Приготовление и контроль биопрепараты против сибирской язвы
Обновлено: 18.04.2024
Возбудитель сибирской язвы. Механизмы развития сибирской язвы
Возбудитель- Bacillus anthracis- крупная грамположительная спорообразующая палочка с обрубленными концами размерами до 3-10 мкм в длину и 2 мкм в ширину, неподвижная, располагается в окрашенных препаратах цепочками. В организме животных и человека существует в вегетативной форме, способной к образованию капсул, а во внешней среде - в споровой форме, сохраняющейся годами и десятилетиями, создавая стойкий резервуар инфекции.
Допускается возможность при благоприятных условиях их прорастания и размножения, что потенциально опасно, особенно при попадания возбудителя в воду или в воздух в облаке пыли (болезнь тряпичников). Вирулентность возбудителя связывают с капсульным антигеном, способным подавлять фагоцитарную активность лейкоцитов. Кроме того, возбудитель вырабатывает сильный экзотоксин, состоящий из трех патогенетических факторов белковой природы, отечного, летального и протективного (последний активирует патогенное действие двух других), равно как и вырабатываемые возбудителем протеолитические ферменты.
Оптимальная температура роста возбудителя +32-37°С в нейтральной среде. Вегетативные его формы гибнут при нагревании до 75-80°С в течение минуты, тогда как низкие температуры длительно сохраняют их активность. Споры при кипячении гибнут через 45-60 мин; сухой жар убивает их за 3 ч. Хорошо сохраняются в засоленном мясе, дубленых шкурах; устойчивы к действию дезинфицирующих средств.
При прорыве лимфатического барьера по причине незавершенности фагоцитоза молниеносно развивается геморрагическая септицемия, которая проявляется массивной бактериемией, тяжелой интоксикацией, полиорганными поражениями (отек легких, пневмония, плеврит, медиастинит, менингит и др.), развитием инфекционно-токсического шока (ИТШ) и тромбогеморрагического синдрома (ТГС).
При внедрении возбудителя через дыхательные пути и пищеварительный канал он также размножается в месте проникновения и регионарных ЛУ (медиастинальных, брыжеечных), прорывается в кровь, вызывая геморрагическую септицемию с последующим развитием ИТШ и ТГС. Поражения легких и кишечника в этих случаях носят преимущественно вторичный характер.
Встречаются редкие случаи, когда возбудитель не оставляет следа (при заражении через кожу и слизистую оболочку губ) на месте внедрения и болезнь манифестируется развитием молниеносной геморрагической септицемии (смерть наступает внезапно, в течение нескольких часов и даже десятков минут).
В месте внедрения возбудителя любой локализации развивается серозно-геморрагическое воспаление с резчайшим студневидным геморрагическим отеком и некрозом тканей со скоплением большого количества сибиреязвенных палочек в кровеносных сосудах При внедрении в кожу, обычно на открытых (незащищенных одеждой) участках, чаще рук и лица, образуется типичного вида сибиреязвенный карбункул
При патологоанатомическом исследовании находят выраженное полнокровие органов с жидкой, несвертывающейся кровью. Всюду картина серозно-геморрагического воспаления и резкого отека тканей, включая мозговые оболочки. В тонкой кишке иногда удается обнаружить очаги геморрагического воспаления с изъязвлением и некрозом, с ближайшим геморрагическо-некротическим поражением брыжеечных лимфоузлов. Селезенка, как и при всяком сепсисе, увеличена, дряблая, с обильным соскобом
У переболевших и выздоровевших остается продолжительный иммунитет, повторные заболевания сибирской язвой возможны, но встречаются редко.
Болеют КРС, свиньи +человек. Труп вздут, окоченения нет, красн пена- трупы не вскрывая СЖИГАЮТ.
Морфология: Гр+, Споры+ , Капсула+ общая для цепочки, Подвижность–. Палочки в виде цепочек.
Рост: МПБ – прозрачн, на дне комочки в виде ваты, МПЖ – елочка верхушкой вниз, воронка разжижения (аэроб), МПА – R-колонии (голова медузы, грива льва), Агар с пенициллином – жемчужное ожерелье
Биопроба – мышам подкожно в корень хвоста 0,1мл, свинкам 0,2мл, кроликам 0,3мл.
Серологич – РП по Асколи (несвежий материал) и РДискП, МФА и ИФА
ПЦР-обнаружение генов, кодирующих синтез токсина и капсулы.
Аллергический метод-у людей вводят антраксин в предплечье (у больных,переболевших, привитых – зона воспаления больше 15мм)
60) Дифференциальная диагностика возбудителя сибирской язвы и эмфизематозного карбункула.
Bacillus antrhracis
Clostridium chauvoei
+спора меньше диаметра кл.
+спора больше диаметра кл.
+ (Гамма МВА, К-ВИЭВ)
9.МФА (на сибирскую язву)
61) Дифференциальная диагностика возбудителя сибирской язвы и антракоидов (сибиреязвенноподобных).
В природе существует несколько видов микроорганизмов морфологически похожих на возбудителя сибирской язвы. Это непатогенные почвенные бациллы такие как Bac.anhtracoides,pseudoanthracoides,cereus,subtilis.
Bacillus anthracis
+ (Гамма МВА, К-ВИЭВ)
9.Серолог.диагностика (МФА, РДискП)
62) Биопрепараты для диагностики профилактики и лечения сибирской язвы.
1. Живая вакцина из безкапсульного эталонного штамма СТИ
2. Живая вакцина из штамма 55
4. Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и ЭМКАРа КРС
5. Гипериммунная лечебно-профилактическая сыворотка и гамма-глобулин
Диагностические биопрепараты:преципитирующая сыворотка и стандартный АГ для РП, люминесцирующие сыворотки для МФА, диагностические бактериофаги.
63) Патогенные анаэробы и болезни, вызываемые ими. Особенности взятия материала при анаэробных болезнях и проведения бакдиагностки (среды, условия).
Кроме клостридий анаэробные инфекции вызывают микроорганизмы родов Fusubacteriumnecrophorum– возбудитель некробактериоза(гнойно-некротические поражения кожи, слизистой оболочки и конечностей);Bacteroidesnodosus– возбудитель копытной гнили(мацерация и воспаление кожи межкопытной щели, гнойно-гнилостным распадом копытного рога).
Материал на ЭМКАР, брадзот, инфекционную энтеротоксемию и другие клостридиозы следует брать не позже 3-4 часов после гибели животного, так как затем происходит быстрое размножение анаэробов в организме. При ЭМКАРе не вскрывать трупы-ПОЧВЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ. Среды Китта-Тароцци, молоко с кусочками печени, сахарно-кровяной агар Цейслера. Для выделения чистой культуры материал прогревают на водяной бане при 80С в течение 10-60 минут, чтобы в нем остались только споры клостридий. Создают анаэробные условия.
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы по морфологическим, культуральным свойствам возбудителя сибирской язвы и биопрепараты. Для приготовления препаратов-мазков суточная агаровая культура вакцинного штамма СТИ, реактивы для окрашивания их по Граму, микроскопы; Для приготовления препаратов-отпечатков – печень морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, реактивы для окрашивания на капсулу; для постановки реакции преципитации – сибиреязвенный антиген и преципитирующие иммунные сыворотки, преципитационные пробирки в штативах, пастеровские пипетки.
При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:
1. Название возбудителя и его патогенность.
2. Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя сибирской язвы.
3. Условия, необходимые для формирования капсул и спор, их биологическое значение.
4. Культуральные особенности возбудителя сибирской язвы.
5. Дифференциация возбудителя сибирской язвы от непатогенных антраксоподобных бактерий.
6. Схема бактериологической диагностики сибирской язвы.
7. Реакция преципитации на сибирскую язву.
8. Компоненты реакции преципитации и особенности ее постановки при сибирской язве.
9. Контроли реакции преципитации при сибирской язве, учет и оценка ее результатов.
10. Специфическая профилактика и терапия сибирской язвы.
1. Классификация возбудителя
2. Общая характеристика болезни
Сибирская язва – острая инфекционная болезнь, характеризующаяся септицемией, поражением кожи, (карбункулезная форма), кишечника, легких, миндалин (висцеральная форма).
3. Восприимчивые животные:
- наиболее восприимчивы крупный и мелкий рогатый скот, лошади, олени;
4. Патогенез и факторы вирулентности:
- основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, трансмиссивный;
- бациллы, попадая в кровь, вызывают септицемию, интоксикацию организма, потерю способности крови к свертыванию;
- образует экзотоксины: отечный, летальный, защитный (протективный);
- внутри инфицированного организма возбудитель образует капсулы.
Методы диагностики (рис. 103):
Рис. 103. Схема лабораторной диагностики сибирской язвы
А. Бактериологический метод:
1. Материал для исследования:
- при подозрении на сибирскую язву категорически запрещено вскрывать трупы;
- ухо павшего животного или толстые мазки крови;
- при вынужденном убое – паренхиматозные органы, отечная ткань.
а) методы окраски: по Граму, на капсулу (методы Ольта, Михина),
б) микрокартина: крупные палочки до 10 мкм, располагаются одиночно, попарно в виде коротких цепочек, обращенных друг к другу, прямые, резко обрубленные, свободные – слегка закругленные.
г) в почве и культуре образует споры (рис. 104);
д) в инфицированном организме вокруг палочек формируется капсула (рис. 105);
Рис. 104. Возбудитель сибирской язвы из чистой агаровой культуры. Спорообразование. Увеличение х900
Рис. 105. Возбудитель сибирской язвы из селезенки белой мыши. Окраска по Ольту на капсулы. Увеличение х900
а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, МПЖ;
б) Особенности выделения возбудителей:
- оптимальная температура 37С,
в) культуральные свойства:
- на МПБ – прозрачный, на дне пробирки хлопьевидный осадок,
- на МПА – серо-белые колонии до 5 мм, край изрезанный – R-форма (рис. 106),
г) биохимические свойства:
- обладает умеренными сахаролитическими свойствами и протеолитической активностью, разжижает МПЖ;
- гемолиза на кровяном МПА не вызывает.
- заражают подкожно белых мышей, морских свинок.
Для идентификации возбудителя используют дополнительные методы:
- на гемолитические свойства,
- фаготипирование, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ),
Рис. 106. Край колонии (R-форма) возбудителя сибирской язвы. Увеличение х10
Б. Серологический метод:
- реакцию преципитации (РП) используют для исследования кожевенно-мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего исследуемого материала, для идентификации выделенных культур.
В. Аллергический метод:
- для выявления свежих случаев и ретроспективной диагностики предложен аллерген ВНИИВиМ (антраксин).
5. Биопрепараты для специфической профилактики:
- живая бескапсульная вакцина-штамм СТИ,
- живая бескапсульная вакцина из штамма 55.
6. Биопрепараты для специфической терапии
- гипериммунная противосибиреязвенная сыворотка,
Задания для самостоятельной работы
1. Изучить культуральные свойства вакцинных штаммов СТИ, Ланге, Ценковского на МПА, МПБ и кровяном агаре.
2. Приготовить препараты-мазки из суточной агаровой культуры вакцинного штамма СТИ, окрасить их по Граму и микроскопировать.
3. Приготовить препараты-отпечатки из печени морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, окрасить на капсулу (по Ольту или Михину) и микроскопировать.
Микробиологическая диагностика сибирской язвы. Принципы микробиологической диагностики сибирской язвы. Бактериоскопический, бактериологический, биологический, кожно-аллергический метод диагностики сибирской язвы.
Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы. При патологоанатомическом исследовании забирают кусочки органов или целые органы. Все образцы следует помещать в герметичные сосуды и транспортировать закупоренными в опломбированные боксы или деревянные ящики.
Выделение возбудителя сибирской язвы. Проводят окраску материала по Граму и посев на обычные питательные среды. Затем определяют подвижность микроорганизмов из выросших колоний, изучают их биохимические и культуральные свойства. Серологические исследования проводят для распознавания больных и реконвалесцентов. Возбудитель сибирской язвы можно выявлять AT, меченными флюоресцеинами (особенно в смешанных культурах), диффузией в геле, в РСК, РИГА и ИФА.
Кожные пробы применяют для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях. Проводят внутрикожное введение 0,1 мл бактериального аллергена (антраксина).
Реакция термопреципитации по Асколи имеет большое значение, так как позволяет идентифицировать возбудителей сибирской язвы при отрицательных результатах бактериологических исследований. Для прижизненной же диагностики эта реакция не имеет серьёзных преимуществ перед вышеуказанными бактериологическими и серологическими методами.
Биологическая проба при диагностике сибирской язвы. Заражение лабораторных животных проводят одномоментно с посевом на питательные среды. Материал можно вводить белым мышам (по 0,1-0,2 мл в спину), кроликам и морским свинкам (по 0,2-0,5 мл в область живота). Обычно мыши погибают через 1-2 сут, морские свинки и кролики— через 2-4 сут. При выживании животных наблюдение за ними продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезёнку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца и места введения заразного материала. Затем проводят посев исследуемого материала на питательные среды.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Читайте также: