С чего берут смывы на сальмонеллез

Обновлено: 19.04.2024

4.2. Биологические и микробиологические факторы

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ, ОБНАРУЖЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Дата введения 2010-09-02

1. Методические указания разработаны ФГУН "ЦНИИ эпидемиологии" Роспотребнадзора (С.Ш.Рожнова, А.Т.Подколзин).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 13.08.2010 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения и других заинтересованных организаций.

1.2. В настоящих методических указаниях определен порядок проведения лабораторных исследований в целях обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.

1.3. Настоящие методические указания распространяются только на лаборатории, имеющие право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и удовлетворяющие требованиям к помещениям и оборудованию в соответствии с СанПиН 1.3.2322-08.

2. Термины и сокращения

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР - полимеразная цепная реакция

Н-антиген - жгутиковый антиген, представляющий собой термолабильный белок

О-антиген - соматический антиген, представляющий собой липополисахарид клеточных мембран

Смесь О-сывороток - диагностические адсорбированные сыворотки сальмонеллезные

R-форма - шероховатая форма

RAPD - амплификация с произвольными (случайными) праймерами

ISO-6579 - международная организация стандартизации

MLST - мультилокусное секвенирование-типирование

PFGE - электрофорез в пульсирующем поле

VNTR - амплификация тандемных повторов с переменной копийностью

S-форма - гладкая форма

SS-агар - сальмонелла-шигелла агар

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

AFLP - оценка полиморфизма длины фрагментов амплификации

3. Нормативные ссылки

МУ по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями - 1984 г.

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа.

ГОСТ Р 50455-92 Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод).

ГОСТ 9792-73 "Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб".

ГОСТ 7702.20-95 "Субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб".

ГОСТ Р 52833-2007 (ИСО 22174-2005). Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения.

ГОСТ 30705-2000 "Продукты молочные для детского питания. Методы микробиологического анализа".

МУ 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов.

МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов".

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют МУ 1.3.2569-09, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

Информационное письмо МЗ РСФСР N 10/11-3223 от 28.08.1987 г.

"Методы контроля бактериологических питательных сред". Методические указания. МУК 4.2.2316-08.

"Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней". Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.

"Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории" МУ 4.2.2039-0.

Инструкция по применению набора реагентов "Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный О-антигенный жидкий" от 22.08.2008 N 6854-Пр/08.

Laboratory Protocol "Isolation of Salmonella spp. From Food and Animal Faeces" 5 Ed June 2010. WHO Global Foodborhe Infections Network.

Antigenic formulae of the Salmonella serovars, 2007, 9 edition WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella.

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы

4.1. Аппаратура и инструментарий

Наименование аппаратуры и материалов

Названия нормативных документов (ГОСТ, ТУ)

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений pH±0,01

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160±5) °С

* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 37 °С с отклонением от заданной ±1 °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 41,5 °С с отклонением от заданной ±1 °С

Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ТУ 3-3.404-83, ТУ 3-3.154-80, ТУ 3-3.190-80, ТУ 3-3.193-80, ТУ 3-3.986-81, являющиеся авторской разработкой. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 51935-2002. - Примечание изготовителя базы данных.

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды в соответствии с

Гомогенизатор перистальтического типа "Микс-2", "Стомайкер", или других наименований

AES Lab., Cat.N AESAP 1066

Гомогенизатор типа "вортекс"

Микропипетки на 200-1000 мкл

BIOHIT, Cat.N 720040 или "Ленпипет"

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

Холодильник бытовой электрический

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 21239-93. - Примечание изготовителя базы данных.

Скальпель хирургический, 15 см

Часы механические сигнальные

Аппарат универсальный для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (или другая аппаратура для встряхивания)

4.2. Лабораторная посуда и материалы

Бумага фильтровальная лабораторная

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 9412-93. - Примечание изготовителя базы данных.

Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости

Вата медицинская гигроскопическая

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см

Пробирки типов II1, II2

Стекла предметные для микропрепаратов

Спиртовки лабораторные стеклянные

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С (цена деления шкалы 1 °С)

Сальмонеллезы — не одно, а группа острых заболеваний, которые чаще всего проявляются поражением органов пищеварения. Болеют не только люди, но и птицы, животные. По госпитальной статистике на сальмонеллезы приходится больше половины случаев всех инфекционных заболеваний.

Болезнь чаще всего регистрируется как вспышка в родовспомогательном учреждении, в детских садах, лагерях отдыха. Дети — наиболее чувствительный к заражению контингент, особенно грудного возраста.

Поэтому анализ на сальмонеллез включен в перечень обязательных осмотров людей, которые оформляются на работу в учреждения, связанные с обслуживанием детей, пищеблоки. Своевременно выявить заболевание у носителей необходимо для предотвращения его распространения.

Другой опасный контингент — люди со сниженным иммунитетом. Их наибольшее число находится на лечении в больницах разного профиля. Заражение человека в условиях стационара отличается от других случаев высокой устойчивостью возбудителя инфекции к лекарственным препаратам и сложным лечением.

Что известно о возбудителях сальмонеллеза?

В 1880 году впервые выделена сальмонелла у больного брюшным тифом. Дальнейшее изучение позволило обнаружить почти аналогичные бактерии у свиней, кур, других животных. Оказалось, что возбудители сальмонеллеза чаще всего находят у пациентов с клинической картиной острого отравления или гастроэнтерита.

Данные современных микробиологических исследований позволяют разделить класс сальмонелл на два вида и выделить 7 подтипов. Раньше считалось, что их значительно больше, но иммунологическим изучением возбудителей доказана многочисленная разновидность, связанная с антигенным составом (до 2500).

Диагноз сальмонеллеза ставится после выявления конкретной причины у больного. Для человека основным поражающим видом является подвид Еnterica. Он выявлен у 99% заболевших. Подтип сальмонеллы Typhimurium — способен вызвать тяжелое распространенное (генерализованное) поражение с наличием возбудителя в крови.

Редко обнаруживаются такие варианты, как:

Choleraesuis,
Heidelberg,
Derby,
Anatum.

Характеристика возбудителя

Сальмонеллы имеют вид палочек, по отношению к окраске Грамм-отрицательны. Хорошо двигаются. Способны образовать защитную капсулу из полисахаридов. Относятся к факультативным (условным) анаэробам, то есть способны жить как в кислородной среде, так и без него. Энергию получают в результате окислительно-восстановительных реакций соединений, добытых из организма носителя.

Сальмонеллы снабжены множеством пилей (ворсинки на поверхности) и жгутиками

Биохимические свойства положены в основу создания питательных сред. Сальмонеллы способны расщеплять многие углеводы (кроме лактозы, сахарозы), включая глюкозу, мальтозу, арабинозу, и образовывать при этом кислоту и газ.

Отдельные типы имеют отличительные свойства, что также используется в микробиологической диагностике. Например, Тyphi не образует газ, а Paratyphi A не выделяет индол. Все сальмонеллы расщепляют белок до сероводорода. Не имеют фермента оксидазы, содержат каталазу.

Сальмонеллы отличаются живучестью и сохранением заразности :

в реках и открытых водоемах — 120 суток;
соленой морской воде — месяц;
земле до 9 месяцев;
пыли домашнего происхождения — до 1,5 лет;
колбасе и мясных изделиях — от 2 до 4 месяцев;
при заморозке мяса — 12 месяцев;
яйцах — 1 год;
в скорлупе — почти месяц.

Сальмонеллы используют такие продукты, как молоко, творог, сметану, фарш в качестве питательной среды, где активно размножаются.

Бактерии особо чувствительны к нагреванию, кипячению, действию хлоросодержащих дезинфицирующих средств.

Какие свойства определяют способность сальмонелл заражать человека?

Степень заразности определяется факторами вирулентности сальмонелл. К ним относятся:

синтез особых белков, способствующих проникновению возбудителя вовнутрь эпителиальных клеток кишечника и обеспечивающих выживаемость;
стимуляция сальмонеллами цитокинов и хемокинов к воспалительной реакции;
разрушение макрофагов крови человека;
размножение внутри макрофагов с выделением эндотоксинов;
действие эндотоксинов способствует поражению сосудов и нервных окончаний кишечника, повышает проницаемость клеток;
стимуляция выделения хлоридов и выраженной диареи.

Какие антигенные свойства сальмонелл используются в диагностических целях?

Иммунная диагностика сальмонеллеза имеет богатые возможности благодаря наличию у возбудителя выраженных антигенных свойств. По ним можно типировать вид сальмонеллы. Различают 3 основных антигена:

О-антиген — выдерживает длительное кипячение (2,5 часа), имеет свойства эндотоксина;
Н-антиген — находится в жгутиках, разрушается при нагревании выше 75 градусов, состоит из белка флагеллина. Существенным отличительным признаком от других энтеробактерий является способность выделять по фазам оба антигена.
К-антиген — содержится в капсуле.

Vi-антиген характерен только для возбудителей тифа и паратифа. По антигенной преобладающей структуре Ф. Кауфман и П. Уайт в 2001 году предложили классификацию сальмонелл, которая используется и поныне.

Для проведения иммунных тестов сальмонеллеза у пациента, контактного человека берут анализ крови или мочи

Серологическое исследование считается довольно трудоемким, поэтому используется редко в виде реакции гемагглютинации, при помощи эритроцитарных диагностикумов. Определяется не только наличие антител, но и их титр. Для анализа достаточно 1–2 мл крови. Ее разводят изотоническим раствором и добавляют диагностикум с О-антигеном.

Имеет значение результат при определении антител в разведении 1/100 и росте титра в динамических исследованиях почти в 4 раза.Более чувствительной считается реакция непрямой гемагглютинации.

Возможны отрицательные результаты:

в случаях легких форм болезни;
наоборот, при тяжелом течении сальмонеллеза, у новорожденных и грудничков.

Если берут анализ на сальмонеллез из кала или мочи, то используются реакции коагглютинации и иммуноферментный метод.

С помощью ИФА можно исследовать титр антител в крови, раздельно подсчитать его для специфических антител. Наличие высокого показателя М-иммуноглобулинов всегда указывает на активный инфекционный процесс.

Способ иммуноферментного анализа (ИФА) проводят в специальных лабораториях по контролю за эпидемиологической ситуацией. Они представляют эпидемиологам свои данные о выявлении нового подтипа возбудителя.

Анализ также проводится при выздоровлении пациента от сальмонеллеза с помощью парных сывороток с интервалом в неделю. При этом особенно важно выявить бактерионосительство:

острое — три месяца после заболевания;
хроническое — более трех месяцев;
транзиторное — одно-, двухкратный положительный высев сальмонелл из кала без симптоматики и выявления антител.

Культуральные свойства сальмонелл и их значение в бак. диагностике

Лабораторная диагностика сальмонеллеза основывается на бактериологическом способе исследования кала. Он гораздо доступнее и достаточно информативен. Проводится в эпидемиологических лабораториях по направлению врача.

Учитываются способности возбудителя:

расти на самых простых питательных средах при температуре 8–45 градусов;
образовывать равномерное помутнение в жидкой среде;
давать полупрозрачные бесцветные колонии на мясопептонном агаре.

Существуют селективные среды. Так называют добавление специфических веществ, при которых выживают только колонии сальмонелл. К ним относятся любые среды с желчью, селенитовый бульон, висмут-сульфит-агар. Дифференциально-диагностическими средами считаются лактозосодержащие варианты: Эндо, Левина, МакКонки. Колонии вырастают бесцветными, поскольку сальмонеллы неспособны раcщеплять лактозу.

Для посева петлей берется образец материала и размазывается на чашке Петри, содержащей питательную среду

Сальмонеллы можно выявить в фекалиях, рвотных массах, моче, промывных водах из желудка, в крови и спинномозговой жидкости. Оптимальным считается посев крови в течении периода повышения температуры. Из локтевой вены достаточно взять около 7 мл крови, провести засев в желчный бульон или на среду Рапопорта.

Бак анализ включает обязательное исследование биохимических свойств возбудителя, изучение строения под микроскопом. При определении длительности исследования приходится учитывать не только работу лаборантов, но и сколько времени занимает рост колоний.

Обычно результат выдается спустя неделю. Положительные данные получают при бак исследовании у 40–80% пациентов с симптомами сальмонеллеза. Максимальная высеваемость приходится на первые 7 дней заболевания.

При эпидемиологическом расследовании вспышки сальмонеллеза по указанию врача для анализа берутся:

остатки приготовленных блюд;
продукты, использованные в кулинарной обработке;
смывы с кухонного оборудования, тарелок;
при выявлении заражения в медицинском учреждении — смывы с рук персонала, оборудования.

Каждый случай учитывает соблюдение технологии приготовления пищи, санитарную обработку и состояние объекта.

На висмут-сульфит-агаре образуются характерные черные блестящие колонии

Как лабораторным способом выявляют пути заражения?

Для определения кому и как сдавать анализ на сальмонеллез учитываются возможные источники возбудителя. Больной человек с легкой формой или носитель — выявляется при обследовании всего персонала, круга контактных лиц взятием мазка кала на дизгруппу.

В исследование включены наиболее распространенные инфекционные заболевания, проявляющиеся одинаковой клинической картиной (понос, температура, боли в животе, рвота):

дизентерия,
сальмонеллез,
амебиаз,
ротавирусная инфекция.

Забор материала проводится из анального отверстия только под контролем медицинского работника в инфекционном кабинете стерильной тонкой ватной палочкой. В случае выявления сальмонелл или других инфекционных агентов сотрудника отстраняют от работы на срок лечения и получения контрольных отрицательных результатов.

Домашние птицы (куры, утки, индюки) — являются источником заражения человека в половине случаев. Сальмонеллы находятся внутри кишечника или в крови птицы, проникают сквозь скорлупу яиц несущихся особей. Заражение происходит при употреблении невареных яиц. Недостаточной температуре кулинарной обработки.

Некоторые мамы практикуют приготовление для детей напитка из взбитых сырых яиц с сахаром и молоком, забывая про сальмонеллез

Домашние животные (кошки, собаки, хомячки, мыши), а также скот (свиньи, коровы) могут быть носителями инфекции. Они передают сальмонелл через загрязненную калом, слюной, мочой внешнюю среду. Детям достается возбудитель с грязными руками. До 20% случаев заражения зависят от употребления свинины, говядины.

Мясо может заразить больной человек в процессе транспортировки, хранения, переработки.

Эпидемиологическая диагностика

Диагностика сальмонеллеза учитывает:

клиническое течение и особенности симптоматики;
уточнение очага распространенности;
обследование контактных лиц;
выявление нарушения санитарных норм;
исследование продуктов питания.

Особую опасность представляют групповые случаи заболевания в род. домах, психиатрических стационарах, домах престарелых и инвалидов. Сальмонеллез может привести к прерыванию беременности у будущей матери, смертельному исходу младенцев.

Санитарной службе предоставлены широкие права по проведению расследования для выявления источников инфекции и быстрейшей локализации распространения

Принимаются решения о временном закрытии торговых точек, стационаров или перепрофилизации в инфекционное отделение, обработке помещений дезинфицирующими жидкостями. Виновников наказывают административными мерами, штрафами. От того насколько быстро сделают свою работу эпидемиологи зависит недопущение распространения инфекции на территории.

Клиническая диагностика сальмонеллеза

Клиническая диагностика сальмонеллеза основана на учете специфических симптомов и отличительных признаков с другими похожими заболеваниями.

К типичным признакам сальмонеллеза относятся проявления острого поражения желудка и кишечника:

начало внезапное, тяжесть быстро нарастает;
повышение температуры, озноб;
рвота съеденной пищей и желчью в первые часы заболевания;
головная боль;
максимальная болезненность в эпигастрии при гастритической форме, по ходу кишечника при гастроэнтеритическом течении, в правой подвздошной области в случае гастроэнтероколита;
язык сухой, обложен густым налетом;
скопление газа и урчание в кишечнике;
понос с зеленоватыми фекалиями и зловонным запахом, примесью слизи и крови.

Для детей до года характерны обезвоженность организма, увеличение печени и селезенки, сонливость, вялость из-за токсического воздействия на мозг, возможны судороги.

Яркая клиническая картинка начинается с обычного ощущения слабости

В анализе крови наблюдается значительный лейкоцитоз со сдвигом формулы влево, рост СОЭ. В большинстве случаев на этой стадии инфекционный процесс может завершиться.

Тяжелое течение (тифоподобное) наблюдается при попадании возбудителя сальмонеллеза в кровяное русло, сопровождается септическим состоянием, выраженной интоксикацией, розеолезной сыпью. Сальмонеллы при этом способны вызывать дистрофию в селезенке и печени, сформировать очаги вторичного гнойного воспаления по всему телу.

Дифференциальная диагностика

Признаки сальмонеллеза важно отличить от очень похожих симптомов дизентерии, холеры, острого аппендицита, тромбоза мезентериальных сосудов, отравления мышьяком и ядовитыми грибами.

Для дизентерии более характерны тенезмы (ложные позывы к дефекации), скудный стул из слизи с кровью, спазм сигмовидной кишки, определяемый пальпаторно в подвздошной области слева, редкая рвота.

К признакам острого аппендицита относятся:

боль начинается в эпигастрии и переходит в подвздошную область справа;
по характеру боль постоянна, не уменьшается после поноса, усиливается при кашле;
наличие симптомов раздражения брюшины;
чаще запор, если понос, то 3–4 раза без примесей;
рвота не всегда, 1–2 раза в начале заболевания;
в крови выраженный лейкоцитоз, при наблюдении усиливается.

Для тромбоза мезентериальных сосудов необходимо следующие сочетание признаков:

пожилой возраст пациента;
наличие выраженного атеросклероза сосудов;
проявления ишемии судя по клинической картине болей в сердце и на ЭКГ;
в отличии от сальмонеллеза боль невыносимая по интенсивности;
отсутствие определенной локализации болей;
жидкий стул без запаха с примесью крови;
вздутие живота;
нет признаков обезвоживания;
нарастающий лейкоцитоз в крови.

При сальмонеллезе рвота появляется одним из начальных симптомов

При отравлении мышьяком наблюдаются:

головные и мышечные боли;
судорожный синдром;
рвота носит упорный характер, ощущается запах чеснока;
в жидком стуле много слизи;
боль в животе без четкой локализации;
сухость, жжение во рту;
металлический привкус;
отечность лица;
выраженный конъюнктивит;
возможны парезы и параличи.

Для отравлений грибами в отличии от сальмонеллеза характерны:

связь с приемом в пищу грибных блюд (перед проявлением симптомов может пройти от одного до трех часов);
бурное начало сразу всех признаков;
боли в животе по типу сильных схваткообразных колик;
тошнота, рвота, бледная поганка вызывает неукротимую рвоту;
слюнотечение;
стул водянистый с кровью;
сильная головная боль, слабость из-за интоксикации;
головокружение, падение артериального давления;
расстройства психики с галлюцинациями, бредом, сопорозным состоянием;
желтушность кожи.

Такое многообразие симптоматики сальмонеллезной инфекции способствует соучастию в процессе диагностики врачей разных специальностей. Сходство признаков часто требует консультации хирурга, кардиолога, у женщин — гинеколога. При этих заболеваниях важным аргументом в пользу сальмонеллеза служат положительные результаты посева, серологических и иммунных тестов.

Санитарно -бактериологический контроль смывов с одежды, рук, инвентаря, оборудования

В целях осуществления постоянного санитарно- бактериологического контроля на предприятиях общественного питания, пищевых отраслей различного профиля за поверхностью объектов, контактирующих с продукцией, применяются различные показатели. Например, определяют общую бактериальную обсемененность объекта (руки работников, спецодежда, оборудование и т.п.), наличие санитарно-показательной микрофлоры (БГКП, энтерококков), а также в отдельных случаях наличие на поверхности исследуемого объекта условно-патогенной и патогенной микрофлоры, характерной для данного производства (при использовании мясного сырья — микроорганизмов рода Salmonella , в кондитерском производстве — Staphylococcus ). Общую бактериальную обсемененность объекта определяют количественно (обычно в перерасчете на 1см 2 поверхности- микробное число), а также, в отдельных случаях- качественно.

Данные показатели определяются как в плановом порядке в лабораториях производства и работниками СЭС, так и внепланово по эпидемическим показаниям.

Отбор проб для санитарно-микробиологического исследования предметов обихода и оборудования проводится с помощью следующих методов:

• смывов (тампонами или салфетками );

• отпечатков (контактный метод );

Метод смывов. Этот метод является основным при отборе проб для исследования твердых поверхностей. Смывы с крупных плоских поверхностей (столы, подоконники, полы, стулья, оборудование, инвентарь и т.д.) производят перед началом рабочего дня, либо после санитарной обработки в санитарные дни. Общая площадь поверхности крупных объектов, с которой берется смыв — 100 см 2 . Для ограничения поверхности используют шаблон (трафарет) площадью 25 см 2 , изготовленный из металла, накладывая его последовательно на 4 разных участка. Трафареты перед отбором смывов должны быть простерилизован ы. Смывы с рук работников следует производить перед началом работы. При взятии смывов с рук протирают тампоном обе ладони рук, проводя не менее 5 раз по одной ладони и пальцам, затем протирают участки между пальцами, ногти и под ногтями. При взятии смывов с санитарной одежды протирают 4 площадки по 25 см 2 : нижнюю часть каждого рукава и две площадки с верхней и передней части спецовки. Смывы с посуды на предприятиях общественного питания производят, протирая тампоном всю поверхность исследуемых объектов — для тарелок, рабочую поверхность — для ложек, вилок и т.д. (в количестве 2-3 штуки для мелких объектов). Смывы с мелких предметов можно получить, погрузив их непосредственно в колбу со стерильной жидкостью. В течение 10 мин их встряхивают, затем полученную смывную среду используют для посевов. В каждом случае используют стерильные ватные или марлевые тампоны,
которые перед употреблением смачивают стерильным изотоническим раствором хлорида натрия, водой или питательной средой (чаще мясопептонным бульоном или средой Кесслера). При контроле жирных поверхностей пользуются сухими тампонами или салфетками.

Салфетки помещают в колбы с увлажняющей жидкостью и транспортируют в лаборатории с соответствующим сопроводительным документом, где проводятся соответствующие посевы: на общую обсемененность смыва или его разведения, на присутствие санитарно-показательных (БГКП, энтерококков), патогенных (сальмонелл, синегнойной палочки, протея) микроорганизмов на соответствующие сред ы.

Метод отпечатков, или контактный метод , применяется для определения биологической контаминации ровной гладкой поверхности (как горизонтальной, так и вертикальной ). Кусочки марли (в виде кружков диаметром 3—6 см), мембранные фильтры или полоски фильтровальной бумаги помещают в чашки Петри и заливают расплавленной плотной средой (3% мясо-пептонным агаром или средой Эндо двойной концентрации). После остывания стерильным пинцетом забирают кружочки или полоски и накладывают стороной, пропитанной средой, на исследуемую поверхность, прижимая осторожно пинцетом. Затем переносят в стерильную чашку Петри для последующей инкубации (нижней поверхностью вверх ). Метод отпечатков выгодно отличается от метода смывов возможностью непосредственного обнаружения загрязнения объектов окружающей среды и отсутствием потери микробов в исследуемых предметах (что всегда происходит при распределении микрофлоры со смытой поверхности в смачивающей жидкости).

Метод агаровой заливки применяется для определения микрофлоры различных горизонтальных поверхностей, а также тканей. Для отбора пробы используется специальная металлическая пластинка высотой 2 см в виде кольца усеченной формы с диаметром верхней поверхности круга 5 см и нижней меньшей — 4см. (рис. 9 ,а). Перед исследованием кольцо фламбируют обжиганием, охлаждают, помещают на поверхность исследуемого объекта нижним краем и заливают расплавленным и остуженным до 45 °С мясопептонным агаром или средой Эндо. Спустя 5 -10 мин после застывания среды кольцо осторожно снимают и вытряхивают в стерильную чашку Петри застывшую агаровую пластинку вверх нижней поверхностью, соприкасавшейся с исследуемым объектом. Метод удобен тем, что на поверхность среды захватываются все микроорганизмы, находящиеся на исследуемом участке объекта, но он не дает представления об общей обсемененности предметов из-за ограниченности исследуемой площади. Его рекомендуют применять при небольшой бактериальной загрязненности.

При оценке санитарного состояния предметов обихода, изготовленных из тканей (постельное белье, одеяла, одежда и т. д.) можно применять метод, заключающийся во встряхивании участка загрязненных тканей над чашкой Петри с питательной средой. Обследуемую ткань зажимают в специальной металлической обойме, состоящей из двух колец, вкладываемых друг в друга (рис.9, б), и помещают над чашкой Петри со средой. Встряхивание ткани можно производить просто поколачиванием по ее наружной поверхности стерильным пинцетом или, закрепив в центре ткани стерильную булавку, несколько раз ее оттягивают и отпускают. Вместе с пылью из ткани на питательную среду попадают и находящиеся в ней микроорганизм ы. Чашку закрывают и помещают в термостат для инкубаци и.

Определение общей микробной обсемененности объекта

Определение энтерококков в смывах Проводится титрационным методом или методом мембранных фильтров. Обильный рост колоний энтерококков свидетельствует о свежем фекальном загрязнении исследуемого предмета обихода. За титр энтерококка принимается то

предельное разведение смыва, в котором обнаружены энтерококки.

Исследование смывов на присутствие патогенных стафилококков, сальмонелл, протеев, синегнойной палочки проводят так же, как при санитарно-бактериологическом контроле пищевых продуктов.

Оценка санитарного состояния объектов окружающей среды

При оценке санитарно-микробиологического состояния объектов исходят из цели обследования и назначения этих объектов. Официальных регламентаций о состоянии, составе микрофлоры различных объектов практически нет.

Имеющиеся инструктивные материалы по санитарно- микробиологическому контролю предприятий обществен-ного питания и торговли пищевыми продуктами указывают на то, что фекальное загрязнение должно быть исключено, т. е. не должно быть БГКП на оборудовании (не соприкасающимся с сырыми продуктами), на вымытой посуде. На всех обследуемых предметах обихода и оборудования не должны обнаруживаться патогенные микроорганизм ы: их присутствие указывает на реальную опасность заражения. К сожалению, не всегда удается избежать фекального загрязнения на производстве, в больницах и т.д. В связи с этим, исходя из опыта санитарной практики, если БГКП обнаруживаются только в 5% проб, взятых с предметов обихода и оборудования, санитарно-гигиеническое состояние обследуемого предприятия (лечебного учреждения) расценивается как удовлетворительно е.

По показателям общей обсемененности: санитарное состояние поверхности считается отличным, если ОМЧ на 1см 2 не превышает 100, хорошим — при микробном числе от 100 до 1000, удовлетворительным — более 1000, плохим — более 10000.

В то же время выделение патогенных стафилококков в клиниках хирургического профиля и в родильных домах с предметов обихода и от персонала свидетельствует о санитарном неблагополучии. В этом случае проводится обязательное определение фаговаров и антибиотикограммы выделяемых стафилококко в.

При обследовании различных объектов на стерильность (перевязочный и шовный материал, системы переливания крови, шприцы, иглы, грудное молоко, жидкость для питья детей и т. д.) не должно быть роста во всех посевах.

Обратившись в санэпидемслужбу, вы можете не только заказать такие распространенные услуги, как дезинфекция, дезинсекция или дератизация, но также обратиться в лабораторию при СЭС, которая проводит самые разные анализы. Одними из наиболее востребованных являются микробиологические смывы – на золотистый стафилококк, легионеллы, сальмонеллы и т.п.

Для чего нужно микробиологическое исследование смывов

Изучение микрофлоры смывов необходимо:

Для определения санитарно-гигиенического состояния заведений общественного питания – ресторанов, кафе, столовых в школах, детских садах, больницах, а также предприятий пищевых торговых сетей – при этом исследуется загрязненность рабочих поверхностей, окружающих предметов и рук работающего в сфере общепита персонала.
Для выявления путей распространения опасных инфекционных заболеваний – при этом изучаются смывы, взятые с поверхностей исследуемых объектов и рук людей.

При проверке организаций общественного питания микробиологический анализ смывов позволяет определить общий уровень загрязненности предприятия, наличие или отсутствие нарушений в технологиях приготовления продуктов питания, сделать выводы о соблюдении санитарно-гигиенических норм. Также с помощью анализа смывов можно определить правильность хранения продуктов и готовых блюд. Главная же цель микробиологического анализа смывов – это снижение рисков отравлений, острых кишечных отравлений и других заболеваний, связанных с приемом некачественной пищи. Анализ результатов исследования и принятие соответствующих мер по повышению санитарно-гигиенического уровня на предприятии – залог высокого качества и безопасности продукции.

Что проверяется при лабораторном анализе смывов

Каждое предприятие общественного питания обязано регулярно осуществлять санитарно-бактериологический контроль, который связан с исследованием предметов и объектов, соприкасающихся с пищей или используемых при её приготовлении, обработке и хранении. Обычно исследуются:

Вода, используемая в процессе производства,
Оборудование, бытовые предметы, кухонный инвентарь,
Продукты и полуфабрикаты, готовые блюда и сырье,
Смывы с рабочей одежды и кожи рук работников предприятия общепита, с рабочих столов (используемых для обработки пищевых продуктов),
Пробы с посуды и столовых приборов.

Физические лица также могут заказать исследование микробиологических смывов:

Это возможность дополнительно позаботиться о здоровье членов семьи,
Шанс проверить соответствие условий жилого помещения - квартиры или дома санитарно-эпидемиологическим нормам.

Виды исследований микробиологических смывов

Методика сбора и изучения смывов широко используется во всем мире, поскольку дает очень точные и объективные результаты, а также помогает определить присутствие тех или иных патогенных микроорганизмов.

В нашей лаборатории при санэпидемслужбе можно заказать следующие виды исследований:

Микробиологические смывы БГКП – позволяют определить наличие или отсутствие бактерий группы кишечных палочек.
Микробиологические смывы ОМЧ помогают установить общее микробное число, т.е. количество микроорганизмов 1 кубическом метре воздуха. С помощью этого исследования проверяется микробиологическое состояние вентиляционных систем и систем кондиционирования.
Микробиологические смывы Сальмонеллы применяются для определения обсемененности сальмонеллами объектов внешней среды, а при вспышках сальмонеллеза – для установления источников заболевания и факторов передачи возбудителей.
Итоговая обсемененность – исследование позволяет установить микробиологическую загрязненность воздуха в офисах и административных помещениях.
Микробиологические смывы Легионеллы включают анализ воздуха и смывов на наличие бактерий Legionella, которые способны вызвать легионеллез – тяжелое заболевание, поражающее легкие человека и напоминающее пневмонию.
Микробиологические смывы на Золотистый стафилококк – исследование смывов на наличие патогенного стафилококка, санитарно-показательного микроорганизма, который может вызвать самые разные гнойно-воспалительные заболевания, хотя также встречается и бессимптомное носительство.
Микробиологическое исследование плесени, грибка и дрожжей

Особенности забора проб и проведения микробиологического анализа смывов

Наших заказчиков часто интересует, как происходит забор материалов для исследования. Смывы собирают стерильными салфетками или ватными тампонами, которые предварительно смачивают стерильным изотоническим раствором.

Существуют некоторые правила забора материала для анализов:

Смывы с инвентаря и оборудования производят в санитарные дни после санитарной обработки или перед началом работы,
Если смыв необходимо взять с больших площадей – столы, стены, тогда пробы берут в нескольких местах (для площади в 100*100 см).
При сборе смывов с рук сотрудников общепита используют также стерильные тампоны или салфетки, которыми протирают тыльную часть кисти, затем ладонь не менее 5 раз, после чего межпальцевые участки и ногтевое ложе, а также зону под ногтями.
Собирая смывы с санитарной одежды, необходимо протереть 4 участка площадью 5*5 см каждый: нижние части обоих рукавов, а также 2 участка с нижней и верхней части переда спецовки.

Заказав анализ микробиологических смывов в частном порядке до проверки контролирующего органа, любое предприятие общепита сможет заранее выявить имеющиеся проблемы, устранить их и тем самым благополучно избежать санкций и штрафов.

Читайте также: