Пцр диагностика вич инфекции инвитро

Обновлено: 18.04.2024

Метод определения в пробах материалов, подвергающихся исследованию, любых ДНК и РНК, в случае неэффективности других методов.

Суть этого метода звучит в самом названии.

Поначалу исторический экскурс.

Автор разработки Кэри Мюллис, заработал Нобелевскую премию за работу 1983 года.

Первоначально планировалось научное применение метода, но впоследствии он завоевал свое место и в диагностической медицине.

Этим методом можно определять генетический материал всевозможных инфекций.

Гинекологические и урологические труднодиагностируемые инфекции выявляются этим методом.

Очень часто ПЦР используется для диагностики ВИЧ.

Основы метода, на основании которых работает исследование, основаны на уникальности фрагмента ДНК для каждой инфекции.

В случае с ВИЧ это РНК.

И создает большое количество копий этого фрагмента ДНК (или РНК).

Геометрическая прогрессия определяет число копий в течение цикла ПЦР (около 3-х минут).

По прошествии нескольких часов число фрагментов – несколько миллиардов.

Теперь несложно определить и возбудителя инфекции.

Метод силен своей универсальностью.

Для определения фрагментов ДНК (или РНК) возбудителя любой инфекции всегда используется одно и то же стандартное оборудование.

ПЦР славится и своей специфичностью (практически 100%).

Можно использовать один и тот же исследуемый материал для поиска разных возбудителей заболеваний.

У метода очень высокая чувствительность и оперативность.

Всего в течение дня, можно узнать, есть ли возбудитель в организме и какой.

Инкубационный период не мешает проведению исследования.

Нет еще клиники заболевания и антител в крови, но есть ДНК или РНК конкретного возбудителя в организме подвергающегося исследованию.

К недостаткам метода нужно отнести высокую квалификацию врача, берущего материал для исследования, и лаборанта, проводящего исследование.

Также важна высокая чистота помещения, в котором проводят исследование (практически 100%), чтобы результаты исследований были достоверными.

Для ИППП существуют специальные комплексные исследования, при которых определяют наличие сразу нескольких возбудителей.

А теперь поговорим о перспективах ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции.

Когда делают ПЦР на ВИЧ

От четырех до четырнадцати дней спустя, после инфицирования, можно обнаружить ВИЧ данным методом.

Достоверность результата оценивают, когда минуло четырнадцать дней спустя опасной половой связи.

Наличие отрицательного результата говорит о достоверности проведенного исследования.

Но для того чтобы получить непререкаемый результат исследования проводят еще и ИФА.

ПЦР является высокочувствительным методом, в основе которого лежит амплификация (усиление) небольшого участка провирусной ДНК (или РНК) за счёт праймеров.

Праймеры – это специальные реагенты.

Желательная (не обязательная) процедура взятия венозной крови на исследование на ВИЧ-инфекцию.

Проведение ПЦР для диагностики достаточно дорогостоящий анализ.

Его делают не всегда, а в особых случаях.

И если случилась медицинская авария, в которой есть ВИЧ-инфицированные и возможно заразившиеся.

Спустя четырнадцать дней достоверность на наличие ВИЧ-инфекции порядка 98%.

По истечении пяти дней после предполагаемого заражения - 80%.

Анализ ИФА можно делать только тогда, когда появятся антитела к ВИЧ в крови.

Проходит от одного до трёх месяцев, иногда до года.

Поэтому если есть озабоченность по поводу ВИЧ инфицирования, лучше не тянуть, а сделать этот дорогостоящий, но такой необходимый анализ.

Важно знать диагноз как можно раньше.

ПЦР анализ на ВИЧ
рассказывает подполковник
медицинской службы, врач
Ленкин Сергей Геннадьевич

Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.

Ленкиным Сергеем Геннадьевичем

Наименование	Срок	Цена
Прием венеролога	900.00 руб.
ДНК ВИЧ (кровь)	5 д.	3450.00 руб.

Как делают

Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:

исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции

Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.

По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% - 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.

Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.

ПЦР на ВИЧ-инфекцию – единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.

То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.

Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.

Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.

Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:

новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции

Все остальные условия являются необязательными.

Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.

Берется венозная кровь и проводится анализ.

Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.

Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.

Для этого нужна очень чистая лаборатория.

При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.

Для этого используют референц-лабораторию.

Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.

К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.

Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.

Если проводят скрининг на наличие ВИЧ-инфекции или ставят диагноз ВИЧ инфицирования, то используют метод ПЦР.

Методом проводят и количественную оценку нахождения ВИЧ в организме.

Так определяется степень и тяжесть патологических изменений в организме.

Уровень концентрации ВИЧ-инфекции, в организме диагностируемого определяют методом ПЦР.

До лечения исследуется кровь методом ПЦР и после, и можно оценить правильность проводимого курса лечения.

Те ли препараты назначают или нужно другие.

Проводят анализ, и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не говорит о достоверности наличия ВИЧ-инфекции в организме.

Результаты анализов

Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.

Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.

Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.

Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:

при резкой потере веса
при длительной диарее (около 3-х недель)
при лихорадке невыясненной этиологии
при росте лимфоузлов в разных местах
при лимфо- и лейкопении
при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях

Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.

Какой бы ни был результат - это не повод заниматься лечением самостоятельно.

К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.

Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.

Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.

Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.

Расшифровка результатов:

РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
20 – 10 6 копий/мл
более чем 10 6 копий/мл

Самый опасный третий и четвертый результат.

Что делать, если результат анализа ПЦР на ВИЧ положительный

Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.

Это занимает период от двух до десяти дней.

Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.

Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.

Но даже положительный результат не окончательный.

Пересдача крови на анализ тоже делается.

На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.

Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.

При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.

При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.

Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.

Даже положительный результат остается тайной.

Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.

Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.

В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.

Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.

Перспективы метода в диагностике ВИЧ-инфекции

ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.

Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.

Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.

Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.

Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.

С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.

Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью – от одного до ста единиц ВИЧ.

Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.

Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.

Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).

Еще важна и скорость ПЦР анализа.

Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.

Но есть у метода и негативные качества.

Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.

Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.

Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.

Хотя сам метод очень чувствительный.

Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше – 99%.

А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.

Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.

На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.

Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч – сто тысяч лимфоцитов.

Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.

Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.

Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.

Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.

Метод определения Количественное определение, ПЦР с детекцией в режиме реального времени (real-time).

Определение РНК ВИЧ типа 1 в плазме крови методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Исследование выполняется на оборудовании компании Hoffmann-La Roche (Щвейцария) по стандартизованной технологии с автоматизированной пробоподготовкой.

Исследование концентрации в крови РНК ВИЧ типа 1, которое применяют для прогноза и мониторинга эффективности терапии.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) является этиологическим агентом синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД). ВИЧ-инфекция может передаваться половым путем, через контаминированную кровь и ее продукты, или от инфицированной матери плоду. В период 3 – 6 недель после инфицирования обычно развивается недлительный острый синдром, для которого характерны гриппоподобные симптомы и высокие уровни виремии в периферической крови. В большинстве случаев после этого развивается ВИЧ-специфичный иммунный ответ и снижение виремии в плазме, обычно в течение 4 – 6 недель после появления симптомов. После сероконверсии (появления специфических антител) наступает клинически стабильная бессимптомная фаза, способная длиться годами. Для бессимптомного периода характерен невысокий уровень персистирующей виремии в плазме и постепенное снижение уровней CD4+ T-лимфоцитов, которое приводит впоследствии к развитию тяжелого иммунодефицита, множественным оппортунистическим инфекциям, онкогенезу и гибели. У лиц с установленной ВИЧ-1 инфекцией количественное измерение уровня РНК ВИЧ-1 в крови используют в целях прогноза и контроля антиретровирусной терапии.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>

Тест предназначен для использования при ведении пациентов, инфицированных ВИЧ-1, в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными маркерами прогрессирования заболевания. Исследование применяют для прогноза (на основании исходных уровней РНК ВИЧ-1) или для мониторинга эффективности антиретровирусной терапии (на основании определения изменений уровней РНК ВИЧ-1 в плазме на протяжении курса антиретровирусной терапии).

Внимание: тест не предназначен для скрининга на ВИЧ-1 крови и ее продуктов или для подтверждающей диагностики ВИЧ-1-инфекции.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: количество выявленной РНК вируса иммунодефицита человека 1 типа, выраженное в C/ml (копии/мл). Одна копия РНК ВИЧ-1 соответствует 1.67 Международных единиц (МЕ) в соответствии в первым международным стандартном ВОЗ для РНК ВИЧ-1 в тестах по выявлению нуклеиновых кислот (NIBSC 97/656).

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Метод определения Количественное определение, ПЦР с детекцией в режиме реального времени (real-time).

Внимание. При положительных и сомнительных реакциях, срок выдачи результата может быть увеличен до 10 рабочих дней.

Синонимы: Анализ крови на антитела к ВИЧ1 и 2 и антиген ВИЧ1 и 2; ВИЧ-1 p24; ВИЧ-1-антиген, p24-антиген; ВИЧ 1 и 2 антитела и антиген p24/25, ВИЧ тест-системы 4-го поколения; Одновременное качественное определение антигена р24 ВИЧ и антител к антигенам ВИЧ типов 1 и 2. Anti-HIV, HIV antibodies, human immunodeficiency virus antibodies; HIV-1 p24, HIV-1 Ag, p24-antigen; HIV-1 and HIV-2 Antibody and Antigen Evaluation; HIV Screening Tests; AIDS Test; AIDS Screen; HIV Serology.

Краткое описание исследования на Антитела к ВИЧ1 и 2 и антиген ВИЧ1 и 2

Антитела к ВИЧ могут появиться, начиная со второй недели после инфицирования; их содержание увеличивается в течение 2-4 недель и сохраняется на протяжении многих лет. У 90-95% инфицированных они появляются в первые три месяца после заражения, у 5-9% – в период от трех до шести месяцев, у 0,5-1% – в более поздние сроки. После инфицирования ВИЧ, еще до появления антител (сероконверсии), в образцах сыворотки или плазмы крови могут быть выявлены антигены ВИЧ. Структурный ядерный белок ВИЧ р24, который появляется в крови через две недели после инфицирования, исчезает только через два месяца. Тест-система 4-го поколения, с использованием которой выполняется данный тест позволяет, помимо выявления антител к ВИЧ-1 и 2, обнаруживать антиген р24 ВИЧ. Таким образом, исследование может быть информативным и до сероконверсии. Подобный подход в лабораторной диагностике ВИЧ позволяет проводить самое раннее определение инфекции. К особым характеристикам применяемого в лаборатории ИНВИТРО теста для выявления ВИЧ-инфекции стоит отнести высокую специфичность исследования: > 99,5%; 100% чувствительность анализа к антителам, характерным для периода сероконверсии, и чувствительность теста к антигену р24 порядка 18 пг/мл.

У большинства людей с антителами к ВИЧ клинические признаки заболевания (СПИД) могут не проявляться от двух до десяти лет и более. Порядок проведения лабораторного обследования на наличие антигенов ВИЧ и антител к ВИЧ строго регламентирован приказами МЗ РФ и включает в себя этап скринингового (отборочного) исследования иммуноферментными (ИФА) методами, разрешенными к использованию, и этап верификационного (подтверждающего) исследования методом иммуноблота в лаборатории городского центра СПИД.

Следует отметить, что даже лучшие диагностические ИФА-системы не имеют 100% специфичности, то есть существует некоторая вероятность получения неспецифических, ложноположительных результатов, связанных с особенностями сыворотки крови пациента. Поэтому положительный результат скринингового ИФА обследования может не подтвердиться в подтверждающем тесте, после чего пациенту выдадут отрицательный результат. При получении неопределенных результатов в подтверждающем исследовании тестирование повторяют в динамике. Рекомендуется проводить повторные исследования через 2-3 недели.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет свои особенности. В их крови до 18 месяцев с момента рождения могут циркулировать материнские антитела к ВИЧ (класса IgG). Отсутствие антител к ВИЧ у новорожденных не означает, что вирус не проник через плацентарный барьер. Дети ВИЧ-инфицированных матерей подлежат лабораторно-диагностическому обследованию в течение 36 месяцев после рождения.

С какой целью проводят исследование на Антитела к ВИЧ1 и 2 и антиген ВИЧ1 и 2

Исследование используется для выявления ВИЧ, в том числе и на доклинической стадии заболевания. Комбинированное определение специфических антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена р24 ВИЧ в крови применяется в качестве анализа на наличие инфицирования вирусом иммунодефицита человека. Своевременная диагностика инфекционного процесса может предотвратить распространение вируса в популяции и позволит начать специфическую терапию в максимально короткие сроки.

Что может повлиять на результат исследования на Антитела к ВИЧ1 и 2 и антиген ВИЧ1 и 2

В редких случаях возможен ложноположительный результат, если в крови обследуемого присутствуют антитела к вирусу Эпштейна-Барр, ревматоидному фактору, главному комплексу гистосовместимости HLA или антитела после введения вакцины против ВИЧ.

Читайте также: