Отрицательный блот по вич

Обновлено: 23.04.2024

Самым распространенным методом диагностики ВИЧ-инфекции является иммуноферментный анализ (ИФА) , с помощью которого в сыворотке крови больного выявляются антитела к ВИЧ.

Антитела к вирусу появляются у 90-95 % инфицированных лиц через 4-6 недель от момента заражения, у 5-10% через 3-6 месяцев и у 0,5-1% в более поздние сроки. В связи с этим, период от момента заражения до появления в крови определяемых с помощью общепринятых методов лабораторной диагностики количеств антител к ВИЧ называется "серонегативным окном". В течение этого времени диагноз поставить невозможно, но такой человек может быть источником инфекции и заражать других людей.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет выявлять в крови суммарный спектр антител к структурным белкам ВИЧ. В том случае если исследуемая сыворотка или плазма дала дважды положительный результат в ИФА, она тестируется в подтверждающем тесте иммуноблота (II этап). В отличие от ИФА иммуноблот позволяет обнаруживать антитела к индивидуальным белкам вируса. На основании результатов иммуноблота ставится окончательный диагноз ВИЧ-инфекции.

В этом анализе используется два типа реакций: иммунологическая и ферментативная.

Все вариации ИФА основаны на способности антител специфически взаимодействовать только с "собственными" антигенами, т.е. на иммунологической реакции "антиген-антитело".

Наибольшее распространение получил гетерогенный вариант иммуноферментного анализа, при котором антиген (определяемое соединение) или антитела фиксируется на твердой основе, в качестве которой могут выступать полистироловый планшет, полистироловые бусины, пористая подложка или магнитный носитель. Анализ проводят в 3 стадии. В лунку планшета, содержащую на своих стенках тот или иной антиген (т.е. один из белков вируса), добавляют исследуемый биологический материал - сыворотку крови больного. При наличии в организме инфекционного агента, в сыворотке появляются антитела к нему. Они прочно связываются с антигеном и не удаляются при последующей промывке чашки.

На следующем этапе необходимо определить, образовался или нет в лунке иммунный комплекс, то есть произошло ли соединение антигена с антителом. Простым глазом или под микроскопом это нельзя увидеть, поэтому требуются следующие две стадии, которые можно назвать проявляющими.

На второй стадии анализа в лунку вносят специальные (реагирующие с разными антителами) антитела с заранее прикрепленным к ним ферментом (поэтому метод называется ферментным). Слитый в единый комплекс "антитело-фермент" (конъюгат) способен связаться с антителами, уже зацепившимися за антиген, который закреплен на твердой подложке. В результате возникает "молекулярная цепочка", на одном конце которой вирусный белок, а на другом - фермент. После отмывки весь этот многослойный "пирог" остается в лунке планшета. Теперь нужно обнаружить активность фермента, чтобы сделать вывод о наличие антитела. Для этого на третьей стадии в ту же лунку вносят раствор субстрата и специального бесцветного вещества - хромогена, который способен окрашиваться в результате серии биохимических реакций, осуществляемых присутствующим в лунке ферментом. Если в лунке появляется окраска, это означает, что все элементы цепочки присутствуют. Из этого следует вывод: в крови пациента имеются антитела к антигенам ВИЧ и, следовательно, сам пациент инфицирован этим вирусом.

Существуют и другие варианты метода ИФА. Например, можно детектировать не антитела, а сам антиген. Процедура в целом будет похожей, хотя немного более сложной.

Результаты анализа могут быть положительными, отрицательными или сомнительными.

При отрицательном результате и отсутствии подозрения на недавнее (в течение последних 6 месяцев) заражение, можно считать диагноз ВИЧ неподтвержденным. Если есть подозрение на недавнее заражение, проводят повторное исследование.

ИФА может дать как ложноотрицательный, так и ложноположительный результат.

Ложноотрицательный результат ИФА возможен при свежем инфицировании, пока антитела к ВИЧ еще не выработались организмом больного.

Ложноположительные результаты могут быть получены при обследовании больных хроническими заболеваниями и в некоторых других случаях:

Административная ошибка в клинике или лаборатории (на пример, путаница в маркировке образцов или бланков) может привести к неверным результатам, сообщаемым лицам, проходящим тестирование на ВИЧ-инфекцию. Поэтому рекомендуется у всех пациентов с положительной реакцией на наличие антител к ВИЧ взять еще одну пробу крови и исследовать ее на антитела к ВИЧ по той же методике.

Наиболее распространенной причиной ложноположительного теста является вакцинация. Однако описан один случай такого результата при заболевании системной красной волчанкой и в терминальной стадии заболевания почек.

Поэтому при получении положительного результата ИФА его обязательно перепроверяют более чувствительными методами.

Иммуноблот на ВИЧ позволяет обнаружить антитела к вирусным белкам, помещенным на специальную нитроцеллюлозную мембрану. Это высокоточное исследование, устанавливающее наличие фракций, в которых основные белки располагаются в виде небольших полос.

Оболочка вируса ВИЧ-1 содержит гликопротеины с молекулярной массой от 41 кд до 160 кд (килодальтона). Большое значение для проведения иммунного блоттинга имеет гликопротеин ВИЧ-2 с молекулярным весом от 32 кд до 140 кд. Белки сердцевины ВИЧ-1 и ферменты вируса представлены протеинами р17, р24, р55.

Возбудитель ВИЧ-2 состоит из белков, обозначаемых как р16, р25, р56. Они образуют его внутреннюю оболочку. В состав генома входят 6 регуляторных и 3 структурных гена. Нередко при делении клеток возникают генетические неточности и появляется несколько подтипов возбудителя.

Положительные пробы

Для исключения ошибок при лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции пациенту назначают дополнительное исследование. Его результаты интегрируются как положительные, если обнаружены антитела к 2 или 3 белкам ВИЧ-1 или ВИЧ-2.

Иммуноблот подтверждает все хорошие результаты ИФА. В этом случае обнаруживают антитела к gp120/160, gp41 или р24, которые являются структурными единицами трех основных генов СПИДа — gag, pol, and env. У некоторых пациентов, имеющих отрицательные результаты ИФА и ПЦР, иммуноблот показывает несколько положительных полосок. Врач назначает дополнительное исследование р24 для постановки правильного диагноза и исключения ранней фазы ВИЧ-инфекции.

Если полученные результаты подвергаются сомнению, больному предлагают повторять сдачу анализа в течение последующих 3 месяцев. Почти все случаи заболевания ВИЧ подтверждают с помощью системы для проведения иммуноблота — прибора Sanofi. В большинстве случаев обнаруживают антигены ВИЧ, белки р25, gp110/120 и gp160, указывающие на инфицирование вирусом. Ложноположительная проба регистрируется у пациентов, страдающих заболеваниями соединительной ткани, имеющих повышенный уровень билирубина, при взаимодействии с различными вирусными антигенами.

Негативный результат

Для исследования берут образцы сыворотки крови ВИЧ-инфицированных пациентов. Их хранят в замороженном виде при температуре -20°С. Анализ проводят с помощью тест-систем:

Антиген;
Рекомбинат-ВИЧ;
Пептоскрин.

Нередко больного интересует вопрос, может ли быть отрицательный результат иммуноблота на ВИЧ у пациента, имеющего инфицированного сексуального партнера. После проведенного исследования нередко получают сомнительный результат или фиксируются антитела к белкам gp120 и gp160, что указывает на полное отсутствие отрицательных данных. Иногда сомнительный ответ регистрируют у пациентов с бессимптомно протекающей инфекцией.

Неинтерпретируемые результаты

Анализ, проведенный с помощью различных тестов на антитела к ВИЧ-инфекции, иногда не соответствует отрицательным данным и не отвечает критериям серопозитивности. Врачу трудно установить причину появления сомнительного результата.

Некоторые больные не входят в группу риска по инфицированию ВИЧ. Врач может ошибаться в интерпретации результатов исследования в том случае, если инфицирование вызвано другим серотипом.

Сыворотку крови пациента необходимо исследовать в динамике. Если в течение 6 месяцев не наблюдают клинических проявлений СПИДа и отсутствуют факторы риска, у больного регистрируют отсутствие инфекции.

Сомнительные результаты анализа получают у пациентов, имеющих низкий риск инфицирования. В некоторых случаях появление неясных данных вызывают содержащиеся в сыворотке крови иммунные комплексы и аутоантитела.

У некоторых больных возникновение сомнительных результатов вызвано развитием патологических процессов:

инфекционных заболеваний;
раковой опухоли;
аллергической реакции.

У больного появляются изменения в клиническом анализе крови, наблюдают рост С-реактивного белка или повышение СОЭ. У людей, страдающих инфекционными заболеваниями, часто выявляют сомнительную реакцию иммуноблота на ВИЧ.

Пациенты с неопределенными результатами не могут являться донорами крови и биологических материалов.

Линейный метод

Принцип иммуноблоттинга включает:

Использование нативного вирусного вещества ВИЧ-формат или антигенов в формате Western -Blot.
Соединение белков ВИЧ с отдельными антителами, выявленными в сыворотке крови.
Процесс инкубации, происходящий с добавлением меченных антител к человеческим Ig.
Расшифровку окрашенных полос.

Анализ позволяет врачу своевременно провести интерпретацию результатов исследования. Положительный блот расшифровывают как 2ENV+/- GAG+/POL, неопределенный — 1 ENV+/- GAG+/POL. Отрицательный результат предусматривает отсутствие полос.

Для выполнения анализа применяют рекомбинантный и лизатный иммуноблот. Исследование является специфичным и составляет 99,5%.

Может ли результат анализа быть расшифрован как ложный, интересуются больные. Полученные данные могут быть сформированы в результате стимуляции защитных сил организма (беременности, гемодиализа). При подозрении на острый ретровирусный синдром и контакт с больным ВИЧ-инфекцией пациенту рекомендуют сдать сыворотку на реакцию ПЦР. Повторное серологическое исследование подтверждается путем измерения вирусной нагрузки в представленном образе биологического материала.

Диагностика ВИЧ у новорожденных

Анализ на СПИД у ребенка раннего возраста проводят в том случае, если установлен контакт с ВИЧ-инфицированной матерью. Серологические реакции могут быть положительными в течение 1,5 лет. Антитела в сыворотке крови новорожденного обнаруживают с помощью реакций ИФА, РИФ и иммунного блоттинга.

В течение 9 месяцев жизни ребенка положительный результат появляется в связи с наличием в сыворотке крови антител матери. Антиген р24 имеет специфичность около 65%. В некоторых случаях не удается обнаружить антитела у больного ребенка, если у него диагностировано врожденное низкое содержание глобулинов в крови. Установленный отрицательный результат иммуноблота не является гарантией отсутствия инфекции.

Тестирование проводят в несколько этапов:

на 1-2 сутки после рождения;
в 1-2 месяца;
в полугодовалом возрасте.

Дальнейшее изучение антител проводят до тех пор, пока не будут получены 2 отрицательных результата иммуноблота. Установление диагноза СПИД у ребенка, рожденного от ВИЧ-инфицированной женщины, возможно на основании 2 положительных результатов реакции ПЦР. Передача новорожденному возбудителя ВИЧ-инфекции исключена, если женщина не кормит ребенка грудью.

Исследование при беременности

Будущей матери назначают иммунный и линейный блоттинг, если получен положительный результат на ВИЧ методом ИФА. Если блот подтвержден, пациентка больна СПИДом. В этом случае начиная с 14 недели беременности назначают терапию, предупреждающую инфицирование ребенка.

Может ли ошибиться специалист при выполнении исследования сыворотки крови во время беременности, спрашивают пациентки у лечащего врача. Он обязан выдать на руки беременной женщине копии анализов ПЦР, ИФА для устранения сомнений в их достоверности.

При постановке иммуноблота иногда возникают проблемы, но если ИФА, блот и ПЦР — положительные, диагноз ВИЧ-инфекции подтверждается окончательно. Вероятность получения ложноположительного анализа при беременности велика. В случае если ИФА (+), а иммуноблот (-), женщине предлагают пересдать сыворотку крови.

На сервисе СпросиВрача доступна консультация инфекциониста по любой волнующей Вас проблеме. Врачи-эксперты оказывают консультации круглосуточно и бесплатно. Задайте свой вопрос и получите ответ сразу же!

При таких анализах, считается, что анализ методом ИФА был ложноположительным и данных за ВИЧ инфекцию у Вас нет.

Михаил, Дело в том,как мне объяснил врач в СПИД центре диагноз поставить не могут нет каких-либо белков на антителах по этому БЛОТ отрицательный и требуется дальнейшее наблюдение! Только я ни чего не поняла первый раз с там сталкиваюсь! Возможен ли положительный анализ ИФА быть ложным если я его сдавала во время сильной инфекции герпеса половых органов и температуре?
Управление

Здравствуйте. Если у вас на ИФА-4 -го поколения p24-антиген положительный и антитела к ВИЧ положительные и при этом у вас иммуноблот отрицательный, то у вас ВИЧ-инфекция.
Если у вас на ИФА-4-го поколения p24-антиген отрицательный, антитела к ВИЧ положительные, а иммуноблот отрицательный, то у вас нет ВИЧ-инфекции.

Руслан, Дело в том,как мне объяснил врач в СПИД центре диагноз поставить не могут нет каких-либо белков на антителах по этому БЛОТ отрицательный и требуется дальнейшее наблюдение! Только я ни чего не поняла первый раз с там сталкиваюсь! Возможен ли положительный анализ ИФА быть ложным если я его сдавала во время сильной инфекции герпеса половых органов и температуре?

Здравствуйте! Вероятно анализ ложный, сдайте сейчас ПЦР на ВИЧ качественно, через 2 мес повторить ИФА с блотом.

Ольга. Посмотрите результат анализа ИФА 4-поколения, там должен быть напечатан: Ag - отрицательный или p24 - отрицательный, тогда анализ отрицательный. Или дайте ссылку на анализы.

Александр, сдайте пцр. Этот метод диагностики вам показан. Сделайте и будете знать наверняка. Если генетический материал вируса не обнаружат, значит вируса нет.

Добрый день. Знаю эту тему. При сомнительной ПЦР или блоте очень много народу - я знаю о чем говорю. Наблюдают по схеме 3 года - 2 раза сдавать иммуноблот на ВИЧ. И ещё раз скажу- я знаю эту схему наблюдения и погрешности анализов на ВИЧ. Что 80% через 3 года идёт сомнительный, или отрицательный результат. Работала с инфекционистом по ВИЧ в одном кабинете. Таких людей немало. Алкоголь и прививки - главные риски для таких результатов. Знаю 3 пациентов, у которых сомнительный блот более 5 лет. Положительный белок С-125 .

Наталья, я алкоголь после как попал в таксикологию не принимал и спустя месяц пересдал,алкоголя уже точно в крови не было.Не могу найти ответ для себя.

Наталья, эти люди с многолетним сомнит.иммуноблотом как то разрешился вопрос?как то выяснили инфецированны или нет?

Здравствуйте! Согласна с коллегами пересдайте анализ методом пцр. Вероятно особенность вашего организма так непонятно отвечать на реагенты к вич.

Это ИФА - анализ на антитела, а Вам рекомендовано сдать ПЦР - анализ на сам вирус - на данном сроке он будет высокодоствоерен и даст окончательный ответ на Ваш вопрос.

Павел, здравствуйте.А иммуноблот если вдруг он будет полож.,то это уже 100 проц.подтверждение,что я заражен?Или иммуноблот бывает ложноположительным в каких то случаях?

Александр. При сомнительном иммуноблоте есть вероятность того, что было недавнее заражение. В течение 6 месяцев от момента заражения иммуноблот может давать такие реакции. В России иммуноблот делают только на ВИЧ 1, а есть ещё вич 2. Если вы ранее проверялись иммуноблотом, то тогда только на ВИЧ 1.
Способ подтверждения или опровержения:
1.Повторять иммуноблот через 6 месяцев от первого сомнительного результата.
2. Сдавать анализ крови на определение РНК ВИЧ 1 и 2 методом пцр. Окно, во время которого вирус в крови не выявляется - от 6 до 12 месяцев (редко).
Пцр сомнительным быть не может, так как метод определяет генетический материал вируса. Этот генетический материал либо есть, либо нет. Но, повторюсь, вирус в крови может быть не виден в крови в течение и
6-12 месяцев из-за особенностей внедрения вируса в организм.

Употребление алкоголя и деструкция печени не могли дважды повлиять на результат.
Есть вероятность ошибки диагностики, нарушения методики выполнения анализа. Может поэтому такие результаты.
В любом случае вам нужно анализы пересдавать.

ПЦР тоже бывает сомнительный. Лаборанты описывают его как " помутнение облачка". Говорю, только то, что знаю и видела сама. Что это- ошибки диагностики, которые ломают людям жизнь, или что- то другое- не знаю. Только факты- после прививки от гриппа часто бывает однократный сомнительный ПЦР, или блот. А бывает по 3 года результаты сомнительные. Просто эта проблема коснулась одного близкого мне человека, поэтому в ней я разбиралась досконально. Исход бывает разным. Но я чаще наблюдала как снимают с учёта с отрицательным анализом. А иногда и наоборот.

Александр, я по человечески понимаю Вас.
Но Вам все равно дело надо доделать! Я вам расписала возможные варианты таких анализов и способы решения. Есть вероятность наличия вируса. Поэтому надо дойти обследование до конца.
Сейчас НЕТ ответа, что вирус у вас есть. Поэтому сейчас не думайте о плохом и пройдите обследование. Это в ваших интересах.
Берегите себя!

Маргарита, спасибо огромгое за развернутый ответ.Просто в недоумении,я ж не мог через воздух заразиться.Я ничего р скового не делал.Поэтому не знаю,как понять всё это.Анализы я прикрепил.Посмотриие,пожта.

Да, я видела фото анализов. Там нет необходимой информации. Указано лишь, что результаты сомнительные. Поэтому ничего нового добавить не могу.

Добрый вечер! Из-за алкоголя такие анализы быть не могут. Иногда бывает ложноположитеььный если есть гепатит с. Обычно при сомнительном анализе направляют на повторный анализ и дают окончательный ответ.

Советую прислушаться к рекомендациям трех инфекционистов,которые подробно описали вам, что делать. Здоровья вам!

Доброе утро. Это реклмендации ВОЗ. "Иммунный блоттинг чаще всего используют для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции. ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум белкам оболочки ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp160, gp120, gp41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, с использованием набора другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, исследования продолжаются через каждые 3 месяца.". За свою профессиональную деятелтность не могу похвастаться пациентами с многолетним сомнительным иммуноблотом, Слава Богу. Во всех ситуациях ясность проявояется достаточно быстро. Думаю, за этот срок (многолетний) они с неврозом как минимум уже наблюдаются у невролога. В завершении скажу, Вы в головном учреждении России по ВИЧ. Запишитесь на поием инфекциониста-спидолога. Задавайте самые разные вопросы, без разъяснений Вы от него не уйдете. Здоровья Вам и всех благ!

Иммунный блоттинг (иммуноблот, Western Blot, вестерн-блот) - сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску (стрип) антигенов вируса.

Иммуноблот включает в себя несколько стадий:

Подготовка стрипа. Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на "промокашку" избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.

Исследование пробы. На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами. В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется - делается видимым.

В настоящее время иммунный блоттинг (иммуноблот) является основным методом для подтверждения наличия вирусспецифических антител в исследуемой сыворотке. В некоторых случаях ВИЧ-инфекции, до развития сероконверсии, специфические антитела более эффективно выявляются методом иммунного блоттинга, чем ИФА. При исследовании методом иммунного блоттинга обнаружено, что чаще всего в сыворотках больных СПИДом выявляются антитела к gp 41, причем обнаружение р24 у лиц, обследуемых с профилактической целью, требует дополнительных исследований на наличие у них ВИЧ-инфекции. Тест-системы для иммунного блоттинга на основе рекомбинантных белков, полученных путем генной инженерии, оказались более специфичными, чем обычные системы на основе очищенного вирусного лизата. При использовании рекомбинантного антигена формируется не диффузная, а четко выраженная узкая полоска антигена, легко доступная для учета и оценки.

Сыворотки лиц, инфицированных ВИЧ-1, обнаруживают антитела к следующим основным белкам и гликопротеидам - структурным белкам оболочки (env) - gp160, gp120, gp41; ядра (gag) - p17, p24, p55, а также ферментов вируса (pol) - p31, p51, p66. Для ВИЧ-2 типичны антитела к env - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol - p68.

Среди лабораторных методов, необходимых для установления специфичности реакции, наибольшее признание имеет обнаружение антител к белкам оболочки ВИЧ-1- gp41, gp120, gp160, и ВИЧ-2 - gp36, gp105, gp140.

ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (гп 160, гп 120, гп 41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, используя набор другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, рекомендуется наблюдение в течение 6 месяцев (исследования через 3 месяца).

Наличие положительной реакции с антигеном p24 может указывать на период сероконверсии, так как антитела именно к этому белку иногда появляются первыми. В этом случае рекомендуется, в зависимости от клинических и эпидемиологических данных, повторить исследование с образцом сыворотки, взятым как минимум через 2 недели, и это является как раз тем случаем, когда при ВИЧ-инфекции необходимо исследование парных сывороток.

Положительные реакции с белками gag и pol без наличия реакции с белками env могут отражать стадию ранней сероконверсии, а также может указывать на ВИЧ-2 инфекцию или на неспецифическую реакцию. Лиц с такими результатами после тестирования на ВИЧ-2 повторно исследуют через 3 месяца (в течение 6 месяцев).

Читайте также: