Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры

Обновлено: 24.04.2024

В соответствии с Федеральным законом от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст. 1650; 2002, N 1 (ч. I), ст. 2; 2003, N 2, ст. 167; N 27 (ч. I), ст. 2700; 2004, N 35, ст. 3607; 2005, N 19, ст. 1752; 2006, N 1, ст. 10; 2007, N 1 (ч. I), ст. 21, 29; N 27, ст. 3213; N 46, ст. 5554; N 49, ст. 6070; 2008, N 24, ст. 2801; N 29 (ч. I), ст. 3418); Постановлением Правительства Российской Федерации от 15.09.2005 N 569 "О Положении об осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора в Российской Федерации" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2005, N 39, ст. 3953), Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденным Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.2000 N 554 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 31, ст. 3295; 2005, N 39, ст. 3953), постановляю:

1. Утвердить санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.1.2521-09 - "Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации" (приложение).

2. Ввести в действие СП 3.1.1.2521-09 с 1 августа 2009 года.

3. С момента введения в действие СП 3.1.1.2521-09 "Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации" признать утратившими силу санитарно-эпидемиологические правила "Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой. СП 3.1.1086-02" .

государственного санитарного врача

от 09.06.2009 N 43

ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ К ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОМУ НАДЗОРУ ЗА ХОЛЕРОЙ

НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

I. Область применения

1.2. Настоящие санитарно-эпидемиологические правила устанавливают основные требования к комплексу организационных, профилактических и противоэпидемических мероприятий, направленных на предупреждение возникновения очагов холеры и распространения возбудителя инфекции.

1.3. Соблюдение санитарных правил является обязательным для граждан, индивидуальных предпринимателей и юридических лиц.

1.4. Контроль за выполнением настоящих санитарных правил осуществляют органы и учреждения системы государственного санитарно-эпидемиологического надзора.

II. Общие положения

2.1. Холера представляет собой особо опасную инфекционную болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом передачи возбудителя инфекции, водным (наиболее частым), пищевым и контактным путями распространения. Характеризуется различной тяжестью клинического течения заболевания, нарушением водно-солевого обмена, обезвоживанием, токсикозом и гастроэнтеритом. Инкубационный период - один - пять дней.

2.2. Холера входит в перечень болезней, требующих проведения мероприятий по санитарной охране территории Российской Федерации. В соответствии с Международными медико-санитарными правилами (2005 г.) холера относится к болезням, которые могут оказывать серьезное влияние на здоровье населения, вызывать события, которые могут представлять собой чрезвычайную ситуацию в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения, имеющую международное значение.

2.3. В соответствии с "Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем" (МБК-10) холера кодируется: АОО холера; АОО.О - холера, вызванная холерным вибрионом 01, биовар cholerae, классическая холера; АОО.1 - холера, вызванная холерным вибрионом О1, биовар eltor, холера Эль-Тор; АОО.9 - холера неуточненная.

2.5. В целях предупреждения возникновения и распространения холеры необходимо своевременно и в полном объеме проводить комплекс организационных, профилактических и противоэпидемических мероприятий.

2.6. Проведение профилактических и противоэпидемических противохолерных мероприятий осуществляется в соответствии с настоящими санитарными правилами, нормативными документами федерального органа исполнительной власти, осуществляющего функции по выработке государственной политики и нормативно-правовому регулированию в сфере здравоохранения, федерального органа исполнительной власти, уполномоченного осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации.

III. Общие организационные мероприятия

3.1. Профилактические мероприятия, направленные на предупреждение заноса и распространения холеры на территории Российской Федерации, проводят специалисты органов и учреждений Роспотребнадзора, органов управления здравоохранением в субъекте Российской Федерации, юридические лица, независимо от организационно-правовых форм и форм собственности, физические лица, в том числе индивидуальные предприниматели в соответствии с осуществляемой ими деятельностью согласно настоящим санитарным правилам и разрабатываемым в субъектах Российской Федерации комплексным планам.

3.2. В комплексный план по санитарной охране территории должен быть включен раздел противохолерных мероприятий, которые разрабатываются управлениями Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации, территориальными отделами управлений совместно с федеральными государственными учреждениями здравоохранения (далее - ФГУЗ) "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации, филиалами ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" с органами управления и организациями здравоохранения в субъектах Российской Федерации (и муниципальных образованиях), управлениями Роспотребнадзора по железнодорожному транспорту и его территориальными отделами, противочумными учреждениями Роспотребнадзора и заинтересованными организациями сроком на пять лет и ежегодно корректируются.

В разделе противохолерных мероприятий должны быть учтены организационные, профилактические, противоэпидемические мероприятия и мероприятия в населенных пунктах после ликвидации очага холеры.

3.3. При составлении плана противохолерных мероприятий необходимо учитывать тип административной территории по эпидемическим проявлениям холеры (приложение).

3.4. Мероприятия по организации и обеспечению противоэпидемической готовности органов и учреждений Роспотребнадзора и лечебно-профилактических организаций на случай выявления больного (трупа) с подозрением на холеру должны включать:

- разработку оперативных планов проведения первичных противоэпидемических мероприятий, в которых предусматриваются способ и порядок передачи информации (в рабочее и нерабочее время) вышестоящему руководству о выявлении подозрительного больного; схем оповещения и сбора специалистов (в рабочее и нерабочее время); подготовку комплектов индивидуальной защиты (противочумные костюмы или другие регламентированные средства индивидуальной защиты); укомплектование укладки для забора материала от больного и проб из объектов окружающей среды; определение функциональных обязанностей и действий каждого специалиста при выявлении больного (трупа), подозрительного на холеру; порядок госпитализации больного (подозрительного) холерой, контактировавших с больным холерой, и проведения дезинфекционных и дезинсекционных мероприятий;

- формирование противоэпидемической группы медицинского штаба для: обеспечения учета и информации об эпидемиологической обстановке и противохолерных мероприятиях; проведения эпидемиологического обследования в очагах; отбора проб из объектов окружающей среды для лабораторного исследования; контроля обеспечения режима биологической безопасности работы в инфекционном и провизорном госпиталях, изоляторе, бактериологических лабораториях и других медицинских организациях, независимо от их ведомственной принадлежности; проведения дезинфекционных и дезинсекционных мероприятий;

- формирование самостоятельной или в составе противоэпидемической группы медицинского штаба профилактической группы для обеспечения санитарно-эпидемиологического надзора и контроля;

- формирование группы оперативного эпидемиологического анализа для оценки эпидемиологической обстановки и эффективности проводимых противохолерных мероприятий;

- формирование госпитальной базы и патологоанатомической группы, паспортизацию инфекционного, провизорного госпиталей и изолятора, их материально-техническое оснащение, обеспечение медицинским оборудованием, средствами лечения, для дезинфекции, стерилизации и дезинсекции;

- формирование лабораторной группы с определением мощности лабораторной базы, потребности в кадрах, оборудовании и централизованным обеспечением бактериологических лабораторий питательными средами, другими средствами диагностики, дезинфекции, стерилизации и дезинсекции;

- создание на уровне субъектов Российской Федерации (республики, края, области) резерва кадров врачей, лаборантов, помощников эпидемиологов, врачей-дезинфектологов, дезинструкторов и дезинфекторов;

- определение порядка и обеспечения охраны стационаров специального назначения и бактериологических лабораторий учреждениями управлений внутренних дел (далее - УВД);

- определение источников пополнения и расчет автотранспорта для работы в очаге холеры;

- обеспечение противоэпидемической готовности и взаимодействия органов и организаций Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, Министерства внутренних дел Российской Федерации, Министерства обороны Российской Федерации, Министерства транспорта Российской Федерации, медицинских организаций других федеральных органов исполнительной власти, органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации на случай возникновения эпидемиологических осложнений по холере.

3.5. На территории всей страны ежегодно проводится теоретическая и практическая подготовка по холере на семинарах (рабочих местах):

- врачей-эпидемиологов, врачей-бактериологов, врачей-дезинфектологов, дезинструкторов, дезинфекторов в организациях, проводящих дезинфекционные работы; специалистов санитарно-карантинных пунктов в пунктах пропуска через государственную границу Российской Федерации и медицинских работников медицинских пунктов железнодорожных, авиа-, авто-, морских и речных вокзалов; заместителей главных врачей лечебно-профилактических организаций, заведующих врачебными участками и фельдшерско-акушерскими пунктами; врачей-инфекционистов, терапевтов и других специалистов, приписанных к стационарам специального назначения (инфекционный, провизорный госпитали, изолятор и обсерватор); врачей станций (отделений) скорой медицинской помощи, поликлиник, фельдшерско-акушерских пунктов; патологоанатомов патологоанатомических отделений больниц и бюро судебно-медицинских экспертиз; медицинских работников психоневрологических стационаров, центров социальной реабилитации и других организаций;

- бортпроводников, проводников, командиров экипажей, помощников капитанов, сотрудников контрольных служб в пунктах пропуска через государственную границу Российской Федерации и др.

3.6. Ежегодно проводятся тренировочные учения и практические занятия для всех категорий обучаемых с отработкой функциональных обязанностей и практических навыков на случай выявления больного с подозрением на холеру.

3.7. Проводится гигиеническое воспитание и обучение населения.

IV. Эпидемиологический надзор за холерой

4.1. Эпидемиологический надзор за холерой обеспечивает систему мер, направленных на своевременное выявление заносных и местных случаев холеры, обнаружение холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп в объектах окружающей среды, информационное обеспечение, выработку обоснованных рекомендаций к планированию и проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий с целью локализации и ликвидации возникших очагов холеры.

4.2. Органы и учреждения Роспотребнадзора и лечебно-профилактические организации Минздравсоцразвития России, а также соответствующие структурные подразделения федеральных органов исполнительной власти и иных государственных органов осуществляют эпидемиологический надзор за холерой на территории всей страны дифференцированно с учетом типов административных территорий по эпидемическим проявлениям холеры (приложение).

4.3. Информационное обеспечение при эпидемиологическом надзоре на территории всей страны осуществляют в следующем порядке:

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации обеспечивает в установленном порядке информирование о возникновении или об угрозе возникновения холеры на территории страны органов и учреждений, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический надзор, органов управления здравоохранением, противочумных учреждений, соответствующих структурных подразделений федеральных органов исполнительной власти и иных государственных органов.

ФГУЗ "Противочумный центр" Роспотребнадзора - Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности с прикрепленными субъектами Российской Федерации и Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней - информирует органы и учреждения Роспотребнадзора о заболеваемости холерой за рубежом.

ФГУЗ "Противочумный центр" Роспотребнадзора совместно с ФГУЗ "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" - Референс-центр по мониторингу за холерой - ежегодно сообщают о свойствах холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, выделенных из объектов окружающей среды и от людей на территории Российской Федерации, управлениям Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации, ФГУЗ "Центры гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации, научно-исследовательским противочумным институтам и противочумным станциям Роспотребнадзора.

Главные государственные санитарные врачи по субъектам Российской Федерации представляют информацию о каждом больном холерой и вибриононосителе в виде донесений в Роспотребнадзор, в органы государственной власти субъекта Российской Федерации и органы местного самоуправления, на территории которых управление непосредственно осуществляет функции по государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю), во ФГУЗ "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт", во ФГУЗ "Противочумный центр" Роспотребнадзора, в курирующий научно-исследовательский противочумный институт и территориальные противочумные учреждения - региональные центры индикации и диагностики опасных инфекционных болезней Роспотребнадзора.

Главные государственные санитарные врачи по субъектам Российской Федерации, главные государственные санитарные врачи территориальных отделов управлений Роспотребнадзора по железнодорожному транспорту, директора ФГУЗ "Научно-исследовательский противочумный институт", начальники ФГУЗ "Противочумная станция" Роспотребнадзора передают информацию о выделении холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп из объектов окружающей среды на подконтрольной территории в Роспотребнадзор, ФГУЗ "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт", в ФГУЗ "Противочумный центр" Роспотребнадзора и курирующий научно-исследовательский противочумный институт.

4.4. Сбор, обработку первичной информации, эпидемиологический анализ и оценку осуществляют специалисты Управлений Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации и ФГУЗ "Центры гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации в оперативном порядке. Результаты оперативного эпидемиологического анализа являются основой для принятия экстренных управленческих решений.

Ретроспективный эпидемиологический анализ осуществляют специалисты Управлений Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации и ФГУЗ "Центры гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации на основе анализа данных о заносах холеры на административную территорию, о заболеваемости холерой и выявлении вибриононосителей, выделении холерных вибрионов из объектов окружающей среды с учетом природно-социальных условий, демографических особенностей территории, ее отдельных частей и конкретных эпидемиологически значимых объектов. Анализ направлен на выявление основных закономерностей проявления холеры и прогнозирование эпидемиологической обстановки.

4.5. Специалисты ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации, филиалов ФГУЗ "Центры гигиены и эпидемиологии" осуществляют оценку качества воды на соответствие санитарно-эпидемиологическим правилам и нормативам, условиям безопасного для здоровья населения использования водных объектов, систем централизованного и нецентрализованного питьевого водоснабжения с целью определения степени потенциальной опасности реализации водного пути распространения возбудителя холеры на административных территориях (город, район, населенный пункт).

4.6. Специалисты управлений Роспотребнадзора по субъекту, территориальных отделов управлений Роспотребнадзора составляют карты-схемы населенных пунктов с указанием расположения канализационных очистных сооружений, мест сбросов хозяйственно-бытовых сточных вод (в том числе аварийных) в открытые водоемы, их характер и объем, наличие канализационно-насосных станций вблизи водоемов, используемых для рекреационного и хозяйственно-бытового водопользования, а также с указанием мест обнаружения холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп.

4.7. Лабораторному обследованию на холеру при проведении эпидемиологического надзора в соответствии со ст. 33 Федерального закона "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ, с п. 2, ст. 23 Международных медико-санитарных правил (2005 г.) подлежат лица, представленные в табл. 1.

Таблица 1 - Тактика эпидемиологического надзора за холерой при обследовании населения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Лабораторная диагностика холеры

1. РАЗРАБОТАНЫ: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю.М.Федоров, Н.Я.Жилина); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" (Ю.М.Ломов, Б.Н.Мишанькин, Л.С.Подосинникова, Л.Г.Воронежская, И.Я.Черепахина, Т.А.Кудрякова, Б.Л.Мазрухо, Л.М.Смоликова, И.В.Рыжко, Р.И.Цураева, Э.А.Москвитина, Б.П.Голубев, С.О.Водопьянов, Е.В.Монахова, В.Д.Кругликов, Н.Р.Телесманич, А.Б.Мазрухо, В.В.Агафонова); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Противочумный Центр" (А.А.Кюрегян, С.М.Иванова, Ю.С.Королев); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (А.К.Адамов, З.В.Малыхина, Т.В.Бугоркова, Н.И.Смирнова, Л.Ф.Ливанова; А.В.Топорков, С.И.Заднова, Н.А.Осина, Е.С.Казакова, Н.Б.Челдышева, А.В.Осин); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" (А.С.Марамович, В.С.Ганин, Л.Я.Урбанович, В.И.Погорелов, Л.В.Миронова, Е.С.Куликалова); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" (В.Н.Савельев); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Причерноморская противочумная станция" (Г.В.Гальцева); Государственным Центром по антибиотикам (С.В.Сидоренко); Российской медицинской академией последипломного образования (Е.А.Ведьмина); ГИСК им. Л.А.Тарасевича (Т.И.Анисимова, Л.В.Саяпина).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 31 мая 2007 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН Методических указаний "Лабораторная диагностика холеры" МУ 4.2.1097-02.

1. Область применения

1.1. Методические указания "Лабораторная диагностика холеры" разработаны для внедрения и применения действующих нормативных документов, определяющих требования к эпидемиологическому надзору за холерой в части, касающейся организации и проведения лабораторной диагностики холеры.

1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов бактериологических лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, лечебно-профилактических и противочумных учреждений.

2. Нормативные ссылки

2.3. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. СП 1.2.036-95".

2.4. Санитарные правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99".

2.6. Методические указания "Организация работ при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности. МУ 1.3.1794-03".

3. Характеристика возбудителя холеры

Холера - острая инфекционная болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом заражения, пищевым, водным и контактно-бытовым путями распространения возбудителя. Относится к группе инфекций, борьба с которыми регламентируется Международными медико-санитарными правилами (2005).

Возбудителями холеры являются холерные вибрионы О1 (классического и эльтор биоваров) и О139 серогрупп.

Токсигенные () холерные вибрионы обеих серогрупп вызывают заболевание холерой, склонное к эпидемическому и пандемическому распространению (эпидемически значимые штаммы), нетоксигенные () - единичные или групповые заболевания холерой при общем источнике заражения.

У нетоксигенных () штаммов холерных вибрионов возможно присутствие отдельных генов патогенности, среди которых определенную значимость имеет ген , участвующий в реализации процесса адгезии.

Характеристика генома выделенных холерных вибрионов биологическими методами широко используется для эпидемиологического анализа и оценки эпидемической значимости выделенных штаммов.

4. Организация лабораторных исследований

Диагностические исследования на холеру в регламентированном объеме могут проводить:

- бактериологические лаборатории учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, лечебно-профилактических и противочумных учреждений, имеющие разрешение на работу с микроорганизмами III группы патогенности;

- лаборатории особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора и ведомств, имеющие разрешение на проведение диагностических исследований на холеру;

- лаборатории противочумных учреждений, имеющие разрешение на проведение диагностических исследований на холеру и на работу с возбудителем холеры.

Организация и выполнение диагностических исследований на холеру в лабораториях должны осуществляться в соответствии с требованиями, регламентирующими:

- безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности - для бактериологических лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и лечебно-профилактических учреждений;

- безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности - для лабораторий (отделов) особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, ведомств и противочумных учреждений;

- порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов IV группы патогенности.

Порядок получения лабораториями разрешения на диагностические исследования на холеру определяется действующими нормативными документами о порядке выдачи разрешений на эти виды работ.

В условиях осложнения эпидемиологической обстановки временное разрешение на проведение диагностических исследований на холеру бактериологическим лабораториям учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и другим, функционирующим в составе лабораторной службы очага, в случае расширения их функциональных обязанностей представляется решением медицинского штаба очага.

4.1. При осуществлении эпидемиологического надзора

4.1.1. Бактериологические лаборатории учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и лечебно-профилактические учреждения проводят плановые диагностические исследования на холеру материала от больных острыми кишечными инфекциями, определенного контингента здоровых лиц и проб из объектов окружающей среды в объеме, предусмотренном действующими нормативными документами по эпидемиологическому надзору за холерой.

Исследования ведут до установления отрицательного результата анализа или до выделения культуры с характерным для вибрионов ростом на агаровой и полиуглеводной средах и положительной реакцией на оксидазу. Культуры проверяют на чистоту в мазке, окрашенном по Граму, на подвижность и в реакции агглютинации на стекле (далее слайд-агглютинации) с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, РО и О139.

При положительном результате слайд-агглютинации немедленно сообщают в органы Роспотребнадзора в субъекте Российской Федерации, культуру для окончательной идентификации немедленно доставляют в специализированную лабораторию в установленном порядке.

При отрицательном результате слайд-агглютинации:

- неагглютинирующиеся холерными сыворотками О1 и О139 культуры, выделенные от людей, направляют для дальнейшей идентификации в специализированную лабораторию;

- неагглютинирующиеся холерными сыворотками О1 и О139 культуры, выделенные из объектов окружающей среды, идентифицируют на месте или по согласованию передают в учреждение Роспотребнадзора.

- 4.1.2. Лаборатории особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора и ведомств:

- выполняют диагностическое исследование материала от больных и умерших с подозрением на холеру и проб из объектов окружающей среды;

- идентифицируют культуры вибрионов, выделенных в территориальных и ведомственных лабораториях, определяя их таксономическую принадлежность, а также определяют эпидемическую значимость (токсигенность) и антибиотикочувствительность холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп по регламентированным для этих лабораторий тестам;

- осуществляют (или организуют) бактериологический контроль качества питательных сред и других диагностических препаратов, используемых в территориальных лабораториях;

- представляют оперативную информацию о выделении культур холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп;

- в установленном порядке немедленно передают в территориальное противочумное учреждение культуры холерных вибрионов, таксономическая принадлежность или токсигенность которых имеющимися средствами диагностики не определяется;

- в течение 5 дней после окончания идентификации передают в территориальное противочумное учреждение или в головной по проблеме "Холера" Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт все культуры холерных вибрионов О1, О139, независимо от объекта обследования, и других серогрупп при выделении от больных;

- контролируют деятельность территориальных лабораторий, оказывают им методическую помощь по всем вопросам лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за холерой.

4.1.3. Лаборатории противочумных учреждений:

- проводят исследования материала от больных и умерших с подозрением на заболевание холерой, а также проб из объектов окружающей среды;

- подтверждают таксономическую принадлежность культур холерных вибрионов, выделенных на курируемой территории;

- идентифицируют все атипичные культуры холерных вибрионов с использованием дополнительных методов серологической, биохимической и других видов идентификации с целью уточнения таксономической принадлежности;

- определяют эпидемическую значимость (токсигенность) и антибиотикочувствительность культур;

- осуществляют методическое руководство по всем вопросам лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за холерой на курируемой территории;

- в установленном порядке выделенные культуры холерных вибрионов с паспортами передают в территориальный противочумный институт, головной по проблеме "Холера" Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт, одновременно паспорта на эти же культуры направляют в противочумный центр Роспотребнадзора.

Лабораторное обеспечение эпидемиологического надзора за холерой осуществляют в соответствии с действующими нормативными и методическими документами. Профилактические исследования на холеру проводят в течение рабочего дня с использованием соответствующих питательных сред, диагностические исследования материала от подозрительных на холеру больных (трупов) - в условиях круглосуточного режима работы лаборатории.

4.2. При проведении противоэпидемических мероприятий

Организация и регламентирование деятельности лабораторий, а также формирование лабораторной службы в очаге холеры осуществляются в соответствии с действующими нормативными документами по организации и проведению противохолерных мероприятий.

5. Бактериологическое исследование

В системе противохолерных мероприятий значительное место занимает бактериологический анализ, от правильности и своевременности проведения которого зависит характер и объем профилактических и противоэпидемических мероприятий.

Исследования проводят с целью:

- выявления больных холерой и вибриононосителей;

- установления окончательного диагноза при вскрытии трупов лиц, умерших от подозрительного на холеру заболевания;

- обоснования выбора средств этиотропной терапии холеры;

- бактериологического контроля эффективности лечения больных холерой и вибриононосителей;

- бактериологического контроля объектов окружающей среды, в том числе поверхностных водоемов;

- бактериологического контроля эффективности обеззараживания в очаге инфекции.

5.1. Отбор и доставка материала на исследование

Материалом для бактериологического анализа могут служить испражнения, рвотные массы, желчь, трупный материал (отрезки тонкого кишечника и желчный пузырь); предметы, загрязненные испражнениями (постельное и нательное белье и др.); вода, ил, гидробионты, сточные воды, содержимое выгребных туалетов; смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.

Материал от больного забирает медицинский персонал лечебного учреждения, немедленно после выявления больного и до начала лечения антибиотиками. Руководитель является ответственным за правильность отбора, хранения и своевременность доставки проб в лабораторию.

Необходимо учитывать высокую чувствительность холерных вибрионов к дезинфицирующим средствам и кислотам, возможность антагонистического действия сопутствующей микрофлоры и предполагаемую концентрацию возбудителя в исследуемом материале. Если в материале от больных алгидной формой холеры концентрация возбудителя достигает 10-10 м.к./мл, то в испражнениях больных легкой формой и леченных антибиотиками, реконвалесцентов и носителей количество холерных вибрионов обычно не превышает 10-10 м.к./г.

Для отбора проб используют чистую стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов. Стерилизацию посуды и других средств забора материала проводят автоклавированием, сухим жаром или кипячением в 2%-м растворе пищевой соды.

Материал для исследования должен быть доставлен не позже, чем через 2 ч после его взятия. В случае удлинения сроков доставки используют транспортные среды. Наиболее удобной и достаточно эффективной является 1%-я пептонная вода (рН 8,4±0,1).

В пептонную воду в качестве ингибитора сопутствующей флоры может быть добавлен теллурит калия из расчета 1:100000-1:200000 или моющее средство "Прогресс" в концентрации 0,1-0,2%. В отдельных случаях для транспортирования материала могут быть использованы солевые консерванты (см. раздел 7).

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней

Дата введения 2011-06-01

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (Ю.М.Ломов, Э.А.Москвитина, Н.Р.Телесманич, В.Д.Кругликов, И.Я.Черепахина, В.В.Балахнова, И.В.Архангельская); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора (В.В.Кутырев, Е.С.Казакова, И.Н.Шарова, Н.А.Осина, С.А.Щербакова, Н.И.Смирнова); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (С.В.Балахонов, Л.Я.Урбанович, Л.В.Миронова, Е.С.Куликалова, А.С.Кожевникова); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (В.Н.Савельев); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Противочумный центр" Роспотребнадзора (В.Е.Безсмертный, С.М.Иванова); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (В.Г.Сенникова, М.В.Зароченцев, В.В.Мордвинова); Федеральным государственным учреждением науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора (И.А.Дятлов, С.Ф.Бикетов, Е.И.Баранова, М.В.Храмов, Е.А.Тюрин); Федеральным государственным бюджетным учреждением "ГИСК им. Л.А.Тарасевича" Минздравсоцразвития (И.В.Борисевич, Л.В.Саяпина).

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней, формы и методы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, биологической безопасности проведения работ.

1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, специалистов противочумных учреждений, органов управления здравоохранением и лечебно-профилактических учреждений.

2. Нормативные ссылки

2.6. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности": СП 1.2.036-95 (Утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 28.08.1995 N 14).

2.14. Методические указания "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности" МУ 1.3.2569-09.

2.15. Методические указания "Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии": МУ 3.3.2.2124-06.

2.17. Методические указания "Профилактика холеры. Организационные мероприятия. Оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий на случай возникновения очага холеры": МУ 3.1.1.2232-07.

2.18. Методические указания. "Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чумы, сибирской язвы, холеры, туляремии, бруцеллеза, сапа и мелиоидоза) к антибактериальным препаратам": МУК 4.2.2495-09.

2.19. Методические указания "Методы контроля бактериологических питательных сред": МУК 4.2.2316-08.

3. Перечень сокращений

АБП - антибактериальные препараты

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛПУ - лечебно-профилактическое учреждение

МУ - методические указания

МУК - методические указания по контролю

МФА - метод флуоресцирующих антител

ООИ - особо опасные инфекции

ПБА - патогенный биологический агент

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПЧС - противочумная станция

РАО - реакция агломерации объёмная

РА - реакция агглютинации

РИВ - реакция иммобилизации вибрионов

РВА - реакция вибриоцидных антител

СанПиН - санитарные правила и нормативы

СП - санитарные правила

ИХ-тест - иммунохроматографический тест

4. Общие положения

Характеристика болезни и возбудителя холеры

Холера - особо опасная инфекционная болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом передачи возбудителя инфекции, водным, пищевым и контактным путями распространения.

Возбудитель холеры - холерный вибрион относится к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio и виду Vibrio cholerae:

К виду Vibrio cholerae отнесены грамотрицательные, аспорогенные, полиморфные, слегка изогнутые или прямые палочки длиной 1,5-3,0 мкм и шириной 0,2-0,6 мкм, с одним полярно расположенным жгутиком, который длиннее тела клетки в 2-3 раза.

Холерные вибрионы образуют индофенолоксидазу - тест дифференциации от представителей семейства Enterobacteriaceae, ферментируют глюкозу в аэробных и анаэробных условиях до кислоты без газа - тест дифференциации от представителей родов Pseudomonadaceae, декарбоксилируют лизин и орнитин, но не дигидролизуют аргинин - тесты дифференциации от представителей других семейств (Aeromonas spp., Plesiomonas spp., Enhydrobacter spp., Photobacterium spp.) и отдельных видов рода Vibrio.

Помимо этого, холерные вибрионы расщепляют до кислоты без газа сахарозу, маннозу, крахмал, маннит, не расщепляют арабинозу, салицин, дульцит, инозит. В отдельных случаях ферментацию маннозы холерными вибрионами возможно определить только в анаэробных условиях. Холерные вибрионы восстанавливают нитраты в нитриты, образуют индол, разжижают желатину, продуцируют нейраминидазу, лецитиназу, триглицероллипазу.

V. cholerae по наличию специфического О-антигена распределяются на серологические группы. В настоящее время известно 206 серологических О групп холерных вибрионов. Возбудителями холеры являются холерные вибрионы О1 и О139 серологических групп. Холерные вибрионы других не О1/не О139 серологических групп могут вызывать спорадические или групповые случаи диарей, не склонные к эпидемическому распространению.

Холерные вибрионы О1 серогруппы по различиям в полисахаридном компоненте О-антигена делятся на три серовара: Огава, Инаба и Гикошима. Серовар Гикошима не стабилен и реверсирует в один из основных сероваров, преимущественно - Огава. Известен R-антиген холерных вибрионов, описаны штаммы, агглютинирующиеся RO сывороткой и не агглютинирующиеся сыворотками О1, Огава или Инаба.

У холерных вибрионов имеется общий жгутиковый Н-антиген.

Холерные вибрионы в пределах О1 серогруппы делятся на два биовара: классический и эльтор, имеющие существенные фенотипические и генетические отличия. Деление на биовары основывается на чувствительности к холерным диагностическим бактериофагам - классическому и эльтор, чувствительности к 50 ед/мл полимиксина В, агглютинации куриных эритроцитов, образовании ацетилметилкарбинола в реакции Фогес-Проскауэра.

Холерные вибрионы являются носителями умеренных фагов с низкой литической активностью. Известны фаги, активные в отношении холерных вибрионов О1 и не О1, включая О139 серологическую группу, а также с более узким спектром литического действия, в пределах отдельных групп штаммов, например ctx и ctx холерных вибрионов.

Одним из основных факторов вирулентности (и эпидемической значимости) холерных вибрионов, определяющих тяжесть клинической картины при холере, является холерный энтеротоксин или СТ (от англ. - cholera toxin), синтез которого контролируется кластером генов ctxAB.

Описан ряд дополнительных токсинов: Zot и Асе токсины, цитотоксический комплекс RTX, цитотонический фактор Cef, термостабильный токсин ST, NMDCY токсин, шигаподобный токсин Sit, WО7 токсин, cholix toxin. Не менее важным фактором вирулентности холерных вибрионов являются токсин-корегулируемые пили адгезии или TCP (от англ. - toxin-coregulated pilus) - ключевой фактор колонизации. За синтез пилей TCP отвечают гены tcpA-F, среди них ген tcpA - за биосинтез основной субъединицы пилей.

Нетоксигенные штаммы холерных вибрионов обладают гемолитической активностью, которая включает активность нескольких компонентов: рициноподобного галактозоспецифичного лектина (hlyA) и комплекса ферментов гидролаз, ведущим из которых является липаза (lipА). Гемолитическая активность является ведущим фактором патогенности у штаммов возбудителей холеры О1 и О139 серогрупп, не имеющих ген холерного токсина. Такие штаммы могут вызывать спорадические случаи диареи различной степени тяжести, но не склонны к широкому распространению. Способность к гемолизу эритроцитов барана в тесте Грейга, коррелирующая с липазной активностью, является визуализированным тестом, свидетельствующим о том, что штамм не может вызывать тяжёлую клиническую картину холеры и не способен к широкому эпидемическому распространению.

Понятие эпидемической значимости базируется на определении комплекса показателей:

прямые - выявление гена холерного токсина в ПЦР и определение активности его продукции на кроликах-сосунках;

косвенные - отсутствие гемолитической, липазной активности, поздняя ферментация маннита, высокая адгезивная активность in vitro (на модели эритроцитов).

Холерные вибрионы имеют две хромосомы: первую (или большую размером 2960 т.п.н.) и вторую (или малую размером 1070 т.п.н.). На большой хромосоме V. cholerae расположены гены патогенности: ctxAB, кодирующий биосинтез СТ, гены, определяющие продукцию дополнительных холерных токсинов, гены tcpA-F, кодирующие продукцию TCP, а также гены, необходимые для репликации, транскрипции, репарации ДНК, биосинтеза клеточной стенки и О-антигена. Биосинтез О1 антигена определяет кластер генов, обозначенный как wbe. Продукция О139 антигена кодируется кластером генов, также локализованном на большой хромосоме и имеющим обозначение wbf. Выявление с помощью ПЦР генов wbe и wbf, специфичных для холерных вибрионов О1 и О139 серологических групп, позволяет определить серогруппу возбудителя холеры. На малой хромосоме, помимо генов с неустановленной функцией, локализованы структурные гены hlyA, отвечающие за синтез термолабильного гемолизина, а также остров интегронов, содержащий гены, кодирующие антибиотикоустойчивость, и участвующий в приобретении новых генов. Следует отметить, что ген hlyA присутствует в хромосоме всех штаммов V. cholerae, как способных к биосинтезу термолабильного гемолизина, так и не продуцирующих этот белок. Однако в гене hlyA холерных вибрионов классического биовара, в отличие от такового V. cholerae эльтор, имеется делеция протяженностью 11 п.н., вследствие чего продукция гемолизина вибрионами этого биовара невозможна.

Штаммы холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, содержащие гены ctxAB и tcpA-F, вызывают холеру и являются эпидзначимыми. Эти штаммы не лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Эпидемически не значимые штаммы холерных вибрионов, не содержащие генов ctxAB и tcpA-F, лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Нетоксигенные (не содержащие гена холерного токсина) ctxAB варианты холерных вибрионов О1, также как и других серогрупп, могут вызывать спорадические (единичные) или групповые (при общем источнике инфицирования) заболевания, не склонные к эпидемическому распространению.

Читайте также: