Правила забора материала на энтеровирусную инфекцию энтеровирусной инфекции

Обновлено: 24.04.2024

при медицинском наблюдении за лицами, общавшимися с больными.

Все больные с подозрением на энтеровирусную инфекцию подлежат обязательному лабораторному обследованию в первые дни с момента установления первичного диагноза. Методы и объем лабораторных исследований определяются лечащим врачом в зависимости от клинической формы энтеровирусной инфекции. Окончательный диагноз устанавливается по клиническим, эпидемиологическим данным и результатам лабораторных исследований.

Учет и регистрация

Первичными документами учета информации о заболевании являются: медицинская карта амбулаторного больного (ф. 025у); история развития ребенка (ф. 112 у), медицинская карта (ф. 026 у). Случай заболевания регистрируется в журнале учета инфекционных заболеваний (ф. 060 у).

Экстренное извещение в ЦГЭ

Больные энтеровирусными инфекциями подлежат индивидуальному учету в территориальных ЦГЭ. Врач, зарегистрировавший случай заболевания, направляет в ЦГЭ экстренное извещение (ф. 058у): первичное – устно, по телефону в городе в первые 12 часов, на селе – 24 часа, окончательное – письменно, не позже 24 часов с момента установления установления окончательного диагноза,

Обязательной госпитализации подлежат больные с неврологическими формами энтеровтрусной инфекции (серозные менингиты, менингоэнцефалиты, вирусные энцефалиты).

В остальных случаях госпитализация проводится по клиническим показаниям, либо при наличии угрозы распространения инфекции по месту жительства больного (эпидемические показания).

В соответствии с протоколами (стандартами) обследования и лечения больных инфекционными и паразитарными болезнями, до клинического выздоровления и прекращения выделения возбудителей.

Осуществляется после клинического выздоровления. Необходимость лабораторного обследования перед выпиской решается лечащим врачом.

Порядок допуска в организованные коллективы и на работу

Работники пищевых объектов, объектов водообеспечения, дети, посещающие детские и подростковые организованные коллективы (детские дошкольные организации, школы-интернаты, летние оздоровительные учреждения, санатории) допускаются на работу и посещению данных учреждений после выписки из стационара или лечения на дому на основании справки о выздоровлении.

Реконвалесцентные носители, выделяющие энтеровирусы с фекалиями после клинического выздоровления из категории лиц, указанных выше, допускаются к работе и посещению детских и подростковых организованных коллективов при условии организации ежедневного медицинского наблюдения за ними в течение 10 дней.

Проводится по клиническим показаниям: за реконвалесцентами, перенесшими энтеровирусные инфекции с поражением нервной системы, сердца, печени, поджелудочной железы, глаз. Длительность наблюдения составляет от 1 года до 3-х лет.

2. Мероприятия, направленные на механизм передачи

В домашних очагах комната, в которой находится больной, места общего пользования подвергаются ежедневной влажной уборке с применением моюще-дезинфицирующих средств бытовой химии и проветриванию. Для больного выделяют отдельную посуду, ограничивается число предметов, с которыми больной может соприкасаться. Посуду, предметы ухода моют, постельные принадлежности и белье больного стирают отдельно. Разъяснительную работу о необходимости и порядке проведения проводит медицинский работник территориального ЛПО или помощник эпидемиолога ЦГЭ.

В детских организованных коллективах организуется и проводится под контролем медицинского работника учреждения на протяжении 10 дней с момента изоляции больного из коллектива с применением разрешенных дезинфицирующих средств по вирулицидному режиму.

В домашних очагах проводится после госпитализации или выздоровления больного с применением моюще-дезинфицирующих средств бытовой химии силами проживающих в данном очаге. Разъяснительную работу о необходимости и порядке проведения проводит медицинский работник территориальной ЛПО или помощник эпидемиолога ЦГЭ.

В детских дошкольных организациях, школах-интернатах, летних оздоровительных учреждениях и санаториях для детей проводится при регистрации каждого случая силами ЦДС или дезинфекционного отдела территориального ЦГЭ в течение первых суток с момента получения экстренного извещения с применением разрешенных дезинфицирующих средств по вирулицидному режиму.

Лабораторное исследование внешней среды

Необходимость и объем лабораторного обследования внешней среды определяет врач-эпидемиолог (помощник врача-эпидемиолога). Как правило, проводят отбор проб воды, продуктов, подозреваемых в качестве фактора передачи, для вирусологических и ПЦР-исследований.

3. Мероприятия, направленные на лиц, общавшихся с источником инфекции

К числу общавшихся причисляются:

в детских дошкольных организациях, школах-интернатах, летних оздоровительных учреждениях, санаториях – дети и персонал, находившиеся в тесном контакте с больным энтеровирусной инфекцией (по группе, комнате, классу и т.д.);

на предприятиях пищевой промышленности и к ним приравненным, объектам водообеспечения – лица, работающие по специальностям, связанным с технологическим процессом производства пищевых продуктов и водоподготовки, контактировавшие с больным энтнровирусной инфекцией на рабочем месте;

в домашних очагах – лица, проживающие совместно с заболевшим.

Осуществляется участковым врачом и включает опрос, оценку общего состояния, осмотр, пальпацию кишечника, измерение температуры тела. Уточняется наличие симптомов заболевания и дата их возникновения.

Сбор эпидемиологического анамнеза

Выясняется время и характер общения с заболевшим, факт употребления продуктов, подозреваемых в качестве фактора передачи (в т.ч. не кипяченой питьевой воды).

Медицинскому наблюдению подлежат:

все общавшиеся в организованных очагах (детские дошкольные организации, школы-интернаты, летние оздоровительные учреждения, санатории, предприятия пищевой промышленности и к ним приравненные, объекты водообеспечения);

общавшиеся в домашних очагах дети дошкольного возраста и взрослые из категории лиц, указанных выше.

Медицинское наблюдение осуществляется медицинским работником указанных выше учреждений или территориальной ЛПО. Длительность медицинского наблюдения составляет 10 дней с момента изоляции последнего заболевшего энтеровирусной инфекцией.

В организованных коллективах составляются списки контактных, в которых предусмотрены графы с отметками о ежедневных результатах осмотра (общее состояние, термометрия, осмотр кожи и слизистых, состояние стула)

Результаты осмотра общавшихся в квартирных очагах фиксируются в амбулаторной карте больного (ф. 025у).

При регистрации одномоментных или вторичных (два и более) случаев заболеваний в организованных очагах энтнолвтрусной инфекции в течение первых 2-х суток с момента регистрации проводится однократный осмотр общавшихся врачом-инфекционистом, детей до 15 лет – дополнительно врачом-невропатологом.

Мероприятия проводятся в течение 10 дней после изоляции больного. Прекращается прием новых и временно отсутствовавших детей в группу ДДУ, из которой изолирован больной. Запрещается перевод детей из данной группы в другие группы после изоляции больного. Не допускается общение с детьми других групп. Запрещается участие карантинной группы в общих культурно-массовых мероприятиях. Организуются прогулки карантинной группы и возвращение из них в последнюю очередь, соблюдение групповой изоляции на участке, получение пищи в последнюю очередь.

Тест используют в целях лабораторного подтверждения энтеровирусной инфекции (выявляется общая для различных видов и серотипов энтеровирусов нуклеотидная последовательность).

Энтеровирусы – род РНК-содержащих вирусов, который относится к семейству пикорнавирусов (Picornaviridae). Энтеровирусной инфекции подвержены лица всех возрастов, но наиболее восприимчивы к ней дети. Эта инфекция часто может оставаться нераспознанной, поскольку в большинстве случаев протекает бессимптомно (у 85% инфицированных лиц) либо в легкой или среднетяжелой форме, напоминающей обычную простуду (в 12-14% случаев). Тяжелое течение заболевания (спектр клинических форм см. ниже) отмечают у 1-3% инфицированных. Потребность в лабораторном подтверждении энтеровирусной инфекции для отличия от других видов патологии возникает при тяжелых формах заболевания (в том числе менингитах, энцефалитах) или при эпидемических вспышках инфекции.

Среди энтеровирусов выделяют различные виды и серотипы. Заболеваемость, связанная с полиомиелитными энтеровирусами (полиовирусами), во многих странах, включая Россию, практически ликвидирована благодаря эффективной вакцинации. Среди неполиомиелитных энтеровирусов потенциальную опасность для человека представляют 70 серотипов.

Вид	Число серотипов	Серотипы
A	16	Коксаки A2–8, 10, 12, 14, 16 Энтеровирусы 71, 76, 89–91
B	41	Коксаки A9, Коксаки B1–6 ЕСНО 1–7, 9, 11–21, 24–27, 29–33 Энтеровирусы 69, 73–75, 77, 78
C	11	Коксаки A1, 11, 13, 15, 17–22, 24
D	2	Энтеровирусы 68 и 70

Пик заболеваемости, связанной с энтеровирусами, приходится на лето и осень. Основной механизм передачи – фекально-оральный (включает пищевой, водный и бытовой (через предметы обихода) пути), возможен воздушно-капельный путь передачи инфекции. Относительная роль каждого из путей передачи может варьировать в зависимости от разновидности энтеровирусов, сроков после начала болезни, жизненных условий. Возможна вертикальная (трансплацентарная) передача инфекции от матери к плоду во время беременности.

Размножение вирусов начинается в эпителии желудочно-кишечного тракта. Из желудочно-кишечного тракта вирусные частицы попадают в кровоток и поражают внутренние органы, где проходит вторая волна размножения вируса. Энтеровирусы можно обнаружить в секретах дыхательных путей и фекалиях инфицированных лиц, иногда – в крови и спинномозговой жидкости.

Особенностью энтеровирусной инфекции является то, что различные клинические формы заболевания могут быть обусловлены представителями одного серотипа, а сходные клинические проявления могут вызывать разные серотипы вирусов. Лишь для некоторых серотипов энтеровирусов характерен определенный комплекс симптомов, который не наблюдается при инфицировании другими разновидностями. Многие из возможных клинических проявлений не являются специфичными для энтеровирусной инфекции и встречаются при других инфекционных заболеваниях.

Менее опасные формы заболевания: трехдневная лихорадка с сыпью или без, герпангина, плевродиния, везикулярный фарингит, конъюнктивит, увеит, гастроэнтерит.
Потенциально тяжелые формы заболевания: менингит, энцефалит, острый паралич, септикоподобные состояния у новорожденных, миокардит, перикардит, гепатит, хронические инфекции у лиц с иммунодефицитами.

Основные методы лабораторной диагностики энтеровирусной инфекции – выделение энтеровирусов в культуре клеток и обнаружение РНК энтеровирусов методом ПЦР. По сравнению с методом выделения и идентификации вируса с применением культуры клеток, ПЦР-исследование обладает большей чувствительностью и требует меньших временных затрат.

Присутствие энтеровирусов в фекалиях не является специфичным только для периода острых клинических проявлений, вирусная РНК в пробах кала может обнаруживаться до одного месяца и более от начала инфицирования. Следует учитывать, что, в соответствии с указаниями Роспотребнадзора, обнаружение РНК энтеровирусов в образцах фекалий (в отсутствие эпидемической вспышки) не может служить основанием для лабораторного подтверждения этиологии серозных менингитов, заболеваний верхних дыхательных путей, диарейных инфекций и лихорадочных заболеваний неясной этиологии вследствие высокой частоты носительства энтеровирусов в популяции.

Предпочтительно взятие пробы в первые дни от начала заболевания, хотя присутствие энтеровирусов в фекалиях может сохраняться до месяца и более после инфицирования.

Вид	Число серотипов	Серотипы
A	16	Коксаки A2–8, 10, 12, 14, 16 Энтеровирусы 71, 76, 89–91
B	41	Коксаки A9, Коксаки B1–6 ЕСНО 1–7, 9, 11–21, 24–27, 29–33 Энтеровирусы 69, 73–75, 77, 78
C	11	Коксаки A1, 11, 13, 15, 17–22, 24
D	2	Энтеровирусы 68 и 70

Менее опасные формы заболевания: трехдневная лихорадка с сыпью или без, герпангина, плевродиния, везикулярный фарингит, конъюнктивит, увеит, гастроэнтерит.
Потенциально тяжелые формы заболевания: менингит, энцефалит, острый паралич, септикоподобные состояния у новорожденных, миокардит, перикардит, гепатит, хронические инфекции у лиц с иммунодефицитами.

Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения. Забор производят в стерильные одноразовые флаконы, пробирки, контейнеры, стерильными инструментами.

Образцы фекалий. Используют пробы фекалий массой (объемом) 1-3 г (1-3 мл). Фекалии забирают из предварительно продезинфицированного горшка или подкладного судна. Пробу в количестве 1 грамма (примерно) отдельным наконечником с аэрозольным барьером или одноразовыми лопатками переносят в специальный стерильный флакон. Две пробы фекалий для выделения вируса отбирают в течение 7 дней после начала болезни, но не позднее 14 дней, с интервалом 24-48 часов.

Мазки из ротоглотки. Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой.

После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки.

Спинномозговая жидкость. Забор СМЖ проводится в первые дни болезни при наличии клинических показаний в асептических условиях с использованием одноразовых пункционных игл. Для исследования отбирают 1 мл СМЖ.

Кровь. Первую пробу крови (5 мл) для серологической диагностики берут как можно раньше после начала болезни, вторую - на 3-4-й неделе, в стадии реконвалесценции.

Содержимое везикул. Для взятия материала везикулы участок кожи протирают спиртом. Пузырек прокалывают иглой или вскрывают скальпелем, собирают вытекающую жидкость на ватный тампон, которым также протирают везикулу. Для повышения информативности исследования необходимо собирать одним тампоном материал не менее чем с трех везикул. Тампон помещают в 1 мл транспортной среды.

В случае летального исхода забирают секционный материал - ткани головного, спинного и продолговатого мозга и варолиева моста, содержимое кишечника и ткань кишечной стенки. При необходимости исследуют другие материалы (ткань сердечной мышцы, печени, легких, и пр.). Для иссечения тканей используют набор стерильных инструментов для каждой пробы. Объём пробы (кусочка) из тканей центральной нервной системы должен составлять примерно 1 см 3 ; из толстой кишки иссекается сегмент длиной 3-5 см, содержащий фекальные массы. Каждую пробу помещают в отдельный стерильный флакон с транспортировочной средой.

Лабораторная диагностика энтеровирусных инфекций проводится путем выделения вируса из организма больного, а также по нарастанию титра вирусспецифических антител. Вирусы выделяют из фекалий, крови, смывов носоглотки и другого материала в зависимости от периода заболевания одновременно на первичных и перевиваемых культурах клеток, а также путем заражения мышей-сосунков. Для идентификации вируса применяется реакция нейтрализации.

Гемагглютинирующие варианты вирусов ECHO и Коксаки можно идентифицировать с помощью РТГА, которая, подобно реакции вируснейтрализации, характеризуется типоспецифичностью.

Выделение энтеровирусов из организма бoльнoгo особенно из фекальных масс, не является абсолютным основанием для постановки диагноза, учитывая распространение бессимптомного носительства. Поэтому необходима серологическая диагностика с использованием парных сывороток, взятых в первые дни и на 2—3-й неделе после начала заболевания. В положительном случае отмечается нарастание титра антител во второй сыворотке не менее чем в 4 раза в реакциях нейтрализации, РСК, РТГА.

Риновирусы

Эта группа вирусов впервые была выделена в 1960 г. от людей, больных острым ринитом.

Вирионы риновирусов имеют сферическую форму и кубический тип симметрии, достигая 20—30 нм в диаметре. Они похожи на энтеровирусы, но в отличие от них теряют свои инфекционные свойства в кислой среде. Хорошо сохраняются при низких температурах.

Для культивирования риновирусов используют культуру клеток, приготовленную из фибробластов легких эмбриона человека или эпителия трахеи человека и хорьков. В оптимальных условиях культивирования проявляется ЦПД.

Выделено 113 серотипов риновирусов, многие из которых имеют идентичные антигены, ответственные за перекрестные серологические реакции. Они не обладают гемагглютинирующими свойствами.

Патогенез заболеваний человека и иммунитет. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Риновирусы локализуются в эпителиальных клетках слизистой оболочки носа, а у детей — и бронхов, вызывая насморк, бронхиты и бронхопневмонии.

После заболевания сохраняется непродолжительный иммунитет, который определяется не столько сывороточными антителами, сколько секреторными иммуноглобулинами типа IgA. Специфическая профилактика не разработана.

Лабораторная диагностика основана на выделении вируса в чувствительных культурах клеток. Для экспресс-диагностики применяется иммунофлюоресцентный метод, который позволяет обнаружить вирусный антиген в цитоплазме эпителиальных клеток слизистой оболочки.

Афтовирусы

К роду афтовирусов относится вирус ящура — возбудитель высококонтагиозного заболевания парнокопытных домашних животных, вирусная природа которого была установлена еще в 1898 г. Ф. Леффлером и П. Фрошем. Вирус ящура мало чем отличается от других пикорнавирусов. Существует 7 серотипов вируса яищфа, отличающихся друг от друга типоспецифическими антигенами.

Патогенез заболеваний человека. Вирус репродуцируется в средних слоях эпителия кожи и слизистых оболочек. Затем проникает в кровь, вызывая вирусемию. При этом может произойти поражение миокарда и паренхиматозных органов.

После перенесения заболевания сохраняется непродолжительный типоспецифический иммунитет (около 1 —1,5 лет).

Экология и распространение. Источником инфекции являются больные животные. Человек заражается главным образом при уходе за ними, реже — при употреблении в пищу зараженных продуктов (сырого молока и мяса) без достаточной термической обработки.

Вирус ящура в течение 2 мес сохраняется в некоторых пищевых продуктах (масле, жирах), а также в сгустках крови и костном мозге погибших животных.

Лабораторная диагностика. Исследуемый материал (содержимое везикул) вводится в кожу стопы морской свинки. Через 24—48 ч в месте введения, а также в полости рта появляются везикулы. Вирус можно выделить в культуре клеток. Серодиагностику проводят в реакции вируснейтрализации и РСК с парными сыворотками.

Дополнительные материалы по лабораторной диагностике энтеровирусной инфекции

Кишечные вирусы (энтеровирусы) человека входят в род Enterovirus семейства Picornaviridae. К ним относятся вирусы полиомиелита (3 серотипа), Коксаки А (24 серотипа), Коксаки В (6 серотипов), ECHO (34 серотипа) и энтеровирусы человека 69—72-го серотипов. Энтеровирус 70 вызывает острый геморрагический конъюнктивит, энтеровирус 72 — вирус гепатита А. В род Enterovirus входят также кишечные вирусы животных (крупного рогатого скота, обезьян, свиней, мышей) и насекомых. Энтеровирусы животных характеризуются видовой специфичностью.

Обратите внимание: Коксаки А 23 идентичен ЕСНО 9. ЕСНО 28 отнесен к риновирусам, ЕСНО 34 – вариант Коксаки А 24

Энтеровирусы вызывают у человека поражение центральной нервной системы (энцефалит, менингоэнцефалит, полиомиелит, менингит), желудка и кишок (диарея, гепатит, панкреатит), а также дыхательных путей (ринит, фарингит, пневмония новорожденных и др.), сердечно-сосудистой системы (миокардит, перикардит). Возможно также развитие герпетической ангины, экзантемы, везикулярного стоматита, миалгии и конъюнктивита. Различные энтеровирусы могут обусловливать одинаковые клинические проявления, в то же время один энтеровирус способен привести к развитию разных клинических синдромов.

Материалом для исследования служат фекалии, смывы с носовой части глотки, спинномозговая жидкость, кровь, сыворотка, содержимое везикул, моча, асцитическая жидкость. От трупа берут на исследование кровь, спинномозговую жидкость, ткань спинного и продолговатого мозга, варолиева моста, кусочки кишок и их содержимое, кусочки печени, селезенки, легкого, поджелудочной железы, миокарда, лимфатические узлы. Материал берут в первые часы болезни, от трупа — не позднее чем через 3—4 ч после смерти.

Кровь (около 10 мл) для вирусологического анализа и приготовления сыворотки берут натощак в начале болезни, а затем спустя 3—4 недели.

Фекалии (4—6 г) собирают с интервалом 1—2 дня (можно использовать флаконы из-под антибиотиков). Готовят 10 % суспензию в растворе Хенкса, встряхивают и осветляют центрифугированием в течение 30 мин при 3000 об/мин (при возможности материал центрифугируют при 10 000 об/мин). Надосадочную жидкость обрабатывают эфиром (к осветленной суспензии фекалыий добавляют 50 % по объему диэтилового эфира, смесь оставляют в холодильнике под ватно-марлевой пробкой в течение 12-16 часов) и антибиотиками.

Ректальные тампоны помещают в пробирку с 1—2 мл раствора Хенкса или Эрла, споласкивают, отжимают. Материал центрифугируют и обрабатывают эфиром и антибиотиками.

Глоточный смыв в объеме 20 мл получают при 2-кратном (с интервалом 3 мин) полоскании горла стерильным солевым раствором или дистиллированной водой. Тампонами протирают заднюю стенку глотки, миндалины и небные дужки и погружают в пробирку с 1—2 мл раствора Хенкса. Материал центрифугируют и обрабатывают эфиром и антибиотиками.

Стерильную прозрачную спинномозговую жидкость (около 3 мл) используют для выделения вируса без предварительной обработки. Мутную спинномозговую жидкость, а также содержащую эритроциты центрифугируют. Мочу в объеме 10 мл берут в стерильный сосуд в середине акта мочеиспускания и обрабатывают антибиотиками.

Пробы секционного материала растирают в стерильной ступке, готовят 20 % суспензию в растворе Хенкса, центрифугируют 5—10 мин при 2000 об/мин.

Материал обрабатывают антибиотиками — пенициллином (1000 ЕД/мл) и стрептомицином (500 ЕД/мл) в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем используют его для выделения вируса. Часть материала замораживают и хранят при температуре —70 °С. Многократное замораживание и оттаивание недопустимо, так как приводит к инактивации вируса.

Экспресс-диагностика не нашла широкого применения при энтеровирусных инфекциях из-за особенностей их патогенеза. Описано применение РИФ для исследования клеток спинномозговой жидкости. При ротавирусных инфекциях применяют ЭМ и ИЭМ (см. с. 243).

Выделение вируса проводят в культурах клеток и на однодневных белых мышах (табл.).

Читайте также: