Презентация лабораторная диагностика вич инфекции презентация
Обновлено: 24.04.2024
Презентация на тему: " Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции ВИЧ-инфекции." — Транскрипт:
1 Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции ВИЧ-инфекции
3 Серологические методы основаны на реакции взаимодействия антиген-антитело Молекулярные методы основаны на комплементарном взаимодействии нуклеиновых кислот
4 Серологические - ИФА: - ИФА: антитела антитела р 24-антиген р 24-антиген - иммуноблот - иммуноблот Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции Молекулярные - детекция - детекция РНК и ДНК РНК и ДНК - вирусная - вирусная нагрузка нагрузка - генотипирование, - генотипирование, определение определение устойчивости устойчивости
5 ОБНАРУЖЕНИЕ АНТИТЕЛ К ВИЧ 1 ЭТАП Выявление суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с использованием различных тестов: иммуноферментных, агглютинационных, комбинированных, гребенчатых, мембранно- фильтрационных или мембранно- диффузных Выявление суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с использованием различных тестов: иммуноферментных, агглютинационных, комбинированных, гребенчатых, мембранно- фильтрационных или мембранно- диффузных 2 ЭТАП Определение антител к отдельным белкам ВИЧ методом иммунного блоттинга Определение антител к отдельным белкам ВИЧ методом иммунного блоттинга
6 Положительный результат анализа на антитела к ВИЧ = двукратный положительный результат ИФА + положительный иммуноблот
7 ВИЧ: объекты диагностического исследования РНК p66/p51 gp41 gp120 p24 p17 клеточная мембрана env gag pol
10 ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ Осуществляется путем комплексной оценки Осуществляется путем комплексной оценки - эпидемиологических данных - результатов клинического обследования - лабораторных исследований Включает в себя два последовательных этапа: Включает в себя два последовательных этапа: - установление собственно диагноза ВИЧ- инфекции, т.е. определение состояния инфицирования ВИЧ - установление развернутого клинического диагноза, т.е. определение стадии, характера течения ВИЧ-инфекции и прогноза заболевания
11 ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ Констатация состояния инфицирования ВИЧ имеет значение для проведения противоэпидемических мероприятий, ведет к важным правовым последствиям. От своевременности установления состояния инфицированности ВИЧ или подозрения на заражение зависит успех проведения последующих противоэпидемических мероприятий, например, предупреждение передачи ВИЧ через донорскую кровь. Констатация состояния инфицирования ВИЧ имеет значение для проведения противоэпидемических мероприятий, ведет к важным правовым последствиям. От своевременности установления состояния инфицированности ВИЧ или подозрения на заражение зависит успех проведения последующих противоэпидемических мероприятий, например, предупреждение передачи ВИЧ через донорскую кровь. Определение клинического диагноза ВИЧ- инфекции проводится, в основном, с целью оказания пациенту медицинской помощи. Определение клинического диагноза ВИЧ- инфекции проводится, в основном, с целью оказания пациенту медицинской помощи.
12 ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ ОБОСНОВАНИЯ ДИАГНОЗА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ Критерии высокой вероятности инфицирования: Критерии высокой вероятности инфицирования: - переливание донорской крови, полученной от инфицированного ВИЧ лица - рождение обследуемой женщиной инфицированного ВИЧ ребенка - в случае рождения обследуемого от инфицированной ВИЧ матери - наличие полового контакта с инфицированным ВИЧ лицом - совместный парентеральный прием наркотиков с инфицированным ВИЧ лицом Покровский В.В., 2001
13 ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ ОБОСНОВАНИЯ ДИАГНОЗА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ Наличие определенного риска заражения ВИЧ: Наличие определенного риска заражения ВИЧ: - обнаруживается при достоверных парентеральных вмешательствах или повреждениях, которые осуществляются инструментами, вероятно, контаминированными ВИЧ Покровский В.В., 2001
14 ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ ОБОСНОВАНИЯ ДИАГНОЗА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ Наличие заметного риска заражения ВИЧ: Наличие заметного риска заражения ВИЧ: - обследуемый сообщает о половых связях или о парентеральном приеме наркотиков на территориях, где ВИЧ значительно распространен среди той группы населения, к которой принадлежит обследуемый - в тоже время половые связи и прием наркотиков на территориях с низким распространением ВИЧ-инфекции не исключают возможности заражения ВИЧ Покровский В.В., 2001
2. Исследования применяемые для диагностики ВИЧ-инфекции
ИФА
антитела к
ВИЧ 1
и ВИЧ 2
антиген ВИЧ
(р24)
Иммунный
блоттинг
определение
антител к
определенны
м белкам
вируса
Экспресс
диагностика
антитела к ВИЧ1
и ВИЧ 2
ПЦР
ДНК
провируса
РНК ВИЧ
3. Иммуноферментный анализ
Использование тест-систем 4 поколения
позволяет одновременно определять как
антитела к ВИЧ 1-го и 2-го типа, так и
антигены (р 24).
1 этап – скрининговый
2 этап – референтный
3 этап – экспертный
4. Алгоритм исследования
–
+
ИФА на ВИЧ
Повторное исследование в дубле
–
СТОП
хотя бы один результат
+
Подтверждающий тест (ИФА, Блот, ПЦР)
–
Исследование в
динамике (ПЦР,ИФА)
±
+
Медицинское
наблюдение
и/или терапии
Иммунные реакции – это специфические реакции связывания
антигена с антителом с образованием иммунного комплекса.
Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе
не существует! В диагностике используют только один вид антител,
который наиболее специфичен в отношении определяемого
возбудителя. То есть связывание данного вида антител с
определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего
применяются IgG и IgM.
Именно этот принцип иммунной реакции (уникальная точность и
специфичность узнавания определяемого биологического объекта)
лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой
точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода
иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.
6. Иммунный блоттинг
Обозначение Геном
Gp 160
ENV
Gp 120
P 68/66
ENV
POL
Р55
GAG
Р52/51
POL
Gp 41
ENV
Р 40
GAG
Р 34/31
Р 24/25
Р18/17
POL
GAG
GAG
Природа
Гликопротеин
предшественник Gp 120 и
Gp41
Гликопротеин оболочки
Обратная транскриптаза
Предшественник ядерных
белков
Обратная транскриптаза
Трансмембранный
гликопротеин
Предшественник ядерных
белков
эндонуклеаза
Ядерный белок
Ядерный белок
7. Интерпретация результатов ИБ
интерпретация
профиль
Положительный
2ENV+/- GAG+/POL
Неопределенны
й
ENV +/-GAG+/POL или GAG+
POL
или GAG
илиPOL
Отрицательный
Полосы
отсутствуют
вообще,
нет
специфических
полос
8. Антиген р 24
9. Полимеразная цепная реакция - ДНК
Обнаружение ДНК провируса ВИЧ в мононуклеарных
клетках периферической крови. Используется как
диагностическая методика для прямой диагностики
ВИЧ-инфекции в следующих случаях:
• При обследовании детей, родившихся от ВИЧинфицированных матерей. Использование ПЦР в
этом случае позволяет сократить сроки постановки
диагноза ВИЧ-инфекции с 18 месяцев до 3-6 месяцев.
• В случае сомнительного результата ИБ.
• В период серологического "окна".
11. Иммунный статус
Подсчёт CD4+ лимфоцитов является
критическим параметром в мониторинге
ВИЧ-инфекции и позволяет:
• Оценивать состояние иммунной системы.
• Наряду с клинической информацией определять
момент начала антиретровирусной терапии.
• Определять сроки для профилактики
оппортунистических инфекций .
• Оценивать эффективность лечения.
12. Экспресс диагностика ВИЧ
Станции пробоподготовки позволяют
автоматически подготовить пробы к
измерению и свести ручной труд к
минимуму.
Скорость, достоверность, воспроизводимость, точность,
информативность и объективность полученных ПЦМ
цитологических характеристик настолько высоки, что
существующие сегодня другие методы оценки иммуногенетических
и фенотипических свойств клеток не могут серьезно конкурировать
17. Факторы, влияющие на результаты диагностики
• выбор соответствующего метода лабораторного
исследования;
• правильная подготовка пациента к исследованию;
• правильный забор крови;
• правильная предварительная подготовка крови и
своевременное проведение исследований;
• правильное хранение и доставка материала в
лабораторию;
• материально-техническое обеспечение
лабораторного исследования;
• уровень квалификации медицинского персонала,
проводящего исследование.
18. ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
19. Для повышения уровня качества исследований, проводимых в лаборатории необходимо:
• Регулярно участвовать в системах внешней
оценки качества;
• для оценки правильности проводимых
исследований применять стандартные
контрольные материалы;
• для оценки воспроизводимости исследований
проводить внутрилабораторный контроль
качества каждой постановки ИФА, с последующим
построением контрольной карты и анализом
полученных результатов;
• постоянное повышать квалификацию персонала;
• строго соблюдать инструкции к тест-системам
Задачи лаборатороной диагностики В И Ч
Определить ВИЧ статус (да/нет)
Исследования у ВИЧ-позитивного пациента :
• Определить стадии ВИЧ-инфекции и прогноз течения;
• Сформулировать показания к терапии;
• Проводить контроль эффективности терапии.
2
Последовательность
появлен ие маркеров В ИЧ -инфекции
Продолжительность стадий ВИЧ -инфекциипри отсутствии АРВТ
3
Методы л аборат орной диагн ост и ки
Выявление
компонентов вируса
Выявление антител к
вирусу
Ранний антиген
ВИЧ
р24
Нуклеиновые кислоты
ВИЧ-ДНК,РНК
4
Методы лабораторной диагностики
Стандартный метод
Комбинированные
тест-системы ИФА,
ИХЛА (ранний
антиген ВИЧ р24 + АТ)
Подтверждающие
тесты – ИБ
Экспресс-методы
(Быстрые тесты)
Слюна –
выявление АТ к ВИЧ
Текст слайда
Кровь
•выявление АТ
•Выявление АТ + АГ
Дополнительные методы:
Выявление ДНК ВИЧ
Выявление РНК
ВИЧ (вирусная
нагрузка)
Моча –
выявление АТ к ВИЧ
5
И ммунофермент ны й ан ализ
Использование тест- систем 4
поколения позволяет одновременно
определять как антитела к ВИЧ 1- го и 2го типа, так и антигены (р 24).
1 этап – скрининговый :
ИФА1 – скрининг Набор 1;
ИФА2 (в дубле) Набор 1;
ИФА ВИЧ-АГ+АТ реакция отрицательная;
ИФА ВИЧ-АГ+АТ реакция положительная.
2 этап – референтный
3 этап – экспертный
7
Алгоритм референс тестирования на
ВИЧ
В соответствии с Санитарно-эпидемиологическими правилами
СП 3.1.5.2826-10 Профилактика ВИЧ-инфекции.
п.4.4.Диагностический алгоритм тестирования
Тест-система 1
Тест-система 2
при отриц. рез-те
+
результат на ВИЧ
отрицательный
+
ИБ
Для подтверждения АТ
+
сомнительный
Проба содержит
антитела к ВИЧ
-
Тест-система 3
(для определения р24)
Диспансерный учет
Повторный забор крови
через 2,4,6…недель
+
-
Референс тестирование (Тест-система1) на
примере ВИЧ Комбо АГ/АТ
•Тест-система использует принцип
хемилюминисцентного иммуноанализа на
парамагнитных частицах.
•Обеспечивает исключительную
чувствительность ко всем известным
субтипам
вирусов ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
•Обеспечивает раннее выявление
инфекций ВИЧ со средней
чувствительностью
к ВИЧ-1 антигену p24 18,06 пг/мл.
•Высокая специфичность, подтвержденная
тестированием донорской крови.
•Обеспечивает высокую
производительность и автоматизацию с
выдачей достоверных результатов в
течение 29 минут.
Автоматический иммунохимический
анализатор - Arсhitect plus i2000sr
Референс тестирование
(Тест-система 2)
на примере ДЖЕНСКРИН ВИЧ 1-2 АГ/АТ УЛЬТРА.
Лучшая чувствительность по
антителам
Лучшая выявляемость
субтипов и вариантов
вирусов.
Специфичность на
случайной выборке доноров
(6038) 99,95%
Чувствительность по
антигену р24 ниже 25 пг/мл
ДС-ИФА-ВИЧ-АГ-СКРИН
(Тест-система 3)
• Ранее выявление ВИЧ-1 Антигена
• Аналитическая чувствительность по p24 антигену –
0,5пг/мл
• Антиген р24 в сыворотке в норме отсутствует.
• Антиген р24 - белок стенки нуклеотида ВИЧ.
следствие начала репликативного процесса.
• Антиген р24 появляется в крови через 2 нед
после инфицирования и может быть выявлен в
период от 2 до 8 нед.
CТ Р ОЕ Н ИЕ В ИЧ -1
Обозначение
Геном
Природа
Gp 160
ENV
Гликопротеин
предшественник Gp 120
и Gp41
Gp 120
ENV
Гликопротеин оболочки
P 68/66
POL
Обратная транскриптаза
Р55
GAG
Предшественник
ядерных белков
Р52/51
POL
Обратная транскриптаза
Gp 41
ENV
Трансмембранный гликопроте
ин
Р 40
GAG
Предшественник
ядерных белков
Р 34/31
POL
эндонуклеаза
Р 24/25
GAG
Ядерный белок
Р18/17
GAG
Ядерный белок
15
Результаты тестирования крови методом
иммуноблотинга (ИБ)
ИБ положительный
Автоблот – прибор для
постановки реакции
ИБ сомнительный
ИБ отрицательный
Области применения к экспресс тестам
Области применения простых/быстрых тестов:
• транспслантология - перед забором донорского материала;
• донорство - обследование крови в случае экстренного переливания препаратов крови и отсутствия
обследованной на антитела к ВИЧ донорской крови;
• вертикальная профилактика - тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в
предродовом периоде (для назначения медикаментозной профилактики ВИЧ-инфекции в родах);
• постконтактная профилактика ВИЧ - тестирование на ВИЧ в случае аварийной ситуации.
Каждое исследование на ВИЧ с применением простых/быстрых тестов должно сопровождаться обязательным
параллельным исследованием той же порции крови классическими методами ИФА, ИБ. 4.9. Выдача
заключения о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции только по результатам простого/быстрого теста не
допускается. Результаты простых/быстрых тестов используются только для своевременного принятия решений
в экстренных ситуациях
17
Зачем нужно определение CD-4 клеток?
¨ установление степени иммунных нарушений
¨ для определения показаний для профилактического лечения оппортунисто
¨ слежение за иммунологическим ответом на АРВТ (восстановление CD4 при лечении)
Степени иммунных нарушений
отсутствие иммунодефицита
или незначительный
умеренный иммунодефицит
выраженный иммунодефицит
тяжелый иммунодефицит
CD4, клеток/мкл
≥ 6 лет и взрослые
> 500
350-499
200-349
< 200
21
Цитофлуориметрическое определение количества CD-4 клеток
-проточный цитофлоуриметр позволяет определить абсолютное количество Т-хелперов( СД4/СД3, СД8/СД3)
-реагенты содержат меченный флуорохромами антитела, которые специфически связываются с поверхностными
антигенами лимфоцитов.
В приборе клетки попадают в лазерный пучек, который вызывает флуоресценцию клеток, связавший
флуоресцентные метки.
22
Кодирование при обследовании на ВИЧ
101-обследованные добровольно при прохождении диспансеризации ;
102- больные наркоманией и токсикоманией;
103-мужчины,имеющие секс с мужчинами;
104-больные с подозрением или подтвержденным диагнозом ЗППП;
105-лица,занимающиеся оказанием ком. секс услуг, проституцией (КСР);
109-беременные;
110-мужья,половые партнеры беременных;
112-лица,поступающиеся в ИВС, приемники-распределители;
114-лица,обследуемые по клиническим показаниям;
116-обследование при обращении за медицинской помощью;
117-лица,с подозрением или с подтверженным диагнозом гепатита В или С;
121-контактные лица, выявленные при проведении эпид. расследования;
122-дети и подростки обследуемые в очагах;
124-дети, рожденные ВИЧ-инфицированными матерями;
125- участники аварийной ситуации, с попаданием крови, биологических жидкостей под кожу, на
кожу или слизистые;
126-опекуны и опекаемые с круглосуточным прибыванием детей(домов ребенка, школ- интернатов);
131-реципиенты крови и ее компанентов;
132-медицинские работники;
133-биоматериал при экспертизе трупов, умерших от инфекционных заболеваний.
23
Анализы для скрининга
на ВИЧ инфекцию:
1. ИФА (Иммуноферментный анализ)
2. Иммуноблот
3. Пассивная
гемагглютинация,
агглютинация
латекса
1.
2.
3.
4.
Анализы для
подтверждения
ВИЧ инфекции:
Вестерн блот
Непрямой анализ с
иммунофлюоресцентными антителами
ПЦР (полимеразная
цепная реакция)
Биочипы
3. Иммуноферментный анализ
4. Вестерн-блот
Вестерн-блот
gp 160
gp 120
Положительный результат:
Наличие по крайней мере
p 24
gp 65
gp 41
gp 55
gp 51
gp 120/160
gp 41
p 32
p 24
p 18
Отрицательный результат:
отсутствие всех полос,
или слабая p 18
6. ПЦР (полимеразная цепная реакция)
ПРОБОПОДГОТОВКА –
выделение ДНК из исследуемого материала
Принцип метода:
Комплиментарное достраивание матричной ДНК in vitro с
помощью Taq-полимеразы.
7. ПЦР АМПЛИФИКАЦИЯ – многократное удвоение матричной ДНК
8. ПЦР ДЕТЕКЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Полученный амплификат
подвергается
электрофорезу и
просматривается в УФизлучении.
Наличие светящейся
оранжевой полосы на
уровне положительного
контроля свидетельствует о
наличии антигена ВИЧ в
образце.
9. БИОЧИПЫ
Принцип основан на взаимодействии неизвестной
нуклеотидной последовательности с расположенными в
определенном порядке известными ДНКпоследовательностями, иммобилизованными на стекле
асп
глу
глу
асп
вал
вал
глу
глу
вал
глу
тир
тир
тир
глу
глу
асп
глу
глу
асп
глу
глу
вал
асп
глу
лей
глу
лей
глу
лей
вал
лей
глу
вал
глу
тир
асп
вал
асп
глу
вал
арг
глу
тир
глу
лей
вал
лей
глу
асп
глу
тир
тир
арг
лей
арг
арг
лей
арг
глу
лей
лей
глу
тир
асп
10. БИОЧИПЫ
Учет результатов
По мнению ученых биочип совершит переворот в
диагностике. Благодаря ему всего за несколько часов можно
выявить туберкулез и его лекарственную устойчивость,
проводить экспресс-диагностику таких опасных инфекций,
как чума, сибирская язва, выявлять на самых ранних
стадиях онкозаболевания, в 30 раз быстрее выявлять СПИД.
Спасибо
за
Внедрение миниатюрных и многопараметрических
анализаторов – биочипов сделает анализ многих
патогенетических факторов исчерпывающим и абсолютно
объективным.
внимание !
Исследуемый образец
Стандарт
Читайте также: