Отбор овощей на гельминты

Обновлено: 11.05.2024

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого Московского государственного медицинского университета (МГМУ) им. И.М.Сеченова (А.И.Чернышенко, Н.А.Турбабина, Т.В.Старкова. О.П.Зеля, В.Г.Супряга, К.Ю.Кузнецова, В.Д.Завойкин, Е.А.Черникова, Е.Н.Морозов, М.Н.Лебедева, В.П.Сергиев); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.М.Гузеева, В.Н.Брагина); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (Т.Г.Сыскова, Т.А.Семенова, М.М.Асланова); ФБУН Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора (Ю.И.Васерин, Т.И.Твердохлебова, Е.П.Хроменкова, Л.Л.Димидова, Е.Ю.Криворотова); Всероссийским НИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина (А.В.Успенский, В.В.Горохов, Н.П.Сорокина); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" (Н.И.Тимошенко, Т.Н.Цыбина, М.В.Гузеева); ФБУН "Тюменский НИИ краевой и инфекционной патологии (Т.Ф.Степанова); Курским государственным университетом (Н.С.Малышева, Н.А.Самохвалова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области" (М.И.Беляева); Управлением Роспотребнадзора по Ростовской области (М.Ю.Соловьев, Е.В.Ковалев, Г.В.Портнова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Ростовской области" (Г.Т.Айдинов, Г.В.Стрельникова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Липецкой области" (Е.П.Сиротина); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Тульской области" (Л.И.Шишкина. Е.Ю.Державина); Управлением Роспотребнадзора по Республике Адыгея (А.X.Агиров, Л.А.Долева, Н.3.Шовгенова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Ханты-Мансийском автономном округе" (Н.А.Остапенко, М.Г.Соловьева, И.И.Козлова, О.В.Мосьсина, С.В.Куклин); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Адыгея" (С.А.Завгородний, Н.Д.Труфанов, И.В.Пипченко, А.Ю.Шураш).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ к практическому применению на бюро секции по физико-химическим методам исследования объектов окружающей среды при Проблемной комиссии "Научные основы экологии человека и гигиены окружающей среды".

3. РЕКОМЕНДОВАНЫ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2011 N 2).

4. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 12 мая 2012 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН МУК 4.2.1881-04 "Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции".

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы санитарно-паразитологической экспертизы плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции на соответствие установленным требованиям санитарно-эпидемиологической безопасности.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы другими испытательными лабораториями, аккредитованными в установленном порядке.

2. Нормативные ссылки

2.14. СанПиН 3.2.1333-03 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".

2.17. ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2006* "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009. - Примечание изготовителя базы данных.

2.18. ГОСТ 26313-84 "Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб".

2.19. МУ 3.2.1756-03 "Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями".

2.20. МУК 4.2.2661-10 "Методы санитарно-паразитологических исследований".

2.21. МУК 4.2.2314-08 "Методы санитарно-паразитологического анализа воды".

2.22. МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности".

3. Правила отбора проб для санитарно-паразитологических исследований

Правила отбора проб (образцов) плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции устанавливаются с целью санитарно-эпидемиологической экспертизы продукции и определения степени ее контаминации яйцами и личинками гельминтов, а также цистами (ооцистами) кишечных простейших.

3.1. Отбор проб для лабораторных исследований производится методом случайной выборки. Объединенная проба формируется методом отбора трех точечных проб от каждой фиксированной партии однородной продукции.

3.2. Пробы свежих и свежемороженых зелени столовой, овощей, фруктов и ягод отбираются в чистые емкости (чистые полиэтиленовые пакеты или другие упаковочные материалы, разрешенные для контакта с пищевой продукцией).

3.3. Объем пробы плодов, овощей составляет по 0,5 кг с каждых 100 кг продукции.

3.4. Объем объединенной пробы столовой зелени, листовых овощей и грибов, выращенных в тепличных условиях, должен составлять не менее 0,1 кг из каждой потребительской тары.

3.5. Отбор проб ягодной продукции проводят по 0,2 кг с каждых 100 кг продукции.

3.6. Отбор проб свежеотжатых соков проводят в объеме 0,1 л.

3.7. При отборе продукции непосредственно на производстве по выращиванию продукции (теплица, поле) отбирают 0,5 кг с каждых 10 м объекта по методу "конверта". Метод "конверта": площадь теплицы (поля) условно делится на площадки по 10 м, определяются 5 точек отбора по углам и центру выделенных площадок, в них отбираются по одной пробе весом 0,1 кг продукции и составляется одна объединенная проба весом не более 0,5 кг выращенной продукции.

3.8. Отбор проб методом смывов допускается с плодов и бахчевых культур крупных размеров с гладкой поверхностью; проводится на месте выемки проб двумя методами: методом простых смывов; методом инструментальных смывов.

3.9. Результаты лабораторных исследований оформляются в виде протоколов исследований (испытаний).

Объемы проб плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции для проведения санитарно-паразитологических исследований представлены в табл.1.

Отбор проб свежих и свежемороженых плодов, овощей, ягод и столовой зелени

Объем, вес объединенной пробы для исследования

Не менее 0,1 кг из каждой потребительской тары.

Отбор проб капусты, салатов допускается с поверхностных (прикорневых) листьев

Грибы, выращенные в тепличных условиях

Не менее 0,5 кг с каждых 100 кг продукции

По 0,2 кг с каждых 100 кг продукции

Плоды бахчевых культур крупных размеров с гладкой поверхностью

Смывы с поверхности не менее 20-25 экземпляров плодов

4. Условия хранения проб

4.1. Доставленные в лабораторию пробы овощей, фруктов, ягод и столовой зелени исследуют в день доставки, при невозможности проведения исследования пробы хранят в холодильнике при температуре 4-5 °С в доставленной упаковке. Срок исследования зависит от объема пробы (не более 10 суток).

4.2. Образцы свежезамороженной продукции хранят при температуре морозильной камеры в соответствии с маркировкой на этикетке. Размораживание и повторное замораживание продукции в процессе хранения в лаборатории не допускается.

4.3. Пробы плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции после исследования возвращаются заказчику, либо утилизируются.

5. Оборудование и реактивы

Пробоотборник-концентратор гидробиологический (аппарат "ПробоКонГ") (или аналоги)

* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Отборник флотанта фильтрующий "ОФФ-25"

Вакуумные фильтровальные установки ПВФ-142, ПВФ-35, ПВФ-47

Приборы напорного фильтрования ПНФ, УППВ (или аналоги)

Термоконтейнер для транспортирования свежей и свежемороженой продукции

Лабораторные центрифуги со сменным ротором или другие марки с аналогичными параметрами, обеспечивающие 1500-3000 об./мин, позволяющие центрифугировать пробы в центрифужных пробирках от 10 до 250 мл

Холодильный шкаф или холодильник бытовой, поддерживающий температуру ±(2-6) °С

Морозильная камера, поддерживающая температуру до -18 °С

Термометр для контроля температуры внутри холодильного шкафа, холодильника бытового, морозильной камеры

Весы лабораторные механические равноплечие с наибольшим пределом взвешивания 1000 г, с допустимой погрешностью не более 0,1 г с разновесами или электронные весы с наибольшим пределом взвешивания 200 г, с допустимой погрешностью не более 0,01 г

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды не ниже требований

Ареометры с пределами измерений от 1,000 до 1,400 кг/м

Световые микроскопы, оснащенные окулярами с увеличением 10 (дополнительно могут быть 7, 5), объективами 10, 40, 100, окуляр-микрометр и объект-микрометр

Шейкер S-3 (аналоги)

Мембранные фильтры на основе ацетатов целлюлозы с размерами пор от 2,5 до 5,0 мкм,

Прозрачные трековые мембраны ATM на основе полиэтилентерефталата с размерами пор от 1,0 до 5,0 и более мкм

Диаметр фильтровальных дисков 25, 35, 47, 70 и до 142 мм, в зависимости от диаметра фритты фильтродержателя используемого фильтровального оборудования

Таз круглый с ручками объемом 32 л или эквивалентные емкости объемом 25-40 л, с диаметром дна 35-40 см и более

Посуда лабораторная стеклянная:

Пробирки (многоразового или одноразового использования)

Цилиндры, вместимостью 100, 250, 500 мл или мензурки,
вместимостью 250, 500, 1000 мл

Чашки бактериологические (Петри)

Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10 мл с ценой деления 0,1 мл (многоразового или одноразового использования)

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 9284-75. - Примечание изготовителя базы данных.

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 6672-75. - Примечание изготовителя базы данных.

Стеклянные бюретки, диаметром 12-13 мм и высотой 35-40 см

Флаконы стеклянные или пластиковые (одноразовые) емкостью:
5, 100, 200, 500 и 1000 мл

Банки (широкогорлые) объемом более 2000 мл и высокие кюветы для замачивания продукции и т.п.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого Московского государственного медицинского университета (МГМУ) им.И.М.Сеченова (В.П.Сергиев, М.Н.Лебедева, В.Г.Супряга, Ф.П.Коваленко, Е.Н.Морозов, Е.Н.Понировский, Т.В.Продеус, Л.В.Федянина, А.А.Фролова, Е.Н.Жиренкина, К.Ю.Кузнецова, И.В.Кухалева, В.М.Ракова, Н.А.Турбабина, Е.А.Черникова, В.Д.Завойкин, О.П.Зеля, Л.Ф.Морозова, Г.Л.Плющева, Н.Р.Цаава); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.М.Гузеева); ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (Т.Г.Сыскова); кафедрой факультетской хирургии N 1 Первого МГМУ им.И.М.Сеченова (Г.X.Мусаев); отделом хирургии печени НИЦ Первого МГМУ им.И.М.Сеченова (Г.Г.Ахаладзе); ФБУН "Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии" Роспотребнадзора (Т.И.Твердохлебова, Ю.И.Васерин, Е.П.Хроменкова, С.А.Нагорный, Л.Л.Димидова, А.В.Упырев, Л.В.Шишканова, Е.Ю.Криворотова, А.С.Кожухина); Военно-медицинской академией им.С.М.Кирова (С.С.Козлов); НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи (Д.Б.Гончаров); Российским научным центром хирургии им.Б.В.Петровского РАМН (Г.А.Шатверян); кафедрой молекулярной биологии МГУ им.М.В.Ломоносова (А.А.Колесников); кафедрой тропических и паразитарных болезней Российской медицинской академии последипломного образования (А.Е.Беляев); Управлением Роспотребнадзора по городу Москве (Т.Н.Иванова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве" (Н.И.Тимошенко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. N 3).

3. Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю.Поповой 26 ноября 2013 г.

4. Введены взамен МУК 4.2.735-99 "Паразитологические методы диагностики гельминтозов и протозоозов".

2-е издание, исправленное и дополненное

Область применения

1. Методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода отбора проб и методов лабораторных исследований биологического материала от людей с целью обнаружения возбудителей гельминтозов и протозоозов, определения их видовой принадлежности.

2. Методические указания предназначены для специалистов паразитологических, микробиологических лабораторий санитарно-эпидемиологической службы, медицинских организаций независимо от их организационно-правовых форм, индивидуальных предпринимателей, а также научно-исследовательских институтов, осуществляющих лабораторную диагностику гельминтозов и протозоозов.

3. Методические указания носят рекомендательный характер.

Раздел 1. Лабораторная диагностика кишечных гельминтозов

1.1. Лабораторная диагностика кишечных гельминтов

Гельминты человека относятся преимущественно к двум типам червей: типу плоских червей Plathelminthes и типу круглых червей Nemathelminthes. Тип плоских червей, поражающих человека, включают два класса: ленточные черви - Cestoda и сосальщики - Trematoda. Тип круглых червей включает в себя один класс, имеющий медицинское значение, собственно класс Nematoda.

Большинство гельминтозов можно диагностировать прямыми методами, то есть по обнаружению в биологическом материале (кал, моча, мокрота, дуоденальное содержимое и пр.) гельминтов на разных стадиях развития (взрослых особей, яиц или личинок). Для этого используют макроскопические и микроскопические методы диагностики.

Отбор проб и условия доставки биологического материала в лабораторию для паразитологического исследования

Материалом для лабораторных паразитологических исследований на гельминтозы служит различный биологический материал: кал, кровь, моча, мокрота, лаважная жидкость, дуоденальное содержимое, содержимое кист, биопсионный или постоперационный материал, гистологические препараты внутренних органов и тканей и другой.

Отбор проб кала

Кал после дефекации отбирают из разных участков в количестве не менее 50 г.

Пробу помещают в чистую сухую, стеклянную или пластмассовую посуду с крышками.

Проба кала доставляется в лабораторию и исследуется в день дефекации.

При невозможности исследования пробы кала сразу после дефекации или в день поступления материала в лабораторию, пробу кала хранят при температуре от 0 до 4°С не более суток или собирают в консервант (прилож.8).

Отбор дуоденального содержимого (желчь )

Материал доставляется в лабораторию в чистых химических или центрифужных пробирках сразу после зондирования пациента натощак.

Доставляют все три фракции (порции "А", "В", "С") и исследуют сразу после поступления в лабораторию.

Порцию "А" доставляют для исследования на наличие возбудителей стронгилоидоза, трихостронгилоидозов, анкилостомидозов.

Порции "В" и "С" доставляют для исследования на яйца гельминтов, паразитирующих в протоках печени и желчном пузыре.

Отбор проб мокроты и лаважной жидкости

В лабораторию доставляется мокрота, выделенная при откашливании (не слюна и не слизь с носоглотки), в стерильной посуде с крышками. Проба мокроты исследуется сразу после поступления в лабораторию.

Лаважная жидкость в лабораторию доставляется в стерильной посуде и исследуется в день доставки.

Отбор проб мочи

В лабораторию доставляется моча, собранная между 10 ч утра и 14 ч дня, или все порции суточной мочи; желательно собрать мочу после физической нагрузки (например, 20-30 приседаний).

1.1.1. Методы исследования кала на яйца гельминтов

1.1.1.1. Макроскопические методы

Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы и/или стереомикроскопа.

На поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; иногда выделяются с калом аскариды; у пациентов с дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца, а у инвазированных свиным цепнем с калом часто отходят членики гельминта. У инвазированных бычьим цепнем также происходит отхождение члеников, однако значительная доля члеников отходит активно вне дефекации. В живом состоянии такие членики пациенты часто сравнивают с лапшой. Пациент может доставить членики в лабораторию, но если они подсохли, то на лапшу они перестают быть похожи, а выглядят скорее как чешуйки размером с ноготь мизинца. Перед исследованием такой членик следует размочить в физиологическом растворе. Кроме того, за отхождением взрослых гельминтов необходимо следить при оценке результатов лечения.

Необходимые реактивы и оборудование

Предметные стекла большие (610; 812 см)

Лупа, микроскоп и бинокулярный стереоскопический микроскоп типа МБС

Подготовка к исследованию

1) Извлекать пинцетом или препаровальной иглой все подозрительные частицы и крупные образования на отдельное предметное стекло или чашку Петри.

2) Образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривать под микроскопом МБС или под лупой между двумя предметными стеклами.

3) Мелких гельминтов рассматривать в капле глицерина или физиологического раствора под микроскопом при увеличении: окуляр 7 или 10, объектив 8 или 10.

4) Членики ленточных гельминтов поместить на предметное стекло, подсушить, закрыть другим предметным стеклом, слегка сдавить и рассмотреть строение матки.

5) Микроскопия всех визуально обнаруженных в кале паразитов или фрагментов обязательна для уточнения морфологических особенностей и идентификации паразита.

Применение. Метод применяется при идентификации зрелых паразитов или их фрагментов, например для дифференциальной диагностики члеников цестод (бычьего, свиного цепня и широкого, чаечного лентеца).

1.1.1.2. Микроскопические методы
1.1.1.2.1. Метод толстого мазка под целлофаном по Като и Миура

Толстый мазок представляет собой тонкий слой пробы кала на предметном стекле под гигроскопическим целлофаном, пропитанным смесью глицерина, фенола и малахитового зеленого.

Примечание. Гидрофильный целлофан горит в отличие от полиэтиленовой пленки, которая плавится и непригодна для исследования.

Необходимые реактивы и оборудование

Раствор фенола 6%-й (100 мл дистиллированной воды + 6 г фенола)

Раствор малахитового зеленого 3%-й (2,5 г малахитовой зелени + 75 мл дистиллированной воды)

Обезжиренные предметные стекла

Палочки стеклянные или деревянные

Валик или резиновая пробка

Подготовка к исследованию

Приготовление рабочего раствора Като: 100 мл 6%-го раствора фенола + 100 мл глицерина + 1,2 мл 3%-го раствора малахитового зеленого (раствор можно хранить длительное время в склянке из темного стекла с притертой крышкой).

При отсутствии фенола и малахитовой зелени можно использовать раствор глицерина (50 мл глицерина + 50 мл дистиллированной воды).

Подготовка целлофановых полосок. Нарезать полоски из гидрофильного целлофана, чтобы их размер соответствовал размеру предметного стекла.

1) Полоски поместить в рабочий раствор Като не менее, чем на 24 ч до проведения анализа. В 200 мл рабочего раствора можно обрабатывать до 5 тыс. новых целлофановых полосок.

2) На предметное стекло нанести пробу кала размером с горошину. Весь объем пробы кала растереть индивидуальной стеклянной палочкой по стеклу.

3) Мазок кала накрыть целлофановой полоской, обработанной в растворе.

4) Целлофан сверху притереть резиновой пробкой или специальным валиком, ширина которого соответствует или немного больше ширины предметного стекла, до получения тонкого, равномерного, прозрачного слоя.

5) Препарат просветляется при комнатной температуре в течение 20-30 мин.

6) Микроскопировать при увеличении: объектив 8 или 10, окуляр 7 или 10 (для уточнения морфологического строения яиц гельминтов - объектив 40).

1) Позволяет просмотреть в 20-30 раз больше препаратов кала, чем в нативном мазке без применения гигроскопических целлофановых полосок.

2) Выявляет яйца гельминтов желудочно-кишечного тракта при высокой и средней интенсивности инвазии.

1) Рекомендуется при массовых обследованиях населения на кишечные гельминтозы.

2) При обследованиях населения на анкилостомидозы, трихостронгилидозы и гименолепидоз необходимо учитывать, что применение данного метода имеет ограничения во времени, а именно возбудители указанных инвазий разрушаются в течение 1-2 ч.

1.1.1.2.2. Методы седиментации
Метод формалин-эфирной или уксусной седиментации

В основе методов седиментации (осаждения) лежит разность удельного веса используемых химических реактивов и яиц гельминтов: удельный вес яиц высокий, и они концентрируются в осадке.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого Московского государственного медицинского университета (МГМУ) им. И.М.Сеченова (А.И.Чернышенко, Н.А.Турбабина, Т.В.Старкова. О.П.Зеля, В.Г.Супряга, К.Ю.Кузнецова, В.Д.Завойкин, Е.А.Черникова, Е.Н.Морозов, М.Н.Лебедева, В.П.Сергиев); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.М.Гузеева, В.Н.Брагина); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (Т.Г.Сыскова, Т.А.Семенова, М.М.Асланова); ФБУН Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора (Ю.И.Васерин, Т.И.Твердохлебова, Е.П.Хроменкова, Л.Л.Димидова, Е.Ю.Криворотова); Всероссийским НИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина (А.В.Успенский, В.В.Горохов, Н.П.Сорокина); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" (Н.И.Тимошенко, Т.Н.Цыбина, М.В.Гузеева); ФБУН "Тюменский НИИ краевой и инфекционной патологии (Т.Ф.Степанова); Курским государственным университетом (Н.С.Малышева, Н.А.Самохвалова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области" (М.И.Беляева); Управлением Роспотребнадзора по Ростовской области (М.Ю.Соловьев, Е.В.Ковалев, Г.В.Портнова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Ростовской области" (Г.Т.Айдинов, Г.В.Стрельникова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Липецкой области" (Е.П.Сиротина); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Тульской области" (Л.И.Шишкина. Е.Ю.Державина); Управлением Роспотребнадзора по Республике Адыгея (А.X.Агиров, Л.А.Долева, Н.3.Шовгенова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Ханты-Мансийском автономном округе" (Н.А.Остапенко, М.Г.Соловьева, И.И.Козлова, О.В.Мосьсина, С.В.Куклин); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Адыгея" (С.А.Завгородний, Н.Д.Труфанов, И.В.Пипченко, А.Ю.Шураш).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ к практическому применению на бюро секции по физико-химическим методам исследования объектов окружающей среды при Проблемной комиссии "Научные основы экологии человека и гигиены окружающей среды".

3. РЕКОМЕНДОВАНЫ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2011 N 2).

4. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 12 мая 2012 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН МУК 4.2.1881-04 "Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции".

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы санитарно-паразитологической экспертизы плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции на соответствие установленным требованиям санитарно-эпидемиологической безопасности.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы другими испытательными лабораториями, аккредитованными в установленном порядке.

2. Нормативные ссылки

2.14. СанПиН 3.2.1333-03 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".

2.17. ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2006* "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009. - Примечание изготовителя базы данных.

2.18. ГОСТ 26313-84 "Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб".

2.19. МУ 3.2.1756-03 "Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями".

2.20. МУК 4.2.2661-10 "Методы санитарно-паразитологических исследований".

2.21. МУК 4.2.2314-08 "Методы санитарно-паразитологического анализа воды".

2.22. МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности".

3. Правила отбора проб для санитарно-паразитологических исследований

Правила отбора проб (образцов) плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции устанавливаются с целью санитарно-эпидемиологической экспертизы продукции и определения степени ее контаминации яйцами и личинками гельминтов, а также цистами (ооцистами) кишечных простейших.

3.1. Отбор проб для лабораторных исследований производится методом случайной выборки. Объединенная проба формируется методом отбора трех точечных проб от каждой фиксированной партии однородной продукции.

3.2. Пробы свежих и свежемороженых зелени столовой, овощей, фруктов и ягод отбираются в чистые емкости (чистые полиэтиленовые пакеты или другие упаковочные материалы, разрешенные для контакта с пищевой продукцией).

3.3. Объем пробы плодов, овощей составляет по 0,5 кг с каждых 100 кг продукции.

3.4. Объем объединенной пробы столовой зелени, листовых овощей и грибов, выращенных в тепличных условиях, должен составлять не менее 0,1 кг из каждой потребительской тары.

3.5. Отбор проб ягодной продукции проводят по 0,2 кг с каждых 100 кг продукции.

3.6. Отбор проб свежеотжатых соков проводят в объеме 0,1 л.

3.7. При отборе продукции непосредственно на производстве по выращиванию продукции (теплица, поле) отбирают 0,5 кг с каждых 10 м объекта по методу "конверта". Метод "конверта": площадь теплицы (поля) условно делится на площадки по 10 м, определяются 5 точек отбора по углам и центру выделенных площадок, в них отбираются по одной пробе весом 0,1 кг продукции и составляется одна объединенная проба весом не более 0,5 кг выращенной продукции.

3.8. Отбор проб методом смывов допускается с плодов и бахчевых культур крупных размеров с гладкой поверхностью; проводится на месте выемки проб двумя методами: методом простых смывов; методом инструментальных смывов.

3.9. Результаты лабораторных исследований оформляются в виде протоколов исследований (испытаний).

Объемы проб плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции для проведения санитарно-паразитологических исследований представлены в табл.1.

Отбор проб свежих и свежемороженых плодов, овощей, ягод и столовой зелени

Объем, вес объединенной пробы для исследования

Не менее 0,1 кг из каждой потребительской тары.

Отбор проб капусты, салатов допускается с поверхностных (прикорневых) листьев

Грибы, выращенные в тепличных условиях

Не менее 0,5 кг с каждых 100 кг продукции

По 0,2 кг с каждых 100 кг продукции

Плоды бахчевых культур крупных размеров с гладкой поверхностью

Смывы с поверхности не менее 20-25 экземпляров плодов

4. Условия хранения проб

4.1. Доставленные в лабораторию пробы овощей, фруктов, ягод и столовой зелени исследуют в день доставки, при невозможности проведения исследования пробы хранят в холодильнике при температуре 4-5 °С в доставленной упаковке. Срок исследования зависит от объема пробы (не более 10 суток).

4.2. Образцы свежезамороженной продукции хранят при температуре морозильной камеры в соответствии с маркировкой на этикетке. Размораживание и повторное замораживание продукции в процессе хранения в лаборатории не допускается.

4.3. Пробы плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции после исследования возвращаются заказчику, либо утилизируются.

5. Оборудование и реактивы

Пробоотборник-концентратор гидробиологический (аппарат "ПробоКонГ") (или аналоги)

* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Отборник флотанта фильтрующий "ОФФ-25"

Вакуумные фильтровальные установки ПВФ-142, ПВФ-35, ПВФ-47

Приборы напорного фильтрования ПНФ, УППВ (или аналоги)

Термоконтейнер для транспортирования свежей и свежемороженой продукции

Лабораторные центрифуги со сменным ротором или другие марки с аналогичными параметрами, обеспечивающие 1500-3000 об./мин, позволяющие центрифугировать пробы в центрифужных пробирках от 10 до 250 мл

Холодильный шкаф или холодильник бытовой, поддерживающий температуру ±(2-6) °С

Морозильная камера, поддерживающая температуру до -18 °С

Термометр для контроля температуры внутри холодильного шкафа, холодильника бытового, морозильной камеры

Весы лабораторные механические равноплечие с наибольшим пределом взвешивания 1000 г, с допустимой погрешностью не более 0,1 г с разновесами или электронные весы с наибольшим пределом взвешивания 200 г, с допустимой погрешностью не более 0,01 г

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды не ниже требований

Ареометры с пределами измерений от 1,000 до 1,400 кг/м

Световые микроскопы, оснащенные окулярами с увеличением 10 (дополнительно могут быть 7, 5), объективами 10, 40, 100, окуляр-микрометр и объект-микрометр

Шейкер S-3 (аналоги)

Мембранные фильтры на основе ацетатов целлюлозы с размерами пор от 2,5 до 5,0 мкм,

Прозрачные трековые мембраны ATM на основе полиэтилентерефталата с размерами пор от 1,0 до 5,0 и более мкм

Диаметр фильтровальных дисков 25, 35, 47, 70 и до 142 мм, в зависимости от диаметра фритты фильтродержателя используемого фильтровального оборудования

Таз круглый с ручками объемом 32 л или эквивалентные емкости объемом 25-40 л, с диаметром дна 35-40 см и более

Посуда лабораторная стеклянная:

Пробирки (многоразового или одноразового использования)

Цилиндры, вместимостью 100, 250, 500 мл или мензурки,
вместимостью 250, 500, 1000 мл

Чашки бактериологические (Петри)

Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10 мл с ценой деления 0,1 мл (многоразового или одноразового использования)

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 9284-75. - Примечание изготовителя базы данных.

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 6672-75. - Примечание изготовителя базы данных.

Стеклянные бюретки, диаметром 12-13 мм и высотой 35-40 см

Флаконы стеклянные или пластиковые (одноразовые) емкостью:
5, 100, 200, 500 и 1000 мл

Банки (широкогорлые) объемом более 2000 мл и высокие кюветы для замачивания продукции и т.п.

Гельминтные инвазии, передающиеся через почву, входят в число наиболее распространенных в мире инфекций и поражают самые бедные и социально неблагополучные слои населения. Они передаются через яйца, присутствующие в фекалиях человека, которые попадают в почву в районах с плохой санитарией.

К наиболее распространенным геогельминтам относятся круглые черви (Ascaris lumbricoides), власоглавы (Trichuris trichiura) и анкилостомы (Necator americanus и Ancylostoma duodenale). Эти виды геогельминтов обычно объединяются в одну группу, поскольку они требуют аналогичных диагностических процедур и реагируют на одни и те же лекарственные препараты.

Угрица кишечная (Strongyloides stercoralis) – кишечный гельминт, который в силу своих специфических особенностей требует иных методов диагностики, нежели другие геогельминты, и по этой причине часто не выявляется. Кроме того, этот паразит нечувствителен к альбендазолу и мебендазолу, в связи с чем массовые кампании профилактического лечения других геогельминтозов не отражаются на связанной с ним заболеваемости.

Глобальное распределение и распространенность

Во всем мире гельминтами, передающимися через почву, заражено около 1,5 млрд человек, или 24% мирового населения. Такие инвазии широко распространены в тропических и субтропических районах, причем самые высокие показатели приходятся на страны Африку к югу от Сахары, страны Америки, Китай и Восточную Азию.

Более 267 млн детей дошкольного возраста и более 568 млн детей школьного возраста проживают в районах с интенсивной передачей этих паразитов и нуждаются в лечении и профилактике.

По оценкам, во всем мире S. stercoralis заражено более 600 млн человек. При этом в силу того, что заражение этим паразитом характерно для районов с неудовлетворительной санитарией, ареал его географического распространения частично совпадает с ареалами распространения других геогельминтов.

Механизмы передачи

Геогельминты передаются через яйца, выделяющиеся с фекалиями инфицированных. Взрослые особи паразитов живут в кишечнике, где ежедневно откладывают тысячи яиц. В районах с неудовлетворительной санитарией эти яйца попадают в почву. Заражение ими может происходить разными путями:

  • потребление в пищу плохо вымытых, неочищенных или не прошедших надлежащую термическую обработку овощей, загрязненных яйцами геогельминтов;
  • потребление содержащей яйца геогельминтов питьевой воды, поступающей из зараженных источников;
  • попадание яиц геогельминтов в пищеварительный тракт детей, играющих на загрязненной почве и берущих грязные руки в рот.

Кроме того, личинки анкилостомы могут вылупляться из яиц в почве и развиваться в формы, способные активно проникать в организм через кожу. Заражение анкилостомами происходит главным образом при ходьбе босиком по зараженной почве.

Геогельминтные инвазии не передаются непосредственно от человека к человеку или в результате контакта со свежими фекалиями, поскольку выделяемые с фекалиями яйца паразитов приобретают инвазивность лишь примерно после трехнедельного созревания в почве.

A. lumbricoides, T. trichiura и анкилостомы в организме человека не размножаются, поэтому повторное заражение происходит только в результате контакта с паразитами, находящимися на инвазивных стадиях развития в объектах окружающей среды. S. stercoralis способны размножаться в организме хозяина, и у лиц с ослабленным иммунитетом бесконтрольное размножение паразита может привести к летальному исходу.

Воздействие на нутритивный статус

Геогельминтозы могут приводить к различным нарушениям нутритивного статуса зараженных пациентов.

  • Черви питаются тканями организма хозяина, в том числе кровью, что приводит к дефициту железа и белка.
  • Кроме того, при анкилостомозе развивается хроническое кишечное кровотечение, которое может привести к анемии.
  • Заражение гельминтами приводит к нарушению всасывания питательных веществ. Заражение круглыми червями может приводить к дефициту витамина А.
  • Некоторые геогельминты также приводят к потере аппетита и, как следствие, к снижению объемов потребляемой пищи и ухудшению общего физического тонуса. Заражение T.trichiura может приводить к диарее и дизентерии.

Формы заболевания и симптоматика

Выраженность клинических проявлений зависит от численности гельминтов в организме. Как правило, у людей с легкой формой гельминтной инвазии (т. е. с небольшим числом гельминтов в организме) серьезных симптомов не наблюдается. При более тяжелых формах инвазии могут развиваться разнообразные симптомы, включая кишечные проявления (диарею, боли в области брюшной полости), недостаточность питания, общее недомогание и слабость, а также нарушения роста и физического развития.

При особо тяжелых гельминтозах может возникнуть непроходимость кишечника, требующая хирургического вмешательства.

Гельминтозы, вызванные S. stercoralis, могут вызывать дерматологические и гастроинтестинальные симптомы и часто ассоциируются с хронической недостаточностью питания у детей. У лиц с ослабленным иммунитетом паразиты могут вызвать гиперинфекцию/синдром диссеминации, что без быстрого и надлежащего лечения всегда заканчивается летальным исходом; при этом часто даже лечение не способно предотвратить летальный исход.

Стратегия ВОЗ по борьбе с гельминтными инвазиями

В 2001 г. делегаты сессии Всемирной ассамблеи здравоохранения единогласно приняли резолюцию (WHA54.19), в которой содержался призыв к эндемичным странам начать серьезную борьбу с гельминтозами, в частности с шистосомозом и гельминтными инвазиями, передающимися через почву.

Мероприятия по борьбе с геогельминтными инвазиями заключаются в обеспечении снижения заболеваемости путем периодического лечения представителей групп риска. К группам риска относятся:

  • дети дошкольного возраста;
  • дети школьного возраста;
  • женщины репродуктивного возраста (в том числе беременные на втором и третьем триместре беременности и кормящие матери);
  • взрослые, подверженные высокому риску в силу своей трудовой деятельности, например работники чайных плантаций или горнодобывающей отрасли.

ВОЗ рекомендует назначать всем представителям групп риска, проживающим в эндемичных районах, периодическое лечение (дегельминтизацию) без необходимости предварительной постановки индивидуального диагноза. Это позволит снизить заболеваемость или интенсивность клинических проявлений посредством уменьшения количества паразитов. К дополнительным мероприятиям относятся:

  • санитарно-гигиеническое просвещение, которое позволяет сократить передачу гельминтов и повторное заражение за счет пропаганды и поощрения здоровых форм поведения; и
  • обеспечение надлежащей санитарии, что также имеет большое значение, однако не всегда представляется возможным в условиях ограниченности ресурсов.

Периодическое лечение направлено на снижение и поддержание на низком уровне интенсивности инвазий, а также на профилактику клинических форм гельминтозов у зараженных представителей групп риска.

Дегельминтизацию можно легко совместить с проведением дней детского здоровья или программами по раздаче пищевых добавок среди детей дошкольного возраста, а также включить в школьные медицинские программы. В 2020 г. в эндемичных странах лечение антигельминтными средствами прошли более 436 млн детей, что составляет 42% всех детей, относящихся к группам риска.

Значительное уменьшение показателей охвата (по сравнению с 58% в 2019 г.) обусловлено пандемией COVID-19, которая вызвала частичную приостановку работы инфраструктуры, которая использовалась для раздачи антигельминтных препаратов, в том числе кампаний вакцинации и дней детского здоровья среди дошкольников и школьных мероприятий среди детей школьного возраста.

ВОЗ включила задачу по снижению заболеваемости, связанной с S. stercoralis, в перечень задач, которые должны быть выполнены к 2030 г. Эта задача представляется выполнимой с учетом текущих поставок прошедшего преквалификацию ивермектина по доступным ценам. Для предоставления ивермектина могут использоваться механизмы, применяемые в рамках борьбы с другими гельминтозами, передающимися через почву. В настоящее время в порядке эксперимента проводятся пилотные мероприятия в целях доработки стратегии и оценки ее эффективности.

Рекомендуемые ВОЗ лекарственные средства

Рекомендуемые препараты — альбендазол (400 мг) и мебендазол (500 мг) — эффективны, недороги и просты в использовании, что позволяет привлекать к их распространению немедицинский персонал (например, учителей). Они прошли масштабные исследования на безопасность и применялись для лечения миллионов людей, и вызываемые ими побочные эффекты являются относительно редкими и умеренными по своему характеру.

ВОЗ обеспечивает поставки альбендазола и мебендазола на безвозмездной основе министерствам здравоохранения всех эндемичных стран для лечения всех детей школьного возраста.

Начиная с 2021 г. для борьбы с S. stercoralis может по доступным ценам приобретаться непатентованный ивермектин.

Глобальные задачи

В области борьбы с гельминтозами, передающимися через почву, было поставлено шесть глобальных задач со сроком выполнения к 2030 г.:

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого Московского государственного медицинского университета (МГМУ) им.И.М.Сеченова (В.П.Сергиев, М.Н.Лебедева, В.Г.Супряга, Ф.П.Коваленко, Е.Н.Морозов, Е.Н.Понировский, Т.В.Продеус, Л.В.Федянина, А.А.Фролова, Е.Н.Жиренкина, К.Ю.Кузнецова, И.В.Кухалева, В.М.Ракова, Н.А.Турбабина, Е.А.Черникова, В.Д.Завойкин, О.П.Зеля, Л.Ф.Морозова, Г.Л.Плющева, Н.Р.Цаава); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.М.Гузеева); ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (Т.Г.Сыскова); кафедрой факультетской хирургии N 1 Первого МГМУ им.И.М.Сеченова (Г.X.Мусаев); отделом хирургии печени НИЦ Первого МГМУ им.И.М.Сеченова (Г.Г.Ахаладзе); ФБУН "Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии" Роспотребнадзора (Т.И.Твердохлебова, Ю.И.Васерин, Е.П.Хроменкова, С.А.Нагорный, Л.Л.Димидова, А.В.Упырев, Л.В.Шишканова, Е.Ю.Криворотова, А.С.Кожухина); Военно-медицинской академией им.С.М.Кирова (С.С.Козлов); НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи (Д.Б.Гончаров); Российским научным центром хирургии им.Б.В.Петровского РАМН (Г.А.Шатверян); кафедрой молекулярной биологии МГУ им.М.В.Ломоносова (А.А.Колесников); кафедрой тропических и паразитарных болезней Российской медицинской академии последипломного образования (А.Е.Беляев); Управлением Роспотребнадзора по городу Москве (Т.Н.Иванова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве" (Н.И.Тимошенко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. N 3).

3. Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю.Поповой 26 ноября 2013 г.

4. Введены взамен МУК 4.2.735-99 "Паразитологические методы диагностики гельминтозов и протозоозов".

2-е издание, исправленное и дополненное

Область применения

1. Методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода отбора проб и методов лабораторных исследований биологического материала от людей с целью обнаружения возбудителей гельминтозов и протозоозов, определения их видовой принадлежности.

2. Методические указания предназначены для специалистов паразитологических, микробиологических лабораторий санитарно-эпидемиологической службы, медицинских организаций независимо от их организационно-правовых форм, индивидуальных предпринимателей, а также научно-исследовательских институтов, осуществляющих лабораторную диагностику гельминтозов и протозоозов.

3. Методические указания носят рекомендательный характер.

Раздел 1. Лабораторная диагностика кишечных гельминтозов

1.1. Лабораторная диагностика кишечных гельминтов

Гельминты человека относятся преимущественно к двум типам червей: типу плоских червей Plathelminthes и типу круглых червей Nemathelminthes. Тип плоских червей, поражающих человека, включают два класса: ленточные черви - Cestoda и сосальщики - Trematoda. Тип круглых червей включает в себя один класс, имеющий медицинское значение, собственно класс Nematoda.

Большинство гельминтозов можно диагностировать прямыми методами, то есть по обнаружению в биологическом материале (кал, моча, мокрота, дуоденальное содержимое и пр.) гельминтов на разных стадиях развития (взрослых особей, яиц или личинок). Для этого используют макроскопические и микроскопические методы диагностики.

Отбор проб и условия доставки биологического материала в лабораторию для паразитологического исследования

Материалом для лабораторных паразитологических исследований на гельминтозы служит различный биологический материал: кал, кровь, моча, мокрота, лаважная жидкость, дуоденальное содержимое, содержимое кист, биопсионный или постоперационный материал, гистологические препараты внутренних органов и тканей и другой.

Отбор проб кала

Кал после дефекации отбирают из разных участков в количестве не менее 50 г.

Пробу помещают в чистую сухую, стеклянную или пластмассовую посуду с крышками.

Проба кала доставляется в лабораторию и исследуется в день дефекации.

При невозможности исследования пробы кала сразу после дефекации или в день поступления материала в лабораторию, пробу кала хранят при температуре от 0 до 4°С не более суток или собирают в консервант (прилож.8).

Отбор дуоденального содержимого (желчь )

Материал доставляется в лабораторию в чистых химических или центрифужных пробирках сразу после зондирования пациента натощак.

Доставляют все три фракции (порции "А", "В", "С") и исследуют сразу после поступления в лабораторию.

Порцию "А" доставляют для исследования на наличие возбудителей стронгилоидоза, трихостронгилоидозов, анкилостомидозов.

Порции "В" и "С" доставляют для исследования на яйца гельминтов, паразитирующих в протоках печени и желчном пузыре.

Отбор проб мокроты и лаважной жидкости

В лабораторию доставляется мокрота, выделенная при откашливании (не слюна и не слизь с носоглотки), в стерильной посуде с крышками. Проба мокроты исследуется сразу после поступления в лабораторию.

Лаважная жидкость в лабораторию доставляется в стерильной посуде и исследуется в день доставки.

Отбор проб мочи

В лабораторию доставляется моча, собранная между 10 ч утра и 14 ч дня, или все порции суточной мочи; желательно собрать мочу после физической нагрузки (например, 20-30 приседаний).

1.1.1. Методы исследования кала на яйца гельминтов

1.1.1.1. Макроскопические методы

Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы и/или стереомикроскопа.

На поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; иногда выделяются с калом аскариды; у пациентов с дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца, а у инвазированных свиным цепнем с калом часто отходят членики гельминта. У инвазированных бычьим цепнем также происходит отхождение члеников, однако значительная доля члеников отходит активно вне дефекации. В живом состоянии такие членики пациенты часто сравнивают с лапшой. Пациент может доставить членики в лабораторию, но если они подсохли, то на лапшу они перестают быть похожи, а выглядят скорее как чешуйки размером с ноготь мизинца. Перед исследованием такой членик следует размочить в физиологическом растворе. Кроме того, за отхождением взрослых гельминтов необходимо следить при оценке результатов лечения.

Необходимые реактивы и оборудование

Предметные стекла большие (610; 812 см)

Лупа, микроскоп и бинокулярный стереоскопический микроскоп типа МБС

Подготовка к исследованию

1) Извлекать пинцетом или препаровальной иглой все подозрительные частицы и крупные образования на отдельное предметное стекло или чашку Петри.

2) Образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривать под микроскопом МБС или под лупой между двумя предметными стеклами.

3) Мелких гельминтов рассматривать в капле глицерина или физиологического раствора под микроскопом при увеличении: окуляр 7 или 10, объектив 8 или 10.

4) Членики ленточных гельминтов поместить на предметное стекло, подсушить, закрыть другим предметным стеклом, слегка сдавить и рассмотреть строение матки.

5) Микроскопия всех визуально обнаруженных в кале паразитов или фрагментов обязательна для уточнения морфологических особенностей и идентификации паразита.

Применение. Метод применяется при идентификации зрелых паразитов или их фрагментов, например для дифференциальной диагностики члеников цестод (бычьего, свиного цепня и широкого, чаечного лентеца).

1.1.1.2. Микроскопические методы
1.1.1.2.1. Метод толстого мазка под целлофаном по Като и Миура

Толстый мазок представляет собой тонкий слой пробы кала на предметном стекле под гигроскопическим целлофаном, пропитанным смесью глицерина, фенола и малахитового зеленого.

Примечание. Гидрофильный целлофан горит в отличие от полиэтиленовой пленки, которая плавится и непригодна для исследования.

Необходимые реактивы и оборудование

Раствор фенола 6%-й (100 мл дистиллированной воды + 6 г фенола)

Раствор малахитового зеленого 3%-й (2,5 г малахитовой зелени + 75 мл дистиллированной воды)

Обезжиренные предметные стекла

Палочки стеклянные или деревянные

Валик или резиновая пробка

Подготовка к исследованию

Приготовление рабочего раствора Като: 100 мл 6%-го раствора фенола + 100 мл глицерина + 1,2 мл 3%-го раствора малахитового зеленого (раствор можно хранить длительное время в склянке из темного стекла с притертой крышкой).

При отсутствии фенола и малахитовой зелени можно использовать раствор глицерина (50 мл глицерина + 50 мл дистиллированной воды).

Подготовка целлофановых полосок. Нарезать полоски из гидрофильного целлофана, чтобы их размер соответствовал размеру предметного стекла.

1) Полоски поместить в рабочий раствор Като не менее, чем на 24 ч до проведения анализа. В 200 мл рабочего раствора можно обрабатывать до 5 тыс. новых целлофановых полосок.

2) На предметное стекло нанести пробу кала размером с горошину. Весь объем пробы кала растереть индивидуальной стеклянной палочкой по стеклу.

3) Мазок кала накрыть целлофановой полоской, обработанной в растворе.

4) Целлофан сверху притереть резиновой пробкой или специальным валиком, ширина которого соответствует или немного больше ширины предметного стекла, до получения тонкого, равномерного, прозрачного слоя.

5) Препарат просветляется при комнатной температуре в течение 20-30 мин.

6) Микроскопировать при увеличении: объектив 8 или 10, окуляр 7 или 10 (для уточнения морфологического строения яиц гельминтов - объектив 40).

1) Позволяет просмотреть в 20-30 раз больше препаратов кала, чем в нативном мазке без применения гигроскопических целлофановых полосок.

2) Выявляет яйца гельминтов желудочно-кишечного тракта при высокой и средней интенсивности инвазии.

1) Рекомендуется при массовых обследованиях населения на кишечные гельминтозы.

2) При обследованиях населения на анкилостомидозы, трихостронгилидозы и гименолепидоз необходимо учитывать, что применение данного метода имеет ограничения во времени, а именно возбудители указанных инвазий разрушаются в течение 1-2 ч.

1.1.1.2.2. Методы седиментации
Метод формалин-эфирной или уксусной седиментации

В основе методов седиментации (осаждения) лежит разность удельного веса используемых химических реактивов и яиц гельминтов: удельный вес яиц высокий, и они концентрируются в осадке.

Читайте также: