Питьевая вода на стафилококк

Обновлено: 24.04.2024

18.3. Методы определения общих и термотолерантных колиформных бактерий в воде

Общие колиформные бактерии (ОКБ) – это грамотрицательные, оксидазоотрицательные палочки, не образующие спор, растущие на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре 37±1 °С в течение 24–48 ч. Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число ОКБ, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре 44±0,5 °С в течение 24 ч.

ОКБ и ТКБ в воде, согласно действующим МУ 2.1.4.1018–01, определяют мембранным и титрационным (бродильным) методами. Титрационный метод используют только при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом мембранной фильтрации, наличии в воде большого количества взвешенных веществ и в случае преобладания посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний.

18.3.1. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации

Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема воды на мембранных фильтрах с подращиванием их на среде Эндо при 37±1,0 °С, дифференцировании по культуральным и биохимическим тестам и подсчете выросших колоний.

Первый день. 1. Подготовка мембранных фильтров. Мембранные фильтры с диаметром пор не более 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм (ацетатцеллюлозные, нитратцеллюлозные, ядерные и др.), имеющие сертификат качества, выпускаются стерильными, в противном случае их стерилизуют методом кипячения по инструкции, предложенной изготовителем.

Подготовка фильтровального аппарата. Фильтровальный аппарат, воронку и столик фильтровального аппарата обтирают и фламбируют марлевым (ватным) тампоном, смоченным спиртом. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его воронкой. Если вода содержит большое количество взвешенных веществ или клеток, ее сначала фильтруют через фильтр с большим диаметром пор, помещая его поверх основного фильтра с диаметром пор 0,45 мкм.
Фильтрование воды. В воронку прибора для фильтрования наливают отмеренный объем воды, затем создают вакуум. При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат без обеззараживания сначала меньшие, а затем большие объемы воды, меняя каждый раз фильтры. Перед фильтрованием каждой новой пробы прибор обеззараживают. Вначале фильтруют пробы обеззараженной воды или предположительно незагрязненные, а затем фильтруют загрязненные пробы. При фильтровании 1 мл исследуемой воды в воронку наливают предварительно не менее 10 мл стерильной воды, а затем вносят анализируемую воду.

После окончания фильтрования и осушения фильтра отключают вакуум, воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду Эндо (рецепты 96, 97), разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.

Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, номера пробы и даты посева. На одну чашку помещают 3–4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались. Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре 37±1 °С в течение 24±2 ч.

При исследовании питьевой воды анализируют 3 объема по 100 мл. При получении стабильных отрицательных результатов допустима фильтрация 300 мл воды через один фильтр.

Объем воды водоемов для посева выбирают в зависимости от степени ее предполагаемого загрязнения. Рассчитывают, чтобы не менее чем на двух фильтрах выросли изолированные колонии. Из них не более 30 колоний на фильтрах диаметром 35 мм или не более 50 колоний на фильтрах диаметром 47 мм должны быть образованы колиформными бактериями. При этом можно ориентироваться на результаты предыдущих исследований.

При исследовании воды неизвестной степени бактериального загрязнения следует засевать не менее четырех-десяти-кратных ее объемов.

Так, например, для воды водоемов, загрязняемых сточными водами, рекомендуется брать объемы 10; 1; 0,1; 0,01 мл. При анализе воды водоемов в зоне влияния выпуска сточных вод – 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001 мл; для чистых водоемов – 100; 50; 10; 1 мл. При анализе воды незагрязненных шахтных колодцев фильтруют 100; 10; 1 и 0,1 мл.

Второй день. По окончании инкубации производят просмотр посевов:

• отсутствие микробного роста или обнаружение колоний, не характерных для ОКБ (пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые), позволяет на этом этапе анализа закончить исследования с выдачей отрицательного результата (отсутствие ОКБ и ТКБ в исследуемом объеме воды). Анализ заканчивают через 24 ч;
• при обнаружении на фильтрах типичных лактозоположительных колоний (темно-красных, красных с металлическим блеском или без него либо других подобного типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра) исследования продолжают. Подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.

Каждую выбранную изолированную колонию исследуют на наличие оксидазной активности (см. гл. 9, рецепт 75). Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитов, которые в отличие от кишечных бактерий вырабатывают фермент оксидазу.

Готовят мазки, окрашивают их по Граму, микроскопируют или определяют принадлежность к грамотрицательным бактериям постановкой теста Грегерсена, не требующего использования оптики (см. гл. 6). Подтверждают ферментацию лактозы до кислоты и газа.

Оставшуюся часть оксидазоотрицательной грамотрицательной изолированной колонии засевают параллельно в две пробирки с лактозной средой (рецепт 99).

— для подтверждения наличия ОКБ посев инкубируют при температуре 37±1 °С в течение 48 ч;
— для подтверждения наличия ТКБ посев осуществляют в среду, предварительно прогретую до температуры 43–44 °С, и инкубируют при температуре 44±0,5 °С в течение 24 ч.

Первичный учет образования кислоты и газа на подтверждающих полужидких средах и СИБ-лактозы (коммерческие полоски) возможен через 4–6 ч. При обнаружении кислоты и газа в среде с лактозой дают положительный ответ. При отсутствии кислоты и газа или при наличии только кислоты пробирки с посевами для окончательного учета ТКБ оставляют до 24 ч. Пробирки с посевами для подтверждения наличия ОКБ после просмотра через 24 ч и получения отрицательного результата оставляют для окончательного учета до 48 ч.

При лабораторно-производственном контроле качества воды поверхностных водоемов анализ может быть завершен подсчетом колоний, которые отнесены к ОКБ по двум признакам: отрицательному оксидазному тесту и ферментации лактозы на среде Эндо до кислоты и альдегида. Дальнейшее подтверждение ОКБ по способности образовывать газ на лактозных средах проводят только при отсутствии достаточно четкой дифференциации лактозоположительных колоний, при росте мелкоточечных или мелких плоских колоний, не характерных для колиформных бактерий, при небольшом опыте работы выполняющего анализ.

Учет результатов. Грамотрицательные колонии учитываются как ОКБ при отрицательном оксидазном тесте и ферментации лактозы при температуре 37 °С с образованием кислоты и газа.

Грамотрицательные колонии учитываются как ТКБ при отрицательном оксидазном тесте и ферментации лактозы при температуре 44 °С с образованием кислоты и газа.

При анализе питьевой воды, воды водоемов число колониеобразующих единиц ОКБ и ТКБ подсчитывают на всех фильтрах и выражают результат анализа в КОЕ на 100 мл воды.

Вычисление проводят по формуле:

где X – число колоний в 100 мл; V – профильтрованный через фильтры объем воды; а – число подсчитанных на этих фильтрах колоний в сумме.

При посеве по 100 мл воды на 3 фильтрах выросло две колонии на одном фильтре, на остальных двух фильтрах нет роста. Число общих или термотолерантных колиформных бактерий будет:

При посеве 10, 40, 100 и 150 мл воды на фильтрах с профильтрованным объемом 40 мл выросло 4 изолированные колонии, с профильтрованным объемом 100 мл – 3 ОКБ. Фильтры с объемами 10 и 150 мл заросли и учету не подлежат. Суммируют общее число колоний ОКБ (ТКБ) на тех фильтрах, где получены изолированные колонии, пересчитывают это число на объем 100 мл.

Питьевая вода, вода водоемов удовлетворяют требованиям в том случае, когда ОКБ и ТКБ не обнаруживают в 100 мл воды. При установлении бактериальной загрязненности воды свыше допустимых норм прибегают к повторному исследованию воды.

18.3.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом

Первый день: а) при исследовании питьевой воды засевают 3 объема по 100 мл (качественный метод). При исследованиях воды с целью количественного определения ОКБ и ТКБ при повторном анализе производят посев: трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл, трех объемов по 1 мл;

б) посев воды водоемов производят в двух или трех повторностях. Воду водоемов, не загрязняемых сточными водами, засевают в объемах по 10; 1; 0,1; 0,01 мл; воду водоемов, загрязняемых сточными водами, – по 1; 0,1; 0,01; 0,001 мл; воду водоемов в зоне влияния выпусков сточных вод – в объеме по 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001 мл.

Каждый объем исследуемой воды засевают в лактозопептонную среду (рецепт 95). Посев 100 и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозопептонной среды, посев 1 мл пробы проводят в 10 мл среды обычной концентрации.

Второй день. Посевы инкубируют при 37±1 °С. Не ранее 24 ч инкубации проводят предварительную оценку посевов. Из емкостей, где отмечено наличие роста (помутнение) и образование газа, производят высев бактериологической петлей на сектора среды Эндо (рецепты 96, 97) для получения изолированных колоний.

Емкости без наличия роста и образования газа оставляют в термостате и окончательно просматривают через 48 ч. Посевы без признаков роста считают отрицательными, и дальнейшему исследованию они не подлежат. Из емкостей, где отмечено помутнение и образование газа или только помутнение, делают высев на сектора среды Эндо.

Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре 37±1 °С в течение 18–20 ч.

При образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактозоположительных бактерий (темно-красных или красных, с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром и отпечатком на питательной среде), дают положительный ответ на присутствие ОКБ в данном объеме пробы.

Отрицательный ответ выдается, если в среде накопления и на секторах среды Эндо не отмечено роста; на секторах среды Эндо выросли не характерные для колиформных бактерий колонии; все колонии оказались оксидазоположительными; все бактерии оказались грамположительными; не отмечено газообразования в подтверждающем тесте на среде с углеводом.

Для определения секторов среды Эндо, где выросли типичные лактозоположительные колонии, делают посев 2–3 изолированных колоний каждого типа с каждого сектора в пробирки с любой из лактозных сред (рецепты 99, 100).

Среду перед посевом нагревают на водяной бане или в термостате до 44 °С. Немедленно после посева пробирки помещают в термостат и инкубируют при температуре 44±0,5 °С в течение 24 ч. Допускается просмотр посевов через 4–6 ч.

При образовании газа в среде накопления, росте на среде Эндо лактозоположительных бактерий и выявлении способности этих бактерий ферментировать лактозу до кислоты и газа в течение 24 ч при температуре 44 °С дают положительный ответ на наличие в этом объеме пробы воды ТКБ. Во всех остальных случаях выдают отрицательный ответ.

Для ускорения выдачи ответа на присутствие ТКБ производят высев 1 мл из объемов среды накопления, где отмечено помутнение и газообразование в пробирке с лактозо-пептонной средой с поплавком и прогретой предварительно до температуры 44 °С. Посевы выдерживают в термостате при температуре 44±0,5 °С в течение 24 ч. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ.

Учет результатов. При обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из трех объемов питьевой воды выдается ответ об обнаружении ОКБ и ТКБ в 100 мл.

При исследовании количественным методом определяют наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ питьевой воды (табл. 18.1), воды водоемов (табл. 18.2).

Вода является неотъемлемой составляющей всех живых систем. В среднем, человек потребляет 2,5 литра воды в день. Наряду с полезным кальцием, магнием и калием вода несет в себе и вредные для здоровья человека элементы, такие как нитраты, нитриты, кадмий и тому подобное. Характеристики употребляемой нами жидкости определяют качество и продолжительность жизни. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (WHO, 2007), около 1,1 миллиарда человек не имеют доступа к безопасным источникам водоснабжения, а около 2 миллиона человек ежегодно умирают от заболеваний, передающихся через питьевую воду. Тошнота и диарея – не самое опасное, что вызывают микроорганизмы. Бактерии и вирусы в прямом смысле могут отравлять нашу жизнь, вызывая болезни с летальным исходом (например, Clostridium botulinum – возбудитель ботулизма) или опосредовано приводя к смертельным случаям (Helicobacter pylori – возможная причина рака ЖКТ). В Российской Федерации состояние воды регламентируются несколькими нормативами в зависимости от предназначения (смотреть таблицу).

Требования к микробиологическим показателям качества воды в Российской Федерации в зависимости от хозяйственной деятельности человека

Показатель	Природная вода 1	Вода бассейнов 2	Нецентр. водоснаб. 3	Центр. водоснаб. 4	Бутилированная вода 5
Общая микробная численность (ОМЧ), КОЕ / 1 мл	–	–	не более 100	не более 50	не более 20
Общие колиформные бактерии (ОКБ), КОЕ / 100 мл	не более 1000 (питьевая вода) не более 500 (рекреационное назначение)	не более 1	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Термо-толерантные колиформные бактерии (ТКБ), КОЕ / 100 мл	не более 100	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Колифаги, БОЕ / 100 мл	не более 10	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 1000 мл
Споры сульфит-редукторов	–	–	–	отсутствие в 20 мл	отсутствие в 20 мл
Возбудители кишечных инфекций	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл
Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	отсутствие в 1000 мл
Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	–

Оценка качества по микробиологическим показателям сводится к определению в объекте доли микроорганизмов, связанных с человеком и его продуктами жизнедеятельности.

Прежде всего, определим единицы измерения количества микробов. КОЕ/мл (колониеобразующие единицы) – количество жизнеспособных микробных клеток в миллилитре. Если производится оценка вирусных частиц в среде, то указывается БОЕ/мл (бляшкообразующие единицы) – количество вирусных частиц в миллилитре.

Общие показатели

Общая микробная численность бактерий (ОМЧ) базовый показатель

Выявляет бактерии, потенциально способные причинить вред здоровью. Этот показатель достаточно информативен, так как высокая ОМЧ является индикатором загрязнения органическими соединениями (например, содержащихся в фекалиях) и различными формами азота. С другой стороны, в ОМЧ входят как опасные бактерии (например, высокопатогенный штамм кишечной палочки Escherіchіa colі), так и практически безвредные и повсеместно встречаемые сенные палочки (Bacillus subtillis).

Общие колиформные бактерии (ОКБ) колодцы, скважины, родники

Группу ОКБ формируют бактерии семейства Enterobacteriacea (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella). Многие представители этой группы относятся к нормальной микрофлоре желудка, поэтому превышение ОКБ может говорить о возможном фекальном загрязнении, связанном с деятельностью человека. Однако в данной группе могут встречаться и свободноживущие микробы, которые не представляют опасности для здоровья.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) колодцы, скважины, родники

ТКБ – более достоверный индикатор загрязнения продуктами жизнедеятельности. Этот показатель свидетельствует о свежем фекальном загрязнении. В большинстве случаев в этой группе обнаруживается кишечная палочка Escherіchіa colі.

Колифаги колодцы, открытые источники

Колифаги являются вирусами палочки Escherichia coli и рассматриваются эпидемиологами как более чувствительный метод определения загрязнения жидкости микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы более устойчивы к окружающей среде, чем бактерии, в которых они обитают, поэтому этот показатель качества служит достоверной меткой давнего фекального загрязнения. Содержание колифагов свидетельствует о наличии опасных для человека энтеровирусов в воде.

Рекомендуется проводить исследование этой характеристики в случае, если ранее источник не был проверен, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения воды.

Споры сульфитредукторов бытовые нужды

Спорообразующие клостридии (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani) являются дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения. Клостридии встречаются в кишечнике, однако при попадании в организм в большом количестве могут вызывать пищевые отравления и смертельные заболевания, в том числе, ботулизм. В отличие от относительно неустойчивых ОКБ и ТКБ, споры клостридий могут сохраняться долгое время, поэтому этот микробиологический показатель, как и колифаги, свидетельствует о наличии давнего загрязнения. Относительно высокая устойчивость позволяет использовать споры в качестве индикатора эффективности проведения водоподготовки (хлорирования, озонирования и т.п.).

Определение этого микробиологического показателя качества воды рекомендуется проводить при наличии посторонних запахов и образовании чёрного налёта на трубах, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения жидкости.

Синегнойная палочка бассейны, колодцы, родники

Pseudomonas aeruginosa – распространённый организм, который встречается практически во всех средах, в т. ч. входит в состав микрофлоры кожи. Однако при снижении иммунитета человека и высоком содержании в воде синегнойная палочка может вызывать серьёзные заболевания, поражая лёгкие и почки и приводя к сепсису. Присутствие Pseudomonas aeruginosa в бассейне или ванне является основанием для полной замены содержимого резервуара. Особенность синегнойной палочки – её чрезвычайная устойчивость к нагреванию, дезинфицирующим средствам и антибиотикам.

Золотистый стафилококк бассейны, колодцы, кулеры, родники

Staphylococcus aureus – тесно связанная с человеком бактерия, которая в основном образует колонии на коже, половых органах, респираторном и желудочно-кишечном трактах. Как и синегнойная палочка, золотистый стафилококк встречается у здоровых людей, однако может вызвать развитие болезни при ослаблении иммунитета.

Возбудители кишечных инфекций специфические показатели

В действующих нормативных документах не прописаны конкретные возбудители кишечных инфекций. В эту группу входят микроорганизмы, заражение которыми происходит через жидкие среды (Escherichia, Shigella, Vibrio, Salmonella). Процесс определения этого параметра трудоёмок и требует специальной квалификации микробиолога.

Микробиологические показатели качества воды, не регулируемые СанПиН

Развитие и удешевление технологий и новых методов приводит, с одной стороны, к расширению контролируемых параметров, с другой, к выбору более конкретных микроорганизмов-показателей. Например, руководство ВОЗ рекомендует использовать в качестве индикатора фекального загрязнения наличие кишечной палочки (Escherіchіa colі), а не ОКБ и ТКБ. В странах ЕС помимо палочки определяют наличие энтерококков – специфичной группы микроорганизмов обитателей кишечника человека. Ниже приведены группы микроорганизмов, которые имеют индикаторное значение при оценке микробиологического качества воды.

Энтерококки колодцы, скважины, родники

Enterococcus spp. – широкая группа микроорганизмов, проживающая в кишечнике человека. Наряду с золотистым стафилококком энтерококки являются причиной внутрибольничных инфекций, вызывают у человека (менингит, эндокардит). Ввиду более высокой устойчивости этих микроорганизмов к засолению и температуре, по сравнению с ТКБ, энтерококки – более надежный индикатор фекального загрязнения морей и солёных озёр. Согласно нормативу ЕС, эта группа не должна обнаруживаться в 250 мл. Согласно законодательству США, при превышении содержания Enterococcus spp. 35 КОЕ / 100 мл вводится запрет на купание людей.

Условно-патогенные дрожжи и микромицеты колодцы, родники, поверхностные воды

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов. В неё входят Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые вызывают оппортунистические заболевания, в т. ч. грибковые заболевания кожи и молочницу. Другие организмы-микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillus niger) усиливают аллергические реакции, а иногда вызывают их. Особенно опасны плесневые грибы (Penicillium spp., Aspergillus spp., Fusariam spp., Alternaria spp. and Claviceps spp), образующие канцерогенные микотоксины (патулин, афлотоксин). Исследователи из Европейского союза пришли к выводу, что водопроводная вода не является распространителем микотоксинов, однако в стоячих источниках (например, накопительных резервуарах) могут создаться условия для благоприятного развития грибов. В некоторых странах ЕС содержание грибов строго регламентируется, например, в Швеции в питьевой воде их не может быть более 100 КОЕ / 100 мл.

Сине-зелёные водоросли (цианобактерии) бытовые нужды, воды для купания, кормление животных

Микроорганизмы, содержащие зелёный пигмент хлорофилл – обитатели богатых питательными элементами стоячих водоемов. Сами микроорганизмы не заражают человека, но синтезируют и выделяют в среду цианотоксины, вызывающие поражение внутренних органов млекопитающих: гепатотоксины (Microcystis, Anabaena, Oscillatoria, Nodularia, Nostoc, Cylindrospermopsis и Umezakia), нейротоксины (Aphanizomenon и Oscilatoria), почечные токсины (Cylindroapermopsis raciborski).

Таким образом, микробиологические показатели качества воды отражают несколько важных показателей:

Стафилококки – это грамположительные кокки, относящиеся к роду Staphylococcaceae. Особенностью его представителей является возможность деления сразу в ряде плоскостях. Стафилококки считаются факультативными анаэробами, не образующими споры. В питательных средах колонии бактерий могут иметь разную форму – округлую и выпуклую, а также пигментированную. На жидких средах наблюдается равномерное помутнение.

Стафилококк прежде всего обнаруживается в почве и воздухе, также может находиться в микрофлоре человека и его домашних животных. К этому роду относятся как патогенные, так и условно патогенные микроорганизмы, которые образуют колонии в областях носоглотки, ротоглотки и кожных покровов.

Какие существуют виды стафилококков?

Существует множество видов стафилококков, среди которых можно выделить самые распространенные:

Золотистый стафилококк. Staphylococcus aureus – самый распространенный и наиболее патогенный микроорганизм. Свое наименование он получил из-за умения создавать золотистый пигмент. Заражение организма таким стафилококком может вызывать воспаление большинства органов и тканей. Это приводит к нарушению их работы и различным осложнениям.
Эпидермальный стафилококк. Преимущественно обнаруживается в коже и слизистых и является возбудителем сепсиса, эндокардита, а также приводит к инфицированию ран.
Сапрофитный стафилококк. Его деятельность выражается в появлении таких заболеваний как острый цистит и уретрит.
Гемолитический стафилококк. Опасность микроорганизма заключается в том, что он запускает воспалительные процессы, которые впоследствии атакуют сразу несколько органов.

Любой стафилококк в свою очередь может быть представлен множеством подвидов (штаммов), которые отличаются уровнем патогенности. В зависимости от штамма, бактерии могут избирательно атаковать как определенные органы, так и несколько одновременно. На развитие инфекции может влиять целый ряд факторов, включая наличие хронических заболеваний, ослабленный иммунитет, контакты с потенциальными носителями, несоблюдение санитарных норм, а также прием в пищу необработанных фруктов, овощей и других продуктов.

Как распространяются стафилококки?

Распространение стафилококков в зависимости от их вида может осуществляться несколькими путями: контактным; воздушно-капельным; пищевым; через руки носителей. Факторами, которые упрощают развитие инфекций, являются пониженный иммунитет, лечение сильными медикаментами и иммунодепрессантами, проблемы с щитовидной железой, а также регулярный стресс и негативное влияние экологии. Тяжелее всего стафилококковые инфекции протекают у детей и пожилых людей. Стоит отметить, что к стафилококку не вырабатывается стойкого иммунитета, поэтому им можно переболеть не один раз. Также к нему не разработано специфической иммунизации.

Стафилококк в воде

Стафилококки могут встречаться не только в почве, но и в воде, являясь потенциальным возбудителем различных заболеваний. Чаще всего это происходит при употреблении необработанной воды. Также бактерии находятся в местах купания и плавательных бассейнах. Наличие микроорганизмов указывает на опасность заражения и развития заболеваний кожных покровов и дыхательных путей.

Определение стафилококков в воде

При выявлении стафилококка в воде используется метод микробиологического анализа. С помощью этого способа можно осуществить комплексное исследование, а также точечно выявить определенную группу, которая потенциально может иметь патогенные свойства. Подобное исследование подразделяется на два типа – определение концентрации бактерий, а также их вида.

Самым популярным видом такого анализа считается метод мембранной фильтрации. В рамках проведения исследования отобранная проба – преимущественно в объеме 50 мл – проходит через мембрану. Для того, чтобы обеспечить рост изолированных колоний, при их наличии, удобнее всего фильтровать выбранное количество воды дробно с помощью разных фильтров. Это позволяет более эффективно отсеять бактерии, находящиеся в воде – они остаются на поверхности мембраны.

Фильтр оставляют на период от одного до двух дней в специальной питательной среде – чаще всего это молочно-желточно-солевой агар – установив комфортную температуру в районе 37 градусов. Если уровень загрязненности воды достигает высоких значений, можно проводить прямые посевы в количестве 1 мл и меньше. Далее подсчитывается количество колоний, характерных для стрептококков – они выделяются блестящим золотистым, палевым, белым или лимонно-желтым цветом. Также отмечается пигментирование, появление радужной зоны и зоны помутнения.

Чтобы точно определить вид бактерий, проводятся микроскопические исследования. Если появляется необходимость дальнейшей идентификации, используются общепринятые схемы, которые известны всем аккредитованным лабораториям. Полученные результаты помогут в разработке решений, способствующих нормализации качества используемой воды.

Регулярное потребление воды – это необходимость для человеческого организма. Установлено, что в среднем человек пьет до 2,5 литров воды в день. При этом она используется и во многих других направлениях деятельности, в том числе при приготовлении пищи или купании. Однако далеко не каждый источник соответствует установленным требованиям санитарных служб.

Неудовлетворительное качество, связанное в том числе с наличием патогенных микроорганизмов в водопроводной и сточных водах, может привести к негативным последствиям, среди которых наиболее опасным является риск появления заболеваний. Это означает, что качество жидкости напрямую влияет на самочувствие, функционирование организма, а также продолжительность человеческой жизни.

Что относится к микробиологическим показателям?

Микробиологические показатели делятся на несколько основных категорий:

Общее микробное число,
Бактерии группы кишечной палочки,
Колиформы,
Колифаги,
Цисты лямблий.

В определенных случаях могут осуществляться исследования с целью проверки паразитологических и радиологических показателей.

В целом оценка качества по данным санитарно-эпидемиологическим направлена на выявление в исследуемом образце микроорганизмов, имеющих непосредственную связь с человеческим организмом. Для измерения числа микробов используются две основных единицы — КОЕ/мл и БОЕ/мл. Первая позволяет установить число микробных клеток, вторая – вирусных частиц.

Общее микробное число

ОМЧ – один из самых популярных показателей, использующийся для выявления бактерий, которые потенциально могут причинить вред здоровью. Это связано с тем, что высокое общее микробное число является свидетельством загрязнения органическими веществами. Однако, помимо патогенных бактерий, среди которых можно отметить E. coli, в них могут быть и безвредные.

Общие колиформные бактерии

Анализ воды на ОКБ производится чаще всего из проб колодцев, скважин и родников. В группу входят преимущественно бактерии семейства Enterobacteriacea, которые в ряде случаев указывают на стабильную микрофлору желудка. Однако, превышение показателей ОКБ может означать вероятность фекального загрязнения. При этом в группу могут входить и свободнодвижущие микробы, не представляющие какой-либо опасности для человека. Наличие тех или иных микроорганизмов подтверждается или опровергается в ходе лабораторных исследований.

ОКБ являются своеобразным индикатором качества, в особенности при определении эффективности работы очистных систем от фекальных бактерий. Это связано с легкостью их обнаружения и дальнейшего количественного подсчета. Являясь грамотрицательными палочками, они не образуют спор и активно развиваются в условиях лактозной среды – это учитывается лаборантами при проведении исследований.

Термотолерантные колиформные бактерии

ТКБ – одна из разновидностей колиформов, которая является более точным индикатором загрязнения, так как указывает на недавнее фекальное загрязнение. При этом данные микроорганизмы выделяются простотой обнаружения, за счет чего высоко оцениваются специалистами. Чаще всего при определении ТКБ выявляется кишечная палочка, относящаяся к роду Escherichia coli.

Колифаги

Колифаги представляют собой вирусы палочки Эшерихия коли и задействуются в качестве более точного способа выявления загрязнителей жидкости. С учетом того, что вирусные частицы отличаются большей устойчивостью к воздействиям окружающей среды, нежели бактерии, данный показатель является индикатором давнего загрязнения. Присутствие колифагов в свою очередь доказывает присутствие опасных для человеческого организма энтеровирусов.

Проведение данного исследования осуществляется в случае, если в прошлом проверка источника не проводилась. Также при помощи анализа воды на наличие колифагов можно оценить эффективность применяемых методик очистки источников и систем подачи воды.

Споры сульфетредукторов

Среди дополнительных показателей следует выделить спорообразующие клостридии, которые могут быть в кишечнике, не нанося при этом вреда. Однако их большая концентрация в организме рискует привести к пищевым отравлениям и даже смертельным заболеваниям. Если сравнивать с ОКБ и ТКБ, которые относительно неустойчивы с точки зрения времени проявления, споры могут сохраняться на протяжении длительного временного отрезка. По этой причине, как и колифаги, они указывают на давнее загрязнение.

С учетом устойчивости спор к средствам очистки, они могут использоваться в виде определителя эффективности проведения мероприятий по обеззараживанию воды. Выявление данного показателя необходимо в случае обнаружения посторонних запахов и появления черного налета на трубах.

Синегнойная палочка

Синегнойная палочка является распространенным микроорганизмом, встречающимся в большинстве сред. Однако, в случае снижения иммунитета человека и превышении ее содержания в воде, значительно увеличивается риск появления серьезных заболеваний, в том числе поражения легких и почек. Если Pseudomonas aeruginosa обнаруживается в бассейне или ванне, потребуется полная замена их содержимого. Связано это с тем, что синегнойная палочка практически невосприимчива к воздействию высоких температур и средств дезинфекции.

Золотистый стафилококк

Staphylococcus aureus имеет тесную связь с человеческим организмом, образуя колонии на коже, а также в желудке и кишечном тракте. В определенных количествах золотистый стафилококк, как и синегнойная палочка, безвреден и может присутствовать у людей, не имеющих проблем со здоровьем. В случае, если иммунитет ослаблен, он может вызывать развитие различных заболеваний.

Энтерококки

Энтерококки представляют собой группу микроорганизмов, находящихся в человеческом кишечнике. Данные бактерии также могут вызывать различные инфекции, которые впоследствии приводят к возникновению заболеваний, в том числе менингита и эндокардита.

С учетом невосприимчивости к засолению и высоким температурам, энтерококки представляют собой проверенный индикатор фекального загрязнения вод, предназначенных для купания. Согласно нормам ЕС, в 250 мл воды данной группы быть не должно, ни в каких концентрациях. В противном случае может вводиться запрет на посещение таких источников.

Возбудители кишечных инфекций

На данный момент не существует точного списка с установленными возбудителями инфекций кишечника. Известно, что в группу могут быть включены микроорганизмы, заражение которыми чаще всего производится посредством жидких сред. С учетом сложности и трудоемкости определения параметра, не обойтись без использования специального оборудования. Также играет важную роль высокая квалификация микробиолога.

Санитарные нормы питьевой воды

Любая проверка качества воды должна осуществляться по показателям, которые установлены действующими нормативными документами. С их помощью можно определить предельно допустимую концентрацию того или иного вещества или микроорганизма, а также вид, к которому они относятся.

Работа лабораторий на основании данных показателей позволит установить качество воды из исследуемого источника, а также определиться с необходимостью покупки, монтажа дополнительного очистного оборудования или оптимизации работы действующего.

Микробиологические показатели воды, которые не регулируются СанПиНом

Непрерывное развитие технологий, направленных на исследование воды, привело к увеличению числа контролируемых параметров, а также появлению возможности выбора определенных показателей. В частности, в виде индикатора фекальных загрязнений ВОЗ рекомендует применять метод обнаружения кишечной палочки.

В странах Евросоюза помимо палочки принято устанавливать содержание энтерококков, относящихся к микроорганизмам, присутствующим в кишечнике. Все вышеперечисленные бактерии объединяются в группы, имеющие важное значение как индикаторы. Они позволяют оценить качество воды на конкретном участке.

С учетом всего вышесказанного, микробиологические данные могут отражать сразу несколько показателей, имеющих ключевое значение:

Общая загрязненность воды бактериями.
Выявление фекального загрязнения.
Возможное присутствие энтеровирусов (колифагов).
Обнаружение микроорганизмов, которые потенциально могут нанести серьезный вред человеческому организму. Это могут быть синегнойная палочка, золотистый стафилококк или энтерококки.
Присутствие патогенных микроорганизмов, среди которых встречаются Vibrio и Salmonella.

Санитарно -бактериологический контроль смывов с одежды, рук, инвентаря, оборудования

В целях осуществления постоянного санитарно- бактериологического контроля на предприятиях общественного питания, пищевых отраслей различного профиля за поверхностью объектов, контактирующих с продукцией, применяются различные показатели. Например, определяют общую бактериальную обсемененность объекта (руки работников, спецодежда, оборудование и т.п.), наличие санитарно-показательной микрофлоры (БГКП, энтерококков), а также в отдельных случаях наличие на поверхности исследуемого объекта условно-патогенной и патогенной микрофлоры, характерной для данного производства (при использовании мясного сырья — микроорганизмов рода Salmonella , в кондитерском производстве — Staphylococcus ). Общую бактериальную обсемененность объекта определяют количественно (обычно в перерасчете на 1см 2 поверхности- микробное число), а также, в отдельных случаях- качественно.

Данные показатели определяются как в плановом порядке в лабораториях производства и работниками СЭС, так и внепланово по эпидемическим показаниям.

Отбор проб для санитарно-микробиологического исследования предметов обихода и оборудования проводится с помощью следующих методов:

• смывов (тампонами или салфетками );

• отпечатков (контактный метод );

Метод смывов. Этот метод является основным при отборе проб для исследования твердых поверхностей. Смывы с крупных плоских поверхностей (столы, подоконники, полы, стулья, оборудование, инвентарь и т.д.) производят перед началом рабочего дня, либо после санитарной обработки в санитарные дни. Общая площадь поверхности крупных объектов, с которой берется смыв — 100 см 2 . Для ограничения поверхности используют шаблон (трафарет) площадью 25 см 2 , изготовленный из металла, накладывая его последовательно на 4 разных участка. Трафареты перед отбором смывов должны быть простерилизован ы. Смывы с рук работников следует производить перед началом работы. При взятии смывов с рук протирают тампоном обе ладони рук, проводя не менее 5 раз по одной ладони и пальцам, затем протирают участки между пальцами, ногти и под ногтями. При взятии смывов с санитарной одежды протирают 4 площадки по 25 см 2 : нижнюю часть каждого рукава и две площадки с верхней и передней части спецовки. Смывы с посуды на предприятиях общественного питания производят, протирая тампоном всю поверхность исследуемых объектов — для тарелок, рабочую поверхность — для ложек, вилок и т.д. (в количестве 2-3 штуки для мелких объектов). Смывы с мелких предметов можно получить, погрузив их непосредственно в колбу со стерильной жидкостью. В течение 10 мин их встряхивают, затем полученную смывную среду используют для посевов. В каждом случае используют стерильные ватные или марлевые тампоны,
которые перед употреблением смачивают стерильным изотоническим раствором хлорида натрия, водой или питательной средой (чаще мясопептонным бульоном или средой Кесслера). При контроле жирных поверхностей пользуются сухими тампонами или салфетками.

Салфетки помещают в колбы с увлажняющей жидкостью и транспортируют в лаборатории с соответствующим сопроводительным документом, где проводятся соответствующие посевы: на общую обсемененность смыва или его разведения, на присутствие санитарно-показательных (БГКП, энтерококков), патогенных (сальмонелл, синегнойной палочки, протея) микроорганизмов на соответствующие сред ы.

Метод отпечатков, или контактный метод , применяется для определения биологической контаминации ровной гладкой поверхности (как горизонтальной, так и вертикальной ). Кусочки марли (в виде кружков диаметром 3—6 см), мембранные фильтры или полоски фильтровальной бумаги помещают в чашки Петри и заливают расплавленной плотной средой (3% мясо-пептонным агаром или средой Эндо двойной концентрации). После остывания стерильным пинцетом забирают кружочки или полоски и накладывают стороной, пропитанной средой, на исследуемую поверхность, прижимая осторожно пинцетом. Затем переносят в стерильную чашку Петри для последующей инкубации (нижней поверхностью вверх ). Метод отпечатков выгодно отличается от метода смывов возможностью непосредственного обнаружения загрязнения объектов окружающей среды и отсутствием потери микробов в исследуемых предметах (что всегда происходит при распределении микрофлоры со смытой поверхности в смачивающей жидкости).

Метод агаровой заливки применяется для определения микрофлоры различных горизонтальных поверхностей, а также тканей. Для отбора пробы используется специальная металлическая пластинка высотой 2 см в виде кольца усеченной формы с диаметром верхней поверхности круга 5 см и нижней меньшей — 4см. (рис. 9 ,а). Перед исследованием кольцо фламбируют обжиганием, охлаждают, помещают на поверхность исследуемого объекта нижним краем и заливают расплавленным и остуженным до 45 °С мясопептонным агаром или средой Эндо. Спустя 5 -10 мин после застывания среды кольцо осторожно снимают и вытряхивают в стерильную чашку Петри застывшую агаровую пластинку вверх нижней поверхностью, соприкасавшейся с исследуемым объектом. Метод удобен тем, что на поверхность среды захватываются все микроорганизмы, находящиеся на исследуемом участке объекта, но он не дает представления об общей обсемененности предметов из-за ограниченности исследуемой площади. Его рекомендуют применять при небольшой бактериальной загрязненности.

При оценке санитарного состояния предметов обихода, изготовленных из тканей (постельное белье, одеяла, одежда и т. д.) можно применять метод, заключающийся во встряхивании участка загрязненных тканей над чашкой Петри с питательной средой. Обследуемую ткань зажимают в специальной металлической обойме, состоящей из двух колец, вкладываемых друг в друга (рис.9, б), и помещают над чашкой Петри со средой. Встряхивание ткани можно производить просто поколачиванием по ее наружной поверхности стерильным пинцетом или, закрепив в центре ткани стерильную булавку, несколько раз ее оттягивают и отпускают. Вместе с пылью из ткани на питательную среду попадают и находящиеся в ней микроорганизм ы. Чашку закрывают и помещают в термостат для инкубаци и.

Определение общей микробной обсемененности объекта

Определение энтерококков в смывах Проводится титрационным методом или методом мембранных фильтров. Обильный рост колоний энтерококков свидетельствует о свежем фекальном загрязнении исследуемого предмета обихода. За титр энтерококка принимается то

предельное разведение смыва, в котором обнаружены энтерококки.

Исследование смывов на присутствие патогенных стафилококков, сальмонелл, протеев, синегнойной палочки проводят так же, как при санитарно-бактериологическом контроле пищевых продуктов.

Оценка санитарного состояния объектов окружающей среды

При оценке санитарно-микробиологического состояния объектов исходят из цели обследования и назначения этих объектов. Официальных регламентаций о состоянии, составе микрофлоры различных объектов практически нет.

Имеющиеся инструктивные материалы по санитарно- микробиологическому контролю предприятий обществен-ного питания и торговли пищевыми продуктами указывают на то, что фекальное загрязнение должно быть исключено, т. е. не должно быть БГКП на оборудовании (не соприкасающимся с сырыми продуктами), на вымытой посуде. На всех обследуемых предметах обихода и оборудования не должны обнаруживаться патогенные микроорганизм ы: их присутствие указывает на реальную опасность заражения. К сожалению, не всегда удается избежать фекального загрязнения на производстве, в больницах и т.д. В связи с этим, исходя из опыта санитарной практики, если БГКП обнаруживаются только в 5% проб, взятых с предметов обихода и оборудования, санитарно-гигиеническое состояние обследуемого предприятия (лечебного учреждения) расценивается как удовлетворительно е.

По показателям общей обсемененности: санитарное состояние поверхности считается отличным, если ОМЧ на 1см 2 не превышает 100, хорошим — при микробном числе от 100 до 1000, удовлетворительным — более 1000, плохим — более 10000.

В то же время выделение патогенных стафилококков в клиниках хирургического профиля и в родильных домах с предметов обихода и от персонала свидетельствует о санитарном неблагополучии. В этом случае проводится обязательное определение фаговаров и антибиотикограммы выделяемых стафилококко в.

При обследовании различных объектов на стерильность (перевязочный и шовный материал, системы переливания крови, шприцы, иглы, грудное молоко, жидкость для питья детей и т. д.) не должно быть роста во всех посевах.

Читайте также: