Пцр для диагностики ротавирусов

Обновлено: 19.04.2024

Заболевания у человека вызывают ротавирусы групп А, В и С. Готовые наборы реагентов имеются для выявления ротавирусов группы А, имеющих наибольшее эпидемиологическое значение. На территориях, где не применяются ротавирусные вакцины, ротавирусы являются наиболее широко распространенной причиной диарейных заболеваний у детей в возрасте до 5 лет.

Показания к обследованию

Все пациенты детского возраста при наличии диарейного синдрома;
взрослые пациенты при наличии диарейного синдрома в период сезонного подъема заболеваемости (в РФ с октября–ноября по май–июнь).

Материал для исследований

Нативные образцы фекалий, собранные в первые 72 ч от начала заболевания. Диагностическая ценность исследования мазков со слизистых верхних дыхательных путей, крови пациентов в острую фазу заболеваний малоинформативно.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление АГ или РНК ротавирусов группы А в образцах фекалий.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики

Наиболее распространенные исследования – выявление АГ ротавирусов группы А в фекалиях пациентов методом ИФА, реже – латекс-агглютинации и ИХА. Меньшее распространение получило выявление РНК ротавирусов группы А с использованием ПЦР. Описанное ранее выявление РНК ротавирусов группы А с использованием электрофоретической детекции сегментированного генома в полиакриламидном геле в настоящее время находит ограниченное применение для научно- исследовательских целей.

Аналитическая чувствительность выявления РНК ротавирусов при использовании ПЦР выше, чем при выявлении их АГ, но с учетом высокой концентрации ротавирусов в фекалиях в первые дни болезни это не приводит к большим различиям в диагностической чувствительности названных исследований. Гораздо большее влияние на результат исследований может оказать низкая специфичность наборов реагентов. На территории РФ используются наборы реагентов, имеющие показатели диагностической специфичности/чувствительности по отношению к референтным тест-системам* 45/62 и 90/60 соответственно. При обследовании пациентов позже 72 ч от начала заболевания, а также лиц со стертой клинической симптоматикой для детекции ротавирусов целесообразно использовать более чувствительный метод – выявление РНК методом ПЦР.

Выделение вируса в культуре клеток в практике клинико-диагностических лабораторий не используется.

Показания к применению

Выявление РНК ротавирусов методом ПЦР экономически целесообразно при применении мультиплексных тест-систем, в рамках комплексной детекции нескольких вирусных/бактериальных патогенов и незаменимо при исследовании материала от пациентов на поздних стадиях заболевания (после 3-го дня болезни).

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований

Среди клинически здоровых лиц носительство ротавирусов (транзиториное и связанное с недавно перенесенным заболеванием) встречается довольно редко (дети – до 1,8%, взрослые – 0,8%). По этой причине, при использовании наборов реагентов, обладающих высокой специфичностью, интерпретация положительных результатов исследований не вызывает затруднений. Случаи сочетанного выявления ротавирусов и других возбудителей ОКИ могут быть связаны с длительностью выделения ротавирусов с фекалиями после перенесенного заболевания (при использовании высокочувствительных тест-систем вирус может быть обнаружен в течение 30–40 дн.).

Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал возбудителей острых кишечных инфекций в кале (рота-, норо-, астро- вирусов) и установить этиологию заболевания.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Для чего используется этот анализ?

Для дифференциальной диагностики причин острой диареи.

Общая информация об исследовании

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи.

Факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность,астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей.

Комплексное молекулярно-биологическое исследование для выявления и дифференциации наиболее распространенных возбудителей острых кишечных инфекций (ОКИ) – ротавирусы группы А (Rotavirus), норовирусы 2 генотипа (Norovirus 2 генонотип), астровирусы (Astrovirus), энтеровирусы (Enterovirus). Исследование позволяет выявить генетический материал (РНК) возбудителей в кале и установить этиологию заболевания.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Метод исследования

ПЦР в режиме реального времени.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Ротавирусная инфекция – это острое вирусное заболевание, передающееся фекально-оральным путем. Его возбудителями являются РНКсодержащие ротавирусы (Rotavirus). Источник инфекции – больной человек.

Для ротавирусов характерна сезонность: чаще всего ими заражаются в холодное время года. Инкубационный период длится от 15 часов до нескольких суток, начало заболевания острое, с тошнотой, рвотой, диареей, иногда лихорадкой. После перенесенного заболевания иммунитет нестойкий, поэтому возможен рецидив.

Норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде.

Норовирус (Norovirus) – это РНКсодержащий вирус, относящийся к семейству Caliciviridae и приводящий к возникновению желудочно-кишечной инфекции в форме острого гастроэнтерита. Ассоциирован с передачей инфекции через продукты питания. Норовирусная инфекция является высококонтагиозным заболеванием и может протекать в виде единичных случаев, групповых случаев и вспышек.

Астровирусная инфекция – это острое вирусное заболевание с фекально-оральным путем передачи. Его возбудителями являются РНКсодержащие астровирусы (Astrovirus). Пик заболеваемости приходится на холодное время года. Инкубационный период составляет 3-4 дня. Инфекция проявляется в виде острого гастроэнтерита (общее недомогание, головная боль, тошнота, диарея, небольшое повышение температуры, иногда рвота) и чаще развивается у детей (особенно в возрасте до 2 лет), однако может встречаться и у взрослых. Она напоминает ротовирусную инфекцию, однако протекает легче. Заболевание длится, как правило, не более 5 дней, специфического лечения не требует и заканчивается выздоровлением.

Энтеровирус – это группа РНК-содержащих вирусов, характеризующихся нуклеокапсидом и отсутствием оболочки. Они относятся к семейству Picornaviridae.

Род Enterovirus объединяет несколько десятков различных вирусов, являющихся возбудителями целого спектра заболеваний человека: полиомиелита (Poliovirus), миокардита и перикардита (Сoxsackievirus В), вирусной пузырчатки полости рта и конечностей, герпетической ангины, асептического менингита и энцефалита (Сoxsackievirus A, Echovirus), а также более редких болезней. Для всех вирусов рода Enterovirus характерен схожий патогенез: попадание возбудителя в желудочно-кишечный тракт (фекально-оральный путь передачи), репликация в эпителиальных клетках слизистой оболочки ЖКТ и гематогенное распространение с поражением различных органов и тканей. Учитывая эти особенности заражения, основными биологическими средами для выявления Enterovirus являются отделяемое носоглотки, кал и ликвор. Как правило, острая инфекция Enterovirus протекает бессимптомно или в доброкачественной форме, а клиническая картина заболевания развивается лишь спустя некоторое время после первичного заражения. Эту особенность следует учитывать при выборе вида биоматериала, направляемого на анализ.

Это наиболее чувствительный и специфичный метод диагностики ротавирусной инфекции, в основе которого лежит взаимодействие антиротавирусных антител с ротавирусным антигеном в кале.

Метод исследования

Одностадийный иммунохроматографический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной диеты не требуется.
Накануне исследования исключить ректальное применение каких-либо лекарственных средств, а также препаратов, влияющих на перистальтику кишечника (слабительные, ферменты, симпатомиметики).
Кал собирается после естественной дефекации в стерильную ёмкость.
Нельзя отбирать пробу из унитаза.
При сборе кала, следует избегать примеси мочи и выделений из половых органов.

Общая информация об исследовании

Ротавирусная инфекция - острое вирусное заболевание с фекально-оральным путем передачи, возбудителями которого являются РНК-содержащие ротавирусы (Rotavirus). Это самая частая причина тяжелой диареи у детей младшего возраста, а также у пожилых людей. Источник инфекции - больной человек. Инфицирование чаще всего происходит в холодное время года, инкубационный период длится от 15 часов до нескольких суток. Начало заболевания острое, с симптомами гастроэнтерита: тошнотой, рвотой, диареей, иногда лихорадкой. При отсутствии лечения может возникнуть обезвоживание и нарушение электролитного и кислотно-щелочного баланса.

Иногда ротавирусная инфекция протекает бессимптомно. Иммунитет после перенесенной инфекции нестойкий, поэтому возможно повторное развитие заболевания.

Наиболее чувствительным и специфичным методом диагностики ротавирусной инфекции является выявление антигена вируса в кале.

Для чего используется исследование?

Для выявления больных с ротавирусной инфекцией.
Для выявления вирусоносителей.

Когда назначается исследование?

При подозрении на ротавирусную инфекцию (на 1-4-й день предполагаемого заболевания).
При подозрении на носительство ротавируса.
При дифференциальной диагностике заболеваний, протекающих со сходными симптомами: холеры, эшерихиоза, сальмонеллеза, пищевых отравлений, дизентерии, других вирусных диарей и пр.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Исследование наиболее целесообразно проводить в первые 4 суток заболевания, поскольку пик выделения вируса с калом приходится именно на этот период.

Читайте также: