Пцр диагностика инфекций референсные значения

Обновлено: 19.04.2024

1. Диагностика ИППП. 2. Хронические воспалительные заболевания мочеполовой системы. 3. Акушерско-гинекологическая патология. 4. Псевдоэрозия шейки матки. 5. Реактивный артрит. 6. Хронический конъюнктивит. 7. Лихорадка неясного генеза. 8. Нарушения менструального цикла. 9. Привычное невынашивание беременности. 10. Лечебные и диагностические выскабливания слизистой оболочки шейки матки и тела матки. 11. Профилактическое обследование.

Наименование метода

Тип биоматериала/Тип пробирки/Цвет крышки

Преаналитические требования

Подготовка к исследованию:

1. Соскоб эпителия из влагалища и шейки матки. После введения гинекологического зеркала пробу собирают зондом. Материал собирают с шейки матки и из цервикального канала, со слизистой заднего свода или с ее патологически измененных участков, переносят зонд в пробирку с транспортной средой. Собранный для исследования материал должен содержать достаточное количество эпителиальных клеток! Сполоснуть зонд в транспортной среде, хорошо отжать о стенкии и удалить из пробирки. Пробирку плотно закрыть и промаркировать. (Внимание! Для определения вируса папилломы человека (ВПЧ) материал должен быть собран ТОЛЬКО из эндо- или экзоцервикса!) 2. Получение отделяемого из уретры у женщин. Перед взятием соскоба из уретры необходимо обработать наружное отверстие уретры тампоном. Ввести рабочую часть зонда в уретру, собрать отделяемое уретры и перенести зонд в пробирку с транспортной средой. Тщательно сполоснуть зонд в транспортной среде, хорошо отжать о стенки и удалить из пробирки. Пробирку плотно закрыть крышкой и промаркировать: Ф.И.О. пациента, номер образца, номер ЛПУ (данные должны соответствовать указанным в направительном бланке). 3. Соскоб из уретры у мужчин. Обработать головку полового члена в области наружного отверстия уретры тампоном. Зонд вводят в уретру на 2-4 см, в область ладьевидной ямки, несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортной средой. Тщательно сполоснуть зонд в транспортной среде, хорошо отжать о стенки и удалить из пробирки. Пробирку плотно закрыть крышкой и промаркировать: Ф.И.О. пациента, номер образца, номер ЛПУ (данные должны соответствовать указанным в направительном бланке).

Условия хранения и транспортировки:

При температуре 2-8 С – не более 12 часов с момента взятия материала Передать в лабораторию в день взятия материала

Примечание:

Внимание! Для определения вируса папилломы человека (ВПЧ) материал должен быть собран ТОЛЬКО из эндо- или экзоцервикса!

Стабильность аналитов

Клиническая информация о тесте

ПЦР-15 — это комплексное качественное исследование ДНК возбудителей инфекций органов репродукции. Метод ПЦР позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК микроорганизмов, не выявляемые другими методами. Анализ выявляет наличие вируса папилломы человека высокоонкогенного риска, вируса герпеса, возбудителей инфекций передаваемых половым путем, возбудителей анаэробных инфекций.

Интерпретация результатов

Повышенные значения: наличие одной или нескольких исследуемых инфекций. Сниженные значения: отсутствие инфекции.

Планирование беременности и во время беременности Скрининговое обследование лиц из группы высокого риска (моложе 25 лет и не имеющих постоянного полового партнера) Обследование при наличии жалоб пациента и клинических проявлений инфекционно-воспалительного процесса Обследование лиц, половые партнеры которых имеют перечисленные жалобы или установленный диагноз ИППП

Наименование метода

Тип биоматериала/Тип пробирки/Цвет крышки

Преаналитические требования

Подготовка к исследованию:

Условия хранения и транспортировки:

Примечание:

Стабильность аналитов

Клиническая информация о тесте

Исследование включает в себя количественное определение ДНК наиболее распространенных и значимых в репродуктивной патологии возбудителей инфекций, передаваемых половым путем: Neisseria gonorrhoeae-кач ДНК, Trichomonas vaginalis-кач ДНК, Chlamydia trachomatis - кач ДНК, Candida albicans-кач ДНК, Cytomegalovirus-кач ДНК, Gardnerella vaginalis-кач ДНК, Ureaplasma species-кач ДНК, Herpes simplex virus1-2-кач ДНК, HPV(ВПЧ ВКР) 16тип-кач ДНК, HPV(ВПЧ ВКР) 18тип-кач ДНК, Mycoplasma hominis-кач ДНК, Mycoplasma genitalium-кач ДНК

ПЦР-анализ на сегодняшний день является одним из высокотехнологичных, доступных и эффективных методов молекулярной диагностики, применяемый в разных областях медицины. Чаще всего он используется для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний человека, в том числе инфекций, передаваемых половым путём (ИППП), и выявления возбудителей урогенитальных инфекций, которые могут вызывать различные воспалительные заболевания органов мочеполовой системы у мужчин и женщин.

В этой статье речь пойдет о методе ПЦР для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, при анализе спермы (эякулята). Какие инфекции можно определить в сперме, а какие нельзя? Какие еще материалы можно использовать для диагностики инфекций половой системы?

Среди преимуществ ПЦР как метода в сравнении с другими, традиционно используемыми для диагностики инфекционных заболеваний человека (иммуноферментный анализ, бактериологический посев, микроскопия), стоит отметить непосредственное обнаружение инфекционного агента в результате выявления специфического фрагмента ДНК или РНК возбудителя в исследуемом образце, а потому - возможность напрямую идентифицировать возбудителя инфекции, осуществлять раннюю диагностику, например, в инкубационном периоде, диагностировать заболевание не только в острой и хронической формах, но и выявлять скрытые (латентные) формы инфекций, протекающие без выраженных симптомов или бессимптомно, а также проводить скрининговые исследования, направленные как на определение уже имеющейся инфекционной патологии, так и выявление возможного носительства инфекций для оценки принадлежности пациента к группе риска.

Спектр возбудителей, выявляемых методом ПЦР, чрезвычайно широк, в связи с чем наибольшее распространение ПЦР-диагностика получила в гинекологической и урологической практике, в дерматовенерологии. Для диагностики большинства бактериальных и вирусных инфекций, выявления возбудителей ИППП, вызывающих заболевания, передаваемые половым путём (ЗППП), материалом для исследования служит, в основном, соскобное отделяемое слизистых оболочек мочеполовых органов: соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала и поверхности шейки матки у женщин, соскоб из уретры (мочеиспускательного канала), выделения из половых органов - у мужчин и женщин. При обследовании на некоторые виды инфекций (ВИЧ, гепатиты В и С, вирус Эпштейна-Барр и др.) для анализа берут кровь. Для выявления цитомегаловирусной и герпетической инфекций можно исследовать мочу. Клиническим материалом для ПЦР-диагностики ИППП у мужчин может служить секрет предстательной железы и эякулят (сперма). В каждом конкретном случае выбор исследуемого биоматериала определяется диагностической задачей исследования.

В данной статье мы подробнее остановимся на диагностике ИППП у мужчин и возможности выявления возбудителей ЗППП и урогенитальных инфекций в эякуляте.

Инфекционно-воспалительные заболевания органов мужской репродуктивной системы могут явиться одной из возможных причин снижения мужской фертильности (способности к воспроизведению потомства), а урогенитальные инфекции их вызывающие - быть ассоциированы с мужским бесплодием.

К органам мужской репродуктивной системы относятся наружные и внутренние половые органы. К числу наружных относят половой член и мошонку. Внутренние половые органы представлены яичками с их оболочками и придатками, расположенными в мошонке, семявыносящими протоками и добавочными половыми железами, в числе которых предстательная железа (простата) - железисто-мышечный орган, охватывающий мочеиспускательный канал ниже мочевого пузыря, семенные пузырьки - парный железистый орган, расположенный над предстательной железой, и бульбоуретральные (Куперовы) железы - парные округлые железы небольшой величины, расположенные между пучками мышц мочеполовой диафрагмы. В яичках, являющихся парной половой железой, происходит образование мужских половых клеток - сперматозоидов и выработка мужских половых гормонов. Продукты секреции добавочных половых желез образуют семенную жидкость (семенную плазму, или спермоплазму), которая при смешении со сперматозоидами образует сперму. Придаток яичка (эпидидимис) тесно связан с яичком и служит резервуаром накопления спермы и созревания сперматозоидов, являясь частью семявыводящих путей. Семявыносящий проток представляет собой парный трубчатый орган, служащий для транспортировки сперматозоидов из эпидидимиса в семявыбрасывающий проток. При эякуляции (семяизвержении) происходит сокращение продольных мышечных волокон семявыносящего протока, сперматозоиды поступают в семявыносящий проток и смываются содержимым семенных пузырьков в уретру. Вклад секрета семенных пузырьков и предстательной железы в общий объём семенной жидкости составляет около 95% (примерно 35% приходится на секрет предстательной железы, 60% - на секрет семенных пузырьков), поэтому колебания объёма эякулята, в первую очередь, зависят от секрета добавочных половых желез. Тесная функциональная взаимосвязь всех органов мужской половой системы позволяет оценивать её состояние путём исследования эякулята. Среди лабораторных методов исследования анализ эякулята является важнейшим и, зачастую, - достаточным не только для оценки мужской фертильности, например, при анализе спермограммы, но и диагностики наиболее распространённых, репродуктивно значимых урогенитальных инфекций.

Наиболее частыми возбудителями инфекций мужского урогенитального тракта являются бактерии: гонококк (Neisseria gonorrhoea) - возбудитель гонореи, хламидии (Chlamydia trachomatis) - возбудитель урогенитального хламидиоза, трахомы и венерической лимфогранулемы, бледная трепонема (Treponema pallidum) - возбудитель сифилиса, микоплазмы (Mycoplasma genitalium и Mycoplasma hominis) и уреаплазмы (Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum), являющиеся инфекционными агентами воспалительных процессов в мочеполовых органах, а также простейшие, например, трихомонада (Trichomonas vaginalis) - возбудитель урогенитального трихомониаза, грибы, например, рода Candida, вызывающие урогенитальный кандидоз, и различные вирусы, среди которых вирусы простого герпеса 1 и 2 типов (ВПГ, Herpes simplex virus, HSV1 и HSV2) - возбудители генитального герпеса, цитомегаловирус (CMV), вирус папилломы человека (ВПЧ, HPV, Human papillomavirus), вирусы гепатита В (HBV), гепатита С (HCV), ВИЧ (HIV) и другие. Некоторые из перечисленных бактериальных возбудителей (гонококк, хламидии, бледная трепонема, генитальная микоплазма) являются патогенами, другие (уреаплазмы, энтерококки, стафилококки и ряд других) - принадлежат к группе условно-патогенных микроорганизмов, способных вызывать воспаление в половых органах при снижении иммунной защиты.

Вирусы и бактерии могут напрямую поражать сперматозоиды, приводя к изменению их подвижности. Так, например, известно, что Mycoplasma genitalium и Ureaplasma urealyticum, прикрепившиеся к головке и средней части сперматозоидов, негативно влияют не только на их подвижность, но и способность к оплодотворению яйцеклетки, проводимому в экспериментальных (in vitro) условиях. Повреждающее действие могут оказывать и продуцируемые микроорганизмами токсины. В ответ на инфекционный процесс развивается вторичное воспалительное повреждение, сопровождаемое образованием свободных радикалов и цитокинов, способных оказывать цитотоксическое воздействие на половые клетки. Кроме того, инфекции являются одним из факторов риска образования антиспермальных антител (АСАТ), направленных против различных частей сперматозоидов. Механизмом образования АСАТ на фоне воспалительного процесса является всё та же способность бактерий, вирусов и грибов прикрепляться к мембране сперматозоидов, вследствие чего происходит запуск аутоиммунных реакций. Присутствие АСАТ в эякуляте приводит к снижению его качественных и количественных характеристик: уменьшению концентрации и подвижности сперматозоидов, изменению морфологии половых клеток, их агглютинации, к изменению значений pH и вязкости семенной плазмы. Тем самым инфекции мочеполовых органов могут снижать репродуктивную функцию у мужчин.

Большинство возбудителей ИППП попадают в организм преимущественно половым путём. Наиболее часто инфекции выявляются у лиц молодого возраста, особенно тех, кто имеет большое число половых партнёров. При незащищенном половом акте высок риск заражения хламидиозом, гонореей, сифилисом, трихомониазом, гепатитами В и С, ВИЧ, герпесом, ВПЧ. Всего в настоящее время насчитывается более двадцати инфекций, которые передаются половым путём. Многие из них характеризуются высокой контагиозностью, а потому - быстрым распространением среди населения. К примеру, ежегодно в мире регистрируется около 90 миллионов новых случаев хламидийной инфекции, а восприимчивость к урогенитальному хламидиозу приближается к 100%. Следует помнить, что заражение ИППП может происходить при любом виде сексуальных контактов: анальном и оральном сексе, генитальном контакте без проникновения. Коварство этих инфекций заключается и в их возможности протекать без клинически выраженных симптомов. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), 50 - 80% населения инфицировано вирусом папилломы человека, но лишь 1 - 2% лиц имеют клинические проявления этой инфекции. Бессимптомное вирусоносительство играет ключевую роль в распространении генитального герпеса: до 70% случаев передачи этого вируса и заражения им здоровых лиц происходит при бессимптомном характере болезни и наличии вируса герпеса у больного. Скрытый характер течения инфекции затрудняет возможность её выявления. Отсутствие со стороны мужчины должного внимания на появление у себя некоторых из признаков или симптомов начинающегося заболевания, несвоевременное обращение к врачу или неадекватное лечение, например, в случае предпринимаемого самолечения, могут способствовать переходу инфекции в хроническу форму и развитию хронического заболевания. Хроническую инфекцию труднее диагностировать, тяжелее лечить, к тому же последствия хронического инфекционно-воспалительного процесса в мочеполовых органах оказываются более тяжкими для мужского здоровья.

В зависимости от локализации инфекционного процесса чаще всего у мужчин развиваются уретрит (воспаление мочеиспускательного канала), цистит (воспаление мочевого пузыря), простатит (воспаление предстательной железы), эпидидимит (воспаление придатка яичка) и орхит (воспаление яичка). Острый эпидидимит может распространиться и на яички (эпидидимоорхит). Симптомы или признаки заболевания напрямую зависят от того, какой именно возбудитель инфекции попал в мужской организм и каково состояние иммунитета в целом. Наиболее частыми возбудителями инфекций, вызывающих уретрит, являются Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoea, Mycoplasma genitalium и Ureaplasma urealyticum. Среди сексуально активных молодых мужчин эпидидимит чаще вызывается Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoea и Trichomonas vaginalis. У мужчин старшего возраста и пожилых чаще обнаруживают условно-патогенную микрофлору (Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и др.).

Симптомы урогенитальных заболеваний, вызываемых различными возбудителями ИППП, чаще всего не являются специфичными. При остром характере инфекционного-воспалительного процесса клиническая картина ИППП у мужчин может выражаться такими симптомами, как дискомфорт, зуд и жжение в области уретры, боль в промежности, нижней части живота и в области мошонки, болезненность при мочеиспускании (дизурия) и половых контактах (диспареуния), гиперемия и отёчность кожных покровов в области поражения, слизистые или гнойные выделения из уретры. В случае скрытой формы инфекции признаками заражения могут являться редкие, незначительные выделения из уретры. Сходство клинических проявлений многих урогенитальных инфекций вовсе не означает, что существует их одинаковое лечение, каждая инфекция требует индивидуальной медикаментозной терапии. Это диктует необходимость проведения лабораторного исследования, направленного на выявление и идентификацию возбудителей ИППП.

Одним из таких видов исследования, предлагаемых в нашей клинике для мужчин, является анализ эякулята с помощью молекулярно-биологического метода ПЦР. Исследование является скрининговым и представляет собой блок анализов ПЦР на инфекции в сперме. Предназначен для обнаружения в биоматериале специфических фрагментов ДНК основных возбудителей ИППП и урогенитальных инфекций мочеполового тракта у мужчин: Neisseria gonorrhoeae, Clamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis и Ureaplasma spp. Обследование не требует применения каких-либо инвазивных процедур, а потому может быть выполнено в кратчайшие сроки. Использование для этих целей современного высокочувствительного и высокоточного диагностического метода, каким является ПЦР-анализ, представляется в настоящее время неотъемлемой частью комплексного подхода в лабораторной оценке мужского репродуктивного здоровья.

ПЦР - это метод ДНК-диагностики, который позволяетвыделить в клиническом материале ничтожно малые количества определенного генетического материала, размножить и идентифицировать его.

Что такое ПЦР. Чувствительность и специфичность ПЦР.

Рис. Схема ПЦР

Изящность, простота исполнения в лабораторных условиях, непревзойденные показатели чувствительности и специфичности полимеразной цепной реакции принесли новому методу небывалую популярность. За короткое время ПЦР-анализ распространился по всему миру, быстро выйдя из лабораторий научных институтов в сферу практического использования. Метод нашёл применение в археологии, в практике судебной медицины, в области медицинской генетики, прежде всего, для оценки предрасположенности человека к некоторым онкологическим и генетическим заболеваниям. Но особенно широко ПЦР-анализ стал использоваться для диагностики различных инфекционных заболеваний, в частности, заболеваний, передающихся половым путём (ЗППП), диагностики вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции, туберкулёза, клещевого энцефалита, острых респираторных и кишечных инфекций и множества других. На сегодняшний день практически нет инфекционного агента, которого нельзя было бы выявить с помощью метода ПЦР. Для диагностики некоторых урогенитальных инфекций, например, Mycoplasmagenitalium – возбудителя воспалительных заболеваний мочеполового тракта, ПЦР как метод молекулярной диагностики, стал "золотым стандартом", проверенным временем и тщательно апробированным клиниче

Достоинства ПЦР как метода молекулярной диагностики.
Метод ПЦР, в отличие от других, традиционно используемых для диагностики инфекционных заболеваний (иммуноферментный анализ (ИФА), бактериологический посев, микроскопия и др.), характеризуется целым рядом достоинств, которые позволили вывести лабораторную диагностику на качественно новый уровень.

Возможность одновременного выявления нескольких микроорганизмов в одной биологической пробе, в отличие от бактериологических методов, где для разных возбудителей используются разные способы культивирования.

2. Высокая cпецифичность
Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного микро-(макро)-организма участок его генетического материала. Согласно имеющимся данным, специфичность ПЦР-анализа для хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 95-99 %.

4. Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК или РНК возбудителя. Сходство химического состава нуклеиновых кислот всех микро-(макро)-организмов позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований, а также использовать для диагностики различный биологический материал: соскобы эпителиальных клеток урогенитального тракта, цельную кровь, плазму, сыворотку, мочу, сперму, секрет простаты, фекалии, плевральную и спинномозговую жидкости, мокроту, слюну, биоптаты различных органов и др. Материалом для исследования методом ПЦР могут служить вода, почва, продукты питания.

Для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени как, например, при бактериологическом посеве, также нет необходимости сохранять возбудителя в живом состоянии. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при диагностике скрытых или хронических инфекций.

6. Возможность одновременной диагностики многих возбудителей (анаэробов и аэробов; вирусов, бактерий и грибов).

7. Для некоторых микроорганизмов ПЦР является практически единственным методом диагностики (например, для Mycoplasma genitalium).

Читайте также: