Паразитарная чистота рыбы что это
Обновлено: 23.04.2024
Пищевые продукты, поступающие к нам на стол, должны быть качественными и безопасными для здоровья. Эта аксиома относится и рыбе. Специалистам Управления Роспотребнадзора нередко приходится разбирать жалобы населения, которые касаются качества рыбы и рыбной продукции.
Чаще всего они касаются гельминтов (паразитических червей или их личинок), которые люди видят в мышцах или кишечнике морской и речной рыбы. Так, в соленой сельди нередко обнаруживаются свернутые спиралькой нитевидные личинки анизакид – рыбных гельминтов. Как правило, эти личинки мертвы и поэтому опасности для человеческого здоровья не представляют.
В вяленой мойве лаборанты паразитологической лаборатории Центра гигиены и эпидемиологии в Республике Алтай не так давно обнаружили мертвых свободно живущих нематод ( Spinitestis ), которые также не вызывают заболевания у человека.
Теперь поговорим о речной рыбе. Республика Алтай неблагополучна по описторхозу. Это заболевание передается через рыбу карповых пород. В последние годы отмечается рост описторхоза. Связано это как с завозом речной рыбы с соседних территорий (Алтайского края, Новосибирской области), так и возросшим речным промыслом в самой Республике Алтай. Самое неприятное – это то, что личинки описторхов невидны для глаза. Внешне зараженная рыба выглядит здоровой, однако при микроскопическом исследовании лаборанты-паразитологи находят нередко находят личинки описторхов. Особенно поражены чебаки, лещи, язи, сорожки, ельцы, караси.
Обезвреживают зараженную речную рыбу тоже холодом, но при низких температурах. В морозильных камерах рыбы в бытовых холодильниках не происходит - личинки описторха сохраняются живыми в течение месяца!
Единственной мерой гарантирующей обеззараживание рыбы является – тщательная проварка и прожарка (в течение 20 минут). Вяленую и сушеную карповую рыбу лучше не есть – личинки описторха в такой рыбе сохраняются месяцами. В Республике Алтай самыми неблагополучными территориями являются Горно-Алтайск, Майминский, Чойский, Турачакский районы, где в водоемах находится зараженная описторхами рыба, поэтому жители этих территорий должны употреблять в пищу только хорошо проваренную речную рыбу.
(c) Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Республике Алтай, 2006—2015 г.
Все права на материалы, размещенные на сайте, охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе об авторском праве и смежных правах.
При использовании материалов сайта необходима ссылка на источник
Адрес: 649002, Республика Алтай, г. Горно-Алтайск, проспект Коммунистический, 173
Эл. почта:
заказать обратный звонок
Показателями безопасности продуктов, вырабатываемых из объектов водного промысла, служат запах (в продуктах, готовых к употреблению — также вкус), токсичные элементы, пестициды, полихлорированные бифенилы, гистамин (для семейств тунцов, скумбриевых, лососевых и сельдевых), радионуклиды, микробиологические показатели и паразитарная чистота.
Определение паразитарной чистоты рыбы проводится обычно визуально. В результате внешнего осмотра выявляются:
- визуально заметные паразиты (или иные включения, которые могут быть приняты за паразитов), прикрепленные или прилипшие к поверхности тела рыбы, внутренней полости или к поверхности разрезов ее мяса, а также паразиты, полупогруженные в мясо или находящиеся там непосредственно под поверхностью и просвечивающие сквозь нее;
- пятна и включения, отличающиеся по цвету или консистенции от окружающих их нормальных тканей рыбы, а также различные опухолевидные образования;
- случаи плохой зачистки внутренней полости у потрошеной рыбы и обнаружение в ней отдельных паразитов.
Как правило, паразиты характеризуются четкими контурами тела. Они могут обнаруживаться как в свободном, так и в инцистированном состоянии (тело паразита одето шаровидной или вытянутой соединительнотканной оболочкой — цистой или капсулой).
Максимальные размеры цист (которые всегда шаровидны) — до 3—4 мм, а капсул (их форма может быть различной, но чаще всего вытянутой) — до нескольких сантиметров (иногда более 20 см).
Гельминты вредят здоровью человека и животных. Поселяясь в организме хозяина, они питаются за его счет. При этом одни питаются кровью и тканевыми соками, а другие, живущие в кишечнике, частично поглощают питательные вещества, необходимые для питания организма хозяина. Личинки этих гельминтов, паразитируя в различных органах и тканях рыб, достигают половой зрелости в человеке и плотоядных животных, вызывая у них очень тяжелые заболевания. В процессе жизнедеятельности гельминты выделяют токсичные вещества, которые всасываются в кровь хозяина и отрицательно действуют на его нервную систему, кроветворные и другие органы.
В борьбе с распространением гельминтозов огромное значение имеет строгое соблюдение ветеринарно-санитарных требований, включающее, в том числе и регулярное проведение паразитологических исследований.
В июле 2021 года из Ульяновской области экспортировано 15 партий пиломатериалов хвойных пород 23.07.2021
3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ
МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ РЫБЫ, МОЛЛЮСКОВ, РАКООБРАЗНЫХ, ЗЕМНОВОДНЫХ, ПРЕСМЫКАЮЩИХСЯ И ПРОДУКТОВ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ
Дата введения 2001-01-01
Главный государственный санитарный врач Российской Федерации - Первый заместитель министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 25 октября 2000 г.
1. Область применения и общие положения
1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы и нерыбных объектов промысла (моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся), а также продуктов их переработки (далее по тексту - рыбная продукция).
1.2. Методические указания предназначены для применения в аккредитованных (или аттестованных, или лицензированных) лабораториях (в т.ч. контрольно-производственных) и лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической и ветеринарной служб Российской Федерации, осуществляющих контроль качества гидробионтов и продуктов их переработки на соответствие СанПиН 2.3.2.560-96* и 3.2.569-96**, а также научных учреждений, занимающихся изучением паразитарных болезней.
** На территории Российской Федерации действует СанПиН 3.2.1333-03, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.
Специалисты лабораторий должны пройти подготовку в заявленной области аккредитации (аттестации, лицензирования), владеть метрологически аттестованными методиками и методами, утвержденными или допущенными к применению Госстандартом и госсанэпидслужбой России и соответствующих требованиям ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".
1.3. Среди всех классов паразитов (простейшие, ракообразные, гельминты и др.), встречающихся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются только личинки гельминтов: цестод, трематод, нематод и скребней. К наиболее социально значимым и широко распространенным заболеваниям, передающимся через рыбу и других гидробионтов, относятся описторхоз, дифиллоботриозы и эндемичные для Дальнего Востока России метагонимоз, нанофиетоз и клонорхоз. Определенную опасность для здоровья людей могут представлять гельминты, приживающиеся, но не развивающиеся до взрослой стадии у человека (использующие его в качестве резервуарного хозяина), что затрудняет диагностику заболевания. Это спирометра, гнатостомы, болбозомы, коринозомы и некоторые виды анизакид и парагонимид. Заражение человека пирамикоцефалусами, апофаллами, криптокотилюсами происходит крайне редко. Других гельминтов (меторхисов, псевдамфистомумов, гетерофиесов, эхинохазмусов и др.) можно отнести к паразитам, спорадически встречающимся у человека на определенных территориях.
1.4. Объектами исследований являются промысловые пресноводные и морские рыбы, моллюски, ракообразные, земноводные, пресмыкающиеся и продукты их переработки.
1.5. Потенциальную опасность для здоровья человека представляют только живые личинки гельминтов. В связи с этим, при паразитологическом инспектировании гидробионтов и продуктов их переработки следует определить жизнеспособность выявленных плероцеркоидов, метацеркарий, акантелл и личинок нематод (см. раздел 5).
1.6. При исследовании гидробионтов и продуктов их переработки следует соблюдать режим работы с инвазионным материалом, регламентированный санитарными правилами 1.2.731-99* "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами".
* Действуют СП 1.3.2322-08. - Примечание изготовителя базы данных.
2. Отбор, хранение и подготовка к анализу проб гидробионтов и продуктов их переработки
Отбор и объем проб рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека по паразитарным показателям осуществляется в соответствии с требованиями:
- ГОСТ 7631-85 "Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний";
- Изменений N 2 к ГОСТ 7631-85 (п.1.2), утвержденному Постановлением Госстандарта СССР от 25.10.89 N 3195;
- СанПиН 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации", приложение 3, п.6.2 (при лабораторном контроле рыбной продукции) и п.п.15.12, 15.13 (при оценке и контроле паразитологического состояния районов промысла (биотопов);
- правил по сертификации "Типовой порядок обращения с образцами, используемыми при проведении обязательной сертификации. ПР 50.3.002-95".
2.1. Отбор, хранение и подготовка к анализу проб гидробионтов при оценке и контроле паразитологического состояния районов промысла (биотопов)
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: глицерин; эфир или хлороформ
2. Кюветы эмалированные
4. Пинцеты хирургические и глазные
5. Препаровальные иглы
6. Химические стаканы
7. Кастрюли эмалированные
10. Весы с набором разновесов или весы электронные
11. Сантиметр или линейка
13. Фильтровальная бумага
2.1.1. При оценке паразитологического состояния водоема (района промысла) следует начинать исследовать виды гидробионтов, наиболее подверженные заражению. Так, наилучшими индикаторами неблагополучия водоема в отношении инвазии личинками описторхисов является язь, далее по убывающей - елец, линь и т.д. (см. табл.2), а в отношении Diphyllobothrium latum - щука и налим (см. табл.1).
Дифференциальные признаки плероцеркоидов сем. Diphyllobothriidae, опасных для здоровья человека
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
РЫБА, НЕРЫБНЫЕ ОБЪЕКТЫ И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НИХ
Методы определения жизнеспособности личинок гельминтов
Fish, non-fish objects and products from them. Methods for evaluation of viability of the helminth larvae
Дата введения 2013-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии" (ФГУП "ВНИРО"), Обществом с ограниченной ответственностью "Каспийский научно-исследовательский и аналитический центр рыбной промышленности" (ООО НИиАЦРП "Каспрыбтестцентр")
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 300 "Рыбные продукты, пищевые, кормовые, технические и упаковка"
4 Настоящий стандарт соответствует международному стандарту CODEX STAN 244-2004* "Стандарт на сельдь атлантическую соленую и шпрот соленый" (CODEX STAN 244-2004 "Standard for salted atlantic herring and salted sprat", NEQ) в части определения жизнеспособности личинок нематод, приведенного в подразделе 9.4
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Ноябрь 2019 г.
Введение
Настоящий стандарт в части определения жизнеспособности личинок нематод гармонизирован с международным стандартом Комиссии "Кодекс Алиментариус" стандарт Кодекса 244-2004 для соленой атлантической сельди и соленых шпрот (приложение 1) в той мере, в которой возможно его эффективное применение на территории Российской Федерации.
Настоящий стандарт устанавливает основные термины и соответствующие им определения, которые необходимы для понимания особенностей объекта стандартизации.
При определении жизнеспособности личинок гельминтов, опасных для здоровья человека, организация (лаборатория) самостоятельно устанавливает такой алгоритм проведения испытаний, который обеспечит получение достоверных данных об исследуемом объекте. С этой целью может быть использовано поэтапное проведение определения жизнеспособности личинок гельминтов несколькими методами, приведенными в настоящем стандарте.
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на рыбу, нерыбные объекты и продукцию из них (далее - продукция) и устанавливает методы определения жизнеспособности личинок гельминтов (далее - методы).
Примечание - Методы могут быть применимы для земноводных, пресмыкающихся и продукции из них.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 3309 Часы настольные и настенные балансовые механические. Общие технические условия
ГОСТ 3118 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4025 Мясорубки бытовые. Технические условия
ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 6672 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9284 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 14919 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 20469 Электромясорубки бытовые. Технические условия
ГОСТ 21240 Скальпели и ножи медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 21241 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 23932 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26678 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
ГОСТ 27752 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия
ГОСТ 28498 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ Р 50380 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Термины и определения
ГОСТ Р 53228 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана сылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 50380, а также следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 гельминты (helminths): Паразитические черви.
Примечание - К гельминтам относят гирокотилиды, моногенеи, нематоды, пиявки, скребни, трематоды, турбеллярии и цестоды. К опасным для здоровья человека относят отдельные личинки нематод, скребней, трематод и цестод, установленные в нормативных правовых актах Российской Федерации*.
* До введения соответствующих нормативных правовых актов Российской Федерации - в нормативных документах федеральных органов исполнительной власти [1].
3.2 личинка гельминта (helminths larva): Постэмбриональная стадия индивидуального развития паразита, ведущего самостоятельную жизнь, активно питающегося и развивающегося, претерпевая характерные для этой стадии линьки.
3.3 жизнеспособность (личинки гельминта) (viability): Способность личинки гельминта сохранять свою жизнь в меняющихся условиях среды.
4 Сущность методов
Методы определения жизнеспособности основаны на выделении личинок гельминтов и стимулировании их движений физическим раздражением, электрическим или химическим воздействием.
5 Требования к условиям проведения определения жизнеспособности личинок гельминтов
5.1 Лаборатория, в которой проводят определение жизнеспособности личинок гельминтов, должна иметь разрешение на работу с патогенными биологическими агентами IV группы.
5.2 Помещения лаборатории должны удовлетворять требованиям, приведенным в [2], [3].
5.3 Специалисты, проводящие испытания по установлению жизнеспособности личинок гельминтов, должны быть подготовлены и иметь допуск к работе с патогенными биологическими агентами IV группы.
6 Требования к средствам измерений, оборудованию, материалам, реактивам
6.1 Для хранения и подготовки проб, проведения определений используют:
- холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда по ГОСТ 26678;
- приборы холодильные электрические бытовые по ГОСТ 16317;
- микроскоп стереоскопический МБС-9;
- микроскопы биологические Биолам, Бимам;
- термостат, поддерживающий температуру (37±1)°С;
- мешалку магнитную с термостатической подогреваемой пластиной;
- мясорубки диаметром отверстий решетки от 3 до 5 мм по ГОСТ 4025, ГОСТ 20469;
- электроплитки бытовые по ГОСТ 14919;
- сито механическое диаметром не менее 140 мм и ячеей 0,5 мм;
- источник постоянного электрического тока с напряжением от 0,5 до 1,5 В;
- стол с прозрачной верхней крышкой из матового (молочного) стекла и электрической подсветкой;
- диск для просвечивания по [4];
- весы класса точности III, Мах=500 г, 1 г по ГОСТ Р 53228;
- термометр жидкостный стеклянный с ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498;
Паразиты в рыбе и рыбопродуктах. Паразитологическое исследование
Среди всех классов паразитов, встречающиеся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются только личинки гельминтов:
- цестод,
- трематод,
- нематод,
- скребней.
К наиболее широко распространенным заболеваниям, передающимся через рыбу и другие гидробионы, относятся описторхоз, дифиллоботриозы и эндемичные для Дальнего Востока России метагонимоз, нанофиетоз и клонорхоз (рис. 1).
Рисунок 1 – Паразитологическое исследование: а – Opisthorchis felineus; б – Diphyllobothrium latum
Поэтому при обнаружении личинок гельминтов следует определить жизнеспособность выявленных плероцеркоидод, метацеркарий, акантел и личинок нематод (рис. 2).
Рисунок 2 – Обнаруженные личинки гельминтов: а – личинки описторхоз; б – плероцеркоиды (личинки) лентеца широкого в икре щуки
1. Отбор проб и подготовка проб к анализу
Для паразитологических исследований пробы берут отдельно от проб на микробиологические и физико-химические анализы. Отбор проб и объем рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека по паразитарным показателям осуществляется в соответствии с требованиями:
Отбор проб сырья (свежей, охлажденной и мороженой рыбы, морских беспозвоночных, молок, икры) и полуфабрикатов. Пробы отбирают в чистую посуду, полиэтиленовые мешки или плотную бумагу. Количество единиц упаковки, подлежащих вскрытию, установлены стандартами, нормативно-методическими документами. Если на продукт отсутствуют стандарты или научно-технические документы, то вскрывают 5 % единиц упаковки от общего их количества в партии [48, 49].
Для исследования на наличие метацеркарий Opisthorchis felineus и плероцеркоидов Diphyllobothrium latum целесообразнее отбирать рыб старших возрастов, так как личинки паразитов живут несколько лет, и их число увеличивается с возрастом рыб. Метацеркарий Metorchis bills (albidus) чаще встречается у сеголеток и рыб младших возрастов, а Echinochasmus perfoliatus – преимущественно у мальков.
Хранение и подготовка к исследованию рыбы проводится следующим образом.
- Свежую или охлажденную рыбу сохраняют до исследования в холодильнике при температуре плюс 2–4 °С.
- Мороженую рыбу перед исследованием размораживают до температуры не ниже 0 °С в толще тела рыбы.
- Живых раков и крабов помещают в кипящую воду на 0,5–1,5 мин (в зависимости от размеров ракообразных) до прекращения движения.
- Вяленую и копченую, соленую рыбу перед исследованием предварительно вымачивают в течение суток до размягчения мышц, меняя воду каждые 4–6 ч.
- Соленую икру выдерживают в воде в течение 2–3 ч.
2. Гельминтологическое исследование рыбы
При исследовании используют два подхода: выявление личинок, видимых невооружённым глазом (плероцеркоиды, акнтелы, нематоды), и выявление личинок, невидимых вооружённым глазом с использованием оптических средств (трематоды). При этом проводят:
- Наружный осмотр рыбы для выявления личинок.
- Просмотр внутренних органов и полостей тела.
- Исследование мускулатуры в зависимости от вида гельминта:
- а) метод параллельных разрезов;
- б) метод исследования мышечной ткани на просвете;
- в) компрессорный метод (рис. 3).
Рисунок 3 – Компрессорий
Метод параллельных разрезов. Самый употребительный метод, позволяющий сравнительно быстро обследовать мясо рыб крупной и средней величины, пригоден для рыб всех видов разделки.
Обследуемую рыбу желательно вначале обесшкурить, чтобы проверить, нет ли под кожей паразитов или поражений. Метод применяется для обнаружения в мышечной ткани рыбы личинок гельминтов, видимых без использования увеличительных приборов (цестод, нематод, скребней). Мышечную ткань острым скальпелем разрезают на пластинки толщиной от 5 до 10 мм, которые затем раздвигают и просматривают в падающем свете невооруженным глазом. Разрезы можно делать как поперек, так и вдоль мышечных волокон.
Делая разрезы мускулатуры и встречая в ее толще крупных личинок или капсулы с личинками (величиной около 1 см и более), нужно извлечь несколько экземпляров паразитов целиком для определения вида. Выделенных личинок помещают в чашку Петри. При исследовании тихоокеанских лососей, кунджи и сахалинского тайменя на наличие плероцеркоидов Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii) разрезы проводят поперек мышечных волокон всей дорсальной части тела, большинство личинок локализуется между жировым и спинным плавниками [47, 48].
Метод исследования мышечной ткани на просвет. Это наиболее эффективный метод, позволяющий быстро обследовать большие количества рыбы и рыбной продукции. Используется для выявления личинок нематод, цестод, скребней. Для использования этого метода нужно иметь специальные приспособления – столик с прозрачной (лучше из молочного или матового стекла) крышкой и подсветкой снизу.
Рыба всех видов разделки перед обследованием должна быть обесшкурена, филе толщиной до 3–4 см просматривается целиком, сначала с одной, а потом с другой стороны. У рыбы других видов разделки мясо срезается с костей так, чтобы получившиеся куски или филейчики достигали в толщину не более 3–4 см. Слишком толстые куски соответствующим образом разрезаются.
Паразиты – личинки цестод, трематод и нематод, паразитические ракообразные и другие включения размером от нескольких миллиметров и более – обычно хорошо заметны на просвет, даже в довольно толстых филейчиках. Обнаруженных личинок гельминтов выделяют из мышечных тканей рыбы с помощью препаровальных игл. Выделенных личинок помещают в чашку Петри и определяют видовую принадлежность гельминта (рис. 4).
Рисунок 4 – Исследование мышечной ткани на просвет
Компрессорный метод. Метод применяется в основном для выявления метацеркарий трематод, им можно пользоваться лишь для выборочного контроля. Чаще всего метацеркарии поселяются в поверхностных слоях мышц на глубине до 2 мм и в подкожной клетчатке. Исследуются очень мелкие, незаметные или малозаметные невооруженным глазом объекты, поэтому для их обнаружения и дифференциации видовой принадлежности необходимы специальные микроскопические исследования. Используют метод при просмотре мышечной ткани и внутренних органов рыб, а также мышечной ткани ракообразных. Метод заключается в просмотре на просвет сдавленных между двух стекол кусочков мышечной ткани.
При компрессорном исследовании скальпелем удаляют чешую с одного бока под спинным плавником рыбы, затем надрезают кожу в двух направлениях. Первый разрез делают впереди спинного плавника перпендикулярно продольной оси тела до боковой линии, второй – от конца первого надреза по направлению к хвостовому плавнику вдоль боковой линии. Пинцетом поднимают край кожи и отпрепаровывают ее на площадки до 25 см 2 так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. После этого срезают поверхностный слой мышц толщиной 0,2–0,5 см, нарезают мелкими кусочками и размещают по всей поверхности нижнего стекла компрессора, покрывают верхним стеклом и сжимают винтами [48].
Просмотр осуществляется невооруженным глазом или при слабом увеличении бинокуляра микроскопа. Удобнее всего использовать кусочки мышечной ткани объемом около 2–5 см 3 и стекла размером около 9×20 см. Стекла должны быть толстыми, не менее 4–5 мм. Под малым увеличением микроскопа или под трихинеллоскопом просматривают все кусочки, взятые от одной рыбы. Личинки легко обнаруживаются (рис. 5).
Рисунок 5 – Компрессорный метод исследования
Обследование печени, молок и икры. Печень, молоки и икра обследуются отдельно от других частей рыбы. Вначале проводится внешний осмотр печени или ястыков. Снаружи, чаще всего на покрывающих их пленках или под ними, могут быть инкапсулированные личинки цестод и нематод. Особое внимание нужно обращать на личинок нематод, свернутых в плоские спирали; диаметр таких спиралей может составлять 2–6 мм.
Затем пленки надрезаются или разрываются, небольшие порции молок, икры или ткани печени помещаются на стекло и просматриваются компрессорным методом. При этом могут быть встречены личинки нематод или взрослые трематоды, хорошо видимые визуально, а также другие паразиты или включения [47, 49].
Компрессорным методом удобно просматривать лишь мелкую икру. Порции более крупной икры приходится разбирать препаровальными иглами в чашке Петри с небольшим добавлением воды. Замеченные паразиты или включения, а также имеющие необычный вид икринки, отбираются глазным пинцетом для последующего определения. Отбираются также участки тканей, имеющие ненормальный вид или консистенцию.
3. Жизнеспособность метацеркариев
Определяют следующим образом. Их изолируют от ткани, помещают в каплю физиологического раствора на предметном стекле, покрывают покровным и микроскопируют вначале под малым, а затем большим увеличением микроскопа. У погибших метацеркариев нарушена целостность оболочки, содержимое в состоянии зернистого распада, экскреторный пузырь разрушен, присоски слабо выражены. Живые метацеркарии в цисте подвижны. Подвижность вызывают механическим воздействием или подогреванием личинки (не выше плюс 40 °С).
Неподвижность личинки не свидетельствует о ее гибели. При исследовании свежевыловленной рыбы, а также при комнатной температуре, живые личинки бывают неподвижными. Поэтому исследуют большое количество личинок с применением тепла, а также учитывают степень выраженности присосок и экскреторного пузыря.
4. Критерии оценки условно годной и не пригодной в пищу рыбной продукции
Рыба и продукты её переработки, в которых не обнаружено живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, подлежат сертификации и реализации в установленном порядке. При обнаружении живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, рыба не допускается в реализацию и подлежит обезвреживанию.
5. Паразитологические методы исследования рыбы и рыбных продуктов
Исследование проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость (печень, селезенка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, желчный пузырь, почки, половые железы, кишечник), мышцы, головной и спинной мозг.
Для обнаружения трипаносом и криптобий у рыбы берут кровь из сердца и делают мазки. Для предотвращения свертывания крови добавляют 1 %-й раствор лимоннокислого натрия, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Чтобы мазок не высыхал, края покровного стекла смазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому-Гимзе или гематоксилином и микроскопируют [47, 48, 49].
Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки 30 с, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5–10 %-м раствором танина. Эритроциты окрашивают в красноватофиолетовый цвет, плазма простейших кровепаразитов – в яркоголубой, ядра лейкоцитов – в фиолетовый (рис. 6).
Рисунок 6 – Мазок крови рыб
Для изучения морфологии паразитических инфузорий их окрашивают железным гематоксилином по Гейденгайну, а также гематоксицилином Делафильда или квасцовыми кармином.
Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематоксилином или по Романовскому-Гимзе (рис. 7).
Рисунок 7 – Паразитические жгутиконосцы
Слизистых споров окрашивают 1 %-м водным раствором метиленового синего 30–60 мин, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-й и абсолютный) и просветляют ксилолом.
Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде и помещают в краску от 1 мин до нескольких часов (в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать микроскопией препаратов.
Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут их тщательно отмывают от краски. Отмытых паразитов осторожно сушат фильтрованной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-м), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют маслом и ксилолом.
Мелких цестод можно окрашивать молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят в 2 раза дистиллированной водой, добавляют небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски). Жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают 20–60 мин водопроводной водой и помещают в бальзам (рис. 8).
Рисунок 8 – Сосальщики (трематоды)
При окраске крупных цестод этот способ модифицировали. Цестод промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре летом один день, в холодное время года – 3–4 дня. Затем их помещают на 4–6 ч в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-й молочной кислоты).
Интенсивность прокрашивания контролируют под микроскопом. После этого на сутки их переносят в дистиллированную воду, в которую добавляют 3 капли раствора сернокислого железа и 2 капли 1 %-го раствора фенола.
Далее цестод переносят на чистое предметное стекло, расправляют и высушивают при температуре плюс 30–37 °С. Высохший, очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта [47].
Постоянные препараты для микроскопического исследования нематод готовят следующим образом. Фиксированных в 70 %-м спирте живых гельминтов через сутки помещают на несколько часов (в зависимости от величины нематод) в 96 %-й, а затем в абсолютный спирт на 3–5 мин. После этого их переносят в гвоздичное или хеноподиевое масло или карбоксилол на 2–5 мин, а затем кладут на чистое предметное стекло и заливают бальзамом (рис. 9).
Рисунок 9 – Нематоды
Скребней (акантоцефалов) для изучения хоботка и крючков просветляют. Для этого их из 70 %-го спирта переносят сначала в 50 %-й глицерин, а затем в чистый. Структуру других органов изучают после полного обезвоживания гельминтов путем постепенного проведения их через спирты возрастающей крепости. Из абсолютного спирта гельминтов переносят на предметное стекло в каплю кедрового масла, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой хранят. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином и др.
Читайте также: