Отбор смывов на иерсиниоз
Обновлено: 22.04.2024
ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗ И ИЕРСИНИОЗ (эпидемиология, клиника, диагностика, терапия)
Методические рекомендации содержат современные сведения по эпидемиологии иерсиниозов, особенности клинических проявлений и детальное освещение вопросов дифференциальной диагностики иерсиниозов с различными инфекционными и терапевтическими болезнями.
Особое внимание уделено методам обнаружения возбудителей (антигенов), эффективным средствам специфической диагностики.
Методические рекомендации предназначены эпидемиологам, инфекционистам, педиатрам и микробиологам.
Методические рекомендации разработаны специалистами:
ФГУ "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" - д.м.н. проф. Г.Я.Ценевой, н.с. Г.И.Кокориной, к.б.н. Е.А.Воскресенской; к.м.н. О.А.Шендерович;
ФГУ "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт детских инфекций" - д.м.н. проф. В.В.Ивановой, д.м.н. О.В.Тихомировой, к.м.н. М.К.Бехтеревой;
Министерства здравоохранения и социальной политики Российской Федерации - главным специалистом Т.Н.Фролочкиной.
Рецензенты: профессор В.В.Тэц
Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica широко распространены во многих странах мира, являясь причиной cпорадической и групповой заболеваемости, при этом псевдотуберкулез характерен, в основном, для территорий с умеренным и холодным климатом.
В России псевдотуберкулез регистрируется практически повсеместно, однако наиболее высокие показатели заболеваемости характерны для Сибирского региона (в 2003 г. 24,45 на 100 тыс.), Дальнего Востока (10,52 на 100 тыс.) и Северо-Запада (9,75 на 100 тыс.), включая Санкт-Петербург. Заболеваемость иерсиниозом в указанных регионах также примерно в 2-2,5 раза превышает заболеваемость по стране: показатели на 100 тыс. в 2003 г. составили 2,95; 3,08 и 4,39, соответственно.
Дети болеют псевдотуберкулезом, как и иерсиниозом, в 4-5 раз чаще, чем взрослые. В последние годы отмечается тенденция к росту рецидивирующих и хронических форм.
В настоящее время серотипирование иерсиний на ряде территорий России не проводится. Имеющийся набор коммерческих поликлональных диагностических сывороток не велик, а моноклональные сыворотки, разработанные в России, не имеют промышленного производства. Между тем серологическое типирование является обязательным. Оно необходимо для оценки этиологической значимости выделенных бактерий, а также регистрации новых серотипов в целях усовершенствования диагностики.
Вследствие полиморфизма клинических проявлений псевдотуберкулез и иерсиниоз могут сопровождаться проявлениями, сходными с аналогичными признаками 36 нозологических форм. В этой связи для повышения эффективности диагностики важно освещение вопросов дифференциальной диагностики иерсиниозов с различными инфекционными, терапевтическими и хирургическими болезнями.
Для совершенствования лабораторной диагностики представлены экспресс-методы, в том числе ПЦР, определены наиболее информативные биологические субстраты и оптимальные сроки их исследования, предложена общая тактика лабораторной диагностики заболеваний, обусловленных иерсиниями.
1. ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ МЕТОДА
Клинико-дифференциальную диагностику иерсиниоза и псевдотуберкулеза следует проводить с приведенным ниже перечнем инфекций во избежание гипо- и гипердиагностики.
Методы лабораторной диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза необходимо внедрить во всех регионах России в качестве унифицированных.
2. МАТЕРИАЛЬНО-ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ МЕТОДА
Оборудование:
- стандартное оборудование для бактериологических лабораторий;
- стандартное оборудование для серологических лабораторий;
- стандартное оборудование для иммунологических лабораторий.
Диагностические наборы:
- сыворотки диагностические к Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis распространенных сероваров О-моновалентные кроличьи сухие для РА на стекле;
- сыворотка диагностическая к вирулентным Yersinia enterocolitica адсорбированная кроличья сухая для РА на стекле (СВИ) (НИИЭМ им.Пастера, г.Санкт-Петербург) утв. МЗ 25.02.03;
- "Тест-система иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серовара" (НИИЭМ им.Пастера, г.Санкт-Петербург) утв. МЗ 1995 г.;
- наборы для ПЦР "Иерпсевдоамплитест" и "Иерсэнтероамплитест" производства ЗАО "Ниармедик плюс" (г.Москва);
- "Латексный псевдотуберкулезный диагностикум" (Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток), рег. N 92/203/17;
- диагностикум эритроцитарный псевдотуберкулезный антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/71;
- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:3 антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/383;
- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:9 антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/383.
Питательные среды:
- питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, рег. N 97/306/5;
- среда для определения чувствительности к антибиотикам (АГВ) (ФС 42-3521-98, НПО "Питательные среды");
- среда Игла, рег. N 94/16/81;
- сыворотка крупного рогатого скота, рег. N 91/28/5;
- питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (агар+Эндо-ГРМ) (ГПЦПЦ, Оболенск), рег. N 98/306/5.
Химические реактивы:
- двузамещенный фосфорно-кислый калий (KНРО), ГОСТ 2493-75;
- фосфатно-солевой буфер, кат. N В-60201;
- KОН, СТ СЕВ 1439-78*.
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: СТ СЭВ 1439-78**;
** На территории Российской Федерации действует ГОСТ 24363-80. - Примечание изготовителя базы данных.
3. ОПИСАНИЕ МЕТОДА
3.1. Этиология псевдотуберкулеза и иерсиниоза
Возбудители псевдотуберкулеза и иерсиниоза - микроорганизмы рода Yersinia семейства Enterobacteriaceae. Возбудитель псевдотуберкулеза впервые был выделен в 1883 г. L.Malasses и W.Vignal. Несколько позже C.Eberth (1886), выделив культуру и изучив ее на лабораторных животных как спонтанно болеющих, так и зараженных в эксперименте, отметил сходство патологоанатомических изменений внутренних органов погибших животных с таковыми при туберкулезной инфекции и назвал изучаемый микроорганизм "псевдотуберкулезным". У человека этот микроорганизм вызывает заболевание, сопровождающееся энтеритами, энтероколитами и тяжелой генерализованной инфекцией с множественными поражениями отдельных органов и систем.
Первые сведения о выделении Y. enterocolitica из клинического материала от больных людей появились в США в 1939 г. (Schlifstein J., Coleman N.). С 1962 года после регистрации эпизоотий, вызванных Y. enterocolitica среди шиншилл, микроорганизмы были изучены, идентифицированы и по предложению W. Frederiksen (1964) названы Y. enterocolitica. Название принято Международным подкомитетом по таксономии в 1967 г. В России Y. enterocolitica впервые была выделена М.А.Беловой, Г.В.Ющенко (1968). Этиологическая роль Y. enterocolitica аргументирована при возникновении илеитов, энтеритов и гастроэнтеритов, мезентериальных лимфаденитов, заболеваний печени и мочевыводяших путей, аппендицитов, других внекишечных проявлений (форм) иерсиниоза.
3.1.1. Биологические характеристики иерсиний
Морфологические свойства
Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis - грамотрицательные палочки с закругленными концами, диаметром 0,5-0,8 и длиной 1-3 мкм. Размеры палочек колеблются в зависимости от возраста культуры, температуры и среды выращивания. Микроорганизмы окрашиваются всеми анилиновыми красителями. В мазках имеют вид палочек, а из бульонных культур и отпечатков органов экспериментально зараженных животных - коккобактерии с биполярной окраской. В мазках из жидких питательных сред Y. pseudotuberculosis могут располагаться цепочками, что не наблюдается у Y. enterocolitica.
Культуральные свойства
Возбудители псевдотуберкулеза и иерсиниоза - факультативные анаэробы. Оптимальная температура их культивирования - 22-28 °С, но они могут размножаться при температуре от 2 до 40 °С, в том числе при 2-10 °С, что дало основание J.S.Peterson и R.A.Cook (1963) предложить метод выделения культуры после выдерживания посевов на холоде (4-6 °С) в фосфатном буфере (так называемое холодовое обогащение). При более высокой температуре культивирования иерсинии обоих видов неподвижны. Y. pseudotuberculosis имеет 3-5 жгутиков, расположенных перитрихиально или полярно, а Y. enterocolitica - множество расположенных перитрихиально. Благодаря жгутикам бактерии подвижны. При температуре выше 30 °С жгутики не активны, а также культуры слабо и/или не активны в серологических реакциях.
Иерсинии неприхотливы и не требовательны к питательным веществам; растут на обычных питательных средах (МПА, агары Хоттингера и Мартена, Эндо и др.). Оптимальной для роста является рН среды 7,2-7,4; хотя иерсинии могут расти при рН от 5,2 до 9,0. Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica способны размножаться на минимальной среде без добавлении аминокислот, что позволяет отнести их к прототрофам.
На плотных средах при температуре 22-28 °С через сутки иерсинии вырастают в виде мелких, выпуклых, полупрозрачных, бесцветных колоний с ровным или волнистым краем. При температуре 37 °С колонии становятся прозрачными и имеют неровные фестончатые края и выпуклый центр. Оба микроорганизма хорошо растут на средах Мак-Конки и дезоксихолатном агаре.
Как правило, Y. pseudotuberculosis, выделенные от больных и грызунов, находятся в S-форме при росте на плотной питательной среде, хорошо эмульгируются в физиологическом растворе, полупрозрачные, с ровным краем. При посеве старых, хранившихся в лабораторных условиях, культур и иногда при выделении Y. pseudotuberculosis из объектов окружающей среды бактерии растут в виде колоний с выпуклым, бугристым, коричневым центром и тонкой прозрачной "кружевной" периферической зоной (R-форма), имеющих сходство с колониями Y. pestis.
Полиморфизм колоний Y. enterocolitica менее выражен. Однако в условиях культивирования при 37 °С Y. enterocolitica диссоциируют на S-R варианты, колонии не прозрачны, имеют неровный фестончатый край, выпуклый, сферический, иногда бугристый или исчерченный центр. В жидкой питательной среде такие культуры растут в виде хлопьевидного осадка на дне, оставляя бульон прозрачным, а гладкие - равномерно мутят среду. Такой рост в жидкой среде характерен больше для Y. pseudotuberculosis. При росте Y. enterocolitica бульон не бывает прозрачным. Диссоциированные культуры слабо и/или не активны в серологических реакциях.
Биохимические свойства
В табл.1 представлены биохимические свойства, дифференцирующие Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica.
Основные биохимические свойства бактерий рода Yersinia, отличающие их от представителей семейства Enterobacteriaceae
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторных исследований на иерсиниозы на территориальном, региональном и федеральном уровнях
Дата введения: с момента утверждения
1. Разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, Ю.В.Демина, Н.В.Шеенков); Федеральным бюджетным учреждением науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" Роспотребнадзора (Г.Я.Ценева, Е.А.Воскресенская, Г.И.Кокорина, Е.А.Богумильчик); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Роспотребнадзора (М.В.Чеснокова, С.В.Балахонов, В.Т.Климов, К.А.Тирских, М.Б.Черепанова); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Центр гигиены и эпидемиологии в Новосибирской области" (Т.В.Каримова, О.В.Якунина).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 18 июня 2012 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
4. Введены впервые.
1. Область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее - МУ) определяют организацию и порядок проведения исследований на иерсиниозы в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней.
1.2. МУ предназначены для специалистов органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы медицинскими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы и формы собственности.
2. Нормативные и методические документы
В настоящих методических указаниях использованы ссылки и положения следующих нормативных и методических документов:
2.6. СанПиН 2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами".
2.8. СП 1.3.2322-08 "Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".
2.10. МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности".
2.11. МУК 4.2.2316-08 "Методы контроля бактериологических питательных сред".
2.13. МУК 4.2.2746-10 "Порядок применения молекулярно-генетических методов при обследовании очагов острых инфекций с групповой заболеваемостью".
2.14. СП 3.1.7.2615-10 "Профилактика иерсиниозов".
3. Перечень сокращений
БХ - бульон Хоттингера
ЗФР - забуференный физиологический раствор
ИФА - иммуноферментный анализ
ЛПО - лечебно-профилактические организации
МО - медицинские организации
ОРА - ориентировочная реакция агглютинации
ПУС - полиуглеводная среда
ПК - пептонно-калиевая среда
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РА - реакция агглютинации
РНГА - реакция непрямой гемагглютинации
СанПиН - санитарные правила и нормы
СБТС - среда с бромтимоловым синим
СП - санитарно-эпидемиологические правила
УСС - универсальный скошенный столбик
4. Общие положения
Yersinia pseudotuberculosis (возбудитель псевдотуберкулеза) и Yersinia enterocolitica (возбудитель кишечного иерсиниоза) - энтеропатогенные иерсинии, относимые к возбудителям зооантропонозных инфекций. Заражение Y.pseudotuberculosis происходит через инфицированные продукты питания (преимущественно овощи), Y.enterocolitica - чаще при употреблении в пищу молочных и мясных продуктов.
Иерсиниозы широко распространены в мире. В ряде стран Европы кишечный иерсиниоз занимает третье место по заболеваемости среди кишечных инфекций, после кампилобактериоза и сальмонеллеза. Заболеваемость псевдотуберкулезом в Российской Федерации регистрируется практически повсеместно, преимущественно в виде вспышек, кишечным иерсиниозом - в виде спорадических случаев.
Характеристика иерсиний
Род Yersinia включает группу грамотрицательных, не образующих спор, палочковидных (кокки или овоиды) факультативно-анаэробных микроорганизмов, относящихся к семейству Enterobacteriaceae. Среди 17 видов, входящих в род Yersinia, три отнесены к патогенным для человека и животных - возбудитель чумы Y.pestis, возбудитель псевдотуберкулеза Y.pseudotuberculosis и 11 представителей вида Y.enterocolitica патогенных биотипов 1В и 2-5.
Основные биохимические свойства Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica и некоторых других представителей Enterobacteriaceae, которые используются в практической работе при первичном изучении выделенных культур, представлены в табл.1 и 2.
Основные дифференциальные признаки Y.pseudotuberculosis, Y.enterocolitica и других представителей семейства Enterobacteriaceae
Бактериальный посев - как вид диагностики иерсиниоза
Бактериологический посев на иерсинии - метод лабораторной диагностики, направленный на выявление возбудителя болезни, с последующим подбором антибактериального средства для прицельной терапии.
Достигается результат высеванием материала в питательные среды (бульоны) с последующим наблюдением за ростом колоний в них. Реакция на антибиотики определяется снижением числа иерсиний раздельно по каждому виду препаратов.
Определение вида возбудителя болезни позволяет подобрать несколько антибактериальных средств (резервные препараты), подавляющих рост и размножение иерсинии.
В связи с тем, что анализы проводятся вне организма пациента (в лабораторных условиях), выбор антибиотика для лечения зависит не только от полученных результатов анализа, но и от индивидуальной переносимости препарата пациентом.
Бактериологический анализ сред организма человека позволяет выявить тип возбудителя инфекционного заболевания (вид бактерии и его подвид). В случае выявления иерсиниоза определяется подвид: бактерия псевдотуберкулеза или энтеробактерия.
В каких случаях необходим бакпосев на иерсиниоз?
- острые или хронические заболевания пищеварительной системы, проходящие с острой лихорадкой;
- развитие на фоне энтеритных явлений, или после них, мелко или крупнопятнистой сыпи, артритов;
- увеличение внутренних органов (гепатомегалия, спленомегалия);
- поражение лимфатической системы (полилимфоаденопатия);
- поражение уретры и конъюнктив.
Материал и среды, подвергаемые исследованию
Объектом для посева на иерсиниоз являются: кал, моча, желчь, ликвор, лимфоузлы, патологически измененные органы, сгусток крови. Поликлинически выполняется бакпосев кала.
Предварительная подготовка к анализу
За неделю перед бакпосевом следует прекратить антибиотикотерапию.
Накануне анализа - нельзя делать клизмы с антисептиками.
- приобрести в клинике емкость с консервантом (стерильную пробирку с пробкой);
- подготовить чистую посуду (горшок, таз), на дно которой следует постелить чистую салфетку;
- забор следует производить из мягких участков стула;
- доставить пробирку с калом в лабораторию как можно быстрей (в теплом виде).
О чем говорят результаты бактериального посева
Положительный результат - присутствие в исследуемом материале живых бактерий.
Отрицательный результат - отсутствие возбудителей иерсиниоза.
Читайте также: