Рост гонококков на питательной среде

Обновлено: 24.04.2024

Культуральные свойства гонореи. Культуры гонококков. Свойства гонококков. Биохимические свойства гонококков.

Гонококки неустойчивы во внешней среде, поэтому посев следует проводить сразу после забора материала от больного. Гонококки хорошо растут на свежеприготовленных влажных питательных средах с добавлением нативных белков крови, сыворотки или асцитической жидкости. Оптимальный рН 7,2-7,4, оптимальная температура 37 °С.

На плотных средах гонококки, содержащие в клеточной стенке белок II, образуют слегка мутные бесцветные колонии с ровными краями. Гонококки, лишённые белка II, образуют мелкие круглые прозрачные колонии, напоминающие капли росы. Гонококки типов TI и Т2 чаще образуют мелкие колонии, а бактерии типа Р- (ТЗ-Т5) — более крупные колонии.

В жидких питательных средах гонококки растут диффузно и образуют поверхностную плёнку, через несколько дней оседающую на дно. При пересевах на селективные среды вирулентность бактерий типов Т1 и Т2 может возрастать. Длительное культивирование на неселективных средах может приводить к снижению вирулентности штаммов, потере пилей и увеличению размеров колоний (то есть к переходу в бактерии типа Р-).

Свойства гонококков. Биохимические свойства гонококков.

Гонококки ферментируют только глюкозу с образованием кислоты без газа. Изменённые формы, в том числе L-формы, могут вообще не ферментировать углеводы. Протеолитичес-кую активность не проявляют, аммиак, сероводород и индол не образуют, не приводят к гемолизу на средах, содержащих кровь.

Штаммы гонококкоа, вызывающие диссеминированные инфекции, нуждаются в аргинине, гипоксантине и урациле (так называемые AHU+ штаммы). Бактерии отличает устойчивость к бактерицидному действию сывороточных IgM и IgG, а также комплемента.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Лабораторная диагностика гонореи проводится при помощи бактериоскопического и бактериологического анализа, реже используется серологический и иммуноферментный метод.

Гонорея – инфекционное заболевание, возбудителем которого является гонококк. Впервые гонококки были описаны немецким дерматовенерологом Альбертом Нейссером. Отсюда возбудители гонореи получили название Neisseria gonorrhoeae.

Морфология

Гонококки являются диплококками бобовидной формы и внешне напоминают кофейные зерна. Гонококки - грамотрицательные бактерии, при окрашивании по методу Грама они приобретают красный цвет. Под воздействием внешней среды (химических препаратов, лекарств) гонококки могут менять размеры и форму, становиться грамположительными. Способность гонококков менять свойства часто осложняет диагностику гонореи.

Культуральные свойства

Гонококки хорошо размножаются в жидких питательных средах и на плотных средах с рH от 7,2 до7,4 единиц, содержащих нативный человеческий белок (асцитную жидкость, кровь, сыворотку крови). Культивирование гонококков происходит при температуре 37 градусов Цельсия в атмосфере, содержащей 3 – 5 % углекислого газа. При дальнейшем культивировании потребность в углекислом газе отпадает.

Устойчивость во внешней среде

Во внешней среде гонококки малоустойчивы. На них пагубно влияет повышение и понижение температуры, высыхание, прямые солнечные лучи. Бактерии погибают при самых малых концентрациях дезинфицирующих средств. Но во влажной среде, например, в гное, на грязном белье они могут сохранять свою жизнеспособность до 24 часов.

Эпидемиология

Гонорея – антропогенное заболевание, передаётся только от человека к человеку. Гонорея не переносится животными. Инфекция распространяется при половых контактах, очень редко бытовыми способами, например, через грязное белье. Заболеванию подвержены люди, часто меняющие половых партнёров (девиантные, асоциальные слои населения). Заражение начинается с момента полового контакта с носителем инфекции, инкубационный период длится от одного дня до одного месяца, обычно около недели. У 70 % женщин и 10 % мужчин заболевание проходит бессимптомно.

Диагностика гонореи

Своевременная диагностика венерического заболевания позволяет остановить распространение инфекции по организму и безотлагательно начать лечение. В России порядок проведения диагностики гонореи регламентирован приказом Министерства здравоохранения РФ от 20.08.2003 № 415 и заключается в обязательном осуществлении бактериоскопического исследования с последующим бактериологическим подтверждением, которые помогают быстро определить наличие инфекции.

Бактериоскопический анализ

Бактериоскопический анализ применяют с целью изучения морфологических свойств возбудителя. Из клинического материала (например, отделяемого поражённой слизистой оболочки уретры или цервикального канала) готовят мазок, который фиксируют на стекле и окрашивают анилиновыми красителями по методу Грама.

Отдел новых технологий ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера для проведения бактериоскопического исследования выпускает наборы реагентов для окраски по Граму в трёх разных вариантах.

В состав комплекта № 1 входит фуксин Циля, окрашивающий гонококки в розовый цвет.
В комплекте № 2 фуксин Циля заменен на водный раствор нейтрального красного, в результате чего грамотрицательные бактерии приобретают ярко-оранжевый цвет и хорошо видны на контрасте с фиолетовой окраской грамположительных бактерий.
Наибольшую контрастность получают при применении комплекта № 3, в котором используются в качестве красителей бриллиантовый зеленый и сафранин. Грамположительные микроорганизмы приобретают зеленый цвет, а грамотрицательные – красный.

Бактериоскопический метод имеет следующие недостатки:

необходима высокая концентрация бактерий в исследуемом материале, не менее 10 9 КОЕ/мл, в противном случае гонококки могут быть не выявлены;
при ошибках в технике окрашивания бактерии могут повести себя нетипичным образом и окраситься в другие цвета;
гонококки полиморфны – они могут менять размеры и окраску под воздействием различных препаратов.

Бактериологический анализ

Для эффективной диагностики гонореи бактериоскопический анализ дополняют бактериологическим анализом, при котором исследуемый материал высевают на питательные среды для получения чистых культур возбудителя.

Отдел новых технологий ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера выпускает набор реагентов для выделения гонококков культуральным методом - набор "СВГ". В состав набора входит основа питательной среды и лиофильно высушенная селективная и ростовая добавка. Добавка содержит необходимые для роста гонококков белки, свойственные организму человека, углеводы, аминокислоты, витамины и прочие соединения.

Селективный компонент в виде комплекса антибиотиков подавляет рост посторонней микрофлоры. Благодаря селективному компоненту на питательной среде, выпускаемой Отделом новых технологий, образуются только колонии гонококков, которые очень легко визуально обнаружить.

Бактериологическое исследование завершают проведением бактериоскопии мазков, приготовленных из выросших колоний. Также для контроля морфологии возбудителя проводят тесты для обнаружения цитохромоксидазы (оксидазный тест) и бета-лактомазы – ферментов, продуцируемых гоноккоками.

Отдел новых технологий ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера выпускает два набора реагентов, которые обнаруживают цитохромоксидазу по методу Эрлиха и по методу Ковача. Из этих реагентов готовят рабочие растворы. Растворами обрабатывают выросшие колонии. При взаимодействии реактива Эрлиха и цитохромоксидазы колонии гонококков окрашиваются в синий цвет, при использовании реактива Ковача – в красный.

Также мы предлагаем наборы реагентов для экспресс-определения бета-лактамазы, продуцируемой гонококками. Обнаружение в исследуемом материале бета-лактамазы свидетельствует о резистентности выделенных гонококков к пенициллинам, к цефалоспоринам.

Преимущества препаратов для диагностики гонореи, выпускаемых Отделом новых технологий ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера:

Лабораторные методы широко применяются при диагностике заболеваний мочеполовой системы, передающихся половым путем: гонореи, сифилиса, трихомониаза и др. Наличие заболевания требует проведения мероприятий, призванных выявить причину инфекции.

Питательная среда "СВГ" предназначена для выделения и культивирования гонококков при исследовании материала от пациента. Каждый набор рассчитан на приготовление 110 мл гонококковой среды, готовой к применению.

Состав набора

Набор для получения питательной среды следует хранить при температуре 2 - 8 °С не более 12 месяцев. Плотная питательная среда может храниться в пробирках или чашках Петри не более 7 суток. В состав набора для приготовления питательной среды входит:

основа: агар, дрожжевой экстракт, пептон, крахмал, соли;
селективная добавка: коэнзимы, лизат эритроцитов, противогрибковые препараты, антибиотики, сахара;
инструкция по использованию набора.

Методика проведения

Методика включает несколько этапов, каждый из которых должен проходить в соответствии с определёнными требованиями. По завершении всех стадий диагностики заболевания с помощью метода культивирования возбудителя на гонококковой среде производится учёт результатов через 24 часа, 48 часов и 72 часа. При острой гонорее отмечается рост гонококка в течение первых суток, при хронической - до 72 часов.

Приготовление раствора основы среды для культуральной диагностики осуществляется путём высыпания основы в ёмкость, содержащую дистиллированную воду (100 мл) для последующего набухания. Полученную суспензию помещают на водяную баню и периодически перемешивают до полного растворения основы, затем раствор кипятят в течение 2 минут. Раствор селективной добавки готовят ее растворением в дистиллированной воде (10 мл) при перемешивании.

Готовая питательная среда образуется при добавлении раствора селективной добавки к раствору основы. Полученную среду разливают в стерильные чашки Петри. Перед проведением исследования гонококковая среда должна быть выдержана в течение часа при температуре 37 °С. Затем производят посев материала в соответствии с приказом Минздрава "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений".

Гонорея. Возбудитель гонореи. Гонококк. Эпидемиология гонореи. Источник гонореи. Морфология гонококков. Тинкториальные свойства гонококков.

Гонококк. Эпидемиология гонореи. Источник гонореи.

Источник гонореи — больной человек. Основной путь заражения гонореей — половой, возможно инфицирование плода при прохождении через родовые пути матери. Врождённая невосприимчивость отсутствует. После перенесённого заболевания невосприимчивость к вторичным заражениям не вырабатывается; возможны супер- и ре инфекции.

Животные резистентны к гонококкам, лишь внутрибрюшинное введение микробов вызывает гибель мелких лабораторных животных.

Морфология и тинкториальные свойства гонореи

В свежих культурах гонококки представляют неподвижные диплококки размером 1,25-1,0x0,7-0,8 мкм, образующие капсулу .

Характерен полиморфизм гонококков — в мазках встречают относительно мелкие или крупные клетки, а также палочковидные формы. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зелёным и др.). Образуют L-формы, в том числе под действием пенициллина. Под влиянием химиопрепаратов быстро меняют свойства и образуют грамположительные формы. Гонококки имеют сложно организованную клеточную стенку; наличие тех или иных её компонентов обусловливает их внутривидовую дифференцировку. По наличию пилей гонококки разделяются на пять типов (Т1-Т5).

Гонококки типов Т1 и Т2 снабжены пилями (Р+ и Р++), окружены капсулой и вирулентны, бактерии прочих типов авирулентны. Белок 1 составляет до 60% вещества клеточной мембраны и его идентификация составляет основу серотипирова-ния гонококков и распознавания бактерий методом ИФА. Белок II определяет специфические клинические проявления заболевания. Бактерии содержащие белки 1 и II обычно выделяют при поражениях мочевыводящих путей, а штаммы, содержащие белок I, но лишённые белка И — при диссеминированных поражениях.

Патогенез поражений гонококками. Патогенез гонореи. Принципы микробиологической диагностики гонореи. Микробиологическая диагностика гонококков. Выявление гонококков

Гематогенное распространение гонореи отмечают у 1% заболевших. В патогенезе диссеминирования гонококковой инфекции существенное значение имеет пол больного, обусловливающий характер развивающихся различных синдромов (например, воспаления тазовых органов, артритов, септицемии, менингитов и др.). Женщины более склонны к диссеминированньм поражениям. В то же время заболевание у них часто протекает бессимптомно, а лечение не проводится. Женщины представляют основной резервуар инфекции.

Принципы микробиологической диагностики гонореи. Микробиологическая диагностика гонококков

При типичной форме острого гонорейного уретрита распознавание возбудителя в условиях лаборатории не представляет особого труда и может быть ограничено бактериоскопическим исследованием мазков гнойного отделяемого. Для этого готовят два мазка: первый окрашивают 1% спиртовым раствором эозина и 1% водным раствором метиленового синего, второй мазок окрашивают по Граму.

Бактериоскопическая диагностика гонореи основана на наличии трёх признаков — характерной морфологии, внутриклеточного расположения бактерий и окраски по Грому. Диагностика гонореи у женщин путём бактериоскопии не всегда даёт положительный результат. У молодых женщин с пиурией (более 103 нейтрофилов в поле зрения при отсутствии прочей патогенной микрофлоры) необходимо исключить гонококковую этиологию заболевания. При бактериоскопической диагностике также применяют методы прямой иммунофлюоресценции и реакцию непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). Для распознавания хронических инфекций, а также после неэффективной химиотерапии, приводящих к изменению характерных морфологических особенностей прибегают к выделению возбудителя.

Материал высеивают на свежеприготовленные твёрдые питательные среды — асцит-агар, среду с аутолизатами и сывороткой, КА. Инкубацию посевов 'желательно проводить при повышенном содержании С0₂ (10-20%). В зависимости от условий культивирования и качества среды колонии появляются через 1-8 сут после посева. Характерная особенность— аутолиз колоний от центра к периферии, начинающийся уже через сутки. Дифференциальный признак N. gonorrhoeae — оксидаза-положительные колонии, образованные грамотрицательными диплококками. В ходе реакции происходит изменение окраски колоний в течение нескольких секунд с варьированием от розовой до чёрной (рис. 16-5). Видовую принадлежность подтверждают по способности ферментировать углеводы.

Читайте также: