Препараты для диагностики стафилококковых инфекций

Обновлено: 24.04.2024

Комплекс растворимых термостабильных АГ стафилококка.

Для лечения больных с

Антитела – антитоксины. Сыворотка иммунная, лечебная

Плазма для лечения

больных стафилококковым сепсисом и другими

острыми стафилококковыми заболеваниями

Антитела к стафилококковому экзотоксину.

Для лечения больных

стафилококковым сепсисом и другими острыми

Вопросы для самоконтроля:

Перечислите патогенные кокки. Почему их называют пиогенными кокками?

Каковы морфологические, тинкториальные и культуральные свойства стафилококков?

Какие заболевания вызывают стафилококки? Какой материал берут на исследование при различных стафилококковых инфекциях?

Какова классификация стафилококков?

Перечислите факторы патогенности стафилококков.

Занятие 9

ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СТРЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГНОЯ (2 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ).

Цель: Изучить методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций. Ознакомиться с методами специфической профилактики и терапии стрептококковых инфекций.

Стрептококки

Род Streptococcus, семейство Streptococcaceae включает 21 вид. Клетки стрептококков имеют шаровидную или овальную форму, диаметром 0,6-1 мкм. Располагаются в виде цепочек разной длины или попарно. Грамположительны. Хемоорганотрофы. Требовательны к питательным средам. Стрептококки культивируются на питательных средах с добавлением глюкозы, сыворотки или крови. На поверхности плотных сред образуют мелкие, диаметром до 1 мм, бесцветные колонии, в жидких - дают придонный, пристеночный рост, оставляя среду прозрачной. По характеру роста на кровяном агаре различают стрептококки: бета-гемолитические - вокруг колоний образуется прозрачная зона гемолиза; альфа-гемолитические - вокруг колоний образуется неширокая, зеленоватая зона; негемолитические - среда не изменяется. Стрептококки обладают многими факторами патогенности:

2) антихемотахсический фактор

Из ферментов, определяющих патогенность стрептококков, наибольшее значение имеют гиалуронидаза и стрептокиназа (фибринолизин), которые способствуют распространению и генерализации процесса.

Схема 6

Стрептококки серогруппы А образуют ряд токсинов:

1) О-стрептолизин, 2) S-стрептолизин, 3) лейкоцидин и др.

Для скарлатинозного стрептококка характерно наличие эритрогенина-токсина, вызывающего покраснение кожи или сыпь.

Наиболее значительная роль в инфекционных заболеваниях принадлежит гемолитическому стрептококку (группа А), так как он является возбудителем сепсиса, рожистого воспаления, ревматизма, различных гнойных процессов.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

В связи с множественной устойчивостью клинических штаммов возбудителей к химиотерапевтическим препаратам перед началом этиотропной терапии необходимо определение антибиотикочувствительности выделенного штамма стафилококка.

Химиотерапевтические схемы лечения инфекций, которые обусловлены стафилококками, чувствительными к метициллину (оксациллину) и устойчивыми к метициллину (оксациллину), различны. Для лечения первой группы стафилококковых инфекций могут быть использованы антибиотики: цефалоспорины 1-4 поколения, полусинтетические пенициллины, устойчивые к пенициллиназам (метициллин, оксациллин), аминопенициллины в сочетании с клавулановой кислотой (амоксициллин/клавуланат, ампициллин/сульбактам), карбапенемы, гликопептиды, фторхинолоны, аминогликозиды, макролиды, миноциклин, триметоприм/сульфаметоксазол. Химиотерапевтический спектр воздействия на метициллинустойчивые стафилококки очень узок и включает: гликопептиды (ванкомицин, тейкопланин) и фузидиевую кислоту.

При хронических формах стафилококковых инфекций рекомендуют аутовакцину, представляющую собой инактивированную взвесь чистой культуры клинического штамма, выделенного от данного пациента; а также стафилококковую инактивированную, поливалентную вакцину из взвеси коагулазоположительных штаммов стафилококка.

Для иммунотерапии хронических стафилококковых инфекций применяют также антифагин стафилококковый (фильтрат культур инактивированных вирулентных штаммов стафилококков).

Для лечения стафилококковых инфекций и их профилактики у беременных, новорожденных, ослабленных лиц с иммунодефицитом, используется очищенный, адсорбированный на гидроксиде алюминия стафилококковый анатоксин.

В случаях тяжелых интоксикаций и сепсиса, показано применение человеческого антистафилококкового иммуноглобулина из крови доноров, иммунизированных стафилококковым анатоксином.

Для лечения и санации стафилококконосителей местно и парентерально используют стафилококковый бактериофаг.

Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций

Используют: бактериоскопический, бактериологический, серологический и биологический методы исследований.

Бактериоскопический метод. В качестве материала для исследования берут гнойное отделяемое, мокроту, в случае сепсиса – кровь. Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Предварительный диагноз основывается на выявлении грамположительных шаровидных кокков размером 0,6-1,0 мкм, располагающихся преимущественно цепочками и попарно.

Бактериологический метод. Проводят посев исследуемого материала (гной, мокрота, моча, кровь и др.) на специальные среды: сахарный бульон и агар, для выявления гемолитических свойств – на кровяной агар.

Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным и токсигенным свойствам. Наиболее важными тестами являются: вид гемолиза на кровяном агаре; каталазная активность; чувствительность к бацитрацину, сульфаметоксазолу и триметоприму; САМР-тест; гидролиз гиппурата натрия; желчно-эскулиновый тест; рост в бульоне с 6,5% NaCl; наличие пирролидонилариламидазы (PYR), и характер группового полисахаридного антигена.

Каталазная активность определяется по выделению пузырьков газа при смешивании исследуемой культуры с каплей 3-10% раствора перекиси водорода на предметном стекле.

САМР тест основан на способности стрептококков продуцировать экстрацеллюлярный протеин, усиливающий лизис эритроцитов на кровяном агаре при совместном культивировании с золотистым стафилококком, продуцирующим -лизин.

Для определения гидролиза гиппурата натрия петлю чистую культуру исследуемого штамма суспендируют в 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата натрия, а через 2 часа инкубации добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в смеси бутанола и ацетона (1:1). Положительным результатом является пурпурное окрашивание в течение 10 минут.

Для проведения желчно-эскулинового теста исследуемую культуру засевают на питательный агар с 40% желчи, 0,1 % эскулина и 0,05% цитрата железа. Положительным результатом является образование в питательной среде комплекса темно-коричневого цвета.

С целью обнаружения фермента пирролидонилариламидазы (PYR) исследуемую культуру засевают на питательный бульон, содержащий 0,01% L-пирролидонил--нафтиламида. Положительной реакцией считают ярко-красное окрашивание среды при добавлении капли диметиламиноациннамальдегида через 4 часа.

Антигенную дифференциацию стрептококков проводят по группоспецифическому полисахариду клеточной стенки с помошью антигенных диагностикумов в реакциях преципитации и латекс-агглютинации.

Серологический метод. Для обнаружения пиогенного стрептококка в патологическом материале применяют реакцию коагглютинации и прямую реакцию иммунофлуоресценции (РИФ).

Реакция коагглютинации основывается на применении группоспецифических антител, сорбированных на клетках золотистого стафилококка, против -гемолитического стрептококка. Тампон с исследуемым материалом вначале опускают в раствор для экстрагирования полисахаридного стрептококкового антигена. Затем полученный экстракт на предметном стекле смешивают с диагностикумом и через 2-3 минуты учитывают результат. Положительной реакцией является выпадение хлопьев и просветление взвеси.

Для постановки РИФ используют меченные флуорохромом противострептококковые антитела. Реакцию используют для экспресс-диагностики в нативном материале и идентификации чистой культуры возбудителя.

Биологический метод. Используют для диагностики пневмококковых инфекций. С этой целью внутрибрюшинно заражают белых мышей, обладающих высокой чувствительностью к возбудителю, а затем через 1-5 дней из органов погибших животных делают мазки-отпечатки, проводят посев крови и перитонеального экссудата на питательные среды. Предварительный диагноз ставят при обнаружении ланцетовидных диплококков, окруженных капсулой (отличительная особенность S.pneumoniae). Последующую идентификацию проводят путем бактериологических и серологических исследований.

Плазмокоагулазоположительные: Золотистый стафилококк - патогенен для чел. и жив.

Плазмокоагулазоотрицатльные: S. saprophiticus, S. Homonis, S. Haemolyticus – патогенны для чел.

-взаимное расположение в виде гроздей винограда;

Культуральные св-ва:

Не требоват. к пит. средам. Хорошо растут на универсальных: МПА, МПБ.

Для быстрого роста, для выделения чистой культуры исп. спец. пит. среды:

1) Молочно-желточносолевой агар (МЖСА); Стафилококки образуют колонии S-формы (правильная, выпуклая форма, гладкая, блестящая поверхность, края ровные), все колонии окрашены в золотистый цвет.

2) Кровяной МПА. Вокруг колонии стафилококка образуется зона гемолиза, (разрыв мембраны эритроцита) что свидетельствует о наличие у стафилококка мембраноповреждающих экзотоксинов.

Отличительная особенность: стафилококки растут в пит. среде при наличие в ней до 15% NaCl.

На плотных пит. средах – круглые выпуклые пигментированные колонии с ровными краями.

На жидких пит. средах – равномерное помутнение.

Антигенными св-вами обладают в-ва КС: пептидогликан, тейхоевые к-ты, белок А, а также капсула.

Наиболее важное значение имеет АГ-белок А, кот. взаимодействует с Fc-фрагментом Ig G. Это носит применение стафилококка с белком А в р-ции коагглютинации. В этой р-ции исп. культура стафилококков, несущая на себе известные АТ, в этом случае можно определить неизвестные АГ.

Факторы патогенности:

1). Факторы адгезии и колонизации;

2). Факторы инвазии;

4). Наличие комплекса экзотоксинов: мембраноповреждающие экзотоксины, эксфолиативные экзотоксины типа А и Б, истинный лейкоцитин (разрушает мембрану лейкоцитов), экзотоксин токсического шока.

5). Наличие энтеротоксинов: стафилококки, выделяющие энтеротоксины, вызывают тяж. пищевые отравления по типу интоксикации. Энтеротоксины обладают особыми св-вами: 1).термостабильны; 2).устойчивы при рН от 3 до 10; 3). Не разрушаются ферментами ЖКТ; 4). При обработке формалином и температурой не образуют анатоксин.

6). Наличие перекрёстно-реагирующих АГ;

7). Обладают выраженными аллергенными св-вами, вызывают р-ции немедленного и замедленного типа.

Эпидемиология:

Антропоноз, источник – больной человек или носитель.

Пути заражения: прямой и непрямой контакт, алиментарный, воздушно-капельный.

Стафилококки вызывают более 100 нозологических форм.

Местные гнойно-воспалит. процессы в коже, подкожной клетчатке, лимф. узлах (фурункулы, карбункулы, нагноения ран, маститы – воспаления молочных желёз, абсцессы – гнойное воспаление тканей с их расплавлением и образованием гнойной полости, пиодермии).

Гнойно-воспалит. процессы в органах дыхания (бронхиты, пневмонии – воспаление альвеол инфекционного происхождения).

Поражают ухо, носоглотку, придаточные пазухи (отит, ангина, гайморит, тонзиллит – воспаление нёбных миндалин).

Поражают органы зрения (конъюнктивит, язвы роговицы).

Поражают ЦНС (менингит, абсцессы мозга).

Поражают сердечно-сосудистую сис-му (эндокардит, миокардит).

Поражают ЖКТ (энтероколит, пищ. отравления).

Поражают опорно-двигательный аппарат (остеомиелит, артрит).

Генерализация любой формы местного процесса завершается сепсисом и септикопиемией.

МБ диагностика:

Для идентификации культуры стафилококка исп. метод фаготипирования, т.е. опр-ют наличие фагогруппы или фаготипа. Этот метод исп. в эпидемиологических целях для выявления источника инфекции и путей её распространения.

2).Бактериологический. Материал высеивают на кровяной МПА, подозрит. колонию – на скошенный агар, затем проводят р-ции плазмокоагуляции, гемолиз эритроцитов, отношение к типовым стафилококковым фагам, чувствительность к АБ.

4). Биологический (исп. при пищ. отравления, ставят биол. пробу на котятах первых дней жизни).

Специфическая профилактика:

АБ широкого спектра.

Стафилококки продуцируют фермент β-лактамазу, инактивирующий АБ в орагнизме.

Инфекции золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus): диагностика, лечение, профилактика

Представители этого рода — неспорообразующие неподвижные грамположительные кокки, формирующие при росте колонии в виде виноградной грозди (кластера) и входящие в состав нормальной микрофлоры кожного покрова животных и человека.

Стафилококки — представители семейства Micrococcaceae. Существует свыше 26 видов стафилококков, но лишь некоторые из них представляют угрозу для здоровья человека. Самым опасным считают золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), отличающийся от остальных наличием фермента коагулазы.

Staphylococcus aureus

Этот вид долгое время считали единственным патогенным микроорганизмом в своём роде. Носительство S. aureus у человека обычно протекает бессимптомно; его обнаруживают у 40% здорового населения.

Обычно он локализуется на слизистой оболочке носа, коже подмышечной области и промежности.

Патогенез инфекции золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus)

Коагулаза, продуцируемая Staphylococcus aureus, катализирует реакцию превращения фибриногена в фибрин и помогает микроорганизму образовывать защитный барьер. Кроме того, наличие рецепторов к поверхностным структурам клеток хозяина и матричным белкам (например, фибронектину, коллагену) обусловливает возможность адгезии возбудителя.

Он вырабатывает экстрацеллюлярные лизирующие ферменты (липазу), разрушающие ткани и способствующие инвазии. Некоторые штаммы продуцируют сильнейший экзотоксин, вызывающий синдром токсического шока. Выделяемые бактерией энтеротоксины могут быть причиной диареи.

Клиническая значимость золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus)

Staphylococcus aureus вызывает различные заболевания. Кожные инфекции возникают в условиях повышенной температуры и влажности, а также в связи с нарушением целостности кожного покрова при некоторых заболеваниях (экзема и др.), хирургических операциях, инъекциях или внутривенной катетеризации. Даже на здоровой коже может развиться поверхностная пиодермия (импетиго), которая затем передаётся от человека к человеку.

Пневмонию, вызванную S. aureus, наблюдают достаточно редко (в большинстве случаев в качестве осложнения гриппа). Инфекция быстро профессирует (часто наблюдают образование полостей или каверн); характерен высокий уровень смертности. Быстрое течение свойственно и стафилококковому эндокардиту, возникающему при неправильном подборе антибиотиков или вследствие микробной колонизации внутривенных устройств. Заболевание часто приводит к смерти пациента. Кроме того, S. aureus — наиболее распространённая причина остеомиелита и септического артрита.

Лабораторная диагностика золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus)

• Бактериологическое исследование: S. aureus — грамположительные кокки, располагающиеся в микропрепарате в виде виноградной грозди. Быстро растут на большинстве питательных сред. Выдерживают высокие концентрации солей, поэтому диагностическая среда может быть приготовлена с учётом этой особенности микроорганизма.
• Изучение биохимических свойств: большинство штаммов S. aureus разлагают маннитол, поэтому добавление его и характерного красителя помогает идентифицировать субкультуру бактерий. Продуцируют коагулазу, ДНКазу, каталазу.
• Типирование S. aureus с помощью набора типовых стафилококковых бактериофагов или методом рестрицирования ДНК.

Чувствительность золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus) к антибиотикам

Изменение чувствительности S. aureus к антибиотикам можно считать настоящим пособием по антимикробной химиотерапии. Сначала против золотистого стафилококка был в полной мере эффективен бензилпенициллин, но затем возникли штаммы, способные вырабатывать бета-лактамазы. Со временем они стали преобладать над всеми остальными. С внедрением в клиническую практику метициллина и родственных ему лекарственных средств (флуклоксациллина) именно они стали препаратами выбора и в настоящее время остаются таковыми при наличии чувствительных штаммов.

Позже возникли штаммы золотистого стафилококка, устойчивые к действию метициллина. Их резистентность обусловлена геном тесА+, кодирующим белки со сниженным сродством к пенициллинам. Некоторые из устойчивых штаммов способны вызвать эпидемические вспышки заболевания, для борьбы с которыми применяют ванкомицин и тейкопланин.

В настоящее время обнаруживают всё больше микроорганизмов со средней устойчивостью (или гетерорезистентностью) к гликопептидам. Описаны случаи полной гликопептидной резистентности у некоторых штаммов, обусловленной наличием генов vanA+ и vanB+ заимствованных у энтерококков.

Другими эффективными препаратами считают линезолид, аминогликозиды, эритромицин, клиндамицин, производные фузидовая кислота, хлорамфеникол и тетрациклин.

В отношении метициллинчувствительных штаммов активны цефалоспорины первого и второго поколения. Производные фузидовой кислоты применяют при комбинированной терапии инфекционных заболеваний костей и суставов. Лечение должно сопровождаться обязательным проведением теста на чувствительность к антимикробным препаратам.

Профилактика заболеваний вызванного золотистым стафилококком (Staphylococcus aureus)

Передача инфекций, вызываемых Staphylococcus aureus, происходит посредством аэрозольного и контактного механизма. Носителей или лиц, заражённых штаммами, устойчивыми к метициллину и гликопептидам, необходимо изолировать в отдельные боксы и соблюдать меры предосторожности во избежание раневого или энтерального проникновения бактерий.

Следует помнить, что медперсонал может стать носителем инфекции и способствовать её распространению в лечебном учреждении. Именно поэтому всем работникам больницы рекомендовано применение местных растворов мупироцина и хлоргексидина.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Грамположительные кокки представлены стафилококками и стрептококками — основными возбудителями гнойно-воспалительных поражений у человека.

Отличительные особенности стафилококков и стрептококков:
• отсутствие способности к спорообразованию,
• сферическая форма,
• положительная окраска по Граму.

Стафилококки. Особенности стафилококков. Отличительные особенности стафилококков

Стафилококки относят к отделу Firmicutes, семейству Microсоссасеае, роду Staphylococcus. Стафилококки распространены повсеместно; колонизируют кожные покровы и поверхности слизистых оболочек человека и животных. Первых представителей рода выделили Кох (1878) и Пастер (1880) из очагов гнойных поражений у человека.

Стафилококки представлены неподвижными клетками диаметром 0,5-1,5 мкм (рис. 12-1). В мазках стафилококки расположены одиночно, парами или гроздьями (рис. 12~2).

Свойство стафилококков образовывать скопления, напоминающие гроздья винограда в результате деления во взаимно перпендикулярных плоскостях, определило их название [от греч. staphyle, виноградная гроздь, + kokkos, зерно, ягода].

Основные дифференцировочные признаки стафилококков — характерная морфология и положительная окраска по Граму. Температурный оптимум стафилококков 30-37 °С.

Образующиеся липохромные пигменты защищают бактерии от действия токсических кислородных радикалов. Стафилококки каталаза-положительны; содержат цитохромы, но обычно оксидаза-отрицательны. Стафилококки проявляют высокую биохимическую активность: восстанавливают нитраты, вырабатывают Н₂S, разлагают мочевину и ферментируют многие углеводы с образованием кислоты.

Таблица 12-1. Основные инфекционные заболевания человека, вызываемые стафилококками

Антигены стафилокков

У стафилококков выделяют более 50 антигенных субстанций, разделяемых на родовые, видовые и типовые Аг. Многие стафилококки признаны аллергенами. Родовые Аг нередко способны перекрёстно реагировать с изоантигенами клеток организма человека (эритроцитов, почек и др.), что может привести к развитию аутоиммунной патологии. Видоспецифичными Аг стафилококков могут служить тейхоевые кислоты. Для S. aureus видоспецифичным Аг также является белок А. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10—12 ч. Они довольно устойчивы к нагреванию— при 70-80 X погибают за 20-30 мин, при 150 X— за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 ч. Бактерии менее устойчивы к действию дезинфицирующих средств, но резистентны к чистому этанолу. По наличию коагулазы все стафилококки разделяют на две группы.

Среди коагулаза-положительных стафилококков поражения у человека вызывает лишь S. aureus; среди коагулаза-отрицательных видов — S. epidermidis и S. saprophyticus.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Читайте также: