит обязательной сертификации Класс опасности: Не опасный Транспортировка при: +2°С +8°С Условия хранения: 2-8°С

Заполните форму

быстрого заказа

Спасибо за заявку!


 ОМБ - ваш ориентир в море лабораторной диагностики

 хрю-хрю

7 Российский конгресс лабораторной медицины. Выставка

9 мая

II Форум по преаналитике

Urilyzer 100 Pro

Автоматический анализатор ADVIA Centaur XP

Автоматический анализатор IMMULITE 1000

Гематологический анализатор Sysmex XN-2000

Ротор на 24 гелевые карты (Head 24 cards) (при необходимости)

Ротор на два штатива (Head 2 racks) (при необходимости)

Центрифуга лабораторная настольная ID-CENTRIFUGE L

Порядок взятия венозной крови и новые стандарты

Порядок взятия венозной крови и новые стандарты

В последнее время к нам часто поступают запросы о разъяснении порядка взятия пробирок при венепункции. Для изучения данного вопроса было рассмотрено..

Гемостаз: подборка самых интересных записей вебинаров

Гемостаз: подборка самых интересных записей вебинаров

Преаналитика: подборка самых интересных записей вебинаров

Преаналитика: подборка самых интересных записей вебинаров

Контаминация культуры крови у госпитализированных детей: опыт одного учреждения

Контаминация культуры крови у госпитализированных детей: опыт одного учреждения

Целью данного исследования было определение уровня контаминации гемокультур, а также – выявление факторов риска, связанных с контаминацией у детей..

Профилактика гликолиза и обмена ионами

Профилактика гликолиза и обмена ионами

Оказавшись вне кровеносного русла, кровь подвергается воздействию времени, температуры, света и других естественных факторов, которые влияют на нее вне кровеносной системы..

Читайте также: