Сальмонеллезный диагностикум инструкция по применению

Обновлено: 24.04.2024

Диагностикум Сальмонеллезный ВИ-антигенный (ВИ-Диагностикум)

сальмонеллезный Ви

Набор реагентов Диагностикум Сальмонеллезный ВИ-антигенный предназначен для выявления в сыворотке крови человека специфических антител к Ви-антигену сальмонелл тифа в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

2.1. Принцип метода.

Действующим началом Диагностикум Сальмонеллезный ВИ-антигенный является Ви-антиген, фиксированный на поверхности эритроцитов. При взаимодействии с сыворотками, содержащими антитела к Ви-антигену, наблюдается феномен агглютинации эритроцитов.

2.2. СОСТАВ НАБОРА

АнаЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.

3.1. Диагностикум должен агглютинироваться в РПГА сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой в разведении не менее чем 1:160.

Условным уровнем диагностической характеристики сыворотки крови здоровых людей следует считать разведение сыворотки не выше 1:20.

3.2. Время проведения анализа – 2 ч.

3.3. Набор рассчитан на 8 определений.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР (М., 1981 г.).

Анализируемые сыворотки, а также находящиеся с ними в контакте реагенты следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции — обращаться с ними следует осторожно:

работать в резиновых перчатках;
при пипетировании необходимо пользоваться автоматическими дозаторами;
при завершении работы анализируемые сыворотки и находящиеся с ними в контакте реагенты, инструменты подвергать обработке дезинфицирующим раствором
оборудование до и после работы протирать 70 % этиловым спиртом.

Анализируемые сыворотки должны быть инактивированы при температуре 56 0 С в течение 30 мин.

Объективные результаты анализа гарантируются при выполнении следующих условий:

Внешний вид упаковки и препарата может отличаться от изображённого на фотографии

Филиал АО НПО "Микроген" в г. Пермь "Пермское НПО "Биомед"" Россия, 614089, Пермский край, г. Пермь, ул. Братская, д. 177

Инструкция по применению

Описание

Предназначены для выявления в сыворотке крови человека антител к О-антигенам сальмонелл в реакции пассивной гемагглютинации.

Форма выпуска

Выпускается в комплекте №1: 1 флакон по 6 мл диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный комплексный (1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 12) жидкий; 6 флаконов по 0,1 мл сыворотки диагностические сальмо- неллезные неадсорбированные сухие к отдельным серогруппам A, B, C1, C2, Д, E; 1 флакон по 1 мл 1% взвесь формалинизированных, несенсиби- лизированных эритроцитов барана; 4 флакона по 8 мл 0,9% раствора натрия хлорида; планшет круглодон- ный для иммунологических реакций 2 штуки. В комплекте № 2: 1 флакон по 3 мл диагностикум эритроцитарный сальмонелезный О-антигенный жидкий групповой (серогрупп А (1, 2, 12), В (1, 4, 12), С1 (6, 7), С2 (6, 8), Д (1, 9, 12), Е (3, 10); 1 флакон по 0,1 мл сыворотка диагностическая сальмонеллезная неадсорбированная сухая к одной из серогрупп А, В, С1, С2, Д, Е; 1 флакон по 1 мл 1% взвесь формалинизированных, несенсиби- лизированных эритроцитов барана; 2 флакона по 8 мл 0,9% раствора натрия хлорида; планшет круглодонный для иммунологических реакций 1 штука.

Показания для применения

Режим дозирования и способ применения

Формалинизированный фосфатно - солевой буферный раствор (рН 7,0-7,4): 0,86 г натрия хлорида, 0,56 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, предварительно высушенного до постоянной массы, 0,084 г калия фосфорнокислого однозамещенного помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в 800 мл воды очищенной и доводят тем же растворителем до метки. К полученному раствору прибавляют 0,3 % нейтрального формалина.
Содержимое ампулы с сывороткой диагностической к риккетсиям Провачека, сухой для РНГА регидратируют в 1 мл фосфатно-солевого буферного раствора (рН 7,0-7,4).
Флаконы с диагностикумом и эритроцитами человека непосредственно перед использованием интенсивно встряхивают до полной гомогенизации содержимого. После этого флаконы вскрывают. Для проведения РНГА истощения и инактивации исследуемых сывороток не требуется.

Меры предосторожности при применении

Внешний вид упаковки и препарата может отличаться от изображённого на фотографии

Филиал АО НПО "Микроген" в г. Пермь "Пермское НПО "Биомед"" Россия, 614089, Пермский край, г. Пермь, ул. Братская, д. 177

Инструкция по применению

Описание

Действующим началом диагностикума является Ви-антиген, фиксированный на поверхности эритроцитов. При взаимодействии с сыворотками, содержащими антитела к Ви-антигену, наблюдается феномен агглютинации эритроцитов.

Форма выпуска

Выпускается в наборе 1 флакон с диагностикумом - 3 мл, диагностическая сыворотка сальмонеллезная адсорбированная рецептор Ви Сухая в виде лиофилизата из 0,1 мл 1 флакон; 0,9 % раствор натрия хлорида - 2 флакона по 8 мл; планшет для иммунологических реакций однократного применения - 1 шт.

Состав

Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Ви-антигенный, который представляет собой 0,75 % взвесь формалинизированных и сенсибили-зированных Ви-антигеном эритроцитов человека О (I) группы крови в фос-фатном буферном растворе (рН- 7,2 ± 0,2; концентрация - 0,06 моль/л). Консервант - формалин. Гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев; при отстаивании обра¬зуется 2 слоя: плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желто¬ватая надосадочная жидкость 1 флакон-3 мл.

Сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная рецептор Ви сухая - гомогенная масса от белого с коричневатым оттенком до бежевого цвета. 1 флакон - из 0,1 мл.

Поддерживающий раствор - 0,9 % раствор натрия хлорида - прозрачная бесцветная жидкость, рН от 6,5 до 7,5. 2 флакона -по 8 мл.

Планшет круглодонный для иммунологических реакций однократного применения - состоит из 8 рядов, каждый из которых включает в себя 12 лунок с прозрачным, бесцветным, круглым дном. 1 шт.

Диагностикум должен агглютинироваться в РПГА сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой в разведении не ниже 1/2 их титра, но не менее, чем 1/160. Диагностикум не должен агглютинироваться сыворотками диагностичесскими сальмонеллезными адсорбированными сухими для РА: О рецептор 9 - в разведении 1:40 и выше, Н рецептор d - в разведении 1:10 и выше.

Показания для применения

Предназначен для выявления в сыворотке крови человека специфических антител к Ви-антигену сальмонелл тифа в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Режим дозирования и способ применения

В качестве анализируемых образцов используют образцы сыворотки крови человека.
Анализируемый образец хранят в условиях, предотвращающих бактериальный пророст при температуре от 2 до 8 °С не более 72 часов. Допускается замораживание, замороженные анализируемые образцы перед исследованием разморозить при комнатной температуре.
Анализ образцов с выраженным гемолизом, бактериальным проростом, а также длительно хранившихся без замораживания или повторно замораживаемых не допускается.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Приготовление растворов для РПГА.
Флаконы с сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой вскрыть и добавить 1 мл прилагаемого 0,9 % раствора натрия хлорида, получив, таким образом, разведение 1:10, являющееся рабочим разведением.
Вскрытый флакон с сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой при разведении 1:10 в закрытом виде можно хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение одного месяца.
Диагностикум готов к применению. Перед вскрытием флакон с диагностикумом необходимо осторожно встряхнуть до получения гомогенной суспензии. В ходе работы встряхивание рекомендуется повторять.
Вскрытый флакон с диагностикумом в закрытом виде можно хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение одного месяца.
0,9 % раствор натрия хлорида. Готов к применению.

Проведение РПГА.
При контроле любого количества анализируемых сывороток обязательна постановка 1 ряда агглютинации с сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой.
Для постановки РПГА используют планшет для иммунологических реакций одно-кратного применения. Готовят двукратные серийные разведения анализируемых сывороток в 0,05 мл прилагаемого 0,9 % раствора натрия хлорида начиная с 1:10 до 1:2560 и 1 ряд двукратного серийного разведения сыворотки диагностической сальмонеллезной адсорбирован-ной рецептор Ви сухой, начиная с разведения 1:10, до удвоенного титра, указанного на этикетке флаконов данной сыворотки.
В каждую из лунок с разведениями сыворотки прибавляют по 0,025 мл диагностикума.

Обязательными контролями являются:
1. Контроль сыворотки диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор
Ви сухой и анализированной сыворотки, которые в разведении 1:10 в объеме 0,05 мл вносят
в две контрольные лунки.
2. Проверка отсутствия спонтанной агглютинации диагностикума, для чего в две лунки, содержащие по 0,05 мл 0,9 % раствора натрия хлорида добавляют по 0,025 мл диагностикума.
Планшет встряхивают и помещают на 1,5-2,0 ч в термостат при температуре (37+1) °С.

Меры предосторожности при применении

Объективные результаты анализа гарантируются при выполнении следующих условий:
- хранение всех реагентов набора осуществлять при температуре от 2 до 8 °С;
- не использовать реагенты с истекшим сроком годности;
- не использовать реагенты набора при отсутствии на их упаковке соответствующей маркировки;
- для проведения РПГА использовать реагенты, входящие только в данный набор.

Набор реагентов "Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный для РПГА" (СЭД-Vi) предназначен для выявления антител к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа в сыворотках крови людей реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА).

Характеристика набора

Принцип действия

При наличии антител к возбудителю брюшного тифа наблюдается гемагглютинация сенсибилизированных Vi-антигеном куриных эритроцитов, что приводит к образованию на дне U-образных лунок планшета "зонтика" из осевших эритроцитов. При отсутствии антител к возбудителю брюшного тифа осевшие эритроциты образуют "точку".

Состав набора

Наименование реагента	Описание	Количество в наборе
Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный, сухой 6 % (СЭД)	Формалинизированные куриные эритроциты, сенсибилизированные Vi-антигеном S.typhi. Сухая гигроскопическая масса коричневого цвета. После растворения — суспензия красно-коричневого цвета.	1 фл., из 0,6 мл
Сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная, рецептор Vi, сухая (в разведении 1:20, (К+))	Кроличья сыворотка сальмонеллезная адсорбированная, рецептор Vi, в разведении 1:20. Сухая гигроскопичная пористая масса белого цвета. После растворения — прозрачная жидкость желтоватого цвета или бесцветная.	1 фл., из 0,3 мл
Разбавитель исследуемых проб (РИП)	Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета.	1 фл., 10 мл
Фосфатный буферный раствор (ФБР)	Прозрачная бесцветная жидкость.	1 фл., 10 мл
Планшет полимерный для иммунологических реакций однократного применения	Планшет полимерный для иммунологических реакций однократного применения из прозрачного бесцветного полистирола.	1 шт.

Диагностические характеристики

Диагностикум должен агглютинироваться в РПГА сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной, рецептор Vi, сухой (в разведении 1:20), до титра, указанного на этикетке сыворотки. Условным уровнем диагностической характеристики сыворотки крови здоровых людей следует считать разведение сыворотки не выше 1:20. Время проведения анализа – 30−40 минут. Набор рассчитан на исследование 42 сывороток крови в варианте скрининга или 10 сывороток крови в варианте их титрования.

Меры предосторожности

Дополнительное оборудование и материалы

Оборудование, материалы, растворы:

Анализируемые образцы

Исследуемые образцы сыворотки крови хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 3 суток от момента взятия крови. Допускается хранение сыворотки в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 °С не более 1 года. Перед использованием образцы размораживают при температуре от 16 до 25 °С и перемешивают встряхиванием. Повторное замораживание не допускается. Нельзя использовать образцы с бактериальным проростом и гемолизом. Перед постановкой реакции испытуемые сыворотки прогревают при 56 °С в течение 30 минут.

Проведение анализа

Подготовка контрольной диагностической сыворотки (К+)

Готовят рабочий раствор сыворотки диагностической сальмонеллезной адсорбированной, рецептор Vi, сухой (в разведении 1:20) из 0,3 мл (К+). Для этого к содержимому флакона с К+ добавляют 0,3 мл фосфатного буферного раствора (ФБР). Оставшееся количество сыворотки можно аликвотировать и хранить в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 °С не более 6 месяцев.

Подготовка диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного (СЭД)

Для приготовления рабочего разведения суспензии диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного к содержимому флакона с сухим 6 % СЭД добавляют 0,6 мл дистиллированной воды и оставляют для гидратации на 2 часа при температуре от 16 до 25 °С. Затем к раствору добавляют 2,4 мл фосфатного буферного раствора (ФБР). Рабочий раствор хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 1 мес. Замораживание не допускается.

Постановка РПГА при скрининге сывороток крови

Сыворотки крови для скринингового исследования разводят в лунках планшета следующим образом:

предварительные разведения 1:20 готовят в первых лунках планшета, внося в них сначала 190 мкл раствора РИП, затем – по 10 мкл исследуемых сывороток. Каждую сыворотку вносят отдельным наконечником и тщательно пипетируют (при этом цвет раствора в лунках после добавления сывороток должен измениться с сине-фиолетового на зеленый);
скрининговые разведения 1:40 готовят во вторых лунках, внося в них сначала по 25 мкл раствора ФБР, а затем − по 25 мкл предварительно разведенных сывороток и тщательно пипетируют.

При каждой постановке РПГА необходимо проводить контрольное определение титра К+. Для этого в 8 лунок длинного ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР. Затем в первую лунку вносят 50 мкл рабочего раствора К+ (1:20), тщательно пипетируют и переносят в следующие лунки по 50 мкл, получая 2-кратные разведения от 1:40 до 1:5120. Еще в 4 лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР для контроля СЭД на отсутствие спонтанной гемагглютинации.

Во все лунки планшета со скрининговыми разведениями исследуемых сывороток (кроме первых, содержащих РИП) и контролями вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 30 - 40 минут до полного оседания эритроцитов в контроле.

Постановка РПГА при титровании исследуемых сывороток крови

Титрование исследуемых сывороток и рабочего раствора К+ проводят в коротких рядах планшета. Еще один короткий ряд используют для контроля на отсутствие спонтанной гемагглютинации СЭД.

В первые лунки коротких рядов для титрования исследуемой сыворотки вносят 180 мкл раствора РИП. Во все остальные лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР.

В лунки с раствором РИП вносят 20 мкл исследуемых сывороток (получают разведение 1:10). Каждую сыворотку вносят своим наконечником и тщательно пипетируют (цвет раствора в лунках должен измениться с сине-фиолетового на зеленый). Затем из первых лунок переносят по 50 мкл в следующие лунки рядов, получая двукратные разведения от 1:20 до 1:1280. В конце титрования из последних лунок растворы в объеме 50 мкл удаляют.

Для контроля диагностикума на отсутствие спонтанной гемагглютинации во все лунки короткого ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР.

Во все лунки (кроме первых лунок каждого ряда для исследуемых сывороток, содержащих РИП) вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 30 — 40 минут до полного оседания эритроцитов в контроле.

Учет и интерпретация результатов

Учет результатов при скрининге сывороток крови

Учет результатов проводят по условной шкале четырех крестов. Титром сыворотки считается ее разведение, дающее гемагглютинацию не менее чем на 3 (+++) креста.

Положительным результатом считают гемагглютинацию нагруженных Vi-антигеном эритроцитов не менее, чем на 3 креста (+++).

Контролем качества диагностикума служат 4 лунки контрольного ряда, в которые вносили только раствор ФБР и СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной гемагглютинации — реакция отрицательная (-). В противном случае следует повторить исследование. Если при повторной постановке появляется гемагглютинация, то препарат не используется.

Сыворотки с отрицательным результатом следует считать не содержащими антител к Vi-антигену в диагностическом титре 1:40 и ниже.

Сыворотки, дающие положительный результат в разведении 1:40, следует исследовать повторно в варианте с титрованием сыворотки для установления ее титра.

Результаты можно считать достоверными только в том случае, если титр прилагаемой контрольной сыворотки (К+) соответствует титру, указанному на этикетке.

Учет результатов при титровании сывороток крови

Титром сыворотки считается ее разведение, дающее гемагглютинацию не менее, чем на 3 (+++) креста.

Контролем качества диагностикума служат лунки ряда для контроля СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной гемагглютинации — реакция отрицательная (-). В противном случае следует повторить исследование. Если при повторной постановке появляется гемагглютинация, то препарат не используется.

Лица, у которых обнаружены антитела к Vi-антигену в титре 1:40 и выше, рассматриваются как подозрительные на хроническое носительство возбудителя брюшного тифа. Для окончательной постановки диагноза необходимо углубленное бактериологическое обследование этих лиц.

Утилизация

Утилизация отходов после использования набора реагентов осуществляется в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790−10 ("Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами").

Набор реагентов для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) включает: Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный отдельных основных О-групп сальмонелл по схеме Кауфмана-Уайта, полученный путем сенсибилизации эритроцитов О-антигенами сальмонелл серогрупп А (1, 2, 12), В (1, 4, 12), С1 (6, 7), С2 (6, 8), Д (1, 9, 12), Е (3, 10), представляет собой 1% взвесь эритроцитов барана, сенсибилизированных антигенами сальмонелл в фосфатном буферном растворе (pH 7,0 - 7,4, концентрация 0,06 моль/л), консервированных формалином. Сыворотка диагностическая сальмонеллезная (гомологичная) неадсорбированные сухая. Раствор для разведений с pH 6,5 - 7,5. Суспензия 1% формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана. Планшет круглодонный для иммунологических реакций на 96 лунок однократного применения. Действующим началом диагностикума являются специфические антигены сальмонелл, фиксированные на поверхности эритроцитов. При взаимодействии с сыворотками, содержащими антитела к Salmonella spp., наблюдается феномен агглютинации эритроцитов. Набор рассчитан на 8 определений, фактически можно провести 12

Функциональное назначение

Выявления в сыворотке крови человека специфических антител к О-антигенам сальмонелл в реакции пассивной гемагглютинации.
Анализ проводят на разведенной в 10 раз сыворотке крови человека. Рабочие растворы диагностических сывороток раститровывают в лунки прилагаемого планшета и вносят по 0,25 мл диагностикума. Ставят обязательные контроли. Инкубируют в термостате. Время проведения анализа - 2 часа. Результат реакции учитывают по четырехкрестной системе. Как правило, антитела в наибольшем титре обнаруживают в сыворотке крови только с одним из диагностикумов. В единичных случаях встречаются сыворотки, в которых антитела в разных титрах обнаруживают в реакции с несколькими антигенами. В таких случаях вопрос о возможной серогруппе возбудителя, вызвавшего заболевание у данного больного, решается по наиболее высокому уровню антител, полученному с тем или другим диагностикумом.
Первоначально анализируемые сыворотки проверяют в РПГА с комплексным диагностикумом эритроцитарным сальмонеллезным (набор №1), а при получении положительного результата - с диагностикумами эритроцитарными сальмонеллезными О-антигенными каждой группы (набор №2)

Технические характеристики

Читайте также: