Определение рнк вич методом от-пцр в реальном времени

Обновлено: 24.04.2024

Исследование позволяет обнаружить генетический материал вирусов гепатита B и С, а также вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) в крови. Помогает выявить заболевания, вызванные данными возбудителями, на ранних сроках.

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

Приём и исследование биоматериала

Комплексы с этим исследованием

Когда нужно сдавать анализ Ранняя диагностика инфекций: РНК HCV, ДНК HBV, РНК ВИЧ-1, РНК ВИЧ-2 (ультрачувствительный метод) плазма, кач.?

Исследование назначают для раннего выявления инфицирования вирусами гепатитов В и С, а также ВИЧ.

В период от 10—14 дней после попадания возбудителя в кровь и до полугода после заражения антитела к данным вирусам могут ещё не появиться, а генетический материал (РНК и ДНК) возбудителей уже возможно обнаружить. Это особенно актуально, если были ситуации потенциального риска: медицинские и косметические процедуры, бытовой (для вируса гепатита В) или незащищённый половой контакт с инфицированным человеком / с человеком, о котором неизвестно, является ли он инфицированным.

Подробное описание исследования

Гемоконтактные инфекции и их диагностика

Некоторые инфекции способны передаваться при контакте с кровью и другими биологическими жидкостями инфицированного. Такие инфекции называют гемоконтактными. К числу наиболее распространённых гемоконтактных инфекций относят:

вирус гепатита С,
вирус гепатита В,
вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).

Ситуации, в которых возможно заражение этими инфекциями:

Контакт крови здорового человека с кровью инфицированного. Такое случается, например, при проведении некоторых процедур (гемодиализ, переливание крови и др.; выполнение пирсинга, нанесение татуировок; бритьё, маникюр, чистка зубов чужой зубной щёткой; использование одного шприца для внутривенного введения наркотических веществ).
При незащищённом половом акте — контакт с биологическими жидкостями инфицированного. При незащищённом половом контакте с носителем вируса инфицирование осуществляется через мельчайшие порезы или раны во влагалище, на пенисе или в анальном отверстии.
Инфицирование во время родов. Передача инфекции ребёнку от заражённой матери происходит при прохождении ребёнком родовых путей.

Генетический материал (РНК и ДНК) вирусов гепатита B и С, а также вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) в крови выявляют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. Преимущества этого метода — высокая чувствительность и специфичность. А значит, ПЦР способна выявить фрагменты генетического материала вируса даже на ранней стадии (через 10—14 дней после попадания возбудителя в кровь), когда ещё не появились антитела к возбудителю и другие лабораторные методы не обнаружат факт инфицирования. Также для ПЦР меньше, чем для других методов исследования, характерны ложноотрицательные результаты.

Состав комплекса

Вирус гепатита С (ВГС, HCV) — РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae.

Этот вирус — одна из самых частых причин поражения печени и возникновения хронического гепатита.

Вирус гепатита В (ВГВ, HBV) — ДНК-содержащий вирус из семейства гепаднавирусов. Данный вирус также поражает печень, причём заражение вирусом гепатита В происходит легче, чем вирусом гепатита C.

Инкубационный период при заражении вирусами гепатита B и С может длиться несколько месяцев. Далее появляются симптомы острой инфекции.

Симптомы острого гепатита В проявляются поэтапно. Сперва развивается гриппоподобное состояние:

недомогание,
повышение температуры тела,
снижение аппетита,
боли в суставах и мышцах.

Симптомы острого гепатита С могут быть ещё менее выражены: слабость, усталость, отсутствие аппетита.

Как при гепатите B, так и при гепатите C, если происходит обширное разрушение клеток печени, возникает желтуха.

При вирусном гепатите В инфицированный чаще выздоравливает после острой инфекции, а при вирусном гепатите С — острое заболевание чаще переходит в хроническое. Однако, если вирусный гепатит В перешёл в хроническую форму, то вероятность полностью вылечиться от него значительно ниже, чем при хроническом гепатите С, который, напротив, обычно успешно излечивается.

Поскольку при переходе вирусного гепатита В в хроническую форму высок риск развития смертельно опасных осложнений — цирроза и рака печени, Всемирная организация здравоохранения рекомендует профилактическую вакцинацию против этого вируса.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ, HIV) — возбудитель заболевания, поражающего иммунную систему человека. ВИЧ-инфекцию невозможно полностью вылечить, но благодаря современным препаратам заболевание можно контролировать.

Выделяют два вида вируса в зависимости от особенностей его строения — ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Однако заражение каждым из вариантов в целом не имеет существенных клинических различий.

Заболевание имеет длительный скрытый период — до полугода. Симптомы первичной инфекции могут напоминать ОРВИ. Как правило, также увеличиваются лимфатические узлы. Этот симптом сохраняется долгое время. Далее вирус активно размножается в иммунной системе, снижая количество важных для поддержания иммунитета Т-лимфоцитов. В результате иммунодефицит прогрессирует: развиваются инфекционные заболевания, вызванные условно-патогенными микроорганизмами, которые в норме не приносят вреда человеку.

Если не начать лечение ВИЧ-инфекции, то состояние здоровья инфицированного человека будет ухудшаться. Самая поздняя стадия ВИЧ-инфекции называется синдромом приобретённого иммунодефицита (СПИД). На этом этапе болезни у инфицированного могут развиваться некоторые виды рака, различные инфекции и другие тяжёлые хронические заболевания.

Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции, вирусов гепатита В и С очень важна. Своевременная диагностика инфицирования данными вирусами и правильно подобранная терапия позволяют улучшить прогноз течения болезни и предотвратить передачу инфекции другим людям.

Вирус иммунодефицита человека, РНК HIV, ПЦР real-time количественный — исследование, которое проводится с целью количественного определения РНК ВИЧ типа 1 в плазме крови методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) в реальном времени (real-time или РТ-ПЦР).

Исследование проводят для прогноза и мониторинга эффективности терапии.

ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) — вирус семейства ретровирусов (вирус с медленной репликацией), который поражает клетки иммунной системы человека (CD4, Т-хелперы) и вызывает синдром приобретённого иммунодефицита. ВИЧ является возбудителем синдрома приобретённого иммунодефицита (СПИД).

Пути передачи ВИЧ-инфекции — половой, при переливании крови, от заражённой матери к новорождённому. В период 3–6 недель после инфицирования, обычно развивается недлительный острый синдром, для которого характерны гриппоподобные симптомы и высокие уровни виремии в периферической крови. В большинстве случаев после этого развивается ВИЧ-специфичный иммунный ответ и снижение виремии в плазме, обычно в течение 4–6 недель после появления симптомов.

После сероконверсии (появления специфических антител) наступает клинически стабильная бессимптомная фаза, способная длиться годами. Для бессимптомного периода характерен невысокий уровень персистирующей виремии в плазме и постепенное снижение уровней CD4+ T-лимфоцитов, которое приводит впоследствии к развитию тяжёлого иммунодефицита, множественным оппортунистическим инфекциям, онкогенезу и гибели. У лиц с установленной ВИЧ-1 инфекцией, количественное измерение уровня РНК ВИЧ-1 в крови используют в целях прогноза и контроля антиретровирусной терапии.

клиническая специфичность теста: 100%, при доверительном интервале 99,6–100%;
чувствительность теста: от 500 копий/мл;
анализируются субтипы группы M и О (ВИЧ-1).

Исследование применяют для прогноза (на основании исходных уровней РНК ВИЧ-1) или для мониторинга эффективности антиретровирусной терапии (на основании определения изменений уровней РНК ВИЧ-1 в плазме на протяжении курса антиретровирусной терапии).

Внимание! Тест не предназначен для скрининга на ВИЧ-1 крови и её продуктов или для подтверждающей диагностики ВИЧ-1-инфекции.

Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приёма пищи.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: количество выявленной РНК вируса иммунодефицита человека 1 типа, выраженное в C/ml (копии/мл).

Одна копия РНК ВИЧ-1 соответствует 1.67 Международных единиц (МЕ) в соответствии в первым международным стандартном ВОЗ для РНК ВИЧ-1 в тестах по выявлению нуклеиновых кислот (NIBSC 97/656).

Вирус иммунодефицита человека, РНК HIV, ПЦР real-time качественный — исследование, которое проводится с целью определения РНК ВИЧ типа 1 в плазме крови, методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) в реальном времени (real-time или РТ-ПЦР). Исследование проводят для прогноза и мониторинга эффективности терапии.

Данный метод ныне является самым быстрым и достоверным методом диагностики инфекционных заболеваний.

При первичном инфицировании ВИЧ, метод ПЦР позволяет выявить РНК ВИЧ в крови уже спустя 10–14 суток после инфицирования.

ВИЧ является возбудителем синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД).

Пути передачи ВИЧ-инфекции — половой, при переливании крови, от заражённой матери к новорождённому. В период 3–6 недель после инфицирования, обычно развивается недлительный острый синдром, для которого характерны гриппоподобные симптомы и высокие уровни виремии в периферической крови. В большинстве случаев, после этого развивается ВИЧ-специфичный иммунный ответ и снижение виремии в плазме, обычно в течение 4–6 недель после появления симптомов. После сероконверсии (появления специфических антител) наступает клинически стабильная бессимптомная фаза, способная длиться годами. Для бессимптомного периода характерен невысокий уровень персистирующей виремии в плазме и постепенное снижение уровней CD4+T-лимфоцитов, которое приводит впоследствии к развитию тяжёлого иммунодефицита, множественным оппортунистическим инфекциям, онкогенезу и гибели. У лиц с установленной ВИЧ-1 инфекцией, количественное измерение уровня РНК ВИЧ-1 в крови используют в целях прогноза и контроля антиретровирусной терапии.

Показания
Обнаружение ВИЧ методом полимеразной цепной реакции — ПЦР (качественно) проводится с целью:

разрешения сомнительных результатов иммуноблоттингового исследования;
для ранней диагностики инфицирования ВИЧ;
контроля эффективности противовирусного лечения;
определения стадии заболевания СПИДом (переход инфицированности в заболевание).

Общие правила при подготовке к исследованию:

по возможности, рекомендуется сдавать кровь утром, в период с 8 до 11 часов, натощак (не менее 8 часов и не более 14 часов голода, питье — вода, в обычном режиме), накануне избегать пищевых перегрузок;
если вы принимаете какие-то лекарственные препараты, следует проконсультироваться с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне приёма препаратов или возможности отмены приёма препарата перед исследованием, длительность отмены определяется периодом выведения препарата из крови;
алкоголь — исключить приём алкоголя накануне исследования;
курение — не курить минимально в течение 1 часа до исследования;
исключить физические и эмоциональные стрессы накануне исследования;
после прихода в медицинский офис рекомендуется отдохнуть (лучше — посидеть) 10–20 минут перед взятием проб крови;
нежелательно сдавать кровь для лабораторного исследования вскоре после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования и других медицинских процедур. После некоторых медицинских процедур (например, биопсия предстательной железы перед исследованием ПСА) следует отложить лабораторное обследование на несколько дней;
при контроле лабораторных показателей в динамике, рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях: в одной лаборатории, сдавать кровь в одинаковое время суток и пр.

Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие РНК ВИЧ в крови.

Положительный результат — выявление РНК ВИЧ — свидетельствует об инфицировании пациента.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это молекулярно-биологический метод, в основе которого лежит амплификация (то есть многократное увеличение) фрагментов ДНК в биоматериале.

Метод ПЦР применяется во многих сферах деятельности, в том числе в качестве быстрого и высокоточного способа диагностики определенных инфекционных и генетических заболеваний человека, а также для выявления спонтанных или унаследованных изменений в ДНК, исследованиях генома сельскохозяйственных растений и животных для селекционных и других задач, в криминалистике, археологии, установлении отцовства, клонировании и секвенировании геномов и прочих сферах деятельности человека.

Вирусы, бактерии и грибы - основные человеческие патогены - содержат ДНК или РНК, причем для каждого вида последовательность нуклеотидов уникальна. Короткие фрагменты, комплементарные целевым участкам нуклеотидов каждого возбудителя, называются праймерами.

В основе анализа на ПЦР лежит создание большего числа копий генетического материала (ДНК или РНК) с помощью этих самых праймеров и специальных ферментов посредством серии циклов нагрева и охлаждения. Полученные амплифицированные сегменты далее методом гель-электрофореза (или с помощью другой технологии) сравниваются с другими нуклеотидными сегментами из известного источника (например, патогенного микроорганизма) для определения их идентичности.

ПЦР в реальном времени — это разновидность ПЦР, которая позволяет отслеживать процесс амплификации в режиме реального времени и может использоваться для количественной оценки присутствующей ДНК / РНК. Это один из основных методов обнаружения бактерий или вирусов на молекулярном уровне, с более высокой степенью точности, чем микроскопические или бактериологические исследования, и значительно более быстрый, чем метод культивирования.

Это также единственный способ определить наличие генетических вариаций, указывающих на предрасположенность к онкологическим и другим заболеваниям. Чувствительность диагностических инструментов для выявления мутаций онкогенов и генов подавления опухоли была улучшена по крайней мере в десять тысяч раз благодаря ПЦР, что позволяет раньше диагностировать, например, такие виды рака, как лейкемия. Метод ПЦР также позволил разработать индивидуальную терапию для больных раком.

Кроме того, ПЦР может использоваться для типирования тканей, которое имеет жизненно важное значение для имплантации органов.

ПЦР также имеет клиническое применение в области пренатального тестирования различных генетических заболеваний и / или клинических патологий. Образцы берут либо с помощью амниоцентеза либо с помощью биопсии ворсин хориона.
В отличие от многих других тестов, ПЦР тест способен обнаружить признаки заболевания на самых ранних стадиях инфицирования, так как для выделения искомого ДНК или РНК достаточно минимального количества генетического материала патогена в образце биоматериала. Другие виды исследования могут оказаться ложноотрицательными из-за того, что в образце недостаточно много вирусов или бактерий или организм не успел выработать достаточное количество антител.

ПЦР-анализ проводится на образце одного из следующих видов биоматериала: кровь, слюна, слизь, ткань, гной, мокрота, моча. Некоторые вирусы, включая новый коронавирус, состоят из РНК, а не ДНК. Их РНК перед амплификацией должна быть преобразована в ДНК. Этот процесс называется ПЦР с обратной транскрипцией.

На сегодняшний день ПЦР тест является стандартом для выявления наличия коронавируса SARS-CoV-2, вызывающего Covid-19. Тесты ПЦР определяют, инфицирован ли пациент в настоящее время вирусом SARS-CoV-2 и, следовательно, заразен ли он. ПЦР может обнаружить РНК COVID-19 только в том случае, если человек был недавно инфицирован или уже длительное время болеет. Обнаружение вирусной РНК с помощью ПЦР позволяет обеспечить диагностику COVID-19 на ранней стадии - до того, как организм выработает ответ в виде антител или даже до того, как у человека появятся симптомы заболевания.

Преимущества метода ПЦР

ПЦР тесты применяются в медицинской диагностике уже более 40 лет и считаются наиболее эффективным методом выявления многих инфекционных заболеваний, включая COVID-19, ВИЧ, Эбола, многих урогенитальных инфекций, герпесвирусов и других. Это “золотой стандарт” в медицинской инфекционной диагностике. Тесты ПЦР играют решающую роль в предотвращении распространения заболеваний, так как часто позволяют выявить инфекции на ранней стадии, еще до появления симптомов.

Анализ ПЦР обладает высокой чувствительностью (для обнаружения инфекционного агента достаточно всего нескольких молекул ДНК патогена) и специфичностью (для большинства инфекций она достигает 100%). Количественный ПЦР-анализ позволяет оценить инфекционную нагрузку на организм, а также используется для анализа изменений экспрессии генов в опухолях.

Важна также и высокая скорость проведения исследования. В отличие от традиционного посева при выявлении бактериальных инфекций, который занимает несколько дней, ПЦР тест обычно выполняется в течение суток. Это значительно увеличивает вероятность назначения своевременного лечения. Кроме того, с помощью ПЦР можно определить латентных носителей инфекции.

Недостатки метода ПЦР

На чувствительность и специфичность ПЦР теста серьезно влияют правила и условия его проведения. Необходимо строго соблюдать правила сбора биоматериала и его хранения.

Важно выбрать правильное время взятия биоматериала и выполнить правила подготовки к тесту. В частности, это касается и нового коронавируса, который присутствует в выделениях носоглотки и ротоглотки только в течение определенного времени, по истечении которого анализ окажется отрицательным.

Кроме того, высокая чувствительность ПЦР может иногда превращаться из преимущества в недостаток. Следы примесей РНК или ДНК в образце могут привести к результатам, вводящим в заблуждение.

Показания к проведению ПЦР-анализа

диагностики инфекционных заболеваний, вызванных вирусами, бактериями и грибами, в том числе для определения возбудителей ряда урогенитальных инфекций;
определения патологических генетических нарушений;
определения роста и развития раковых клеток.

ПЦР тест также можно использовать для прямой диагностики наличия заболевания и мутаций в развивающемся эмбрионе. Например, впервые ПЦР была использована таким образом для диагностики серповидно-клеточной анемии путем обнаружения мутации одного гена.

Подготовка к проведению ПЦР-теста

при взятии крови достаточно не принимать пищу утром в день исследования;
при взятии мазка из ротоглотки/носоглотки важно за 4 часа не принимать пищу и жидкости, не полоскать горло;
исследование урогенитального отделяемого требует воздержания от половой активности в течение одного дня.

Как проводится ПЦР-анализ

Самым распространенным на сегодня является тест в реальном времени, с помощью которого можно определить исходное количество копий ДНК (РНК).
ПЦР с обратной транскрипцией используется для “перевода” РНК в ДНК.
ПЦР с вложенной парой праймеров (гнездовая) проводится в две стадии для снижения вероятности амплификации неспецифичных участков ДНК.
Инвертированная ПЦР используется в случае, когда нужно выяснить природу неизвестных участков ДНК, окружающих известный.

Для проведения анализа биоматериала с помощью ПЦР необходимо обеспечить его правильное взятие. При взятии мазка из носоглотки или ротоглотки образец биоматериала собирают путем введения длинного зонда-тампона в ноздрю или в заднюю часть горла.

Во время анализа крови медицинский работник возьмет образец из вены на руке с помощью небольшой иглы.

Результаты ПЦР-теста

Положительный результат ПЦР теста означает, что пациент в настоящее время инфицирован определенным патогеном. Количественный ПЦР (в реальном времени) позволяет также оценить инфекционную нагрузку, а также определить момент, когда условно-патогенные микроорганизмы стали патогенными в результате неконтролируемого роста.

Отрицательный результат ПЦР теста может означать, что пациент в настоящее время не инфицирован, либо что ДНК/РНК патогена отсутствует во взятом образце биоматериала, либо что образец был взят спустя слишком долгое время после заражения, чтобы вирус был обнаружен.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ ВИЧ-1, РНК (HIV-1, ПЦР) плазма, кол.?

Прогнозирование течения заболевания у пациентов, инфицированных ВИЧ-1
Оценка эффективности антиретровирусной терапии

Подробное описание исследования

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) – это возбудитель хронической системной вирусной инфекции (ВИЧ-инфекции). Его относят к семейству ретровирусов, или Retroviridae. Вирусная частица представляет собой генетический материал (РНК), упакованный в белковую капсулу – капсид вируса, которая в свою очередь покрыта вирусной оболочкой, или суперкапсидом. На сегодняшний день известны два типа вируса – ВИЧ-1 и ВИЧ-2. ВИЧ-2 распространен преимущественно в западноафриканских странах.

ВИЧ-инфекция – медленно прогрессирующее заболевание, при котором происходит поражение иммунной системы с развитием синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИДа). СПИД – это терминальная стадия развития ВИЧ-инфекции, которая сопровождается широким спектром вторичных (оппортунистических) заболеваний. При СПИДе оппортунистические инфекции поражают все органы и системы ВИЧ-инфицированных.

Вирус проникает в клетки, на поверхности которых представлен рецептор CD4 (кластер дифференцировки 4) – трансмембранная гликопротеиновая молекула. Такой рецептор есть только у одного типа клеток – Т-хелперов. Это популяция белых клеток крови (Т-лимфоцитов), которая играет ключевую роль в поддержании необходимого уровня адаптивного иммунного ответа, то есть реакции организма на чужеродные агенты. Это приводит к нарушению функции иммунной системы у ВИЧ-инфицированных.

Вакцины, предотвращающей заражение ВИЧ-инфекцией, не существует. Однако разработаны препараты для антиретровирусной терапии, которая позволяет остановить развитие ВИЧ-инфекции и предотвратить иммунодефицитное состояние.

Для принятия решения о назначении антиретровирусной терапии или для изменения схемы терапии крайне важны два показателя: уровень CD4+ клеток и вирусная нагрузка (количественная концентрация вирусных частиц в крови). Оценить вирусную нагрузку позволяет количественное ПЦР-исследование плазмы крови на наличие РНК возбудителя ВИЧ-инфекции.

Анонимный анализ на ВИЧ

Обращаем Ваше внимание: результаты анонимных анализов на СПИД (ВИЧ) не могут быть использованы для профессиональных осмотров, госпитализации или предоставления лечащему врачу в поликлинике.

Результаты исследования на ВИЧ независимо от их результата выдаются только при личном обращении пациента в лабораторное отделение. При обследовании несовершеннолетних (до 14 лет) детей - законному представителю, указанному в заказе.

Результаты выдаются при предъявлении договора, сметы и документа, удостоверяющего личность самого пациента или представителя пациента, указанного в заказе.

По телефону и электронной почте результаты исследований не сообщаются.

ЕСЛИ АНАЛИЗ НА ВИЧ НАЗНАЧЕН В ЦЕЛЯХ ПОДГОТОВКИ К ГОСПИТАЛИЗАЦИИ ИЛИ ДЛЯ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ В ЛПУ, РЕГИСТРАЦИЯ ЗАЯВОК НА ЕГО ПРОВЕДЕНИЕ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ при обязательном предоставлении пациентом следующих данных:

1) Для жителей Москвы и Московской области

Фамилия, имя, отчество
День, месяц и год рождения
Сведения о регистрации
Паспорт

2) Для жителей других регионов РФ и иностранных граждан дополнительно – ксерокопию (скан) паспорта.

Фамилия, имя, отчество
День, месяц и год рождения
Сведения о регистрации
Ксерокопия (скан) паспорта

Особенности и преимущества методики

Тест-система: Реал ВИЧ ПЦР Вектор-Бест (Россия)

Амплификатор: RealTime CFX 96 Biorad (США)

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки не требуется. Необходимо соблюдать общие требования подготовки к исследованиям.

Читайте также: