Питательные среды для культивирования возбудителей холеры

Обновлено: 27.03.2024

Диагностика холеры. Микробиологическая диагностика холеры. Выявление холеры. Лечение холеры. Профилактика холеры.

Основу диагностики холеры составляют выделение и идентификация возбудителя. Цели исследований на холеру — выявление больных и вибрионосителей; установление причины смерти при исследовании трупов; контроль над эффективностью лечения больных и санации носителей, контроль над объектами внешней среды и эффективностью дезинфекционных мероприятий. Материал для исследований — испражнения, рвотные массы, жёлчь, секционный материал (фрагменты тонкой кишки и жёлчного пузыря), постельное и нательное бельё, вода, ил, сточные воды, гидробионты, смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.

При проведении исследований на холеру необходимо соблюдать следующие правила:

• Материал исследований на холеру следует доставлять в лабораторию не позже 2 ч после забора (так как возбудитель быстро погибает, особенно в испражнениях). При невозможности срочной доставки образцы помещают в транспортные среды (1% пептоннан вода с рН 8,2-8,6).

• Ёмкости для материала нельзя обеззараживать химическими веществами, так как возбудитель чувствителен даже к их следовым количествам. Все образцы помещают в герметически закрываемую транспортную тару.

Посев холеры проводят на жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально-диагностические среды (например, TCBS-arap). Изучают рост на первой среде накопления и выполняют высев на щелочной агар и вторую среду накопления (что повышает высевае-мость возбудителя). Если на первом этапе при исследовании нативного материала ускоренными методами получают положительные результаты, пересев на вторую среду накопления не проводят. Подозрительные колонии пересевают для выделения чистых культур.

Диагностика холеры. Микробиологическая диагностика холеры. Выявление холеры. Лечение холеры. Профилактика холеры

Затем определяют морфологические, биохимические свойства и антигенную структуру холеры с помощью агглютинирующих О-, OR-, Инаба- и Огава-антисывороток. Важное диагностическое значение имеет типирование с помощью холерных диагностических бактериофагов. Все V. cholerae лизируются бактериофагом IV группы, а вибрионы биовара Эль-Тор — фагами группы V.

• Для ускоренной биохимической идентификации возбудителя холеры предложен набор СИБ из 13 тестов (оксида-за, индол, лактоза, глюкоза, сахароза, манноза, арабиноза, маннит, инозит, аргинин, орнитин, лизин), дифференцирующий от представителей семейства Enterobacteriaceae, бактерий родов Plesiomonas, Aeromunas и др.

• При выделении Vibrio cholerae группы, отличной от 01, возбудитель необходимо типировать с помощью других антисывороток. При выделении таких бактерий от больного с диареей обязательным считают проведение всего объёма исследований дли диагностики холеры.

• Определение AT в крови больных холерой носит вспомогательный характер. Их выявляют в РА, а также путём обнаружения вибриоцидных AT и антитоксинов.

Лечение холеры. Профилактика холеры.

Восполняют потерю жидкости и электролитов, проводят антибактериальную терапию холеры препаратами тетрациклинового ряда. Альтернативные антибактериальные препараты — левомицетин, ко-тримоксазол и фуразолидон.

Профилактика холеры включает организацию санитарно-гигиенических мероприятий, предупреждающих занос заболевания; проведение санитарно-просветительной работы среди населения; раннее выявление больных и носителей; массовое профилактическое назначение тетрациклинов в районах эпидемической опасности.

Для специфической иммунопрофилактики холеры разработаны убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба, холероген-анатоксин для подкожного введения и бивалентная вакцина из анатоксина и О-Аг Огава и Инаба. Эффективность их использования не превышает 60-70%, невосприимчивость сохраняется в течение 3-6 мес, поэтому вакцин опрофилактику применяют по эпидемиологическим показаниям.

В очагах холеры хороший эффект даёт профилактический приём тетрациклина.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

TCBS-агар Оболенск предназначен для выделения и культивирования возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов из клинического материала, а также из объектов внешней среды при проведении бактериологических исследований.

TCBS-агар представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного, гигроскопичного, светочувствительного порошка желтого цвета.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. Принцип действия

Высокие концентрации натрия цитрата, желчи, а также щелочность среды в значительной степени подавляют рост сопутствующей микрофлоры.

Дифференцирующие свойства среды основаны на изменении рН в кислую сторону при росте сахарозоферментирующих бактерий, которые образуют на среде колонии желтого цвета (комплекс индикаторов — бромтимоловый синий и тимоловый синий).

2.2. Состав

TCBS-агар Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

  1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

  1. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
  • Термостат, обеспечивающий температуру 37 °С
  • Весы лабораторные 2 класса точности
  • Чашки Петри
  • Пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
  • Пробирки
  • Вода дистиллированная
  • Колбы
  • Воронки стеклянные

Объекты исследований в клинической и санитарной микробиологии.

Проведение АНАЛИЗа

7.1. Приготовление TCBS-агара.

Перед приготовлением питательной среды содержимое банки тщательно перемешать. После взятия навески необходимо банку со средой закрыть герметично во избежание попадания влаги. Среда не требует автоклавирования!

Готовая среда в чашках прозрачная сине-зеленого цвета.

Готовую среду, разлитую в чашки Петри, можно использовать в течение 7 сут после её приготовления при условии хранения при температуре 2-8 °С.

УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в трех повторностях.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ

TCBS-агар необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.

Срок годности – 2 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит. После вскрытия банки с TCBS-агаром гарантируется соответствие требуемым параметрам при соблюдении условий хранения (влажность, температура, герметичность) до окончания срока годности.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

Клетки холерного вибриона размером 1,5-4,0x0,2-0,4 мкм имеют один полярный жгутик, снабжённый чехликом и продольным выростом, напоминающим ундулирующую мембрану.

Подвижность бактерий холеры весьма выражена, и её наличие (выявляют методом висячей или раздавленной капли) — важный диагностический признак холеры.

Для бактерий холеры характерен полиморфизм — типичные формы наблюдают в клиническом материале, в мазках из колоний доминируют палочковидные формы холеры.

Под действием пенициллина холерные вибрионы способны образовывать L-формы. Вибрионы холеры хорошо окрашиваются анилиновыми красителями; обычно используют водный фуксин Пфайффера и карболовый фуксин Шля.

Морфология холеры. Тинкториальные свойства холеры. Культуральные свойства холеры. Рост возбудителя холеры

Культуральные свойства холеры. Рост возбудителя холеры.

Холерный вибрион предпочитают аэробные условия и быстро погибает в анаэробных. Температурный оптимум 37 °С. Вибрион холеры хорошо растёт на простых питательных средах с высоким рН (7,6-8,0); подобные галофильные свойства используют в подборе элективных средств.

На твёрдых средах возбудитель холеры образует небольшие круглые дисковидные прозрачные S-колонии с ровными краями, голубоватые в проходящем свете, что сразу их отличает от более грубых и мутно-белых колоний энтеробактерий.

Холерный вибрион также образует неровные мутные R-колонии; бактерии из которых не чувствительны к бактериофагам, антибиотикам и не агглютинируются О-антисыворотками.

В жидких средах вибрион холеры вызывает помутнение и образование нежной голубоватой плёнки на поверхности, её края приподняты вдоль стенок пробирки; при встряхивании она легко разрушается и оседает на дно.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Читайте также: