Пцр диагностика инфекций у новорожденных

Обновлено: 18.04.2024

Рассмотрена проблема внутриутробного инфицирования и внутриутробной инфекции (ВУИ) плода, факторы риска внутриутробных инфекций, патогенетические механизмы возникновения, развития и воздействия ВУИ, подходы к диагностике и лечению.

The issue of fetal intrauterine infecting and intrauterine infection (IUI) was considered, as well as the risk factors of intrauterine infections, pathogenic mechanisms of their occurrence, development and effect of IUI, and approaches to the diagnostics and treatment.

Проблема внутриутробной инфекции особо актуальна в современных условиях в связи с распространенностью и тяжестью воспалительных процессов. Проблема внутриутробного инфицирования и внутриутробной инфекции (ВУИ) плода является одной из ведущих в акушерской практике и в перинатологии в связи с высоким уровнем инфицирования беременных, рожениц и родильниц, опасностью нарушения развития плода и рождения больного ребенка. Наличие инфекции у матери является фактором риска ВУИ плода, но не всегда означает его заболевание [1, 5–7, 13].

Внутриутробная инфекция — группа инфекционно-воспалительных заболеваний плода и детей раннего возраста, которые вызываются различными возбудителями, но характеризуются сходными эпидемиологическими параметрами и нередко имеют однотипные клинические проявления. Заболевания развиваются в результате внутриутробного (анте- и/или интранатального) инфицирования плода. При этом в подавляющем большинстве случаев источником инфекции для плода является мать. Истинная частота врожденных инфекций до настоящего времени не установлена, но, по данным ряда авторов, распространенность данной патологии в человеческой популяции может достигать 10%. В структуре перинатальной смертности ВУИ составляет более 30% [1, 5–7].

Кроме этого, ВУИ относятся к тяжелым заболеваниям и во многом определяют уровень младенческой смертности.

Согласно данным многих авторов, причиной внезапной смерти грудных детей является инфекционное заболевание, протекающее без ясной симптоматики. В числе причин или фоновых состояний скоропостижной смерти могут быть ВУИ [2].

Под внутриутробным инфицированием понимают процесс внутриутробного проникновения микроорганизмов к плоду, при котором отсутствуют признаки инфекционной болезни плода. Как правило, инфекционный процесс затрагивает плаценту, в которой развивается плацентит, хориоамнионит и т. д. Диагноз внутриутробного инфицирования у новорожденного устанавливается на основании выделения возбудителя из клеток крови, ликвора и других источников, выявления IgM и низкоавидных IgG в пуповинной крови, а также при морфологическом исследовании плаценты [1, 5–7].

Внутриутробное инфицирование не означает неизбежного развития инфекционного заболевания. Для выявления ВУИ необходимо наличие данных лабораторного исследования в сочетании с клинической картиной инфекционного заболевания. Под ВУИ подразумевают не только процесс распространения инфекционных агентов в организме плода, но и вызванные ими морфофункциональные нарушения различных органов и систем, характерные для инфекционной болезни (сепсис, пневмония, менингит, гепатит и т. д.), возникшей анте- или интранатально и выявляемой пренатально или после рождения [10, 11].

Инфекционно-воспалительные заболевания во время беременности имеют особенности: инфицирование плода и новорожденного может быть вызвано как острой инфекцией матери, так и активацией хронической, персистирующей инфекции во время беременности; большая часть заболеваний беременных, приводящих к внутриматочной инфекции, протекает в латентной или субклинической форме; активация персистирующей инфекции возможна при любом нарушении гомеостаза в организме беременной (стресс, острые респираторные вирусные инфекции, переохлаждение и др.) [1, 2].

Возможный спектр возбудителей внутриутробной инфекции весьма разнообразен и широк. Это бактерии (грамположительные и грамотрицательные; аэробные и анаэробные), грибы, простейшие, внутриклеточные микроорганизмы (микоплазмы, хламидии), вирусы. Чаще всего наблюдается сочетание возбудителей — бактериально-вирусная смешанная инфекция [3, 4, 10, 11].

Зачастую ВУИ ассоциируются с наличием инфекций TORCH — то есть синдромом комплекса. Данный термин образован первыми буквами латинских названий наиболее часто верифицируемых врожденных инфекций: T — токсоплазмоз (Тoxoplasmоsis), R — краснуха (Rubella), С — цитомегалия (Cytomegalia), Н — герпес (Herpes) и О — другие инфекции (Оther). К последним относят сифилис, листериоз, вирусные гепатиты, хламидиоз, ВИЧ-инфекцию, микоплазмоз и др. [9, 11].

Принимая во внимание, что источником инфекции для плода всегда является его мать, особое значение приобретают следующие факторы риска внутриутробных инфекций:

хронические очаги инфекции в организме матери (в том числе наличие воспалительных заболеваний органов малого таза, урогенитальные инфекции);
первичное инфицирование во время беременности, активация инфекционного процесса;
патологическое снижение общего и местного иммунитета;
наличие экстрагенитальной патологии (анемия, тромбофилии, аутоиммунные заболевания);
повышение проницаемости плацентарного барьера во II и III триместрах беременности при невынашивании беременности и плацентарной недостаточности;
отягощенный акушерско-гинекологический диагноз;
неблагоприятные социально-бытовые факторы [1, 9, 11].

Патогенетические механизмы возникновения, развития и воздействия ВУИ разнообразны и зависят от многих факторов:

срока беременности, при котором происходит инфицирование (чем раньше, тем прогноз будет более неблагоприятным);
вида возбудителя, его вирулентности, массивности обсеменения;
первичности или вторичности инфекционного процесса у беременной;
путей проникновения инфекции к плоду (восходящий, нисходящий, гематогенный);
степени распространенности и интенсивности воспалительного процесса;
состояния организма матери, его иммунологической толерантности.

Влияние инфекции на эмбрион и плод заключается в воздействии комплекса следующих факторов:

патологическое воздействие микроорганизмов и их токсинов (инфекционное заболевание, гипоксия плода, задержка развития плода);
нарушение процесса имплантации и плацентации (низкая плацентация, предлежание плаценты);
снижение метаболических процессов и иммунологической защиты плода [1, 9, 11].

Таким образом, реализуется ли внутриутробное инфицирование в ВУИ или нет, зависит от ряда факторов, которые мы представили выше.

Учитывая неспецифичность клинических проявлений ВУИ во время беременности, диагностика данной патологии в большинстве случаев затруднена и возможна лишь в результате сочетания клинических и лабораторно-диагностических методов обследования.

Клинический метод исследования позволяет выявить различные осложнения гестационного периода, такие как невынашивание беременности и синдром задержки роста плода (СЗРП). Кроме этого, немаловажное значение имеет наличие проявлений инфекции у матери (отит, гайморит, пиелонефрит, цистит и т. д.).

Методы, позволяющие оценить состояние фетоплацентарной системы:

эхография (плацентометрия, поведенческая активность плода, его тонус, количество околоплодных вод, степень зрелости плаценты);
допплерография (МПК, ФПК);
кардиотокография (КТГ).

Микробиологические и серологические исследования:

микроскопия влагалищных мазков (повышенное содержание лейкоцитов, кокковая флора, признаки дисбиоза, грибковая флора);
бактериальный посев (наличие анаэробных и аэробных бактерий, грибковой флоры);
ПЦР-диагностика (геномы ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, микоплазмы, уреаплазмы, хламидии);
иммуноферментный анализ (ИФА): обнаружение в сыворотке специфических антител к возбудителям (IgM, IgG, IgA) в диагностически значимых титрах.

Исследование хориона (биопсия хориона): бактериологический метод, ПЦР-диагностика.

Исследование околоплодных вод (амниоцентез): бактериологический метод, ПЦР-диагностика.

Исследование пуповинной крови плода (кордоцентез): бактериологический метод, ПЦР-диагностика и специфический иммунный ответ (IgM) плода.

Морфологическое исследование плаценты, данные аутопсии.

Предположительный диагноз внутриутробного инфицирования и ВУИ помогают поставить косвенные методы:

наличие у матери клиники инфекционного заболевания;
наличие специфического иммунного ответа;
результаты УЗИ, допплерометрии, КТГ.

К прямым методам диагностики внутриутробного инфицирования и ВУИ относятся: выявление возбудителя в материале, полученном при биопсии хориона, амниоцентезе (ПЦР, бактериологический метод), кордоцентезе (ПЦР, бактериологический метод и определение уровня специфических IgM).

Характер течения беременности при внутриутробной инфекции зависит от срока воздействия возбудителя.

На ранних этапах зародыша (1–3 недели беременности) из-за отсутствия механизмов взаимодействия инфекционного агента и плодного яйца реализации воспалительной реакции чаще всего не происходит. Контакт с инфекцией может закончиться альтернативным процессом и гибелью плодного яйца. Повреждение эмбриона инфекцией на 4–12 неделях беременности связано с вирусной инфекцией, проникновением микроорганизмов через хорион. Плод еще не имеет защитных механизмов. Нарушение закладки органов и систем вызывает тератогенный и эмбриотоксический эффект [13, 15].

В I триместре беременности специфических клинических признаков наличия ВУИ нет, косвенно о ней свидетельствуют некоторые эхографические признаки:

повышенный локальный тонус матки;
отслойка хориона;
изменение формы плодного яйца (деформация);
прогрессирование истмико-цервикальной недостаточности (функционального характера);
гипоплазия хориона;
увеличение или персистенция желточного мешка;
несоответствие размеров эмбриона размерам полости плодного яйца (увеличение, уменьшение);
отсутствие редукции хорионической полости.

Инфекционные фетопатии возникают с 16-й недели, когда происходит генерализация инфекции у плода. Могут возникать такие пороки развития, как фиброэластоз эндокарда, поликистоз легких, микро- и гидроцефалия (ранние фетопатии) [12–15].

В III триместре плод реагирует на внедрение возбудителя локальной реакцией. Могут возникнуть энцефалит, гепатит, пневмония, интерстициальный нефрит. Влияние вирусов чаще всего проявляется признаками незрелости, дисэмбриогенетическими стигмами, затяжным адаптационным периодом, значительной потерей массы тела в раннем постнатальном периоде. Данные эхографии во II и III триместрах беременности, указывающие на развитие инфекции у плода:

СЗРП;
гипоксия плода;
фетоплацентарная недостаточность;
многоводие или маловодие;
неиммунная водянка плода;
увеличение или уменьшение толщины плаценты, наличие патологических включений;
контрастирование базальной мембраны;
наличие взвеси в околоплодных водах;
кальцификаты в печени и селезенке и головном мозге плода;
поликистоз легких, почек плода;
эхогенные фиброзные включения на папиллярных мышцах и створках клапанов сердца плода;
расширение петель кишечника плода (гипоксия, энтерит) [12–15].

После верификации диагноза ВУИ лечебные мероприятии проводят с помощью этиотропной, антимикробной терапии: препараты пенициллинового ряда и макролиды. Целесообразность назначения антимикробных препаратов не вызывает сомнения, если ВУИ обусловлено наличием патогенных возбудителей (бледная спирохета, токсоплазма, хламидии, гонококк и т. д.) [8, 14].

В настоящее время одним из наиболее дискутабельных вопросов в акушерстве является выяснение истинной этиологической роли генитальных микоплазм (Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalis, Ureaplasma urealyticum) в развитии патологии матери и плода. Инфицирование плода генитальными микоплазмами происходит преимущественно интранатально: в 18–55% — у доношенных новорожденных и в 29–55% — у недоношенных [3, 16, 20].

Актуальность проблемы урогенитального микоплазмоза обусловлена не только значительным распространением этой инфекции в популяции, но и неоднозначностью ее оценки как эпидемиологами, так и клиницистами [16].

По данным различных исследователей, микоплазмы являются возможной причиной развития конъюнктивитов, врожденных пневмоний, респираторного дистресс-синдрома, хронических заболеваний легких, менингита и неонатального сепсиса. Вопрос о терапии микоплазменной инфекции до настоящего времени остается открытым. В схемах терапии предусматривается 7–10-дневные курсы макролидов [1, 3, 21, 22].

Во время беременности противовирусная терапия при генитальном герпесе, цитомегаловирусной инфекции, вирусе ветряной оспы проводится с помощью этиотропных препаратов (ацикловир) начиная со II триместра гестационного периода. Целью лечения является профилактика рецидивирования и антенатального инфицирования [14, 17, 19].

Трихомонадная инфекция относится к группе негонококковых воспалительных заболеваний мочеполовых органов. Лечение трихомониаза во время беременности осуществляется с помощью метронидазол-содержащих препаратов начиная со II триместра гестационного периода [8].

Появление новых методов диагностики, разработка и внедрение новых лекарственных средств не изменяют ситуацию с внутриутробными инфекциями, оставляя это по-прежнему актуальной проблемой в акушерстве. Все это обуславливает неуклонный рост инфекции в человеческой популяции, высокий процент рецидивов инфекции даже у пациентов, получавших курс антибиотикотерапии в соответствии с действующими инструкциями и схемами лечения. Проблема осложняется тем, что в настоящее время отсутствует единая концепция механизма рецидивирования, недостаточно изучена роль микст-инфекции в возникновении, течении и персистировании инфекции, не учитываются особенности гормонального и иммунного статуса больного, не сформированы диагностические критерии контроля излеченности патологического процесса. Это все вместе взятое является стимулом для продолжения исследований, направленных на решение данных проблем. Несмотря на то что роль вирусных и бактериальных инфекций в этиологии и патогенезе многих патологических процессов не вызывает сомнений, вопрос о значении инфекций в качестве моновозбудителя на сегодняшний день окончательно не решен. Актуальным по-прежнему остается вопрос разработки алгоритма лабораторной диагностики заболеваний.

Только совершенствование диагностических подходов, разработка оптимальных алгоритмов и методов обследования и предупреждение распространения резистентных штаммов путем адекватного отношения к каждому пациенту индивидуально (обязательное проведение посевов на определение чувствительности к антибиотикам до назначения терапии) может изменить данную ситуацию.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 15-15-00109).

Литература

В. Н. Кузьмин 1 , доктор медицинских наук, профессор
К. Н. Арсланян, кандидат медицинских наук
Э. И. Харченко, кандидат медицинских наук

ГБОУ ВПО МГМСУ им. А. И. Евдокимова МЗ РФ, Москва

Идентификация инфекционного агента является ключевым фактором в определении тактики проведения антибактериальной терапии, однако длительность микробиологического исследования приводит к запаздыванию старта этио-патогенетической терапии, выбору неоптимальной схемы лечения. Использование молекулярно-генетической идентификации микроорганизмов позволяет получить результат в течение нескольких часов.
Цель исследования. Определение роли и клинической значимости метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени в диагностике врожденных и нозокомиальных инфекций в периоде новорожденности.
Материал и методы. В работе проведено сравнение микробиологического и молекулярно-генетического методов идентификации микробных агентов в условиях отделения реанимации и интенсивной терапии новорожденных.
Результаты исследования. На основании 272 параллельно выполненных исследований показана высокая конкордантность использованных методов. При этом с помощью ПЦР результаты были получены врачами в 4 раза быстрее, чем идентификация чистой культуры при микробиологическом исследовании (предварительные посевы без определения чувствительности к антибиотикам) и в 8 раз быстрее, чем окончательные результаты микробиологического исследования.
Заключение. Метод ПЦР-диагностики является высокоточным, быстрым и может быть рекомендован для рутинной практики при совместном его использовании с традиционным микробиологическим методом при осуществлении инфекционного контроля в отделениях неонатологического профиля.

Работа частично поддержана Государственным контрактом Министерства образования и науки РФ №16.522.12.2009 от 29.09.2011.

Одним из приоритетных направлений в современной неонатологии является выхаживание недоношенных детей с очень низкой (ОНМТ) и экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) при рождении. Данный контингент больных находится в зоне максимального риска по развитию нозокомиальных инфекций. C одной стороны, это связано с незавершенностью процессов формирования иммунного ответа у глубоко недоношенных детей, необходимостью длительного применения различных видов респираторной поддержки, постановки центральных сосудистых катетеров, осуществления большого числа заборов крови и других инвазивных процедур, с другой стороны, с особенностями госпитальной флоры, вносящей существенный вклад в реализацию нозокомиальных инфекций у новорожденных[1].

Возбудителями госпитальных инфекций являются условно-патогенные микроорганизмы (УПМ). Они широко распространены, устойчивы во внешней среде, а также обладают способностью к образованию биопленок [2]. В процессе антимикробной терапии условно-патогенные микроорганизмы приобретают резистентность к применяемым антибактериальным препаратам. Существенное значение в реализации инфекционных процессов среди пациентов реанимационных отделений придается группе так называемых ESKAPE-патогенов, к которым относятся Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp. [3].

Не вызывает сомнений также тот факт, что идентификация инфекционного агента является ключевым фактором в определении тактики проведения целенаправленной антибактериальной терапии или, напротив, ее отмены в случае отсутствия возбудителя.

Таким образом, именно с целью слежения за циркулирующей госпитальной микрофлорой, а также для обеспечения своевременной и быстрой идентификации возможных возбудителей врожденных и нозокомиальных инфекций в отделении реанимации и интенсивной терапии новорожденных (ОРИТН) ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова уже в течение 20 лет ведется регулярный микробиологический мониторинг, включающий выполнение дважды в неделю новорожденным посевов со слизистых оболочек (кал, зев), начиная с рождения. При наличии показаний дополнительно проводятся посевы отделяемого из трахеи, крови, мочи, ликвора, асцитической и плевральной жидкостей, отделяемого пупочной ранки, поврежденной кожи, конъюнктивы и других локусов.

Знание особенностей ESKAPE-патогенов и других УПМ, циркулирующих в реанимационном отделении, позволяет своевременно реагировать на клинически выраженное ухудшение состояния пациентов и назначать адекватную антибактериальную терапию [4, 5].

Основанием для исследования посевов материала из нестерильных локусов является широко известный феномен транслокации УПМ со слизистых оболочек в кровь и во внутренние органы [6–8] и наличие возможной причинно-следственной связи между патогенной флорой, контаминирующей ребенка, и инфекционным процессом.

В различных учреждениях в зависимости от уровня оснащенности микробиологических лабораторий результаты выполненных посевов могут быть получены в интервале от 3 до 10 дней. Позднее получение результатов микробиологических исследований приводит к запаздыванию старта этио-патогенетической антибактериальной терапии, к выбору неоптимальной схемы антибактериальной терапии, неоправданно широкому применению антибиотиков резерва, что, в свою очередь, в дальнейшем приводит к нарастанию мультирезистентности микроорганизмов [4, 7].

Наряду с традиционным выделением возбудителей микробиологическими методами в последние годы все большую актуальность приобретает использование молекулярно-генетических методов для более быстрой идентификации патогенов, способных вызывать течение инфекционного процесса у новорожденных, в том числе недоношенных детей с ЭНМТ и ОНМТ, находящихся в условиях отделения реанимации. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени позволяет идентифицировать возбудителя в биологическом материале в течение нескольких часов [9–12]. Вместе с тем, в силу относительной новизны методики, а также изменчивости микробного пейзажа стационаров, роль и клиническая.

Ионов О.В. , Никитина И.В. , Бурменская О.В. , Непша О.С. , Трофимов Д.Ю. , Донников А.Е. , Митрохин С.Д. , Припутневич Т.В. , Любасовская Л.А. , Дегтярев Д.Н.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее.

Метод ПЦР был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

гепатит C, B;
уреаплазмоз половых органов;
ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
бактериальный вагиноз;
кандидоз половых органов;
инфекционный мононуклеоз;
туберкулез;
сальмонеллез;
туберкулез (легочные и внелегочные формы);
листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную инфекцию;
детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Суть метода полимеразной цепной реакции

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах.

ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Мазок у женщин

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Мазок у мужчин

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.

За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.

Анализ крови

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Как проводится тест ПЦР?

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии;
соскобы и мазки со слизистых для диагностики ЗППП;
клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами.

Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.

Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Точность расшифровки результатов ПЦР анализа

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Примерно 80% населения планеты по статистике международных организаций сегодня являются носителями вируса папилломы человека. Вместе с тем, не следует считать ВПЧ безопасным. Среди многих его видов есть и такие, которые прямо влияют на развитие онкологических заболеваний.

Поскольку проблема себя не сразу показывает, медики рекомендуют лицам с группы риска систематически сдавать специальный анализ — ВПЧ скрининг.

Типы ВПЧ

Специалисты в области медицины выделяют более 100 разновидностей ВПЧ. Однако далеко не все типы ВПЧ опасны для человека.

Развития раковых опухолей можно ожидать при обнаружении следующих типов: 16, 52, 18, 68, 45, 31, 58, 33, 35, 39, 59. Особенно опасными среди них считаются 18 и 16 тип. Именно при наличии таких наблюдается высокая летальность. Каждый канцерогенный тип вируса может привести к развитию рака:

шейки матки;
полового члена;
заднего прохода;
вульвы;
гортани;
рта.

Низкие шансы заболеть раком в случае выявления типов: 11, 43, 42, 6, 44. Не выявлено до сих ни одного факта заболевания онкологическими болезнями в случае заражения типами: 1, 3, 5, 2, 4.

Особенности вируса папилломы человека такие, что инфицирование одним видом не означает, что человек убережется от других.

Причины заражения вирусом папилломы

Основной причиной распространения вируса являются незащищенные интимные отношения. При этом представительницы прекрасного пола, как показывает статистика, больше подвержены инфицированию. Так, вероятность заразиться у мужчин при половом контакте составляет 25-70%. Риск заражения у женщин достигает 80-90%.

Кроме этого, вирус может передаваться в случаях:

переливания крови;
при рождении — от матери к ребенку;
через бытовые предметы — средства личной гигиены;
в результате порезов, ран и тому подобное.

Скрининг — общее обследование

Многих женщин интересует, что такое скрининг ВПЧ. Прежде всего, следует указать, что это качественный анализ, который позволяет выявить рак шейки на ранних стадиях, а также узнать о наличии в организме конкретного человека опасных типов вирусов.

У женщин скрининг ВПЧ делается непосредственно во время гинекологического осмотра. В таком случае врач берет мазок, который впоследствии проверяется в лабораторных условиях. Если в результате папилломавирусная инфекция обнаружена, женщина должна пройти более тщательное обследование, в том числе на предмет выявления патологических изменений тканей.

Активно сегодня используется и несколько других способов установить диагноз ПЧ.

ПЦР. Имеет целью выявить ДНК возбудителя в биологическом материале: крови, моче, выделениях. Следовательно, удается выяснить, какой именно штамп присутствует.
Генотипирование. Помогает выяснить, имеет ли заражение первоначальную форму или хроническую.
Дайджен-тест. Количественный метод, указывает на количество вируса.

Какой именно тест использовать и когда именно делать скрининг на ВПЧ должен решать врач.

Что показывает расширенный скрининг?

Для более полноценного осмотра и диагностики, а также в случае подозрения сразу нескольких типов ВПЧ уместно задавать расширенный ВПЧ скриннинг. Такой содержит информацию по поводу 15 типов вируса. По сути, это количественный метод, дающий возможность выявить ДНК. Главная особенность, которой отличается ВПЧ ВКР скрининг — это стопроцентная специфичность определения.

Получив результаты цепной реакции полимеразной ПЦР, доктор имеет возможность более удачно подобрать схему лечения.

Расширенное тестирование, цервикальный скрининг расшифровывается с использованием специального параметра — контроль взятия материала.

Надежен ли скрининг?

Сегодня трудно найти более надежный и доступный способ выявления вируса ВПЧ, чем скрининг. Всего лишь несколько дней нужно специалистам, чтобы указать на наличие потенциально опасных факторов.

В современных частных клиниках есть вся необходимая аппаратура, индикаторы и средства, которые позволяют провести тест максимально качественно. Для удобства пользования методом ПЦР и легкости интерпретации результатов, происходит перерасчет в единицы Digene. Следовательно, вероятность ошибки очень мала.

Зачем диагностировать заболевание?

Своевременное выявление вируса у женщин или мужчин дает возможность спасти человека от смерти. Выявить наличие канцерогенных типов очень сложно, ведь извне проблема себя может в течении длительного времени никак не проявлять.

Получив точные результаты, врач может выяснить несут ли угрозу кондиломы, приводят ли они к появлению перерожденных новообразований, и стоит ли вообще их удалят.

Своевременная диагностика помогает предупредить развитие рака, а в случае его наличия подобрать наиболее эффективную схему борьбы.

Кто должен проходить скрининг?

Сдавать анализ на выявление ВПЧ должны все женщины после 30 лет. Если канцерогенных типов в них не обнаружено, тогда стоит повторять такой анализ, по крайней мере, раз в 2-3 года.

Сдавать кровь для определения вируса также нужно:

при беременности;
при сильно пониженном иммунитете;
если человек борется с признаками наличия ВПЧ;
после незащищенных контактов, переливания крови.

Также такой анализ время от времени должны сдавать все люди, у которых заболевание уже диагностировано.

Что расскажет доктор перед исследованием?

Обратившись к специалисту, клиент получает максимально полную консультацию по поводу скрининга и особенностей его выполнения. Пациент получит исчерпывающую информацию по вопросу как сдавать ВПЧ скриннинг. У женщин забор материала проводится в стационарных условиях. Врач-гинеколог делает соскоба из цервикального канала.

Для пациентов мужского пола ПЦР анализ осуществляется таким же образом.

Некоторые другие методы диагностики вируса предусматривают просто сдать анализ крови.

Что необходимо делать для прохождения исследования?

Не будем удачно проведенным анализ, если пациент использует медикаменты в течение трех последних дней перед забором материала.

Мужчинам запрещено мочится в течение 2-х часов до начала забора материала.

Как оценить результаты ВПЧ теста

Первым фактом, на который обращает внимание врач, является наличие или отсутствие ДНК вируса в биологических материалах человека. В норме его ДНК должны полностью отсутствовать. Вместе с тем, результаты теста используются для определения особенностей течения заболевания.

Так, показатели до цифры 103 указывают на переходящее, то есть малоопасное течение. В этом случае в течение одного года человек повторно сдает еще несколько раз скрининг. Подтверждением транзиторности является уменьшение показателей в несколько раз.

Если результаты указывают на цифру более 103, врач может сделать вывод о хроническом течении заболевания. Вероятность заболеть раком затем очень значительна.

На начало развития рака шейки матки указывают показатели более 105.

Излечима ли папилломавирусная инфекция?

Нет необходимости использовать сильные препараты для борьбы с типами ВПЧ, которые не несут раковой опасности. Врачи могут порекомендовать удаление (в основном хирургическим методом) бородавок и папиллом и использование иммунных препаратов и методов.

Для купирования инфекции врачи предлагают:

противовирусные препараты;
иммуностимулирующие.

Те же, у кого диагностирован тип 18 или 16 должны быть под контролем врачей и систематически сдавать анализ. Важно понять, что единой схемы для лечения папилломовирусных болезней на сегодня просто не существует.

Читайте также: