Пцр диагностика туберкулеза m tuberculosis m bovis

Обновлено: 27.03.2024

Квантфивероновй тест (QuantiFERON®-ТВ Gold) – современный лабораторный тест для выявления туберкулезной инфекции, альтернатива классическому кожному тесту с туберкулином. В настоящий момент в различных странах разработано и выпущено большое число национальных рекомендаций по применению данного теста.

Квантифероновый тест основан на определении INF-γ (гамма-интерферона), высвобождаемого сенсибилизированными Т-клетками, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6, CFP-10, TB7.7 (p4)) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.). Эти протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. marinum.

В исследуемой крови пациента (из пробирки с ТВ-антигеном) определяется содержание INFγ, результат анализируется в совокупности с данными, полученными из 2-х других пробирок (выполняющих роль контрольных).

Примерно 1/3 часть населения мира инфицирована МБТ, и только у 5-10% инфицированных лиц развивается заболевание. При наличии неблагоприятных факторов латентная туберкулезаня инфекция (ЛТИ – состояние, когда микобактерии туберкулеза (МБТ) присутствуют в организме человека, но при этом отсутствуют клинические и рентгенологические признаки туберкулеза) может перейти в активную форму с развитием внелегочного туберкулеза (например, туберкулез почек).

К группе высокого риска инфицирования МБТ относятся лица, имевшие контакт с больным туберкулезом, или имеющие высокую вероятность контакта (работники противотуберкулезных диспансеров, приютов, исправительных учреждений и др.), а также лица с сопутствующими заболеваниями (ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом и др.).

Используемые для диагностики ЛТИ кожные тесты – проба Манту и Диаскинтест®, имеют ряд противопоказаний и ограничений к применению.

Противопоказания к проведению пробы Манту и Диаскинтеста:

  • Индивидуальная непереносимость туберкулина;
  • Острые и хронические инфекционные заболевания и соматические заболевания в период обострения;
  • Кожные заболевания и аллергические состояния в период обострения;
  • Период карантина в детских коллективах.

У пациентов с индивидуальной гиперчувствительностью к туберкулину может наблюдаться ложноположительная реакция.

Сравнение тестов для диагностики туберкулезной инфекции

Параметр Проба Манту Диаскинтест® Квантифероновый тест
Метод исследования Кожный тест Кожный тест Исследование крови
Побочные реакции Возможны Возможны Нет
Противопоказания Есть Есть Нет
Специфичность Низкая Высокая Высокая
Ложноположительные результаты после вакцинации БЦЖ Да Нет Нет
Зависимость от сроков проведения профилактических прививок Да (не ранее чем через месяц) Да (не ранее чем через месяц) Нет
Интерпретация результатов Субъективна Субъективна Объективна

Преимущества квантиферонового теста:

  • отсутствие противопоказаний и ограничений по времени проведения;
  • отсутствие ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
  • безопасность процедуры и отсутствие побочных реакций;
  • интерпретация результатов этого теста менее субъективна, чем интерпретация результатов кожных туберкулиновых тестов;
  • высокая специфичность (99,1%) и высокая чувствительность (89,0%).

Показания к назначению квантиферонового теста:

  • Выявление ЛТИ в группах высокого риска: работники специализированных противотуберкулезных и других учреждений, где есть высокий риск контакта с возбудителем или больным туберкулезом, пациенты с сопутствующими заболеваниями и др.;
  • Наличие известных контактов с больным туберкулезом (бактериовыделителем);
  • Наличие положительной реакции пробы Манту для исключения поствакцинальной реакции;
  • Наличие противопоказаний к проведению кожных туберкулиновых проб (пробы Манту и Диаскинтеста®);
  • Дифференциальная диагностика инфекций, вызванных МБТ;
  • Обследование иммигрантов.

Пример результата исследования и интерпретация:

Примечание: Данный тест не дифференцирует латентный и активный туберкулез. В случае положительного результата необходима консультация врача-фтизиатра для определения дальнейшей тактики. Величина уровня гамма-интерферона не коррелирует со стадией и степенью инфицирования, уровнем иммунной реактивности или вероятностью перехода латентного туберкулеза в активный.


Параметр Результат Критерии оценки результатов
Содержание гамма-интерферона в контрольной пробирке (NIL) 0,05 До 8,00
Содержание гамма-интерферона в пробирке с ТВ-антигеном (ТВ Ag) 0,09 Менее 0,35 (или свыше 0,35, но до 25% контрольного значения NIL)
Содержание гамма-интерферона в пробирке с митогеном (Mitogen) 9,56 От 0,50
Квантифероновый тест (диагностика туберкулеза) Отрицательный Отрицательный

Интерпретация результата исследования

  • Инфицирование МБТ;
  • Инфицирование нетуберкулезными микобактериями (M. kansasii, M. szulgai, M. marinum).
  • Индивидуальные особенности иммунитета;
  • Нарушение преаналитических требований.

В этом случае врач принимает решение либо в пользу забора нового образца крови, либо в пользу проведения других медицинских обследований.

  • Не исключает инфицирования МБТ или туберкулеза.
  • В ранние сроки инфицирования;
  • При иммунодефицитных состояниях;
  • У детей < 5 лет;
  • При несоблюдении преаналитических требований.

Внимание! Интерпретация результатов должна проводиться с учетом клинико-эпидемиологического анамнеза и результатов других диагностических исследований.

Метод исследования: твердофазный иммуноферментный анализ.

Срок выполнения исследования: 3-10 рабочих дней.

Подготовка к проведению исследования: забор крови производят утром строго натощак (или не ранее, чем через 8 часов после последнего приема пищи).

Определение ДНК возбудителей туберкулеза: комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в мокроте, смывах с бронхов, лаважной жидкости методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени.

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода mycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения.

В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

  • определяемый фрагмент - специфические участки ДНК микобактерий;
  • специфичность определения - 100%;
  • чувствительность определения - 100 копий ДНК микобактерий в образце.

Желательно взятие материала проводить до диагностических и лечебных процедур и до приема химиопрепаратов. Мокроту можно собирать в любое время суток, когда она выделяется у больного. Необходимо следить, чтобы пробу не попадала носоглоточная слизь. Лаважную жидкость и смывы собирает врач в условиях стационара. Материал собирают в стерильную емкость с плотно закручивающейся крышкой.

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода Мycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет.

Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

  • определяемый фрагмент - специфичные участки ДНК микобактерий;
  • специфичность определения - 100%;
  • чувствительность определения- 100 копий ДНК микобактерий в образце.

Специальной подготовки к исследованию не требуется.С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>

  • Лихорадка, характеризующаяся ежедневным двойным повышением и понижением температуры тела. На фоне туберкулиновой гиперчувствительности или туберкулиновой анергии.
  • Острые воспалительные заболевания верхних и нижних дыхательных путей с длительным контактом с туберкулёзным больным в анамнезе.
  • Ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.
  • Подозрение на системную волчанку.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Молекулярно-генетическое исследование, позволяющее определить в исследуемом биоматериале наличие ДНК возбудителей туберкулеза – M. tuberculosis и M. bovis.

Синонимы русские

Возбудители туберкулеза, ДНК [реал-тайм ПЦР].

Синонимы английские

Mycobacterium tuberculosis complex, DNA.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Бронхоальвеолярный лаваж, биоптат, венозную кровь, ликвор, мокроту, первую порцию утренней мочи, плевральную жидкость, эякулят.

Общая информация об исследовании

Туберкулез по сей день является наиболее частой причиной смерти от инфекционных заболеваний у взрослых. Он вызывается человеческим (M. tuberculosis) и бычьим (M. bovis) типом микобактерий. Отличительной особенностью этих бактерий является устойчивость их клеточной стенки к действию кислот, отчего их называют кислотоустойчивыми. Заражение Mycobacterium tuberculosis происходит, как правило, воздушно-капельным путем, а Mycobacterium bovis – алиментарным (через пищевые продукты, в том числе и молоко), возможно заражение контактным путем (через раневую поверхность) и внутриутробно (от больной туберкулезом матери к плоду).

При первичном инфицировании клинические симптомы, как правило, отсутствуют. По мере прогрессирования заболевания появляются усталость, ночная потливость и лихорадка, кашель с мокротой, теряется масса тела. Примерно в 10 % случаев наблюдается активная форма туберкулеза, риск развития которой наиболее высок при ослабленном иммунитете, в том числе при ВИЧ-инфекции, сахарном диабете, терминальной почечной недостаточности, злокачественных опухолях и т. д.

Наиболее быстрым и высокочувствительным методом (чувствительность – 95 %) выявления туберкулеза является полимеразная цепная реакция. Ее принцип основан на амплификации (многократном увеличении числа копий) специфичных для возбудителей туберкулеза участков ДНК.

Исследование для выявления возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микобактерии в образце биоматериала.

Синонимы русские

Туберкулез, микобактерии туберкулеза, палочка Коха.

Синонимы английские

Tuberculosis, Tubercle bacillus, Koch's bacillus.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, венозную кровь, ликвор, мокроту, плевральную жидкость, первую порцию утренней мочи, эякулят.

Общая информация об исследовании

Туберкулез (от лат. tuberculum – "бугорок") – инфекционное заболевание человека и животных, передающееся преимущественно воздушно-капельным путем. Риск заразиться повышает подавление иммунитета, вызванное ВИЧ/СПИДом, диабетом, заболеванием почек, трансплантацией органов и применением иммуносупрессоров, беременностью, старением. Кроме того, наиболее подвержены ему те, кто контактирует с больными туберкулезом, а также дети до 5 лет после виража туберкулиновой пробы. К наиболее уязвимым группам населения относят бездомных, заключенных, мигрантов из стран с высокой заболеваемостью туберкулезом, наркопотребителей, а также пожилых людей.

Для данного исследования используется тест-система, основанная на выявлении геномной ДНК возбудителя туберкулеза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). В современной диагностике это один из самых быстрых, универсальных и высокочувствительных методов.

Стандартные способы обнаружения микобактерий туберкулеза базируются на выращивании патогенных микроорганизмов в питательной среде. Сложности связаны с низкой скоростью роста колоний Mycobacterium tuberculosis – необходимо ожидать до 1,5 месяцев после взятия материала.

Высокой чувствительностью и специфичностью обладают молекулярно-биологические методы, основанные на детекции генетического материала микобактерий туберкулеза. Их важнейшим преимуществом является высокая скорость получения результата. Использование ПЦР реал-тайм позволяет выявить возбудитель туберкулеза уже в день получения клинического образца.

Бактериемия (попадание в кровь пациента микобактерий) может возникать на ранних стадиях туберкулезной инфекции, а также при развитии генерализованного или внелегочного туберкулеза. Она опасна тем, что иммунный ответ на бактерии вызовет сепсис и септический шок, чреватый смертью. Риск развития генерализованного туберкулеза наиболее высок у пациентов с ВИЧ на поздних стадиях, у тех, кто прервал противотуберкулезную терапию, а также у не обратившихся вовремя за медицинской помощью при появлении симптомов туберкулеза.

Диагностика туберкулеза у ВИЧ-инфицированных затруднена из-за иммуносупрессированного состояния организма, что зачастую проявляется в ложноотрицательных результатах туберкулиновых реакций и микробиологических тестов. В связи с этим тестирование на Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР реал-тайм имеет большое значение.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики туберкулеза легких (в частности, его генерализованных и внелегочных, связанных с бактериемией, форм), и контроля за его лечением.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на внелегочный туберкулез.
  • При симптомах бактериемии на фоне туберкулезной инфекции: повышенной температуре тела, потливости и пр. (при небольшом количестве бактерий в крови бактериемия может протекать бессимптомно).
  • Если у пациента был длительный контакт с больным туберкулезом.
  • При ненормальной реакции на туберкулиновую пробу у детей.
  • Когда у пациента ВИЧ-инфекция.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • Наличие возбудителя в исследуемом биоматериале. Это обычно встречается при активной форме туберкулеза, требующей лечения. Выявление большого количества микобактерий чаще всего указывает на внелегочную форму туберкулеза либо генерализацию инфекции.
  • Возбудителя туберкулеза не выявлено. Бактериемия отсутствует.

Что может влиять на результат?

Эффективная противотуберкулезная терапия со временем приводит к исчезновению микобактерий в клиническом материале.

Важные замечания

  • Для назначения корректной схемы лечения при выявлении у пациента туберкулеза необходимо провести тест на чувствительность микобактерий к противотуберкулезным препаратам.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, фтизиатр, уролог, гинеколог, инфекционист.

Читайте также: