Расшифровка чувствительности к инфекции

Обновлено: 28.03.2024

Исследование чувствительности возбудителя инфекции к антибактериальным препаратам с целью назначения оптимальной схемы лечения бактериальной инфекции.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Определение чувствительности возбудителя к антибактериальным препаратам (ддм)?

  1. Подбор антибиотика для эффективного лечения бактериальной инфекции;
  2. Выбор антибактериального препарата для лечения бактериальной инфекции в отсутствие эффективности эмпирического лечения;
  3. Нахождение в регионах с высокой устойчивостью возбудителя к антибактериальным препаратам;
  4. Развитие внутрибольничной инфекции.

Подробное описание исследования

Бактерии представляют собой одноклеточные микроорганизмы, составляющие основную массу микробиома человека. Выделяют так называемые полезные бактерии, необходимые для поддержания иммунитета, образования витаминов, расщепления пищи и других процессов в организме; кроме того, существуют условно-патогенные и патогенные микроорганизмы.

Условно-патогенные бактерии могут присутствовать в организме человека, не вызывая проблем со здоровьем. Однако в случае нарушения состава микробиома, снижения иммунитета человека или развития других благоприятных условий их численность увеличивается, что приводит к развитию заболеваний.

С момента появления первого антибиотика пенициллина в XX веке было разработано множество лекарств, уничтожающих бактерии. Тем не менее микроорганизмы постоянно изменяются, вырабатывая устойчивость (резистентность) к различным антибактериальным средствам. Распространение антибиотикорезистентности бактерий вызвано частым, бесконтрольным и неадекватным назначением этих препаратов.

Особенную проблему представляют внутрибольничные инфекции. Их возбудители часто устойчивы ко многим антибиотикам, то есть демонстрируют полирезистентность. Поэтому при подозрении на развитие внутрибольничной инфекцией обязательно требуется проведение бактериального посева с оценкой чувствительности выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

Среди полирезистентных бактерий особое место занимает возбудитель туберкулеза — Mycobacterium tuberculosis. Данный микроорганизм развивает резистентность к лекарственным препаратам путем спонтанных мутаций в своем геноме, что привело к появлению такой актуальной проблемы, как увеличение случаев возникновения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью. Важно также отметить, что согласно клиническим рекомендациям, людям, страдающим туберкулезом, в обязательном порядке необходимо проводить на фоне лечения оценку чувствительности микроорганизма к антибиотикам с определенной периодичностью.

Перечень антибактериальных средств, воздействующих на возбудителя, определяется конкретно для каждого вида интересующего специалиста микроорганизма. Обнаружение чувствительности к тому или иному антибактериальному средству помогает врачу назначить эффективную терапию.

Некоторые заболевания приводят к попаданию бактерий в биологические жидкости и среды организма, которые изначально стерильны, например, спинномозговую жидкость или кровь. В подобной ситуации исследование полученной культуры бактерий на устойчивость к антибактериальным средствам особенно важно, поскольку позволит раньше назначить этиотропную терапию, направленную непосредственно на возбудителя инфекции, улучшая тем самым течение и прогноз заболевания.

Чувствительность бактерий к антибиотикам постоянно меняется и может быть различной даже у микроорганизмов одного вида, что подчеркивает важность и обязательный характер проведения данного исследования.

Антибиотикограмма — это лабораторное исследование, определяющее чувствительность микрофлоры к антибактериальным препаратам. Метод необходим для подбора максимально эффективной терапии. На практике используют у длительно болеющих пациентов, которым не помогают стандартные схемы.

Бактерии и антибиотики

Все бактерии, способные вызвать заболевание у человека, подразделяются на патогенные и условно-патогенные. Патогенные микроорганизмы — это те, которых у здорового человека быть не должно. Они попадают в организм из окружающей среды и вызывают патологический процесс.

Условно-патогенная флора — это бактерии, которые в норме проживают в организме человека, не вызывая заболеваний. Но при снижении иммунной защиты и дисбиозе активизируются и размножаются, что приводит к развитию болезни.

антибиотикограмма

Антибиотикограмма определяет чувствительность бактерий к антибиотикам

Лечение бактериальных заболеваний проводят антибиотиками. Нет одного универсального препарата, который бы действовал на все бактерии сразу. Существует более 20 групп антибиотиков, эффективных против разных бактерий. Чтобы определить, какой именно препарат нужен для лечения, и назначают антибиотикограмму.

Правила забора материала для антибиотикограммы

Бактерии вызывают заболевания разных органов и обнаруживаются в разных средах организма — кровь, моча, кал, мокрота. Чтобы получить достоверные результаты, материал для исследования нужно собирать правильно.

Забор крови делает медсестра в процедурном кабинете. Для исследования берется венозная кровь, ее собирают в стерильную пробирку и сразу отправляют в лабораторию.

Мазок из зева и носоглотки берет медсестра или врач. Стерильным тампоном собирают слизь из носовых ходов, с задней стенки глотки. Тампон помещают в стерильную пробирку или сразу на питательную среду.

Желательно, чтобы материал был доставлен в лабораторию не позднее трех часов после забора.

Влагалищную и шеечную слизь собирает гинеколог. Женщина располагается на гинекологическом кресле, а врач с помощью специального инструмента собирает слизь. Ее помещают в стерильную пробирку и отдают для исследования.

Мочу и кал собирают дома. Перед мочеиспусканием и дефекацией нужно тщательно подмыться. В стерильный контейнер собирают среднюю порцию мочи. Дефекацию рекомендуется совершать в чисто вымытое судно или другую емкость. Оттуда стерильной лопаточкой собрать кал и поместить в стерильный контейнер.

Если у человека острое заболевание, анализы делают до назначения антибактериальной терапии. На фоне даже однократного приема антибиотиков состав патогенной флоры меняется. Если же у человека длительно текущий патологический процесс, плохо поддающийся терапии, то исследование делают даже на фоне приема противомикробных препаратов.

Техника лабораторного исследования

Для определения чувствительности бактерий нужно сделать посев материала на питательную среду. Используют для этого чашку Петри, куда помещают питательную среду. На поверхность кладут бумажные диски, пропитанные антибиотиками. Обычно в одну чашку помещается пять дисков. Если нужно исследовать большее количество препаратов, берут две или три чашки.

Затем на поверхность среды мазками наносят материал, который нужно исследовать. Чашки помещают в термостат — это тепловой шкаф, в котором поддерживается температура 37 градусов. Она оптимальна для выращивания бактериальных колоний. Через 24–72 часа появляются колонии микроорганизмов.

Если микроб чувствителен к антибиотику, вокруг бумажного диска роста не будет. Если же бактерия резистентна, то есть устойчива, рост будет наблюдаться даже рядом с пропитанным диском.

как расшифровать

Как расшифровать результаты исследования, определяет врач по отметкам лаборанта в бланке

Как расшифровать анализ

Бланк ответа на исследование заполняется лаборантом. Вверху бланка пишут, какой материал и откуда был взят. Отмечают фамилию и инициалы пациента, его пол и возраст. Затем пишут, какие бактерии и в каком количестве были выделены. Кровь и моча в норме стерильны.

В кале здорового человека присутствуют лактобактерии, условно-патогенная флора — кишечная палочка, протей, клебсиеллы. Количество условно-патогенной флоры не должно превышать 10 в третьей степени на 1 мл кала. В содержимом зева и носоглотки тоже обнаруживают условно-патогенную флору — стафилококки, стрептококки. Их количество не должно быть больше 10 в четвертой степени на 1 мл слизи.

Ниже ставится перечень антибиотиков, к которым определялась чувствительность. Напротив каждого препарата выставляют букву, обозначающую степень чувствительности. Что означает S и R в бланке:

  • S — бактерия восприимчива к данному антибиотику, его можно использовать для лечения;
  • I — промежуточный вариант, микроб умеренно чувствителен, препарат можно использовать для лечения, если другого лекарства нет или у человека имеется его непереносимость;
  • R — микроб абсолютно устойчив к антибиотику, препарат для лечения не подходит.

Анализ выполняют в течение трех дней, поэтому пациенту сначала назначают препарат широкого спектра действия, подходящий по клинике заболевания. Когда же будет получена расшифровка анализа, врач оставляет прежний препарат или меняет его на другой.

Профилактика резистентности

Развитие антибиотикорезистентности связано с бесконтрольным приемом препаратов. Антибиотики показаны только при подтвержденном бактериальном происхождении заболевания. Назначенный курс нужно принимать полностью, даже если самочувствие улучшилось на второй-третий день.

Все большее число бактерий становится устойчивыми к лекарствам. А новых препаратов не изобретают. Это грозит возникновением эпидемий инфекционных заболеваний с высокой смертностью.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам важно для назначения эффективной терапии. Для исследования можно взять любую биологическую жидкость. Чтобы не исказить результаты, материал нужно собирать в стерильную емкость. Исследование рекомендуется делать всем пациентам с признаками бактериальной инфекции.

Видео



* Представленная информация не может быть использована для самостоятельной постановки диагноза, определения лечения и не заменяет обращение к врачу!

Для чего нужен анализ на чувствительность к антибиотикам

Микроорганизмы по отношению к конкретному виду антибиотика могут характеризоваться как чувствительные, условно-устойчивые и устойчивые. Чувствительными патогенными микроорганизмами являются те, что подавляются рекомендованными дозами антибактериального препарата. Условно-устойчивые для подавления требуют увеличение дозы. Активность устойчивых патогенных микроорганизмов не подавляется даже повышенными дозами антибиотика.

Чувствительность микрофлоры к антибиотикам индивидуальна: у разных людей бактерии могут реагировать на одни и те же антибиотики по-разному. Поэтому назначение антибактериальных препаратов на основании лишь среднестатистической картины не всегда дает желаемый лечебный эффект. Между тем любой антибиотик – это серьезное лечебное средство, обладающее побочными действиями. В частности, при его применении гибнут не только патогенные бактерии, но и полезные микроорганизмы. Может получиться ситуация, когда антибиотик уничтожит полезную микрофлору, а возбудитель заболевания не пострадает – по причине его устойчивости к данному антибиотику.

Чтобы обеспечить эффективность проводимого курса антибактериальной терапии, врач должен быть уверен, что назначаемый им антибиотик действительно справится с выявленным возбудителем заболевания. Для этого и нужен анализ на чувствительность к антибиотикам.

Когда назначается анализ на чувствительность к антибиотикам

Анализ на чувствительность микрофлоры к антибиотикам назначается, если необходимо:

Как делается анализ на чувствительность к антибиотикам

Анализ на чувствительность к антибиотикам - Сеть клиник АО Семейный доктор (Москва) - Фото 1

АО Семейный доктор - Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

Для анализа используется различный биологический материал – в зависимости от заболевания это может быть моча, кал, мазок (из влагалища, уретры, с задней стенки глотки), грудное молоко, мокрота, слюна, и т.д.

Анализ на чувствительность к антибиотикам относится к культуральным (микробиологическим) исследованиям. Поэтому другое его название – посев на чувствительность к антибиотикам.

Сколько времени занимает анализ на чувствительность к антибиотикам

Изображение 2: Анализ на чувствительность к антибиотикам - клиника Семейный доктор

Автоматический анализатор

В зависимости от метода анализа результаты анализа поступают к врачу через 2-3 дня после сдачи материала в лабораторию.

Как долго действительны результаты анализа на чувствительность к антибиотикам

Анализ на чувствительность к антибиотикам действителен только в период заболевания, по поводу которого он был назначен, и до начала антибиотикотерапии. То есть пока не началось лечение антибиотиками, картина остаётся та же, но само лечение может сказаться на чувствительности патогенных организмов к применяемым антибиотикам. Поэтому в случае повторного заболевания анализ может быть назначен снова.

Подготовка к анализу на чувствительность к антибиотикам

Необходимо соблюдать стандартные требования для сдачи каждого вида биологического материала:

  • при сдаче мочи собирается средняя порция (первая порция мочи пускается в унитаз). Моча собирается в стерильный контейнер. Перед сбором мочи обязательны гигиенические процедуры;
  • грудное молоко собирается до кормления ребенка. Первая порция молока из каждой груди сбрасывается, следующие 0,5-1 мл молока из каждой груди собираются в отдельный стерильный контейнер;
  • перед забором мазка из зева и носоглотки не следует есть (в течение 4-5 часов до сдачи анализа);
  • если вы сдаете мазок из влагалища, уретры или секрет простаты, желательно воздержаться от половой жизни (в течение 1-2 дней до сдачи анализа).

Где сдать анализ на чувствительность к антибиотикам в Москве

Не занимайтесь самолечением. Обратитесь к нашим специалистам, которые правильно поставят диагноз и назначат лечение.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ
К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии (Н.А.Семина, С.В.Сидоренко); Государственным научным центром по антибиотикам (С.П.Резван, С.А.Грудинина); Научно-исследовательским институтом антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии (Л.С.Страчунский, О.У.Стецюк, Р.С.Козлов, М.В.Эйдельштейн); Кафедрой микробиологии и химиотерапии Российской медицинской академии последипломного образования (Е.А.Ведьмина, Л.Г.Столярова, И.В.Власова); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (З.С.Середа).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 4 марта 2004 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН "Методических указаний по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков", утв. Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР В.Е.Ковшило 10 марта 1983 г. N 2675-83.

1. Область применения

1.1. В настоящих методических указаниях изложены стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (методы серийных разведений и диско-диффузионный метод).

1.2. Методические указания предназначены для применения в микробиологических лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и здравоохранения.

2. Общие сведения

Определение чувствительности микроорганизмов - возбудителей инфекционных заболеваний человека к антибактериальным препаратам (АБП) - приобретает все более важное значение в связи с появлением и широким распространением антибиотико-резистентности у бактерий. Стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП (диско-диффузионный и серийных разведений) были разработаны во второй половине 60-х - начале 70-х годов XX века и с тех пор с методической точки зрения не претерпели принципиальных изменений.

Однако внедрение в клиническую практику значительного количества новых АБП и появление новых механизмов антибиотико-резистентности у микроорганизмов потребовало более строгой стандартизации процедуры тестирования, разработки новых подходов к интерпретации результатов, внедрения современной системы внутреннего контроля качества на каждом этапе исследования.

В настоящих методических указаниях систематизированы современные подходы к определению чувствительности бактериальных возбудителей инфекционных заболеваний человека, учитывающие рекомендации Европейского комитета по определению чувствительности к антибиотикам, а также Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам США.

Исследования чувствительности микроорганизмов к АБП осуществляются для решения следующих задач:

- обоснование целенаправленной индивидуальной антибактериальной терапии для лечения конкретной инфекционной болезни отдельным пациентам;

- обоснование эмпирической терапии отдельных нозологических форм инфекционных болезней в пределах лечебных учреждений или географических регионов;

- осуществление наблюдения за распространением антибиотико-резистентности в отдельных учреждениях или географических регионах;

- исследование новых химических соединений на наличие антибактериальной активности.

3. Показания для исследования чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам

В ходе повседневной деятельности в бактериологических лабораториях из различных биологических материалов и объектов внешней среды выделяют множество бактерий, относящихся к различным таксономическим группам. Однако определение чувствительности выделенных микроорганизмов к АБП показано далеко не во всех случаях. Определение показаний для исследования чувствительности микроорганизмов к АБП является обязанностью врача-бактериолога.

Определять чувствительность к АБП представителей нормальной микрофлоры человека, при их выделении из естественных мест обитания, бактерий, выделенных из объектов внешней среды, за исключением случаев проведения специальных исследований, нецелесообразно.

Обязательному исследованию на чувствительность к АБП подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека. В остальных случаях оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости выделенного микроорганизма.

Определение чувствительности выделенного штамма микроорганизма показано, если уровень его устойчивости к АБП не может быть предсказан на основании данных идентификации или вероятной таксономической принадлежности микроорганизма. Практически важной задачей является выявление приобретенной резистентности к АБП у природно-чувствительных к ним микроорганизмов. Подтверждение природной чувствительности или резистентности микроорганизма к АБП не является целью практических исследований.

Исследованию по оценке антибиотикочувствительности подлежат чистые культуры микроорганизмов или материал изолированных колоний с плотных питательных сред после первичного посева образца клинического материала, в последнем случае параллельно необходимо провести идентификацию культуры.

При обнаружении на плотных питательных средах после первичного посева смешанной культуры исследовать антибиотикочувствительность до идентификации и оценки этиологической значимости отдельных микроорганизмов нецелесообразно.

Прямое определение чувствительности с использованием клинического материала (без выделения чистой культуры) возможно только в исключительных случаях при условии подтверждения однородности культуры и высокой степени обсемененности при окраске по Граму, причем исследование следует повторить после выделения чистой культуры микроорганизма.

Следует уделять особое внимание определению чувствительности микроорганизмов, относящихся к таксономическим группам, для которых характерна высокая частота распространения приобретенной резистентности.

У микроорганизмов, проявляющих универсальную чувствительность к каким-либо АБП, т.е. когда случаев резистентности не описано (например, Streptococcus pyogenes - все штаммы чувствительны к пенициллину), проводить определение чувствительности к этим препаратам в повседневной практике нецелесообразно.

Факты выявления резистентности у микроорганизмов, для которых этот феномен ранее не был описан в научной литературе, следует оценивать с крайней осторожностью и рекомендуется обращаться за консультациями в лаборатории, занимающиеся изучением антибиотико-резистентности.

Не следует в практических целях исследовать микроорганизмы, для которых методы определения чувствительности в настоящее время не стандартизованы и отсутствуют критерии интерпретации результатов. Результаты, полученные в данном случае, не могут служить основанием для назначения антибактериального препарата, если соответствующая нозологическая форма не приведена в утвержденной инструкции по его применению.

4. Методы определения чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам

4.1. Общая характеристика методов

Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП подразделяют на методы серийных разведений и диффузионные.

Методы серийных разведений основаны на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность АБП - величины его минимальной подавляющей концентрации (МПК).

МПК - минимальная концентрация, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма в бульонной культуре или на плотной среде.

Для определения МПК заданные концентрации АБП вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма и после инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста.

В зависимости от характера используемой питательной среды различают методы серийных разведений в агаре или в бульоне. В зависимости от объема используемой жидкой питательной среды выделяют методы серийных макро- и микроразведений.

Разновидностью метода серийных разведений является также метод, основанный на использовании только двух концентраций АБП, соответствующих пограничным значениям МПК (см. ниже). Этот принцип исследования широко используется в автоматизированных системах для определения чувствительности микроорганизмов.

Диффузионные методы определения чувствительности основаны на диффузии АБП из носителя в плотную питательную среду и подавлении роста исследуемой культуры в той зоне, где концентрация АБП превосходит МПК.

В настоящее время существуют две основные модификации диффузионного метода: диско-диффузионный и Е-тест.

В диско-диффузионном методе в качестве носителя АБП используют бумажный диск. Образование зоны подавления роста происходит в результате диффузии АБП из носителя в питательную среду. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК. Однако диско-диффузионный метод позволяет лишь косвенно судить о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (чувствительный, промежуточный или резистентный).

Е-тест представляет собой узкую полоску полимера (0,5х6,0 см), на которую нанесен градиент концентраций АБП (от минимальных до максимальных). Подавление роста микроорганизма вокруг полоски Е-теста происходит только в той зоне, где концентрация АБП, диффундирующего из носителя, выше МПК, при этом образуется каплевидная зона ингибиции. Значения концентрации АБП в каждом участке носителя типографским способом нанесены на наружной (обращенной к исследователю) поверхности Е-теста. Величину МПК учитывают в том месте, где граница зоны подавления роста вплотную подходит к носителю. Детальные инструкции по определению чувствительности с использованием Е-тестов прилагаются изготовителем к набору реактивов.

4.1.1. Основные этапы проведения тестирования

Оценка антибиотикочувствительности, независимо от конкретного метода, предполагает последовательное выполнение нескольких этапов:

- приготовление питательных сред;

- приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма);

- учет и интерпретация результатов, формулировка рекомендаций по лечению.

Диффузионные методы включают также этап наложения дисков или полосок Е-теста на плотную питательную среду.

4.1.2. Приготовление питательных сред для определения чувствительности

Для оценки чувствительности используют специально предназначенные для этой цели среды, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке и по своим характеристикам удовлетворяющие требованиям, приведенным в разделе 5. Внутрилабораторный контроль качества среды проводят при использовании всех сред, разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке.

Вид питательной среды для оценки чувствительности определяют выбранным методом проведения исследования (агар или бульон), а также видом тестируемого микроорганизма.

Агар разливают по чашкам слоем толщиной 4 мм (на чашку диаметром 100 мм требуется 25 мл агара, на чашку диаметром 90 мм - 20 мл). Чашки оставляют при комнатной температуре для застывания. Приготовленные указанным образом чашки Петри предпочтительнее использовать немедленно. Допускается хранение в запаянных полиэтиленовых пакетах в холодильнике при 4-8 °С в течение 5 суток.

4.1.3. Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма)

Общим и принципиально важным для всех методов тестирования является стандартизация суспензии исследуемого микроорганизма, ее концентрация должна составлять 1,5·10 КОЕ/мл. Практически наиболее приемлемым методом оценки концентрации бактериальной суспензии является измерение ее оптической плотности. Оптическая плотность бактериальной суспензии с концентрацией 1,5·10 КОЕ/мл при визуальном контроле соответствует стандарту мутности 0,5 по МакФарланду. Контроль оптической плотности суспензии можно также осуществлять спектрофотометрически (денситометрически). Существуют коммерчески доступные стандарты мутности и спектрофотометры. Бактериальную суспензию можно готовить либо из бульонной, либо из агаровой культуры.

Приготовление инокулюма из агаровой культуры

Для приготовления инокулюма используют чистую суточную культуру микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах. Отбирают несколько однотипных, четко изолированных колоний, выросших на неселективных плотных питательных средах. Петлей переносят незначительное количество материала с верхушек колоний в пробирку со стерильным физиологическим раствором или питательным бульоном, доводя плотность инокулюма точно до 0,5 по стандарту МакФарланда. Инокулюм следует использовать в течение 15 мин после приготовления.

Приготовление инокулюма из бульонной культуры

При определении чувствительности быстро растущих бактерий с обычными питательными потребностями для приготовления инокулюма также можно использовать 5-6-часовую бульонную культуру микроорганизма. Для этого отбирают несколько однотипных изолированных колоний, петлей переносят незначительное количество материала в пробирку с 4,0-5,0 мл жидкой неселективной питательной средой. Инкубируют при 35 °С. Через 5-6 ч инкубации плотность микробной суспензии приблизительно соответствует необходимой, и ее точно доводят до 0,5 по МакФарланду путем добавления стерильного бульона или физиологического раствора.

Стандарт МакФарланда может быть либо приобретен, либо приготовлен в лаборатории.

4.1.4. Приготовление стандарта 0,5 по МакФарланду

К 0,5 мл раствора ВаСl в концентрации 0,048 моль/л (1,175% раствор ВаСl·2HO) медленно при тщательном перемешивании добавить 99,5 мл раствора HSO в концентрации 0,18 моль/л (1%) до получения гомогенной суспензии.

Полученную суспензию необходимо разлить по 4-6 мл в пробирки с герметично закрывающимися крышками. Пробирки должны быть такого же диаметра, как и используемые для приготовления бактериальной суспензии.

Хранить пробирки с суспензией необходимо в темноте при комнатной температуре.

Перед использованием пробирки необходимо тщательно встряхивать и оценивать однородность суспензии. При появлении видимых частиц пробирки изымаются из употребления.

Стандарт мутности необходимо обновлять или проверять его оптическую плотность ежемесячно.

4.2. Методы серийных разведений

4.2.1. Приготовление растворов АБП для методов серийных разведений

Общим и крайне важным этапом для всех методов серийных разведений является приготовление растворов АБП. Различают "основные" растворы АБП (пригодные для хранения) и "рабочие" - те, которые необходимо использовать "ех tempore" для приготовления питательных сред.

Для приготовления основных растворов АБП необходимо использовать субстанции АБП с известной активностью, лекарственные формы не пригодны. Для взвешивания субстанций необходимо использовать электронные лабораторные весы с точностью до 4 знака, для измерения объемов - калиброванные дозаторы и пипетки.

Читайте также: