Приготовленные центрированную кровь реконаалыированные против ящура

Обновлено: 24.04.2024

Ящур. Род афтовирусы. Вирус ящура.

Ящур — высококонтагиозное, в большинстве случаев остропротекающее заболевание парнокопытных животных, сопровождающееся образованием везикул и эрозий на слизистых оболочках пищеварительного тракта, в межкопытной щели и венчике, а также на других безволосых участках кожи.

Ящур пока еще остается проблемой для многих стран. Раньше профилактика его основывалась главным образом на вакцинации крупного рогатого скота. Вакцинацию мелкого рогатого скота и свиней хотя и проводили, но часто недостаточно эффективно.

Вирус ящура характеризуется большой вариабельностью антигенной структуры. Различают семь антигенных типов вируса: О, А, С, SAT1, SAT2, SAT3 и Азия 1. Иммунизация или переболевание одним из них не создает защиты против других типов вируса ящура. Кроме того, существуют несколько десятков подтипов и вариантов вируса, существование которых затрудняет специфическую профилактику данного заболевания.

После переболевания вирус ящура может быть обнаружен у КРС спустя более года, у овец — спустя 6 месяцев. Персистенция вируса не обнаружена у свиней. Вирус ящура удалось выделить из глоточно-пищеводной области крупного рогатого скота через 539 дней после заражения. Однако клинически здоровые вирусоносители не являются эффективными распространителями вируса. Во время персистентной инфекции наблюдается быстрая эволюция вируса. Точечные мутации могут сопровождаться изменением вирулентности и антигенности.

Основное значение в защите животных от заболевания принадлежит гуморальным факторам иммунитета. Местный клеточный иммунитет проявляется в перые дни после заражения и ярко выражен к моменту генерализованного афтообразования. Возможную роль на этом этапе играет опсонизация макрофагов.

Антигенспецифические Т-клетки играют важную регуляторную роль в развитии гуморального иммунитета. ВНА у КРС можно обнаружить через 3—4 дня после заражения. Они достигают максимума через 10—14 дней и удерживаются на этом уровне 30—40 дней, а затем их уровень постепенно снижается.

Клиническое выздоровление коррелирует с образованием антител. К концу первой недели вырабатываются ВНА, а спустя еще несколько дней — комплементсвязывающие антитела (КСА), и затем преципитирующие антитела (ПА). ВНА сохраняются в течение нескольких месяцев, а КСА и ПА — 2—3 месяца. IgM нейтрализуют гомо- и гетерологичные типы вируса, IgG — только гомологичный тип вируса или его субтипы.

У переболевших животных, в отличие от привитых инактивированной вакциной, присутствуют антитела к полимеразе. Иммунитет обычно длится около года и реже дольше. Он еще сохраняется после исчезновения нейтрализующих антител и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивности животного. Он всегда направлен против гомологичного типа вируса. Против вариантов данного типа, как правило, также образуется хороший иммунитет. При очень напряженном иммунитете может проявляться некоторая устойчивость к заражению другими типами вируса.

С развитием методов культивирования вируса был создан ряд высокоэффективных инактивированных вакцин, отличающихся способом размножения, инактивацией вируса и качеством адъювантов. Для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные вакцины, а для свиней — эмульгированные. Современные инактивированные вакцины против ящура производят из вируса, выращенного в суспензии клеток. Вирус инактивируют N-ацетилэтиленимином и в качестве адъюванта добавляют ГОА или готовят двойную масляную эмульсию. Систематическое применение инактивированной вакцины во многих европейских странах привело к ликвидации болезни. Первоначально вакцину готовили из вируса больных животных. Затем выращивали в экплантах эпителия языка КРС, а позже в клеточных культурах. В начале использовали первичную культуру клеток почки телят, а затем линию клеток почки молодого хомяка. Последняя клеточная система была адаптирована к производству инактивированной противоящурной вакцины. Наконец появилась самая современная технология крупномасштабного культивирования в суспензии клеток. В основном используют линию клеток ВНК 21 или, реже, линию клеток эмбриона хомяка NIL-2 или IFA3.

Выбор производственного штамма вируса зависит от эпизоотической ситуации в соответствии с циркулирующими типами вируса. Актуальные эпизоотические штаммы вируса ящура предварительно размножали в однослойных культурах клеток почек крупного рогатого скота или свиней, а затем адаптировали к размножению в суспензионной культуре клеток. После размножения в суспензионной культуре вирус подвергают осветлению, фильтрации, инактивации, очистке и концентрированию. Все операции проводят при рН=7,0—8,0.

Содержание целых вирусных частиц (146S) является главной характеристикой вирусного сырья, определяющей иммуногенную активность вакцины. При составлении вакцины необходимое количество антигена в прививной дозе определяют исходя из концентрации 146S компонента. Необходимо иметь в виду, что VP1 чувствителен к разрушению протеазами, которые могут снижать его иммуногенность в процессе инактивации вируса.

Инактивация вируса является одним из наиболее критических этапов изготовления противоящурнои вакцины. Многие вспышки ящура в Европе в 1980-х годах были связаны с применением инактивированной вакцины. Первоначально использовали формальдегид для инактивации вируса адсорбированного на ГОА. По мере совершенствования эта система в основном была заменена использованием веществ, обладающих кинетикой инактивации первого порядка из группы азиридинов, и в первую очередь диаметром этиленимина. В идеале эта процедура выполняется дважды в различных сосудах.

Процесс инактивации контролируют титрованием вируса в чувствительной культуре клеток, спектрофотометрическим анализом и серологически.

С целью уменьшения объема и повышения эффективности вакцины используют концентрированный и частично очищенный вирусный антиген. После инактивации вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, или полиэтиленгликолем, или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в десятки и сотни раз.

Безопасность готовой вакцины определяют на естественно восприимчивых серонегативных животных, а элюированный из нее антиген — в чувствительной культуре клеток. При 40°С вакцина сохраняет специфическую активность в течение 1 года.

Адъювант добавляют к инактивированной забуференной вирусной суспензии. В жидком виде (после адсорбции инактивированного вируса на ГОА — А1(ОН)3 и добавления сапонина) вакцину широко используют в мире для иммунизации жвачных. В связи с недостаточным иммунитетом после применения такой вакцины у свиней им стали применять концентрированную вакцину с масляным адъювантом. Такую же вакцину применяли для КРС в Южной Америке. Совершенствование такой вакцины было направлено на снижение реактогенности. Эмульгированная вакцина была необходима для зон, где требовался длительный иммунитет у КРС и преодоление материнского иммунитета. Простая эмульсия вода в масле получена эмульгированием жидкого раствора антигена с легким минеральным маслом и эмульгирующим агентом. Более легко вводимый препарат получают путем дальнейшего эмульгирования во второй водной фазе до получения стабильной эмульсии вода в масле в воде (двойная масляная эмульсия — DOE). DOE вакцина против ящура успешно применялась для иммунизации КРС и свиней. Ежегодно в мире методом суспензионного культивирования в перевиваемых клетках с использованием автоматизированных реакторов большой емкости производили 800-1000 млн доз вакцины.

Однократное введение инактивированной вакцины сопровождается кратковременным иммунитетом продолжительностью 3—6 мес. С целью более надежной иммунизации животных обычно первоначально вакцинируют дважды с интервалом 2—4 недели. Ревакцинацию проводят через 4—12 месяцев в зависимости от эпизоотической обстановки, качества вакцины и возраста животных.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Сыворотка реконвалесцентов. Эта сыворотка крови переболевших животных, содержащая специфические антитела, применяется с лечебной и профилактической целями.

Кровь берут от животных не ранее 12 и не позднее 20 дней с момента обнаружения у них клинических признаков ящура и при отсутствии осложнений на вымени, копытах, сердце.

Кровь берут от животных не ниже средней упитанности и при удовлетворительном состоянии здоровья. Кровь берут из яремной вены в количестве 3–5 л от каждого животного (с учетом индивидуальных особенностей организма животного).

Место введения иглы выстригают или выбривают, моют с мылом и дезинфицируют настойкой йода.

Кровь берут в стерильные цилиндры или бутыли с соблюдением всех правил асептики в помещении, хорошо вымытом, побеленном и тщательно дезинфицированном. Монтаж и стерилизацию посуды проводят заранее.

Перед стерилизацией в цилиндр или в бутыль наливают 50 см3 физиологического раствора на 1 л крови, после этого отверстие цилиндров или бутылей закрывают двойным слоем бумаги, каждый из них перевязывают шпагатом. Перед введением иглы в яремную вену верхний слой бумаги приподнимают, а нижний прокалывают стеклянным наконечником резинового шланга. В момент взятия крови верхним слоем бумаги прикрывают нижний слои бумаги со стеклянным наконечником, предотвращая возможность попадания воздушной микрофлоры. По окончании крововзятия и изъятия наконечника из цилиндра верхний слой бумаги плотно накладывают на нижний и перевязывают шпагатом.

Кровопускательную иглу монтируют следующим образом: на нее надевают резиновый шланг длиной около 1 м, оканчивающийся стеклянным наконечником. Лучше для кровопускания брать иглу с отверстием не менее 0,3 см в диаметре. Резиновый шланг с иглой и стеклянной трубкой обертывают бумагой, перевязывают в нескольких местах шпагатом и подвергают в таком виде стерилизации.

Перед наполнением цилиндра или бутыли кровью стенки должны быть увлажнены находящимся в них физраствором. Во избежание образования пены кровь спускают по стенкам сосуда.

Взятую кровь ставят для лучшего свертывания в теплое помещение при температуре 25° на 5–6 часов. Через 6 часов сгусток крови обводится фламбированной стеклянной палочкой или металлическим зондом. Затем цилиндры с кровью помещают на двое суток в прохладное место.

После отстоя сыворотку от нескольких животных сливают в общую, заранее стерилизованную и вымеренную бутыль. Сыворотку (серии) сливают через стерильный сифон или стерильную воронку с соблюдением правил получения стерильной сыворотки.

Комнату, в которой сливают сыворотку, чисто убирают и увлажняют дезраствором.

После слива консервируют сыворотку следующим образом:

1) заранее готовят стерильный 5%-ный раствор кристаллической карболовой кислоты на физрастворе;

2) на каждые 900 см3 сыворотки добавляют 100 см3 3%-ного раствора карболовой кислоты (из расчета ее содержания в сыворотке в количестве 0,5%'e Консервирующую жидкость вливают постепенно в бутыль, осторожно встряхивая ее, по окончании карболизации производят более тщательное перемешивание (со взбалтыванием) сыворотки с консервирующей жидкостью.

Консервированную сыворотку расфасовывают в стерильные флаконы емкостью 100–250 см3 через сифон с соблюдением правил стерильности. На флаконы с сывороткой наклеивают этикетки с обозначением на них наименования биопрепарата, времени изготовления, номера серии, кем изготовлена сыворотка, количества ее и дозировки для применения.

Флаконы стерилизуют с временными ватными пробками, а постоянные пробки, завернутые отдельно в бумагу, привязывают к горлышку соответствующего флакона и в таком виде стерилизуют.

Перед укупоркой, в момент расфасовки сыворотки, пробку и горлышко флакона фламбируют над пламенем. Укупоренные флаконы заливают мастикой или сургучом.

Сыворотку хранят в темном, сухом, прохладном месте при температуре не выше 15°. Она может быть использована в течение 6 месяцев с момента изготовления. Флаконы с наличием в сыворотке не разбивающегося осадка, плесени и прочих загрязнений, с гнилостным запахом выбраковывают.

Сыворотка пригодна для практического применения при условии ее безвредности. Последняя проверяется путем введения сыворотки двум морским свинкам (подкожно) в дозе 5 см3 и двум белым мышам в дозе 0,5 см3. Срок наблюдения за подопытными животными не менее 5 суток. Сыворотку считают безвредной, если в означенный срок все привитые животные останутся здоровыми, а на месте введения сыворотки не будет обнаружено никаких патологических изменений.

При отсутствии мышей и свинок безвредность сыворотки проверяют на 2– 3 телятах путем введения под кожу 50 см3 сыворотки. Если в течение трех суток па месте инъекции не будет обнаружено никаких патологических изменений, сыворотка выпускается для массового применения.

Способ применения сыворотки

Сыворотку реконвалесцентов применяют с профилактической целью в неблагополучных по ящуру хозяйствах телятам, ягнятам и поросятам, а также взрослому племенному скоту.

Сыворотка реконвалесцентов создает у животных лишь пассивный иммунитет длительностью до 8–12 дней.

Сыворотку вводят под кожу в области шеи в дозах: телятам 1–1,5 см3 . на 1 кг веса животного, поросятам и ягнятам 1,5–2,0 см3 на 1 кг веса животного.

Одновременно с прививками в хозяйстве проводят тщательную механическую очистку и дезинфекцию помещений, загонов, предметов ухода.

О каждом применении сыворотки реконвалесцентов и ее результатах составляют акт.

Оценка полноты инактивации вирионов. Вакцина против полиомиелита - ящура.

Для определения полноты инактивации вируса в инактивированной вакцине используют чувствительные культуры клеток и восприимчивых животных. В практике производства инактивированных вакцин методы контроля на авирулентность особенно тщательно разработаны для вакцин против полиомиелита, бешенства, ящура, клещевого энцефалита и других наиболее опасных инфекций человека и животных.

Специфическую безвредность инактивированной вакцины против полиомиелита определяют в культуре клеток и на обезьянах. Основным методом при этом является контроль в культуре клеток почки обезьян. Экспериментальные исследования по изучению условий, повышающих возможность обнаружения минимальных количеств живого вируса в культуре клеток, показали, что существенное значение имеет способ обезвреживания свободного формальдегида, объем вакцины для исследования и срок наблюдения. Нейтрализация бисульфитом натрия несвязанного формальдегида в вакцине было предпочтительнее удаления его диализом.

Выбор количества вакцины, наблюдаемой для испытания ее безопасности, обосновывали, исходя из теории вероятности. Согласно американским требованиям, в культуре клеток должно быть исследовано не менее 1500 мл каждой выпускаемой серии вакцин. Кроме культуры клеток, безопасность полиомиелитной вакцины оценивают по результатам наблюдения в течение 28 дней за состоянием привитых обезьян и последующего изучения гистологических изменений в центральной нервной системе.

Опыт производства вакцины против полиомиелита во многих странах показал, что комбинированный способ контроля в культуре клеток и на обезьянах в сочетании с инактивацией фильтрованной вирусной суспензии гарантировал высокую степень безопасности препарата.

Авирулентность инактивированных вакцин против ящура определяли на крупном рогатом скоте, свиньях, лабораторных животных и в культуре клеток. Наиболее чувствительным считали испытание вакцины на крупном рогатом скоте. Критерий безопасности (авирулентности) вакцины — отсутствие признаков ящура у животных в течение 10 дней после введения ее в слизистую оболочку языка. Этот метод использовали во многих странах мира. Однако метод контроля авирулентности противоящурных вакцин на крупном рогатом скоте дорог, громоздок и не всегда гарантирует обнаружение минимального количества инфекционного вируса.

В Италии и ряде стран Южной Америки контроль авирулентности осуществляли на мышах-сосунах. Каждую серию вакцины вводили внутрибрюшинно 40—50 животным, специфичность гибели мышат подтверждали в PCК.
Высокая чувствительность ряда культур клеток к вирусу ящура позволяла использовать их для оценки безопасности противоящурных инактивированных вакцин.

Метод контроля авирулентности инактивированнои вакцины против катаральной лихорадки овец оказался довольно сложным. В итоге, присутствие вируса в вакцине выявляют пассажами в чувствительной культуре клеток непосредственно из инактивированнои вакцины и из крови вакцинированных овец в момент предполагаемой вирусемии - через 7-9 дней после прививки. Кроме того, кровью вакцинированных овец прививают группу овец, у которых, спустя 21 день, определяют сероконверсию и устойчивость к контрольному заражению гомологичным вирулентным штаммом вируса. Несмотря на некоторую сложность, принятая схема испытания безопасности инактивированнои вакцины против КЛО является весьма надежной.

Инактивированные антирабические вакцины контролируют на белых мышах. Готовый препарат вводят мышам (10 голов) интрацеребрально, а через 10 дней проводят слепой пассаж на мышах. Все мыши должны оставаться здоровыми в течение 14 суток с момента инокуляции. Специфичность заболевания и гибели животных подтверждают методом флуоресцирующих антител. Пассаж вакцины в культуре клеток с последующим внутримозговым введением культуральной жидкости белым мышам значительно повысил эффективность обнаружения остаточного вируса в препарате по сравнению с методом слепых пассажей только на мышах. Этому способствовали высокая чувствительность культуры клеток, а также большое количество (30-40 мл) исследуемой вакцины.

Для контроля авирулентности инактивированной вакцины против клещевого энцефалита наиболее надежным признан метод, сочетающий одновременное испытание вакцины в культуре клеток и на мышах.

Авирулентность инактивированных культуральных вакцин против многих вирусных болезней человека и животных оценивают в течение нескольких пассажей (не менее трех) в культуре клеток, которую использовали для выращивания конкретного вируса при изготовлении вакцины.

Профилактика ящура. Вакцинация от ящура. Вакцины от ящура.

Концентрированная ГОА-сапониновая вакцина при однократном введении в дозе 1 мл обеспечивала практически 100%-ную защиту скота при экспериментальном заражении общепринятым способом. Выраженный иммунитет наступает на 10—14 день и достигает максимума через 3-4 недели после вакцинации. Иммунитет у взрослых животных длится 6—12 месяцев. Ревакцинация значительно усиливает иммунитет. При широкой профилактической вакцинации крупный рогатый скот обычно ревакцинируют 1 раз в год, свиней — два раза. ВНА в сыворотке крови появляются к концу первой недели, достигают максимального титра в 3-5 недель, затем их концентрация постепенно снижается. ВНА быстрее появляются и достигают пика после введения сорбированных вакцин, однако после применения эмульгированных вакцин титр антител выше и они сохраняются дольше. Колостральный иммунитет хорошо выражен, антител'а у телят сохраняются в течение 5 мес, хотя пассивная защита продолжается до 3 мес.

Материнский иммунитет может подавлять эффект вакцинации у молодняка, поэтому вакцинацию телят при систематической вакцинации коров начинают с 3—4 месячного возраста. Однако имеются доказательства, что телята отвечают на вакцинацию в месячном возрасте или раньше.

Возникновение и течение ящура в неблагополучной зоне в значительной мере определяются групповым иммунитетом. Если уровень иммунитета в популяции естественно восприимчивых видов животных превышает 75%, заболевание будет под контролем, хотя такие меры, как контроль за импортом скота, карантин и локальный убой скота в неблагополучном пункте являются эффективными.

Инактивированные вакцины могут быть моно- или поливалентными, то есть содержать антигены одного или нескольких типов, подтипов и вариантов вируса. При изготовлении поливалентных вакцин количественное соотношение вирусных антигенов необходимо определять с учетом их иммуногенности.

Одновременная вакцинация крупного рогатого скота против ящура и чумы оказалась возможной. Если инактивированную поливалентную ГОА-вакцину против ящура и живую — против чумы вводить одновременно подкожно в область шеи с разных сторон, то образуется такой же иммунитет, как и при раздельной вакцинации против каждого заболевания. Исследования и разработки в области специфической профилактики ящура достигли высокого уровня.

Инактивированные противоящурные вакцины являются высокоэффективными препаратами, а технология их изготовления основывается на самых современных достижениях биологической науки. Успех и изготовление инактивированных противоящурных вакцин могут быть использованы в качестве прототипных решений в исследованиях и разработках инактивированных вакцин против других заболеваний человека и животных.

Остается неясным вопрос, могут ли современные инактивированные вакцины защищать животных от латентного инфицирования в эндемичных по ящуру регионах. Если нет, то какими они должны быть для достижения указанной цели.

Большой интерес представляют сведения о том, что у вакцинированных свиней после экспериментального заражения при отсутствии клинических признаков болезни вирус обнаруживали в достаточно высокой концентрации в полости рта в течение нескольких недель. Наличие его в ротовой полости находится в прямой зависимости от уровня иммунитета. О приживлении вируса в организме вакцинированных животных свидетельствовало также резкое нарастание титра ВНА. Большой научный и практический интерес представляет выяснение места размножения вируса у таких животных.

Живые вакцины против ящура не разработаны. Многочисленные попытки в этой области не дали положительных результатов. Аттенуированные штаммы, как правило, оказывались или слабоиммуногенными, или реверсибельными. В этом отношении вирус ящура существенно отличался от вируса полиомиелита, аттенуированные штаммы которого успешно применяют для пероральной иммунизации человека. Причина этих различий неизвестна. Возможно, что она заключается в различном патогенезе этих заболеваний. Полиомиелит, как и многие вирусные заболевания, имеет сложный патогенез. Для их возбудителей характерно первичное место репликации с последующим проникновением в один или несколько органов-мишений. У полиовируса первичным местом размножения является кишечник, вторичным — центральная нервная система. Такие вирусы, по-видимому, относительно легко могут быть аттенуированны с помощью селективного изменения тропизма в отношении вторичных органов-мишений. В отличие от них, вирус ящура, как, впрочем, возбудители ряда других топикальных инфекций, практически не имеют вторичного органа-мишени. Получение аттенуированных иммуногенных штаммов против таких заболеваний, вероятно, требует иных подходов и представляет более сложную задачу.

Риновирус лошадей 1 по ряду свойств ближе стоит к афтовирусам, чем к другим пикорнавирусам. Некоторые штаммы этого вируса могут вызывать виремию системное заболевание лошадей с респираторным синдромом. Вирус может выделяться с фекалиями. Средства специфической профилактики не разработаны.

Читайте также: