Национальная лаборатория диагностики полиомиелита

Обновлено: 27.03.2024

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП)

1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (О.Е.Иванова, Т.П.Еремеева, С.Г.Дроздов, М.И.Михайлов, О.Ю.Байкова, О.В.Юрашко); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Ф.Лазикова, Е.Б.Ежлова); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.В.Воронцова, А.А.Ясинский, О.П.Чернявская) с учетом замечаний и предложений ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в г.Москве, Ставропольском, Хабаровском краях, Омской, Свердловской областях; Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. N 2).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 28 июля 2008 г.

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 сентября 2008 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (далее - Роспотребнадзор), осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за полиомиелитом, острыми вялыми параличами в рамках Национального плана действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения, сотрудниками научно-исследовательских институтов и других заинтересованных организаций.

1.2. В методических указаниях определены требования к порядку сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП) в целях установления этиологических агентов заболеваний, а также изучения циркуляции полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов среди населения.

2. Общие положения

2.1. Вирусологические исследования материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (далее - ПОЛИО/ОВП) на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы (далее - НПЭВ) являются одним из важнейших элементов системы эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

2.2. Все процедуры по сбору, транспортированию, подготовке к вирусологическому исследованию материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляются в соответствии с требованиями нормативных и методических документов (прилож.1).

2.3. Выполнение требований настоящих методических указаний направлено на совершенствование эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

3. Организация вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

3.1. Забор материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом ОВП проводят в лечебно-профилактических организациях (далее - ЛПО) в установленном порядке в соответствии с нормативными и методическими документами.

3.2. Вирусологические исследования материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляют: Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (далее - НЦ), вирусологические лаборатории региональных центров эпидемиологического надзора за полиомиелитом и ОВП в г.Москве, Хабаровском, Ставропольском краях, Свердловской, Омской областях, Санкт-Петербургском НИИЭМ им. Пастера (далее - РЦ).

3.3. Вирусологическому исследованию в РЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего (после 14 дня с момента выявления паралича), неполного (1 проба стула) обследования больного (по одной пробе, не более 5 детей);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП (по одной пробе, не более 5 контактных);

парные сыворотки крови больных с подозрением на полиомиелит или больных, отнесенных к приоритетным "горячим" случаям ОВП (прилож.2). Сыворотки могут быть доставлены и исследованы в НЦ (по согласованию).

3.4. Вирусологическому исследованию в НЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание независимо от возраста (две пробы);

пробы фекалий от больных детей, отнесенных к приоритетным ("горячим") случаям ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к приоритетному ("горячему") случаю (одна проба);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к "горячему" случаю (по одной пробе, не более 5 контактных);

пробы фекалий от больных вакциноассоциированным полиомиелитом, собранные повторно на 60-й и 90-й день от начала заболевания (по две пробы). В случае получения положительного вирусологического результата проводят повторный отбор проб для последующего исследования (по согласованию с НЦ);

материалы от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего, неполного обследования больного, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты).

3.5. Результаты вирусологических исследований, идентификации и внутритиповой дифференциации сообщаются в организации здравоохранения, органы и учреждения Роспотребнадзора, направившие материалы, а также в установленном порядке в НЦ, РЦ, Координационный центр ликвидации полиомиелита Роспотребнадзора.

4. Правила сбора, маркировки, хранения и транспортирования материалов для исследования


4.1. Клинические материалы

4.1.1. Отбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник ЛПО в установленном порядке.

4.1.3. В тех случаях, когда получить фекалии от больного невозможно, можно получить фекальную пробу с помощью ректальной "соломинки" или ректального тампона. Ректальную "соломинку" (натуральную или пластиковую, твердую, с внутренним диаметром 5 мм) осторожно вводят в прямую кишку и медленными движениями набирают достаточное количество фекальной массы. После выведения из прямой кишки соломинку сгибают или переламывают и помещают в стерильный флакон/пробирку. При использовании ректального тампона стерильный ватный тампон на деревянной палочке вводят в прямую кишку и протирают слизистую оболочку так, чтобы захватить фекальный материал. Тампон извлекают и, отломив палочку, помещают в стерильную пробирку/флакон с 1-2 мл транспортировочной среды (прилож.3).

4.1.4. В летальных случаях берут пробы (кусочки ткани) из шейного и поясничного отделов спинного мозга, продолговатого мозга, Варолиева моста, нисходящего отдела толстой кишки. Пробы отбирают как можно раньше после наступления смерти. Ткани иссекают стерильными инструментами, помещают в отдельные стерильные пластиковые или стеклянные емкости с транспортировочной средой, добавленной в таком количестве, чтобы сохранить их влажными. Объем каждой пробы (кусочка тканей ЦНС) должен составлять примерно 1 см; из толстой кишки иссекают сегмент длиной 3-5 см, содержащий фекальные массы.

4.1.5. Для диагностических серологических исследований у больных ПОЛИО/ОВП отбирают две пробы крови. Первая должна быть взята в первые семь дней от начала заболевания, вторая - спустя 2-3 нед. Оптимальный объем пробы - 3-5 мл. Если взятие крови из вены по каким-либо причинам невозможно, берут кровь уколом пальца, что позволяет взять 0,3-0,4 мл крови. Пробы крови помещают в стерильные емкости (пробирки, флакончики) без антикоагулянтов или консервантов. Пробы оставляют при комнатной температуре на 2 ч для свертывания крови. После образования сгустка его отделяют от стенки сосуда, пробу помещают в холодильник при температуре от 2 до 8 °С и спустя 24 ч отбирают сыворотку. Центрифугированием при 1500 g в течение 5-10 мин сыворотку осветляют, переносят стерильной пипеткой в стерильную емкость. Если нельзя воспользоваться центрифугой или обработке подлежит сразу большое количество проб, с помощью стерильной пипетки можно осторожно отсосать сыворотку от сгустка так, чтобы в нее не попали выпавшие в осадок эритроциты. Во всех случаях следует предотвращать попадание в сыворотку эритроцитов, т.к. при хранении они подвергаются гемолизу, что может повлиять на результаты серологических исследований.

4.1.6. Пробы фекалий должны быть доставлены в РЦ или в НЦ в течение 72 ч с момента отбора. До отправки их хранят в холодильнике при температуре от 2 до 8 °С. Транспортирование проб осуществляют при температуре от 2 до 8 °С (обратная "холодовая" цепь). Если доставка проб по какой-либо причине задерживается, пробы хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.1.7. Пробы крови (сыворотки) доставляют в лабораторию в течение 72 ч от момента отбора. До отправки пробы хранят при температуре от 2 до 8 °С. Эту же температуру обеспечивают при транспортировании проб. Если доставка по какой-либо причине задерживается, сыворотки хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.2. Изоляты полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов

Изоляты полиовирусов, НПЭВ, выделенные в РЦ из материалов от больных ПОЛИО/ОВП, должны быть отправлены для подтверждения и внутритиповой дифференциации (далее - ВТД) в НЦ в течение 7 дней от момента идентификации вируса в РЦ. Для доставки изолятов используют пластиковые пробирки с завинчивающимися крышками с наружной резьбой объемом 2,0 мл. Вместе с изолятами доставляются образцы фекалий, из которых они были выделены; До отправки изоляты хранят при температуре -20 °С. Транспортирование проб осуществляют в условиях "холодовой цепи", обеспечивающих их сохранение.

4.3. Маркировка материалов

Все vатериалы должны быть снабжены этикеткой, на которой четко обозначают фамилию и инициалы больного, идентификационный номер, тип пробы, дату отбора. Пробы доставляются с направлением (в 2 экз.) на лабораторное исследование (прилож.4).

4.4. Упаковка и транспортирование материалов для исследования

При транспортировании материалов в лабораторию необходимо соблюдать принцип "тройной упаковки", которая включает следующие компоненты:

1) первичная емкость - маркированный контейнер/пробирка/флакон с пробой, надежно закрытые крышкой, герметизированной лабораторной пленкой или парафином;

2) вторичная емкость - прочный водонепроницаемый, непротекающий контейнер (или полиэтиленовый пакет) с адсорбирующим материалом в количестве, достаточном для адсорбции всего образца в случае его протечки. Во вторичную емкость помещают контейнер/пробирку/флакон с пробой. Образцы от одного пациента упаковываются отдельно. Также во вторичную емкость помещают направление на исследование, вложенное в полиэтиленовый пакет;

3) внешняя упаковка - прочный термоизолирующий контейнер или термос, предназначенные для транспортирования биологических материалов. Для обеспечения температурных условий транспортирования, в термоконтейнеры помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. На внешней поверхности термоконтейнера или термоса укрепляют этикетку с указанием адреса, телефона, факса, электронной почты отправителя, адреса, телефона, факса, электронной почты получателя, условий транспортирования.

Перед отправкой материалов отправитель должен проинформировать получателя о планируемой отправке и ее сроках. Недопустимо отправлять материалы без предварительной договоренности с получателем.

Транспортирование проб осуществляется в соответствии с требованиями нормативных и методических документов. Упаковка и материалы, которые использовались для транспортирования, могут быть контаминированы инфекционными агентами, поэтому первичная и вторичная упаковки должны быть уничтожены.

Органы и учреждения Роспотребнадзора обеспечивают выполнение всех необходимых требований по доставке проб в установленном порядке.

5. Порядок проведения вирусологических исследований


5.1. Получение и подготовка проб для исследования

5.1.1. Получение и регистрация проб

Немедленно после доставки материалов в лабораторию упаковочную коробку/термоконтейнер/термос распаковывают в отведенной для этого зоне, соблюдая при этом требования нормативных и методических документов.

В зоне, где происходит распаковка, должны иметься емкость для мусора, тампоны, смоченные 70%-м раствором этилового спирта, биологическое защитное укрытие (далее - БЗУ) 2-го класса безопасности (или рабочий стол с покрытием, которое легко подвергается обработке лабораторными дезинфектантами). Распаковка и регистрация материалов осуществляется двумя сотрудниками - один регистрирует поступившие материалы в рабочем журнале, другой открывает упаковку, проверяет целость емкостей с материалом, отсутствие протечек, полноту сопроводительных документов. В этот момент фиксируется состояние присланных проб ("хорошее" или "плохое").

Проверяют соответствие сведений на этикетке присланной пробы и в направлении на исследование. В случае несовпадения или неполноты сведений, делают запрос в организацию, направившую материал для исследования. Каждой пробе присваивают идентификационный номер, под которым она регистрируется в лабораторном журнале. Этим номером помечают направление на исследование, а также все емкости (центрифужные пробирки, флаконы/пробирки с культурой клеток и пр.), относящиеся к данной пробе в процессе ее исследования и хранения в данной лаборатории. Если исследование будет начато в течение 48 ч, пробы для выделения вируса помещают в холодильник (от 2 до 8 °С), если исследование будет начато позже, пробы хранят при температуре -20 °С.

Все процедуры во время получения, распаковки и регистрации материалов осуществляют в защитной одежде и резиновых перчатках. Все работы по подготовке проб фекалий, фекальных суспензий, секционных материалов для исследования проводятся в БЗУ 2-го класса безопасности.

Лаборатория может получать много проб из разных источников в течение рабочего дня, поэтому следует проявлять особую тщательность и осторожность при обращении с пробами не только для защиты персонала, но и для избежания перекрестной контаминации между пробами.


5.1.2. Подготовка фекальных проб для исследования в культуре клеток

До приготовления фекальной суспензии присланную в лабораторию "исходную" пробу делят пополам, одну часть используют для приготовления суспензии, другую хранят при -20 °С (для отправки в НЦ, для повторного исследования пробы в случае необходимости).

Для исследования в культуре клеток фекальные пробы обрабатывают хлороформом для удаления бактерий, грибков, цитотоксических липидов, для разъединения вирусных агрегатов.

Для приготовления 20% фекальной суспензии устойчивые к хлороформу полиэтиленовые центрифужные пробирки емкостью 50 мл маркируют в соответствии с номером пробы. В каждую пробирку вносят 10 мл фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ) с антибиотиками (прилож.3), 1 г стеклянных бусин и 1 мл хлороформа. В пробирку вносят 2 г фекальной пробы. Плотно закрывают центрифужную пробирку и тщательно встряхивают в течение 20 мин в механическом шейкере или вручную. Центрифугируют 20 мин при 1500 g в центрифуге с охлаждением. Надосадочную жидкость каждой пробы переносят в два маркированных флакона с винтовой крышкой. Если жидкость непрозрачна, обработку хлороформом повторяют. Суспензию из одного флакона используют для исследования, второй флакон хранят при -20 °С для отправки в НЦ, если это будет необходимо.

Пробы, отобранные с помощью ректальных "соломинок", готовят для исследования так же, как и фекальные пробы.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП)

1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (О.Е.Иванова, Т.П.Еремеева, С.Г.Дроздов, М.И.Михайлов, О.Ю.Байкова, О.В.Юрашко); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Ф.Лазикова, Е.Б.Ежлова); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.В.Воронцова, А.А.Ясинский, О.П.Чернявская) с учетом замечаний и предложений ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в г.Москве, Ставропольском, Хабаровском краях, Омской, Свердловской областях; Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. N 2).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 28 июля 2008 г.

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 сентября 2008 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (далее - Роспотребнадзор), осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за полиомиелитом, острыми вялыми параличами в рамках Национального плана действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения, сотрудниками научно-исследовательских институтов и других заинтересованных организаций.

1.2. В методических указаниях определены требования к порядку сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП) в целях установления этиологических агентов заболеваний, а также изучения циркуляции полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов среди населения.

2. Общие положения

2.1. Вирусологические исследования материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (далее - ПОЛИО/ОВП) на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы (далее - НПЭВ) являются одним из важнейших элементов системы эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

2.2. Все процедуры по сбору, транспортированию, подготовке к вирусологическому исследованию материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляются в соответствии с требованиями нормативных и методических документов (прилож.1).

2.3. Выполнение требований настоящих методических указаний направлено на совершенствование эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

3. Организация вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

3.1. Забор материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом ОВП проводят в лечебно-профилактических организациях (далее - ЛПО) в установленном порядке в соответствии с нормативными и методическими документами.

3.2. Вирусологические исследования материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляют: Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (далее - НЦ), вирусологические лаборатории региональных центров эпидемиологического надзора за полиомиелитом и ОВП в г.Москве, Хабаровском, Ставропольском краях, Свердловской, Омской областях, Санкт-Петербургском НИИЭМ им. Пастера (далее - РЦ).

3.3. Вирусологическому исследованию в РЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего (после 14 дня с момента выявления паралича), неполного (1 проба стула) обследования больного (по одной пробе, не более 5 детей);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП (по одной пробе, не более 5 контактных);

парные сыворотки крови больных с подозрением на полиомиелит или больных, отнесенных к приоритетным "горячим" случаям ОВП (прилож.2). Сыворотки могут быть доставлены и исследованы в НЦ (по согласованию).

3.4. Вирусологическому исследованию в НЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание независимо от возраста (две пробы);

пробы фекалий от больных детей, отнесенных к приоритетным ("горячим") случаям ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к приоритетному ("горячему") случаю (одна проба);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к "горячему" случаю (по одной пробе, не более 5 контактных);

пробы фекалий от больных вакциноассоциированным полиомиелитом, собранные повторно на 60-й и 90-й день от начала заболевания (по две пробы). В случае получения положительного вирусологического результата проводят повторный отбор проб для последующего исследования (по согласованию с НЦ);

материалы от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего, неполного обследования больного, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты).

3.5. Результаты вирусологических исследований, идентификации и внутритиповой дифференциации сообщаются в организации здравоохранения, органы и учреждения Роспотребнадзора, направившие материалы, а также в установленном порядке в НЦ, РЦ, Координационный центр ликвидации полиомиелита Роспотребнадзора.

4. Правила сбора, маркировки, хранения и транспортирования материалов для исследования


4.1. Клинические материалы

4.1.1. Отбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник ЛПО в установленном порядке.

4.1.3. В тех случаях, когда получить фекалии от больного невозможно, можно получить фекальную пробу с помощью ректальной "соломинки" или ректального тампона. Ректальную "соломинку" (натуральную или пластиковую, твердую, с внутренним диаметром 5 мм) осторожно вводят в прямую кишку и медленными движениями набирают достаточное количество фекальной массы. После выведения из прямой кишки соломинку сгибают или переламывают и помещают в стерильный флакон/пробирку. При использовании ректального тампона стерильный ватный тампон на деревянной палочке вводят в прямую кишку и протирают слизистую оболочку так, чтобы захватить фекальный материал. Тампон извлекают и, отломив палочку, помещают в стерильную пробирку/флакон с 1-2 мл транспортировочной среды (прилож.3).

4.1.4. В летальных случаях берут пробы (кусочки ткани) из шейного и поясничного отделов спинного мозга, продолговатого мозга, Варолиева моста, нисходящего отдела толстой кишки. Пробы отбирают как можно раньше после наступления смерти. Ткани иссекают стерильными инструментами, помещают в отдельные стерильные пластиковые или стеклянные емкости с транспортировочной средой, добавленной в таком количестве, чтобы сохранить их влажными. Объем каждой пробы (кусочка тканей ЦНС) должен составлять примерно 1 см; из толстой кишки иссекают сегмент длиной 3-5 см, содержащий фекальные массы.

4.1.5. Для диагностических серологических исследований у больных ПОЛИО/ОВП отбирают две пробы крови. Первая должна быть взята в первые семь дней от начала заболевания, вторая - спустя 2-3 нед. Оптимальный объем пробы - 3-5 мл. Если взятие крови из вены по каким-либо причинам невозможно, берут кровь уколом пальца, что позволяет взять 0,3-0,4 мл крови. Пробы крови помещают в стерильные емкости (пробирки, флакончики) без антикоагулянтов или консервантов. Пробы оставляют при комнатной температуре на 2 ч для свертывания крови. После образования сгустка его отделяют от стенки сосуда, пробу помещают в холодильник при температуре от 2 до 8 °С и спустя 24 ч отбирают сыворотку. Центрифугированием при 1500 g в течение 5-10 мин сыворотку осветляют, переносят стерильной пипеткой в стерильную емкость. Если нельзя воспользоваться центрифугой или обработке подлежит сразу большое количество проб, с помощью стерильной пипетки можно осторожно отсосать сыворотку от сгустка так, чтобы в нее не попали выпавшие в осадок эритроциты. Во всех случаях следует предотвращать попадание в сыворотку эритроцитов, т.к. при хранении они подвергаются гемолизу, что может повлиять на результаты серологических исследований.

4.1.6. Пробы фекалий должны быть доставлены в РЦ или в НЦ в течение 72 ч с момента отбора. До отправки их хранят в холодильнике при температуре от 2 до 8 °С. Транспортирование проб осуществляют при температуре от 2 до 8 °С (обратная "холодовая" цепь). Если доставка проб по какой-либо причине задерживается, пробы хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.1.7. Пробы крови (сыворотки) доставляют в лабораторию в течение 72 ч от момента отбора. До отправки пробы хранят при температуре от 2 до 8 °С. Эту же температуру обеспечивают при транспортировании проб. Если доставка по какой-либо причине задерживается, сыворотки хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.2. Изоляты полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов

Изоляты полиовирусов, НПЭВ, выделенные в РЦ из материалов от больных ПОЛИО/ОВП, должны быть отправлены для подтверждения и внутритиповой дифференциации (далее - ВТД) в НЦ в течение 7 дней от момента идентификации вируса в РЦ. Для доставки изолятов используют пластиковые пробирки с завинчивающимися крышками с наружной резьбой объемом 2,0 мл. Вместе с изолятами доставляются образцы фекалий, из которых они были выделены; До отправки изоляты хранят при температуре -20 °С. Транспортирование проб осуществляют в условиях "холодовой цепи", обеспечивающих их сохранение.

4.3. Маркировка материалов

Все vатериалы должны быть снабжены этикеткой, на которой четко обозначают фамилию и инициалы больного, идентификационный номер, тип пробы, дату отбора. Пробы доставляются с направлением (в 2 экз.) на лабораторное исследование (прилож.4).

4.4. Упаковка и транспортирование материалов для исследования

При транспортировании материалов в лабораторию необходимо соблюдать принцип "тройной упаковки", которая включает следующие компоненты:

1) первичная емкость - маркированный контейнер/пробирка/флакон с пробой, надежно закрытые крышкой, герметизированной лабораторной пленкой или парафином;

2) вторичная емкость - прочный водонепроницаемый, непротекающий контейнер (или полиэтиленовый пакет) с адсорбирующим материалом в количестве, достаточном для адсорбции всего образца в случае его протечки. Во вторичную емкость помещают контейнер/пробирку/флакон с пробой. Образцы от одного пациента упаковываются отдельно. Также во вторичную емкость помещают направление на исследование, вложенное в полиэтиленовый пакет;

3) внешняя упаковка - прочный термоизолирующий контейнер или термос, предназначенные для транспортирования биологических материалов. Для обеспечения температурных условий транспортирования, в термоконтейнеры помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. На внешней поверхности термоконтейнера или термоса укрепляют этикетку с указанием адреса, телефона, факса, электронной почты отправителя, адреса, телефона, факса, электронной почты получателя, условий транспортирования.

Перед отправкой материалов отправитель должен проинформировать получателя о планируемой отправке и ее сроках. Недопустимо отправлять материалы без предварительной договоренности с получателем.

Транспортирование проб осуществляется в соответствии с требованиями нормативных и методических документов. Упаковка и материалы, которые использовались для транспортирования, могут быть контаминированы инфекционными агентами, поэтому первичная и вторичная упаковки должны быть уничтожены.

Органы и учреждения Роспотребнадзора обеспечивают выполнение всех необходимых требований по доставке проб в установленном порядке.

5. Порядок проведения вирусологических исследований


5.1. Получение и подготовка проб для исследования

5.1.1. Получение и регистрация проб

Немедленно после доставки материалов в лабораторию упаковочную коробку/термоконтейнер/термос распаковывают в отведенной для этого зоне, соблюдая при этом требования нормативных и методических документов.

В зоне, где происходит распаковка, должны иметься емкость для мусора, тампоны, смоченные 70%-м раствором этилового спирта, биологическое защитное укрытие (далее - БЗУ) 2-го класса безопасности (или рабочий стол с покрытием, которое легко подвергается обработке лабораторными дезинфектантами). Распаковка и регистрация материалов осуществляется двумя сотрудниками - один регистрирует поступившие материалы в рабочем журнале, другой открывает упаковку, проверяет целость емкостей с материалом, отсутствие протечек, полноту сопроводительных документов. В этот момент фиксируется состояние присланных проб ("хорошее" или "плохое").

Проверяют соответствие сведений на этикетке присланной пробы и в направлении на исследование. В случае несовпадения или неполноты сведений, делают запрос в организацию, направившую материал для исследования. Каждой пробе присваивают идентификационный номер, под которым она регистрируется в лабораторном журнале. Этим номером помечают направление на исследование, а также все емкости (центрифужные пробирки, флаконы/пробирки с культурой клеток и пр.), относящиеся к данной пробе в процессе ее исследования и хранения в данной лаборатории. Если исследование будет начато в течение 48 ч, пробы для выделения вируса помещают в холодильник (от 2 до 8 °С), если исследование будет начато позже, пробы хранят при температуре -20 °С.

Все процедуры во время получения, распаковки и регистрации материалов осуществляют в защитной одежде и резиновых перчатках. Все работы по подготовке проб фекалий, фекальных суспензий, секционных материалов для исследования проводятся в БЗУ 2-го класса безопасности.

Лаборатория может получать много проб из разных источников в течение рабочего дня, поэтому следует проявлять особую тщательность и осторожность при обращении с пробами не только для защиты персонала, но и для избежания перекрестной контаминации между пробами.


5.1.2. Подготовка фекальных проб для исследования в культуре клеток

До приготовления фекальной суспензии присланную в лабораторию "исходную" пробу делят пополам, одну часть используют для приготовления суспензии, другую хранят при -20 °С (для отправки в НЦ, для повторного исследования пробы в случае необходимости).

Для исследования в культуре клеток фекальные пробы обрабатывают хлороформом для удаления бактерий, грибков, цитотоксических липидов, для разъединения вирусных агрегатов.

Для приготовления 20% фекальной суспензии устойчивые к хлороформу полиэтиленовые центрифужные пробирки емкостью 50 мл маркируют в соответствии с номером пробы. В каждую пробирку вносят 10 мл фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ) с антибиотиками (прилож.3), 1 г стеклянных бусин и 1 мл хлороформа. В пробирку вносят 2 г фекальной пробы. Плотно закрывают центрифужную пробирку и тщательно встряхивают в течение 20 мин в механическом шейкере или вручную. Центрифугируют 20 мин при 1500 g в центрифуге с охлаждением. Надосадочную жидкость каждой пробы переносят в два маркированных флакона с винтовой крышкой. Если жидкость непрозрачна, обработку хлороформом повторяют. Суспензию из одного флакона используют для исследования, второй флакон хранят при -20 °С для отправки в НЦ, если это будет необходимо.

Пробы, отобранные с помощью ректальных "соломинок", готовят для исследования так же, как и фекальные пробы.

от 26 декабря 1997 года N 386

О создании национального центра и региональных центров по лабораторной диагностике полиомиелита

(с изменениями на 27 августа 1998 года)

____________________________________________________________________
Утратил силу на основании
приказа Министерства здравоохранения Российской Федерации
от 27 августа 1999 года N 332
____________________________________________________________________

Документ с изменениями, внесенными:

В целях обеспечения эпидемиологического благополучия по полиомиелиту в Российской Федерации, совершенствования эпидемиологического надзора за этой инфекцией и в соответствии с рекомендациями Всемирной Организации Здравоохранения

1. Возложить на научно-исследовательский институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П.Чумакова РАМН (по договоренности) функции Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита.

2. Организовать работу указанного центра в соответствии с Положением о Национальном центре по лабораторной диагностике полиомиелита (Приложение 1).

3. Возложить на Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера и на вирусологические лаборатории центров Госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации функции региональных центров (Приложение 3) и организовать их работу в соответствии с Положением о региональных центрах по лабораторной диагностике полиомиелита (Приложение 2).

Приказом Минздрава России от 27 августа 1998 года N 257 функции регионального центра возложены на Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера.

4. Руководителям органов управления здравоохранением субъектов Российской Федерации, главным врачам центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации организовать:

4.1. Направление и доставку материалов от больных с острыми вялыми параличами для вирусологического исследования в региональные центры и Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита в соответствии с перечнем региональных центров и Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита и административных территорий, закрепленных за ними.

4.2. Обеспечить контроль за направлением всех выделенных штаммов вируса полиомиелита в Национальный центр лабораторной диагностики полиомиелита.

5. Управлению планирования, финансирования и развития предусмотреть финансирование работы Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита по Федеральной целевой программе "Вакцинопрофилактика".

6. Контроль за выполнением настоящего Приказа возложить на первого заместителя министра здравоохранения Российской Федерации Онищенко Г.Г.

Приложение 1
к Приказу Минздрава России
от 26 декабря 1997 года N 386

ПОЛОЖЕНИЕ
о национальном центре по лабораторной диагностике полиомиелита

Функции Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита возлагаются на профильные лаборатории Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН.

В своей деятельности Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита руководствуется организационно распорядительными документами Минздрава России и рекомендациями Всемирной организации здравоохранения.

Общее руководство работой Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита, а также распределение функций между профильными лабораториями возлагается на директора научно исследовательского института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН.

В функции Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита входит:

методическое руководство, координация и контроль за работой региональных центров по лабораторной диагностике полиомиелита и вирусологических лабораторий центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации,

получение из региональных вирусологических лабораторий штаммов вируса полиомиелита, вирусологических лабораторий центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации, выделенных от людей и из объектов окружающей среды, установление их природы и свойств и сохранение в вирусной коллекции на территории Российской Федерации,

проведение исследований состояния коллективного иммунитета к полиомиелиту как показателя качества вакцинопрофилактики в субъектах Российской Федерации, которые самостоятельно не осуществляют эти исследования,

обеспечение региональных центров по лабораторной диагностике полиомиелита и вирусологических лабораторий центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации прототипными штаммами вируса полиомиелита, диагностическими сыворотками и культурами клеток RD и Hep-2,

участие в расшифровке этиологии вспышек полиомиелита и проведении противоэпидемических мероприятий при сложных эпидемических процесса этой инфекции,

оценка состояния лабораторной диагностики полиомиелита в Российской Федерации на основании профессиональных тестов, анализа отчетов и выезда в регионы,

разработка предложений для Минздрава России по совершенствованию эпидемиологического надзора за циркуляцией возбудителей полиомиелита на территории Российской Федерации,

повышение квалификации вирусологов, осуществляющих лабораторную диагностику полиомиелита,

осуществление в установленном порядке связи с Европейским региональным бюро ВОЗ по программам международного сотрудничества.

Национальному центру по лабораторной диагностике полиомиелита предоставляется право:

получать от Минздрава России информацию, необходимую для анализа состояния лабораторной диагностики полиомиелита и согласовывать организационно-распорядительные документы Минздрава России, направленные на повышение качества лабораторной диагностики полиомиелита,

пользоваться первичной медицинской документацией лечебно-профилактических учреждений и центров госсанэпиднадзора при изучении и оценке состояния лабораторной диагностики полиомиелита и заболеваемости этой инфекцией,

пользоваться для служебной переписки бланками со штампом, изображающим свое наименование.

Приложение 2
к Приказу Минздрава России
от 26 декабря 1997 года N 386

ПОЛОЖЕНИЕ
о региональных центрах по лабораторной диагностике полиомиелита

Функции региональных центров по лабораторной диагностике полиомиелита осуществляют: профильная лаборатория Санкт-Петербургского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, вирусологические лаборатории центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации в соответствии с перечнем, утвержденным Министерством здравоохранения Российской Федерации.

В функции региональных центров по лабораторной диагностике полиомиелита входит:

выполнение в полном объеме всех исследований по выделению вирусов полиомиелита от больных полиомиелитом и острыми вялыми параличами на своей территории и на закрепленных за ними административных территориях, в том числе типирование выделенных штаммов вируса полиомиелита и направление их в Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита.

осуществление информационного обеспечения закрепленных за ними административных территорий Российской Федерации о результатах исследования материала от больных полиомиелитом и острыми вялыми параличами.

осуществление консультативной и методической помощи закрепленным за ними административным территориям Российской Федерации по вопросам забора, направления и доставки материалов от больных полиомиелитом и острыми вялыми параличами.

Приложение 3
к Приказу Минздрава России
от 26 декабря 1997 года N 386

ПЕРЕЧЕНЬ
региональных центров и национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита и административных территорий, закрепленных за ними

I. Объединенный* Центр госсанэпиднадзора в г.Санкт-Петербурге и Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера:

* Материалы от больных с острыми вялыми параличами направляются в Центр госсанэпиднадзора в г. Санкт-Петербурге.

Приказом Минздрава России от 27 августа 1998 года N 257 функции регионального центра возложены на Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера.

В целях обеспечения эпидемиологического благополучия по полиомиелиту в Российской Федерации, совершенствования эпидемиологического надзора за этой инфекцией и в соответствии с рекомендациями Всемирной Организации Здравоохранения приказываю:

1. Возложить на научно-исследовательский институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (по договоренности) функции Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита.

2. Организовать работу указанного Центра в соответствии с Положением о Национальном Центре по лабораторной диагностике полиомиелита (Приложение 1).

3. Возложить на Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера и на вирусологические лаборатории центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации функции региональных центров (Приложение 3) и организовать их работу в соответствии с Положением о региональных центрах по лабораторной диагностике полиомиелита (Приложение 2).

4. Руководителям органов управления здравоохранением субъектов Российской Федерации, главным врачам центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации организовать:

4.1. Направление и доставку материалов от больных с острыми вялыми параличами для вирусологического исследования в региональные центры и Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита, в соответствии с перечнем региональных центров и Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита и административных территорий, закрепленных за ними.

4.2. Обеспечить контроль за направлением всех выделенных штаммов вируса полиомиелита в Национальный центр лабораторной диагностики полиомиелита.

5. Управлению планирования, финансирования и развития предусмотреть финансирование работы Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита по федеральной целевой программе "Вакцинопрофилактика".

6. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на Первого заместителя Министра здравоохранения Российской Федерации Онищенко Г.Г.

Заместитель начальника
Департамента госсанэпиднадзора

Начальник управления
охраны здоровья
матери и ребенка

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

На научно-исследовательский институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН возложены функции Национального центра по лабораторной диагностике полиомиелита.

Национальный центр уполномочен осуществлять методическое руководство, координацию и контроль за работой региональных центров по лабораторной диагностике полиомиелита и вирусологических лабораторий, центров госсанэпиднадзора в субъектах РФ; проводить исследования состояния коллективного иммунитета к полиомиелиту; разрабатывать предложения для Минздрава России по совершенствованию эпидемиологического надзора за циркуляцией возбудителей полиомиелита; осуществлять повышение квалификации вирусологов, осуществляющих лабораторную диагностику полиомиелита.

Функции региональных центров по лабораторной диагностике полиомиелита осуществляют: профильная лаборатория Санкт-Петербургского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, вирусологические лаборатории центров госсанэпиднадзора в субъектах РФ.

Приказ Министерства здравоохранения РФ от 26 декабря 1997 г. N 386 "О создании Национального Центра и региональных Центров по лабораторной диагностике полиомиелита"

Текст приказа опубликован в Сборнике "Приказы. Минздрав России./Сборник. 1997 год - Часть 2", М.:"Интерсэн", 1999 г.

Приказом Минздрава РФ от 27 августа 1999 г. N 332 настоящий приказ признан утратившим силу

Приказом Министерства здравоохранения РФ от 27 августа 1998 г. N 257 во изменение пункта 1 настоящего Перечня функции регионального центра возложены на Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера

I. Объединенный: Центр госсанэпиднадзора в г. Санкт-Петербурге и Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (Материалы от больных с острыми вялыми параличами направляются в Центр госсанэпиднадзора в г. Санкт-Петербурге):

Республика Карелия, Республика Коми, Архангельская область, Ненецкий автономный округ, Вологодская область, Мурманская область, Ленинградская область, Новгородская область, Псковская область, Калининградская область, Костромская область, Смоленская область, Ярославская область, Республика Мордовия, г. Санкт-Петербург.

II. Центр госсанэпиднадзора в Ставропольском крае:

Республика Северная Осетия (Алания), Чеченская Республика, Ингушская Республика, Карачаево-Черкесская Республика, Республика Адыгея, Кабардино-Балкарская Республика, Республика Дагестан, Краснодарский край, Ростовская область, Астраханская область, Волгоградская область, Республика Калмыкия, Ставропольский край, Ульяновская область.

III. Центр госсанэпиднадзора в Хабаровском крае:

Республика Саха (Якутия), Приморский край, Камчатская область, Корякский автономный округ, Магаданская область, Сахалинская область, Амурская область, Еврейская автономная область, Усть-Ордынский Бурятский автономный округ, Агинский Бурятский автономный округ, Чукотский автономный округ, Республика Бурятия, Иркутская область, Читинская область, Хабаровский край.

IV. Центр госсанэпиднадзора в Омской области:

Республика Алтай, Республика Тува, Республика Хакасия, Кемеровская область, Тюменская область, Алтайский край, Новосибирская область, Томская область, Красноярский край, Эвенкийский автономный округ, Ханты-Мансийский автономный округ, Ямало-Ненецкий автономный округ, Оренбургская область, Омская область.

V. Центр госсанэпиднадзора в Свердловской области:

Республика Башкортостан, Удмуртская Республика, Курганская область, Кировская область, Пермская область, Коми-Пермяцкий автономный округ, Челябинская область, Республика Татарстан, Пензенская область, Самарская область, Саратовская область, Чувашская Республика, Республика Марий-Эл, Нижегородская область, Свердловская область.

Национальный центр на базе НИИПиВЭ им. М.П. Чумакова РАМН:

Москва, Московская область, Брянская область, Владимирская область, Ивановская область, Калужская область, Тверская область, Орловская область, Рязанская область, Тульская область, Белгородская область, Воронежская область, Курская область, Липецкая область, Тамбовская область, Таймырский автономный округ.

Примечание: Вирусологические лаборатории, которые не вошли в перечень лабораторий, определенных как региональные, проводят исследования 1/2 пробы материала (фекалий) от больных острыми вялыми параличами и 1/2 пробы материала направляют в региональную лабораторию, выделенные вирусы направляются в Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита.

Лабораторные исследования сточных вод по выделению вирусов полиомиелита осуществляются на базе вирусологических лабораторий центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации в установленном порядке. Выделенные вирусы полиомиелита направляются в Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Читайте также: