Рпга анализ крови на кишечные инфекции

Обновлено: 28.03.2024

Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.

Синонимы русские

Синонимы английские

Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.

Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев "бактериологически неподтвержденной дизентерии", особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).

В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является "золотым стандартом" в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНКсодержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Серологическая диагностика дизентерии - исследование антител к Shigella sonnei методом РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Бактериальную дизентерию (шигеллёз) вызывают бактерии рода Shigella. Этот род включает около 50 серотипов, объединённых по антигенным и биохимическим свойствам в 4 группы: Shigella dysenteriae (A), Shigella flexneri (B) Shigella boydii (C), Shigella sonnei (D). Наиболее высокой патогенностью среди них обладают S. dysenteriae, вырабатывающие цитотоксин Шига (другие виды шигелл его не вырабатывают или почти не вырабатывают). Наибольшее эпидемическое значение для большинства стран имеют S.flexneri и S.sonnei. Дизентерия, вызванная S.sonnei, протекает в целом легче и реже даёт осложнения, чем S. dysenteriae и S.flexneri. Заражение происходит фекально-оральным путём. Инкубационный период от одних до 7 суток (в среднем 2 - 3 суток), но может сокращаться до 12 и даже до 2 часов. Заболевание начинается остро. Возникает общая интоксикация, повышается температура тела, появляются схваткообразные боли в животе (тенезмы), усиливающиеся перед дефекацией. Стул в типичном случае - сначала обильный водянистый, затем частый малыми порциями, обычно с примесью крови и слизи. Диагноз ставят на основании выделения возбудителя из кала (см. тест №457 - Посев на патогенную кишечную группу и определение чувствительности к антибиотикам). Серологические исследования используют в качестве вспомогательного метода в целях подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования; для ретроспективного подтверждения диагноза; при позднем обращения пациента, назначении терапии антибиотиками; затяжном течении заболевания. Антитела в крови в большей части случаев можно выявить через несколько дней от начала заболевания с максимумом через несколько недель, далее снижением и вероятным исчезновением через 2-3 года. Результат серологического исследования не может быть использован в качестве единственного основания для постановки диагноза. По данным производителя, при острой дизентерии антитела методом РПГА выявляют в 70-80% случаев в титрах от 1:400 до 1:6400 (титр - последнее разведение сыворотки, дающее положительный результат). При затяжном же течении дизентерии антитела в РПГА выявляются значительно реже (в 30-40% случаев) и в менее высоких титрах (от 1:100 до 1:400). Исследование рекомендуют проводить в динамике в парных сыворотках больным с клиническим диагнозом острой дизентерии в первые дни заболевания (при поступлении в стационар) и через 7-10 дней после первичного исследования. Диагностически достоверным считают восьмикратное увеличение (или падение) титров специфических антител в динамике наблюдения. Установление этиологического диагноза на основании меньшего изменения титров или высокого (1:200 и выше) результата однократной постановки РПГА в первые дни заболевания может привести к значительному проценту диагностических ошибок. Такие результаты надо оценивать с учётом эпидемиологической обстановки, формы заболевания, сроков взятия сыворотки и пр. Следует принимать во внимание, что результат определения антител может быть положительным после ранее перенесенной инфекции; в некоторых случаях возможны перекрёстные реакции, связанные с кросс-реагирующими антителами к другим патогенам.

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

  • Для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования.
  • В целях ретроспективного подтверждения диагноза.
  • При позднем обращении больного, назначении антибактериальной терапии.
  • Затяжное течение заболевания.
  • Профилактическое обследование декретированной группы лиц сферы обслуживания.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Референсные значения: отрицательно. Условно-диагностический титр – 1:200 и более. При наблюдении в динамике, диагностически достоверный признак - более чем 4-кратное повышение (или падение) титров за 7-10 дней.

Метод определения РПГА (реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом, содержащим полисахаридные антигены кишечноиерсиниозных бактерий серовара О9).

Исследование антител к Yersinia Enterocolitica серотип О9 методом РПГА (реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации). Кишечный иерсиниоз - острое инфекционное заболевание, характеризующееся преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта, с тенденцией к генерализованному поражению различных органов и систем. Возбудителем иерсиниоза чаще всего является мелкая грамотрицательная палочка Yersinia Enterocolitica серотипов О:3, О:8, О:9. Y.enterocolitica распространены в природе широко. Они могут присутствовать в органах и фекалиях многих видов млекопитающих, птиц, земноводных, членистоногих, а также на овощах, корнеплодах, в почве, пыли, воде. Частый путь передачи инфекции – алиментарный (с заражённой пищей, молоком, водой). Человек, как правило, источником заражения не является. Клинические формы иерсиниоза разнообразны и до некоторой степени обусловлены возрастом и физическим состоянием больного. У детей старшего возраста и подростков клиническая картина часто напоминает аппендицит, симптомы включают лихорадку и разлитую боль в животе. У взрослых иерсиниоз часто проявляется двумя синдромами – реактивным артритом и узловатой эритемой. Сначала наблюдается понос с лихорадкой и болью в животе, а через 1-2 недели развивается артрит, который обычно проходит через 1-4 месяца. Узловатая эритема как постинфекционный синдром отмечается преимущественно у женщин среднего возраста. Иерсиниоз в грудном возрасте опасен осложнением в виде сепсиса. Другие предрасполагающие факторы бактериемии включают заболевания печени, гемохроматоз, сахарный диабет, истощение, иммуносупрессивная терапия, передозировка препаратов железа. Более редкие формы иерсиниоза (атипичная клиника обычно обусловлена серотипами, отличными от Y. enterocolitica О:3, О:8, О:9) – ангина на фоне кишечной симптоматики или без неё, пневмония, абсцесс лёгкого, инфекционный эндокардит, инфекции мочевых путей, абсцессы мягких тканей и конъюнктивит. Частота выявления этого возбудителя в кале больных с поносом, по данным разных исследований, составляет 1-3%. Для лабораторного подтверждения иерсиниоза используют микробиологические тесты (см. тест №460 - Посев на иерсинии и определение чувствительности к антибиотикам), серологические исследования - в том числе, РПГА с Y.enterocolitica, выявление антител к факторам вирулентности Y.enterocolitica методом ИФА (см.тесты №№ 238, 239). Титр антител возрастает через 1 неделю заболевания и достигает пика на 2 неделе. Рекомендовано обследовать больного не менее 2 раз – в начале заболевания и с интервалом в 10-15 дней, диагностически достоверным считают 4-кратный и более прирост титров антител. При отсутствии возможности получения парных сывороток (обследование в боле поздние сроки) допускают использование условно-диагностических титров – при кишечном иерсиниозе для взрослых 1:200-1:400, для детей до 10 лет 1:100-1:200. В сомнительных случаях целесообразно проводить исследование параллельно с постановкой РПГА с Y.pseudotubercelosis, проявляющими иммунологическую общность с Y.enterocolitica. Ценность серодиагностики методом РПГА снижают потенциально возможные перекрёстные реакции (Brucella abortus, Rickettsia spp., Salmonella spp., Morganella morganii).

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

  • Для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования.
  • В целях ретроспективного подтверждения диагноза.
  • При позднем обращении больного, назначении антибактериальной терапии.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Условно-диагностический титр: взрослые – 1:200-1:400; дети до 10 лет – 1:100-1:200. Диагностически достоверным считают прирост титров в 4 и более раз в динамике за 7-10 дней.

Выявление в сыворотке крови антител к O-антигену сальмонелл методом РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Сальмонеллы относят к семейству Enterobacteriaceae, роду Salmonella, в котором насчитывают более 2200 серотипов. Большинство сальмонелл патогенны как для человека, так и для животных и птиц; некоторые типы сальмонелл приспособились к существованию только в организме человека или определённых видов животных. В эпидемиологическом отношении для человека наиболее значимы лишь несколько серотипов. S.typhi вызывают брюшной тиф, резервуаром этой инфекции служит только человек; S.paratyphi A и B - паратифы A и B. Инфекции, вызванные другими видами сальмонелл (сальмонеллёзы), могут протекать в различных формах. Наиболее часто - в виде непродолжительных желудочно-кишечных расстройств (гастроэнтериты); иногда бессимптомно; в некоторых случаях, при наличии предрасполагающих факторов – в генерализованной форме, с осложнениями (сепсис, очаговые инфекции). Сальмонеллы обычно передаются через загрязнённую пищу животного происхождения (мясо, птица, яйца, молоко), возможна также передача инфекции от человека к человеку и от животных человеку. Инкубационный период – от 6 часов до 3 суток. Диагноз ставят на основании выделения возбудителя (см. тест №457 - Посев на патогенную кишечную группу и определение чувствительности к антибиотикам). Серологические исследования используют в качестве вспомогательного метода в целях подтверждения клинических подозрений при получении отрицательного результата бактериологического обследования; для ретроспективного подтверждения диагноза; при позднем обращении пациента, назначении терапии антибиотиками; затяжном течении заболевания. Антитела обычно можно выявить уже к концу первой недели от начала заболевания. Диагностически достоверным считают прирост титров антител более чем 4-кратный в динамике за 7-10 дней. Следует учитывать, что определение титра антител в РПГА не всегда является достаточно чувствительным методом. Антигенные свойства различных серотипов сальмонелл и индивидуальный иммунный ответ варьируют. Повышение титра антител в 4 и более раз наблюдают не у всех пациентов (у леченных – реже, антимикробная терапия препятствует выработке антител). Положительный результат может быть обусловлен перенесённой ранее сальмонеллёзной инфекцией, иногда – неспецифическими перекрёстными реакциями. Деление сальмонелл на серологические группы основано на характеристиках соматического O-антигена (5 основных групп - A, B, C, D, E и др.), при этом отдельные антигенные факторы обозначают арабскими цифрами. Комплексный сальмонеллёзный O-диагностикум включает в себя суммарно антигенные факторы 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 12.

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

  • В качестве вспомогательного теста при диагностике острых кишечных инфекций (после 1 недели заболевания и далее в динамике через неделю) - для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования; в целях ретроспективного подтверждения диагноза; при позднем обращении больного, назначении антибактериальной терапии; затяжном течении заболевания.
  • В дифференциальной диагностике лихорадящих больных.
  • Профилактическое медицинское обследование декретированной группы лиц сферы обслуживания.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Условно-диагностический титр при однократном обследовании: взрослые – 1:400; дети от 6 месяцев до 1 года – 1:200, дети до 6 месяцев – 1:100. Диагностически достоверным считать прирост титров более чем в 4 раза за 7-10 дней.

Выявление в сыворотке крови специфических антител к бледной трепонеме (Treponema pallidum), используемое для подтверждения результатов неспецифических тестов на сифилис, скрининга сифилиса, обследования контактных лиц и доноров крови.

Синонимы русские

Люэс, бледная трепонема.

Синонимы английские

Syphilis, passive hemagglutination test; Syphilis, indirect hemagglutination test; Treponema Pallidum Hemaglutination Assay, TPHA.

Метод исследования

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических ("нетрепонемных"), так и специфических ("трепонемных") антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифические ("нетрепонемные") и специфические ("трепонемные"). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к "трепонемным", то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, "нетрепонемного" исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.

Чувствительность РПГА и других "трепонемных" тестов превосходит чувствительность неспецифических ("нетрепонемных") тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять "трепонемные" тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой "трепонемный" тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.

При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.

Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5 % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза "сифилис" необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Читайте также: