Пироплазмоз собак научные статьи

Обновлено: 24.04.2024

Бабезиоз собак является широко распространенным во всем мире, клинически существенным, трансмисивным гемопротозойным заболеванием. Только в Ростовской области зараженность собак бабезиозом в период с марта по июнь достигает 35% [1].

На сегодняшний день в отечественной ветеринарной литературе сложилось несколько устойчивых стереотипов относительно бабе-зиоза собак, вот некоторые из них: бабезиоз легко диагностируется в острую стадию заболевания: на собаках паразитирует только один вид пироплазм, который не поражает другие виды животных, а пироплазмы других видов животных не поражают собак: пироплазмоз передается только через укусы клещей или при переливании крови: на ранних стадиях заболевания пироплазмоз легко лечится, а не леченые собаки, как правило, погибают: для пироплазмоза нехарактерно носительство.

Разные виды бабезий часто называют пироплазмами, что является собирательным термином для рода бабезий и тейлерий. Эти два рода за последние 10 лет подверглись скрупулезному генетическому исследованию, что привело к изменению в классификации таксономии этих паразитов. По международной классификации роды Babesia spp . входят в семейство Babesiidae . надсемейство Piroplasmida в пределах типа Apicomplexa . кроме того, в надсемейство Piroplasmida входит также и род Theileriidae .

В англоязычной литературе по величине бабезий при световой микроскопии выделяют "большой" бабезиоз (при обнаружении в мазках крови методом световой микроскопии бабезий размерами более 3-5 urn). На сегодняшний день мы знаем, что это такие бабезий. как В. canis и В. vogeli . О "малом" бабезиозе говорят при обнаружении в мазках крови бабезий менее 3 urn. это В. gibsoni (табл 1). Несмотря на кропотливое наблюдение за паразитами в мазках крови, в течение почти ста лет. классификация бабезий не шла дальше, чем классификация их по морфологическим особенностям и размерам. Впервые предложил классифицировать возбудителей бабезиоза собак по клиническим признакам заболевания немецкий протозоолог Эдвард Рейчнов, который выявил серьезные различия в тяжести клинического течения и патогенности возбудителей, вызывающих бабезиоз во Франции и на Севере Африки. Наиболее вероятно, что сейчас эти паразиты известны как В. cams и В. rosi соответственно. До 1980-года никаких новых изменений в номенклатуру возбудителей бабезиозов внесено не было, и только с появлением молекулярных методов диагностики и молекулярного генотипирования возбудители бабезиоза собак были переклассифицированы. Последние исследования бабезиоза собак сосредоточены на определении таксономического статуса известных и недавно обнаруженных возбудителей бабезиоза. улучшении диагностических методов, раскрытия аспектов патофизиологии этого заболевания и поиск новых химиотерапевтических и им-муннопрофилактических протоколов.

Такой возбудитель бабезиоза собак как В. canis в 2000 году был повторно классифицирован в три подвида В. canis canis. В. canis rossi и В. canis vogeli [2. 3]. В 2005 году, на основании перекрестных иммунных реакций, серологического тестирования, векторной специфики и генетического родства, эти паразиты признаны независимыми видами В. canis. В. rossi и В. vogeli . Все три паразита названы большими (крупными бабезиями. по ранее предложенной морфологической классификации) (табл. 1) [2. 3].

Таблица 1. Виды пироплазм, паразитирующие на собаках

Babesia canis vogeli

Babesia canis canis

Babesia canis rossi

Районы Сахары, Африка

Неклассиф Babesia sp

Северная Каролина, США

Babesia gibsoni Азиатск. штамм

Haemaphysalis longicornis. собачьи бои

Азия, включая Японию

Испания, Португалия, Spanish isolate

Неклассифиц. Theileria sp

Африка. Европа, Азия

Африка, Европа, Азия

Четвертая крупная группа бабезий. паразитирующих на собаках, выделена в Северной Каролине (США) от собак с клиническими и гематологическими признаками бабезиоза. На сегодняшний день она еще не классифицирована, и определена как неклассифицированная крупная Babesia sp .. изолят из Северной Каролины (табл. 1) [2].

Большинство специалистов признают, по крайней мере, три возбудителя "малого" пироплазмоза у собак они отличаются по клиническим и генетическим характеристикам это Babesia gibsoni. Babesia conradae . В другом исследовании бабезий были выделены от больных собак на западе США и описаны в оригинальном исследовании как gibsoni [3. 4]. и Babesia microti-like . последняя позже идентифициро вана как Theileria annae [5. 6] (табл. 1).

При световой микроскопии - интроэритроцитарные стадии Babesia spp . неразличимый от Theileria spp . Известно, что на кошках паразитирует Babesia felis и тейлерия Cytauxzoon felis . которые, при световой микроспории имеют такие же характеристики, как и бабезий собак. Однако, данных о том. что эти возбудители могут поражать собак, нет.

Как и при решении многих других вопросов касающихся таксономии, не обошлось без разногласий при классификации пироплазм собак, особенно это касается, так называемых, малых пироплазм. Исторически роды Babesia и Theileria . были разделены на основании стадий жизненного цикла и трансовариальной передачи в клещах. [2]. Противоречие заключается в том. должны ли Babesia spp. и Theileria spp . классифицироваться на основании их естественного цикла в организме собаках и клещей, или могут использоваться генетические данные молекулярного анализа. С 2000 года при классификации пироплазм предпочтение отдают генетическим аспектам возбудителей. При молекулярных исследованиях, в основном, используютлокус субъединицы рибосомального гена 18S РНК для родовых отличий пироплазм, поскольку эта часть гена достаточно устойчива к мутациям. Но другие рРНК гены, например цитохрома Ь. и гены, кодирующие белки теплового шока, также использовались для родовой идентификации [5. 8].

На сегодняшний день установлены зоны распространения бабезиоза собак, они перечислены в таблице 1: имеется всесторонняя и современная карта распространения клещевых инфекций собак Европы. Восточной и Юго-Восточная Азии [2]. Как и ожидалось, географическое распространение клещевых инфекций полностью связано с географическим распространением клещей - переносчиков этих заболеваний. Интересно отметить, что распространение Babesia gibsoni не связано с распространением каких-либо клещей, и быстрое глобальное распространение этого патогена, связано с его уникальной возможностью прямой передачи от больной собаки кздоровым через укусы, минуя какие-либо клещевые векторы [9. 10].

Все данные по распространению различных видов бабезий получены из зарубежной литературы и касаются распространения бабезиоза за пределами Российской Федерации. Данные по распространению различных видов бабезий в России в доступной отечественной литературе мы не нашли, что и определило цель нашего исследования.

Цель исследования: установить наличие носительства бабезиоза у собак на территории Ростовской области, выяснить векторы передачи бабезиоза и виды бабезий, паразитирующих на собаках в данном регионе.

Материал и методы исследования. Исследования были проведены на 100 собаках, поступивших в клиники Ростовской области в период с начала октября по конец ноября. Все собаки были клинически здоровы, и у них не ставился диагноз бабезиоз за весь предшествующий весенне-летний период. У животных отбиралась и стабилизировалась EDTA кровь. Исследования на бабезиоз проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Анализ нуклеотидных полноразмерных геномов и участков различных генов бабезий. взятых из базы данных GenBank (NCBI) последовательностей, проводили с применением пакета прикладных программ "BioEdit 6.0". Исходя из нуклеотидного состава геномов бабезий разных видов нами были выбраны участки 18S рРНК-гена. наиболее консервативные среди известных изолятов. На консервативные участки были рассчитаны родоспецифические праймеры BabspF (5' -GTTG CTTCTTAG AG GG ACTTTGG -3') и BabspR (5-GCTCTAAGCCCTGAGG AAG11 lAAG-3 ). фланкирующие участок в 282 пары нуклеотидов (п.н.).

Для идентификации вида бабезий исследовалась кровь от собак на присутствие видоспецифичных участков гена 18S рРНК. Исходя из диагностической ценности эксперимента для обнаружения кДНК конкретных видов бабезий. был выбран "стандартный" вариант ПЦР. С этой целью были сконструированы праймеры BrosF (5-CTCACCAGGTCCAGACAAACG-3) и BrosR (5-GTAGGATTGACAGATTGATAGCTC-3) к В. rossi. BcanF (5' -G ATTCTTTG GGTG GTG GTGCATG-3") и BcanR (5-CGTTCTTAGTTGGTGGAGTGAT-3) к В. cams и BvogF (5-TGTCTGGTTAATTCCGTTAAC-3 ) и BvogR (5-GAACGAGACCTTAACCTGCTAACT-3) к В. vogeli . Рассчитанные видоспе-цифичные праймеры для выявления кДНК имели высокую температуру отжига 62-64"С. это позволило объединить два этапа реакции (отжиг и элонгацию), в один. В результате удалось значительно снизить время постановки реакции, что не повлияло на ее специфичность и чувствительность. Постановку ПЦР проводили в реакционной смеси стандартного состава с использованием 10 пкМ каждого праймера. 5 мкл раствора кДНК с добавлением 3 мМ MgCI (рис. 1,2).

Рис. 1. Исследование методом ПЦР в реальном времени на родовые гены бабезий. Из 100 исследованных проб 12 оказались положительными.

Рис. 2. Исследование в ПЦР (с детекцией в электрофорезе) на видоспецифич-ные участки гена 185 рРНК бабезий.

Нами были собраны клещи с территории Ростовской области с идентификацией их вида. Результаты исследования занесены в таблицу 2.

В работе рассматриваются особенности проявления пироплазмоза у собак разных возрастных групп города Ульяновска.

Ключевые слова: пироплазмоз, пироплазма, формы клинического проявления, возрастные особенности, возрастные группы.

Akimov D.Y. 1 , Shadyeva L.A. 2 , Schegolenkova A.E. 3 , Indiryakova T.А. 4

1 Graduate student; 2 Сandidate of biological Sciences, assistant Professor of biology, veterinary genetics, Parasitology and ecology, chief of the Ulyanovsk state agricultural Academy them. P.A. Stolypin, Ulyanovsk, b-R New Crown 1; 3 Graduate student; 4 Сandidate of biological Sciences, assistant Professor of biology, veterinary genetics, Parasitology and ecology, chief of the Ulyanovsk state agricultural Academy them. P.A. Stolypin, Ulyanovsk, b-R New Crown 1.

FORMS PIROPLASMOSIS DOMESTIC DOGS ON VARIOUS STAGES OF ONTOGENESIS

Abstract

The paper discusses the features of manifestation of piroplasmosis in dogs of different age groups in Ulyanovsk.

Keywords: piroplasmosis, piroplazmy, forms of clinical manifestations, age characteristics, age groups.

Пироплазмоз – широко распространенное протозойное заболевание собак, возбудителем которого являются одноклеточные паразиты рода Piroplasma: P. canis, реже P. gibsoni или P. vogeli. Переносчиками пироплазмоза собак являются иксодовые клещи (семейство Ixodidae) родов Dermacentor и Rhipicephalus. Вспышки инвазии постоянно регистрируются повсеместно в Европе, Азии, Южной и Северной Америке. Согласно статистическим данным, за последние 10 лет заболеваемость собак пироплазмозом многократно возросла.

В определённой степени это связано с увеличением миграции населения (развитием туризма, пригородного садоводства), в результате чего расширился ареал клещей, что привело к новым очагам инвазии. Кроме того, с тех пор как прекратились обработки лесных массивов пестицидами, размножение клещей практически не регулируется, их популяция постоянно растёт. В последнее десятилетие в населённых пунктах, особенно в городах, резко возросло количество собак, а отсутствие специальных выгульных площадок привело к тому, что увеличилась численность их популяции в лесопарковых зонах городов, что косвенно стимулировало осложнение эпизоотической ситуации по пироплазмозу [2, 3].

Непрерывный и неконтролируемый рост численности бродячих собак в урбоэкосистемах крупных городов способствовал росту численности клещей и их широкому распространению. Отсутствие эффективных средств профилактики болезни, антисанитарное состояние территорий выгулов способствовало тому, что течение болезни становилось всё более тяжёлым и все чаще заканчивалось гибелью животных. Все эти факторы свидетельствуют о возрастающей роли комплекса биотических факторов урбанизированных территорий в формировании очагов инвазии [1, 5, 6].

Цель работы: исследовать возрастные особенности клинического проявления пироплазмоза у домашних собак на урбанизированных территориях Среднего Поволжья.

В задачи исследования входило проведение клинических анализов на пироплазмоз, формирование разновозрастных экспериментальных групп, анализ клинической картины в разновозрастных группах, систематизация форм проявления пироплазмоза.

У собак с подозрением на пироплазмоз исследовались мазки крови, окрашенные по Романовскому. Всего по подозрению на пироплазмоз было обследовано 623 собаки различных пород. У 458 (73,5%) диагноз подтвердился. В мазках крови, окрашенных по Романовскому, были обнаружении Р. cаnis.

Собак условно разделили на четыре возрастные группы: от рождения до двух лет, от двух до пяти лет, от пяти до восьми лет и старше восьми лет. В зависимости от преобладания симптомов выделяли следующие клинические формы пироплазмоза:

типичную – характеризуется повышением температуры тела, анемией, гемоглобинурией и учащением пульса;
кишечную – характеризуется многократной рвотой кормом, желчью и желудочным соком, редко следами крови в рвоте, неконтролируемым актом дефекации. При этом, как правило, кал имел жидкую, либо водянистую консистенцию, с примесью слизи, непереваренных частиц корма, реже – кровь;
нервную – характеризуется нервными проявлениями, такими, как ригидность мышц, неконтролируемое запрокидывание головы к лопаткам, или же, наоборот, пояса задних конечностей к голове, при этом, как правило, животное не реагировало на раздражители, зрачок был расширен, сосудистый рисунок глазного яблока гиперемирован.

Результаты исследований представлены на рис.1.

Рис. 1 – Формы проявления пироплазмоза у собак разновозрастных групп

Результаты проведенных нами исследований (рис. 1) свидетельствуют, что во всех возрастных группах преобладает типичная и кишечная формы пироплазмоза, тогда, как нервная встречается у животных двух возрастных категорий – до двух лет и старше восьми лет. Нельзя исключить, что тяжелые формы заболевания обусловлены более низким уровнем естественной резистентности в младшей возрастной группе и у стареющих животных.

В настоящее время пироплазмоз является одним из самых опасных сезонных заболеваний собак. Ветеринарные врачи прилагают огромные усилия для того, чтобы предупредить возникновение заболевания. Успех в лечении клинических осложнений при пироплазмозе собак зависит от точности дифференциального диагноза и своевременности оказания лечебных и профилактических мероприятий.

Изучение лечебно-профилактической эффективности заявляемого способа в отношении осложнений при пироплазмозе собак на 60 собаках разных возрастных групп с диагнозом пироплазмоз. Животные были условно поделены на две группы: опытную (40 собак) и контрольную (20 собак). Все животные принадлежат частным владельцам. Диагноз на пироплазмоз был установлен в день обращения в ветеринарную клинику. С лечебно-профилактической целью осложнений при пироплазмозе собак у животных опытной группы применяли препараты по следующей схеме лечения:

− пиро-стоп — 0,5мл на 10 кг м. ж. подкожно однократно;

− раствор натрия хлорида 0,9 % — 100 мл на 10 кг. м. ж. внутривенно капельно 1 раз в день в течение 5 суток;

− раствор цианокобаламина — 0,5 мл на 10 кг. м. ж. внутривенно капельно в физиологическом растворе 1 раз в день в течение 5 суток;

− эссенциале Н или гептрал — 1 мл на 10 кг. м. ж. внутривенно капельно в физиологическом растворе 1 раз в день в течение 5 суток;

− рибоксин — 2–5 мл на животное внутривенно струйно 1 раз в день в течение 5 суток;

− цефтриаксон — 200 мг на 10 кг. м. ж. внутривенно капельно в физиологическом растворе 1 раз в день в течение 5 суток;

− дексафорт — 0,5 мл на 10 кг м. ж. подкожно однократно;

− лазикс — 1–2 мл на животное внутримышечно 1 раз в день в течение 3 суток;

− этамзилат — 1–2 мл на животное внутримышечно однократно.

Пиро-стоп — антипротозойный лекарственный препарат из группы имидазолина. Применяется как основное терапевтическое средство при пироплазмозе собак.

Раствор натрия хлорида 0,9 % — применяли в качестве дезинтоксикационного средства, как растворитель других лекарственных препаратов; как вспомогательный осмотический диуретик для обеспечения форсированного диуреза.

Раствор цианокобаламина (витамин В12) — применяли для лечения и профилактики анемий.

Эссенциале Н, или гептрал — применяли в качестве гепатопротектора. В/в введение препарата улучшает кишечно-печеночную циркуляцию желчных кислот.

Рибоксин — применяли для комплексного лечения сердечно сосудистой недостаточности.

Цефтриаксон — применяли для профилактики инфекций.

Дексафорт — применяли в качестве десенсибилизирующего и антиаллергического средства.

Лазикс — быстродействующий диуретик, являющийся производным сульфонамида.

Этамзилат — применяли для профилактики и лечения кровотечений.

Контрольной группе животных вводили препараты по общепринятой схеме:

− пиро-стоп — 0,5мл на 10 кг м. ж. подкожно однократно;

− лазикс — 1–2 мл на животное внутримышечно однократно;

− этамзилат — 1–2 мл на животное внутримышечно однократно.

Результаты исследований представлены в таблице № 1.

Лечебно-профилактическая эффективность вотношение осложнений при пироплазмозе собак предполагаемого способа

Показатели

Группа животных

Опытная

Контрольная

Количество животных, гол.

Выявлено клинических осложнений до проведения лечебно-профилактических мероприятий

Выявлено клинических осложнений после проведения лечебно-профилактических мероприятий

Летальный исход в следствии осложнений пироплазмоза собак

Данные исследований показали, что предложенная нами схема лечебно-профилактических мероприятий обладает достаточно высокой эффективностью в отношении осложнений в терапии при пироплазмозе собак таких как: почечная / печеночная / сердечная недостаточности, анемии, неврологический синдром, болезни суставов.

Применение только классической схемы лечения, позволяют профилактировать различные осложнения не более чем на 60 % и ведут к риску гибели 10 % собак.

В ходе исследований было установлено, что устранение развивающихся тяжелых осложнений лекарственными средствами не всегда оказывается эффективным. Это определяет необходимость поиска более эффективных методов лечения.

В последнее время в этом плане все больший интерес стали привлекать методы немедикаментозной детоксикационной терапии, в частности, плазмаферез.

Плазмаферез — метод лечения многих заболеваний, в основе которого лежит удаление из организма части плазмы крови с содержащимися в ней вредными веществами. Эти вещества — токсины, иммунные комплексы, патологические белки, антигены, жиры — являются причиной многих серьезных патологий.

При поступлении у всех собак был поставлен диагноз пироплазмоз. Кроме этого у животных отмечались осложнения в виде гепатита (1 собака), нефрита (2 собака) и комплексного осложнения печеночная недостаточность + сердечная недостаточность (3 собака). В качестве критериев оценки эффективности применения плазмафереза учитывались следующие показатели — клинический статус собак, и данные обследования в отношении основных осложнений пироплазмоза.

После 3 сеансов наблюдался выраженный регресс заболеваний, что подтверждено методами клинико-лабораторных исследований (таблица № 2).

Таким образом, использование методики плазмафереза является эффективным способом купирования осложнений при пироплазмозе собак.

Терапевтическая эффективность плазмафереза вотношении осложнений при пироплазмозе собак

Ветеринарные врачи, акцентируя внимание на борьбе с пироплазмами, уделяют незаслуженно мало внимания осложняющим клиническим синдромам, хотя они является одной из основных причин гибели животных при пироплазмозе. Часто пироплазмоз сопровождается морфофункциональными нарушениями со стороны сердечнососудистой, дыхательной, пищеварительной, мочевыделительной и других систем организма. Сами возбудители и токсичные продукты их жизнедеятельности являются первым патогенетическим фактором, оказывающим аллергическое воздействие на организм животного. Все это диктует необходимость терапии и профилактики клинических синдромов пироплазмоза собак. [1]

Оценка результатов диагностических исследований усобак больных пироплазмозом спеченочной недостаточностью.

Результаты исследований по изучению морфологических показателей крови у собак больных пироплазмозом с печеночной недостаточностью представлены в таблице № 1. Отмечалась гемолитическая анемия, которая являлась следствием разрушения эритроцитов на фоне интоксикации организма.

Морфологические показатели крови усобак больных пироплазмозом спеченочной недостаточностью

Наименование показателей

Показатели крови животных

Норма

Здоровых (контроль)

Больных пироплазмозом

Больных пироплазмозом спеченочной недостаточностью

Гемоглобин (г / л)

Эритроциты (10 9 /л)

Лейкоциты(10 9 /л)

Об анемии свидетельствует снижение числа эритроцитов до 3,6 и уровня гемоглобина до 93,5 г/л в зависимости от тяжести течения заболевания. Из данных таблицы 2 видно, что у собак больных пироплазмозом с печеночной недостаточностью снижено количество тромбоцитов до 12,2 тыс/мкл. Вместе с этим наблюдается увеличение количества лейкоцитов до 39,2 х 109/л и СОЭ до 24,7 мм/час. Так же, при печеночной недостаточности наблюдается повышение аланинаминотрансферазы до 82,5 ЕД/л, аспартатаминотрансферазы до 98,6 ЕД/л. Соответственно снижение коэффициента де Ритиса до 1,19.

О развитии гепатопривного синдрома и как следствие холестаза свидетельствует также повышение уровня билирубина в сравнении с физиологической нормой в 3 раза (21,4 ммоль/л). Следует отметить повышение щелочной фосфатазы до 197,4 ЕД/л и снижение холестерина до 1,4 (таблица № 2).

В результате проведения ультразвукового исследования у собак отмечались следующие изменения: печень увеличена в размере, фиброз проявляется в виде снижения эхогенности, а воспалительные участки, где ещё не образовался фиброз, проявляется в виде увеличения эхогенности, контур печени не ровный, волнистая поверхность, стенки второй вены утолщены, желчный пузырь деформированный и увеличенный, увеличенный диаметр нижней полой вены.