Парные сыворотки на полиомиелит

Обновлено: 18.04.2024

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП)

1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (О.Е.Иванова, Т.П.Еремеева, С.Г.Дроздов, М.И.Михайлов, О.Ю.Байкова, О.В.Юрашко); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Ф.Лазикова, Е.Б.Ежлова); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.В.Воронцова, А.А.Ясинский, О.П.Чернявская) с учетом замечаний и предложений ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в г.Москве, Ставропольском, Хабаровском краях, Омской, Свердловской областях; Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. N 2).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 28 июля 2008 г.

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 сентября 2008 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (далее - Роспотребнадзор), осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за полиомиелитом, острыми вялыми параличами в рамках Национального плана действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения, сотрудниками научно-исследовательских институтов и других заинтересованных организаций.

1.2. В методических указаниях определены требования к порядку сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП) в целях установления этиологических агентов заболеваний, а также изучения циркуляции полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов среди населения.

2. Общие положения

2.1. Вирусологические исследования материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (далее - ПОЛИО/ОВП) на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы (далее - НПЭВ) являются одним из важнейших элементов системы эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

2.2. Все процедуры по сбору, транспортированию, подготовке к вирусологическому исследованию материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляются в соответствии с требованиями нормативных и методических документов (прилож.1).

2.3. Выполнение требований настоящих методических указаний направлено на совершенствование эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

3. Организация вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

3.1. Забор материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом ОВП проводят в лечебно-профилактических организациях (далее - ЛПО) в установленном порядке в соответствии с нормативными и методическими документами.

3.2. Вирусологические исследования материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляют: Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (далее - НЦ), вирусологические лаборатории региональных центров эпидемиологического надзора за полиомиелитом и ОВП в г.Москве, Хабаровском, Ставропольском краях, Свердловской, Омской областях, Санкт-Петербургском НИИЭМ им. Пастера (далее - РЦ).

3.3. Вирусологическому исследованию в РЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего (после 14 дня с момента выявления паралича), неполного (1 проба стула) обследования больного (по одной пробе, не более 5 детей);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП (по одной пробе, не более 5 контактных);

парные сыворотки крови больных с подозрением на полиомиелит или больных, отнесенных к приоритетным "горячим" случаям ОВП (прилож.2). Сыворотки могут быть доставлены и исследованы в НЦ (по согласованию).

3.4. Вирусологическому исследованию в НЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание независимо от возраста (две пробы);

пробы фекалий от больных детей, отнесенных к приоритетным ("горячим") случаям ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к приоритетному ("горячему") случаю (одна проба);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к "горячему" случаю (по одной пробе, не более 5 контактных);

пробы фекалий от больных вакциноассоциированным полиомиелитом, собранные повторно на 60-й и 90-й день от начала заболевания (по две пробы). В случае получения положительного вирусологического результата проводят повторный отбор проб для последующего исследования (по согласованию с НЦ);

материалы от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего, неполного обследования больного, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты).

3.5. Результаты вирусологических исследований, идентификации и внутритиповой дифференциации сообщаются в организации здравоохранения, органы и учреждения Роспотребнадзора, направившие материалы, а также в установленном порядке в НЦ, РЦ, Координационный центр ликвидации полиомиелита Роспотребнадзора.

4. Правила сбора, маркировки, хранения и транспортирования материалов для исследования

4.1. Клинические материалы

4.1.1. Отбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник ЛПО в установленном порядке.

4.1.3. В тех случаях, когда получить фекалии от больного невозможно, можно получить фекальную пробу с помощью ректальной "соломинки" или ректального тампона. Ректальную "соломинку" (натуральную или пластиковую, твердую, с внутренним диаметром 5 мм) осторожно вводят в прямую кишку и медленными движениями набирают достаточное количество фекальной массы. После выведения из прямой кишки соломинку сгибают или переламывают и помещают в стерильный флакон/пробирку. При использовании ректального тампона стерильный ватный тампон на деревянной палочке вводят в прямую кишку и протирают слизистую оболочку так, чтобы захватить фекальный материал. Тампон извлекают и, отломив палочку, помещают в стерильную пробирку/флакон с 1-2 мл транспортировочной среды (прилож.3).

4.1.4. В летальных случаях берут пробы (кусочки ткани) из шейного и поясничного отделов спинного мозга, продолговатого мозга, Варолиева моста, нисходящего отдела толстой кишки. Пробы отбирают как можно раньше после наступления смерти. Ткани иссекают стерильными инструментами, помещают в отдельные стерильные пластиковые или стеклянные емкости с транспортировочной средой, добавленной в таком количестве, чтобы сохранить их влажными. Объем каждой пробы (кусочка тканей ЦНС) должен составлять примерно 1 см; из толстой кишки иссекают сегмент длиной 3-5 см, содержащий фекальные массы.

4.1.5. Для диагностических серологических исследований у больных ПОЛИО/ОВП отбирают две пробы крови. Первая должна быть взята в первые семь дней от начала заболевания, вторая - спустя 2-3 нед. Оптимальный объем пробы - 3-5 мл. Если взятие крови из вены по каким-либо причинам невозможно, берут кровь уколом пальца, что позволяет взять 0,3-0,4 мл крови. Пробы крови помещают в стерильные емкости (пробирки, флакончики) без антикоагулянтов или консервантов. Пробы оставляют при комнатной температуре на 2 ч для свертывания крови. После образования сгустка его отделяют от стенки сосуда, пробу помещают в холодильник при температуре от 2 до 8 °С и спустя 24 ч отбирают сыворотку. Центрифугированием при 1500 g в течение 5-10 мин сыворотку осветляют, переносят стерильной пипеткой в стерильную емкость. Если нельзя воспользоваться центрифугой или обработке подлежит сразу большое количество проб, с помощью стерильной пипетки можно осторожно отсосать сыворотку от сгустка так, чтобы в нее не попали выпавшие в осадок эритроциты. Во всех случаях следует предотвращать попадание в сыворотку эритроцитов, т.к. при хранении они подвергаются гемолизу, что может повлиять на результаты серологических исследований.

4.1.6. Пробы фекалий должны быть доставлены в РЦ или в НЦ в течение 72 ч с момента отбора. До отправки их хранят в холодильнике при температуре от 2 до 8 °С. Транспортирование проб осуществляют при температуре от 2 до 8 °С (обратная "холодовая" цепь). Если доставка проб по какой-либо причине задерживается, пробы хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.1.7. Пробы крови (сыворотки) доставляют в лабораторию в течение 72 ч от момента отбора. До отправки пробы хранят при температуре от 2 до 8 °С. Эту же температуру обеспечивают при транспортировании проб. Если доставка по какой-либо причине задерживается, сыворотки хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.2. Изоляты полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов

Изоляты полиовирусов, НПЭВ, выделенные в РЦ из материалов от больных ПОЛИО/ОВП, должны быть отправлены для подтверждения и внутритиповой дифференциации (далее - ВТД) в НЦ в течение 7 дней от момента идентификации вируса в РЦ. Для доставки изолятов используют пластиковые пробирки с завинчивающимися крышками с наружной резьбой объемом 2,0 мл. Вместе с изолятами доставляются образцы фекалий, из которых они были выделены; До отправки изоляты хранят при температуре -20 °С. Транспортирование проб осуществляют в условиях "холодовой цепи", обеспечивающих их сохранение.

4.3. Маркировка материалов

Все vатериалы должны быть снабжены этикеткой, на которой четко обозначают фамилию и инициалы больного, идентификационный номер, тип пробы, дату отбора. Пробы доставляются с направлением (в 2 экз.) на лабораторное исследование (прилож.4).

4.4. Упаковка и транспортирование материалов для исследования

При транспортировании материалов в лабораторию необходимо соблюдать принцип "тройной упаковки", которая включает следующие компоненты:

1) первичная емкость - маркированный контейнер/пробирка/флакон с пробой, надежно закрытые крышкой, герметизированной лабораторной пленкой или парафином;

2) вторичная емкость - прочный водонепроницаемый, непротекающий контейнер (или полиэтиленовый пакет) с адсорбирующим материалом в количестве, достаточном для адсорбции всего образца в случае его протечки. Во вторичную емкость помещают контейнер/пробирку/флакон с пробой. Образцы от одного пациента упаковываются отдельно. Также во вторичную емкость помещают направление на исследование, вложенное в полиэтиленовый пакет;

3) внешняя упаковка - прочный термоизолирующий контейнер или термос, предназначенные для транспортирования биологических материалов. Для обеспечения температурных условий транспортирования, в термоконтейнеры помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. На внешней поверхности термоконтейнера или термоса укрепляют этикетку с указанием адреса, телефона, факса, электронной почты отправителя, адреса, телефона, факса, электронной почты получателя, условий транспортирования.

Перед отправкой материалов отправитель должен проинформировать получателя о планируемой отправке и ее сроках. Недопустимо отправлять материалы без предварительной договоренности с получателем.

Транспортирование проб осуществляется в соответствии с требованиями нормативных и методических документов. Упаковка и материалы, которые использовались для транспортирования, могут быть контаминированы инфекционными агентами, поэтому первичная и вторичная упаковки должны быть уничтожены.

Органы и учреждения Роспотребнадзора обеспечивают выполнение всех необходимых требований по доставке проб в установленном порядке.

5. Порядок проведения вирусологических исследований

5.1. Получение и подготовка проб для исследования

5.1.1. Получение и регистрация проб

Немедленно после доставки материалов в лабораторию упаковочную коробку/термоконтейнер/термос распаковывают в отведенной для этого зоне, соблюдая при этом требования нормативных и методических документов.

В зоне, где происходит распаковка, должны иметься емкость для мусора, тампоны, смоченные 70%-м раствором этилового спирта, биологическое защитное укрытие (далее - БЗУ) 2-го класса безопасности (или рабочий стол с покрытием, которое легко подвергается обработке лабораторными дезинфектантами). Распаковка и регистрация материалов осуществляется двумя сотрудниками - один регистрирует поступившие материалы в рабочем журнале, другой открывает упаковку, проверяет целость емкостей с материалом, отсутствие протечек, полноту сопроводительных документов. В этот момент фиксируется состояние присланных проб ("хорошее" или "плохое").

Проверяют соответствие сведений на этикетке присланной пробы и в направлении на исследование. В случае несовпадения или неполноты сведений, делают запрос в организацию, направившую материал для исследования. Каждой пробе присваивают идентификационный номер, под которым она регистрируется в лабораторном журнале. Этим номером помечают направление на исследование, а также все емкости (центрифужные пробирки, флаконы/пробирки с культурой клеток и пр.), относящиеся к данной пробе в процессе ее исследования и хранения в данной лаборатории. Если исследование будет начато в течение 48 ч, пробы для выделения вируса помещают в холодильник (от 2 до 8 °С), если исследование будет начато позже, пробы хранят при температуре -20 °С.

Все процедуры во время получения, распаковки и регистрации материалов осуществляют в защитной одежде и резиновых перчатках. Все работы по подготовке проб фекалий, фекальных суспензий, секционных материалов для исследования проводятся в БЗУ 2-го класса безопасности.

Лаборатория может получать много проб из разных источников в течение рабочего дня, поэтому следует проявлять особую тщательность и осторожность при обращении с пробами не только для защиты персонала, но и для избежания перекрестной контаминации между пробами.

5.1.2. Подготовка фекальных проб для исследования в культуре клеток

До приготовления фекальной суспензии присланную в лабораторию "исходную" пробу делят пополам, одну часть используют для приготовления суспензии, другую хранят при -20 °С (для отправки в НЦ, для повторного исследования пробы в случае необходимости).

Для исследования в культуре клеток фекальные пробы обрабатывают хлороформом для удаления бактерий, грибков, цитотоксических липидов, для разъединения вирусных агрегатов.

Для приготовления 20% фекальной суспензии устойчивые к хлороформу полиэтиленовые центрифужные пробирки емкостью 50 мл маркируют в соответствии с номером пробы. В каждую пробирку вносят 10 мл фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ) с антибиотиками (прилож.3), 1 г стеклянных бусин и 1 мл хлороформа. В пробирку вносят 2 г фекальной пробы. Плотно закрывают центрифужную пробирку и тщательно встряхивают в течение 20 мин в механическом шейкере или вручную. Центрифугируют 20 мин при 1500 g в центрифуге с охлаждением. Надосадочную жидкость каждой пробы переносят в два маркированных флакона с винтовой крышкой. Если жидкость непрозрачна, обработку хлороформом повторяют. Суспензию из одного флакона используют для исследования, второй флакон хранят при -20 °С для отправки в НЦ, если это будет необходимо.

Пробы, отобранные с помощью ректальных "соломинок", готовят для исследования так же, как и фекальные пробы.

Тест позволяет количественно определить концентрацию IgG антител к вирусу полиомиелита 1-го и 3-го типов.

Вирус полиомиелита относится к роду энтеровирусов, семейству пикорнавирусов, РНК-содержащий. Полиомиелит – острая высоко заразная вирусная инфекция, в большинстве случаев протекает в бессимптомной (инаппарантной) – около 95% случаев или стертой (абортивной) форме. Абортивная – наиболее частая из клинически выраженных форм, проявляется лихорадкой, недомоганием, сонливостью, головной болью, тошнотой, рвотой, запором, болью в горле.

Попадая в глотку и желудочно-кишечный тракт, вирус размножается в эпителиальных клетках, регионарных лимфатических узлах кишечника, в последующем попадает в кровь, что приводит к его распространению во многие органы и ткани. С этой стадией инфекции связано развитие латентных и абортивных форм болезни. Менингеальная форма (серозный менингит) встречается относительно редко, обычно начинаясь как абортивная – с лихорадки, боли в горле, рвоты и недомогания, после чего через 1-2 дня появляются симптомы раздражения мозговых оболочек (ригидность затылочных мышц, рвота, сильная головная боль, боли в руках, ногах, спине и шее). У небольшой части пациентов вирус проникает в ЦНС, размножается в мотонейронах, вызывая их гибель и парезы или параличи иннервируемых ими мышц (паралитической формой представлено 0,1-1% случаев полиомиелита).

Источником инфекции является больной или вирусоноситель, выделяющий вирус с секретами верхних дыхательных путей (в течение всего инкубационного периода и в первую неделю заболевания, реже – до 1,5 месяцев) или с фекалиями (1-6 месяцев). Передача инфекции возможна фекально-оральным путем, через слюну больного, реже – водным путем.

тип 1 (штамм Брунгильд) часто протекает с тяжелыми симптомами,
тип 2 (штамм Лансинг) – с умеренно выраженными симптомами,
тип 3 (штамм Леон) – редкий, но с тяжелыми симптомами.

До начала применения вакцинации полиомиелит был распространен повсеместно. Заболевание возникает только у непривитых лиц, более восприимчивы дети до семи лет. В результате применения вакцинации в Европейском регионе, в том числе Российской Федерации, в 2002 году сертифицирована ликвидация полиомиелита. Крайне редко (в особенности при современных схемах иммунизации) возможен полиомиелит, ассоциированный с применением полиомиелитной вакцины (у реципиента или контактного лица). В ряде стран, особенно Азиатского региона, полиомиелит по-прежнему остается эндемичным, возможны переносы заболевания туристами и мигрантами.

Результат серологического теста не может являться основанием для диагноза или терапевтических решений. Предварительный диагноз полиомиелита устанавливается на основании эпидемиологических и клинических данных, окончательный – после комплексного вирусологического (идентификация вируса), серологического и клинико-инструментального обследования.

Специальной подготовки не требуется. Желательно проводить взятие крови не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

С целью обнаружения и количественного определения антител к вирусу полиомиелита 1-го и 3-го типов. Результаты серологических тестов не могут быть основой для диагноза или принятия терапевтических решений, необходимо учитывать анамнез пациентов и результаты дополнительных тестов.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Положительный результат серологического теста может быть связан с заболеванием в прошлом или наличием иммунитета после вакцинации (см. описание).

Тест позволяет количественно определить концентрацию IgG антител к вирусу полиомиелита 1-го и 3-го типов.

тип 1 (штамм Брунгильд) часто протекает с тяжелыми симптомами,
тип 2 (штамм Лансинг) – с умеренно выраженными симптомами,
тип 3 (штамм Леон) – редкий, но с тяжелыми симптомами.

На сегодняшний день полиомиелит в мире не ликвидирован, поэтому проблема завозных случаев заболевания остается актуальной.

Особенности инфекции:

вызывается вирусом;
лекарств в мире нет;
паралич неизлечим;
необратимо повреждается спинной мозг;
нога атрофируется (истончается);
исход - инвалидность.

Чаще болеют дети до 5 лет.

Полиомиелит заразен, передается от человеку к человеку с пищей, водой, через руки и ручки дверей.

Вирус попадает в организм через рот, размножается в кишечнике (период от внедрения до первых признаков составляет от 6 до 21 дней) и поражает нервную систему.

Первые симптомы:

боли в конечностях;
через несколько дней развиваются острые вялые параличи, чаще ног.

Главная эпидемиологическая особенность - большое число здоровых носителей, не знающих что они заразны для непривитых детей (на 1 случай паралича до 200 человек носителей).

Вирус у носителей находится в кишечнике.

Приняты все меры, чтобы своевременно выявить носителей вируса.

Родители, Ваш ребенок- Здоров, но он может оказаться здоровым носителем вируса полиомиелита, не зная об этом заражать непривитых детей.

Вам важно быстрее убедиться, что в кишечнике ребенка нет вирусов полиомиелита, то есть результат анализа отрицательный.

Если к Вам позвонил или пришел медработник из детской поликлиники с просьбой сдать анализы ребенка на полиомиелит, то выслушайте его, откройте дверь, соберите у ребенка клинический материал (кал) для бесплатных анализов.

Где обследоваться?

Родителям необходимо обратиться в детскую поликлинику (инфекционисту, эпидемиологу, участковому педиатру) по месту временного пребывания и получить (или приобрести в аптеке) пластиковый контейнер для кала.

Кого обследовать?

Детей до 5 лет 11 мес. 29 дней, прибывших в Российскую Федерацию из стран, подлежащих обследованию.

Как собрать клинический материал для анализа?

Одну пробу кала (10 грамм – по объему это две чайные ложки) перекладывают из горшка ребенка в стерильный пластиковый контейнер (баночку с ложечкой), на нем делается надпись с фамилией, именем.

После отбора клинического материала (кала):

крышка банки плотно закрывается (завинчивается),

банка упаковывается в полиэтиленовый пакет.

После упаковки тщательно помыть руки с мылом.

Проба в течение двух часов после отбора должна быть передана медицинскому работнику или доставлена в медицинскую организацию родителями самостоятельно в условиях холода - от 0 до +8 градусов (например, заморозить бутылку с водой и положить рядом).

Куда доставляют пробу кала?

Кто оформляет направление в лабораторию?

фамилия, имя, отчество обследуемого ребенка,

количество прививок от полиомиелита, дата последней прививки,

дата прибытия в Российскую Федерацию (с 1 июня 2021 года),

адрес фактического проживания в Республике Башкортостан,

контактный телефон родителя ребенка,

контактный телефон, фамилия медицинского работника.

Как скоро готов анализ?

Отрицательные результаты вирусологических исследований передаются в детскую поликлинику, доставившую материал, по мере получения (не более месяца от даты отбора).

В случае выделения вируса родители будут информированы незамедлительно.

Как узнать достаточно ли привит ребенок?

Покажите детскому врачу / медсестре запись о прививках ребенка, чтобы определить достаточно ли их по количеству и есть ли необходимость дополнительной иммунизации.

В Национальном календаре прививок Российской Федерации к 12 месяцам необходимо иметь 3 прививки ( 3; 4,5 месяца и в 6 месяцев), к 24 месяцам - 5 прививок ( в 20 и 24 месяца).

Если достаточное количество детей полностью иммунизированы против полиомиелита (более 95%), вирус не может найти восприимчивых детей для заражения и исчезает.

Пока в мире остается хоть один инфицированный ребенок, риску заражения полиомиелитом подвергаются дети во всех странах.

Читайте также: