Селективная среда для бактероидов индия

Обновлено: 18.04.2024

Среда — это твердая или жидкая субстанция, содержащая питательные вещества для культивирования (роста) микроорганизмов, а также клеток животных или тканей растений. Культурой называют совокупность микробных клеток, растущих на среде (или в среде).

Твердые и жидкие среды

Микроорганизмы можно выращивать на твердой среде или в жидкой среде (бульоне).

Твердые среды

Твердые среды очень удобны для выращивания бактерий и грибов; их готовят путем смешивания жидкого питательного раствора с гелеобразующим компонентом (обычно агаром) в концентрации 1—2%; при этом получается питательный агар. Агар представляет собой экстракт из красных водорослей. В концентрации 1—2% агар плавится при 90—100 °С и застывает примерно при 44 °С. Агар можно предварительно простерилизовать нагреванием и затем остудить. Микроорганизмы рассевают по поверхности агара после его застывания, либо, если они выдерживают температуру около 44 °С, добавляют к агару непосредственно перед застыванием; тогда они равномерно распределяются по всей среде. Агар прозрачен и, будучи сложным полисахаридом, устойчив к разрушению микроорганизмами; это относится к его преимуществам. Примеры использования твердых и жидких сред будут приведены в последующих разделах. На твердых средах иногда выращивают и культуры тканей растений.

Жидкие среды

Жидкие среды часто используют для изучения роста популяции. Клетки помещают в пробирку, закрытую ватной пробкой или металлической крышкой, или в стеклянный флакон с завинчивающейся крышкой, такой как универсальный сосуд Маккартни, в который помещается около 25 см3 среды — как раз для заливки одной чашки. Перед тем, как среда будет использована для выращивания культуры клеток, она должна быть простерилизована. Добавление небольшого количества клеток к среде называется посевом (или инокуляцией). После инокуляции среду оставляют в термостате при оптимальной для роста данного микроорганизма температуре. Растущие клетки распределяются в среде случайным образом.

При использовании больших объемов среды культуру перемешивают, чтобы предотвратить оседание клеток. Для этой цели применяют механические встряхиватели или магнитные мешалки. Кроме того, пропускают стерильный воздух через среду, чтобы обеспечить поддержание оптимальной концентрации кислорода по всей среде. Для фильтрации воздуха и его стерилизации используют имеющиеся в продаже фильтры либо фильтры из стеклянной или неабсорбирующей хлопковой ваты. Воздух поступает через распылитель — устройство с множеством маленьких отверстий, позволяющее получать идеальные пузырьки. Его крепят на конце трубки, идущей ко дну сосуда с культурой. Жидкие культуры можно выращивать в виде периодических культур или непрерывных культур.

Обогащенные и селективные среды

Селективная среда — это среда, в которую добавляются вещества, подавляющие рост всех организмов, за исключением одного или нескольких. Примером может служить добавление пенициллина к культуре с целью отбора устойчивых к нему организмов, или отбор гибридных клеток в процессе производства моноклональных антител.

Индикаторные среды

Готовые среды

Сухие среды, содержащие агар и все необходимые компоненты, имеются в продаже. Обычно их выдерживают 15 мин в воде и затем, чтобы простерилизовать, автоклавируют в колбах или флаконах в течение 15 мин при 121 °С. В процессе автоклавирования среда перемешивается и растворяется. Внутри автоклава под давлением кипит вода. Автоклав закрывается крышкой с защитным клапаном, выпускающим пар, когда достигнуто необходимое давление. Чем выше давление, тем выше температура кипения воды. Так стерилизуют растворы и оборудование, например, стеклянную посуду. Чтобы убить всех бактерий и их устойчивые споры, обычно достаточно 15—20 мин инкубации при давлении 103 кПа (кН/м2). При таком давлении температура внутри автоклава достигает 121 °С.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Компоненты растворить при нагревании, установить рН 7,2, профильтровать через ватный тампон, разлить во флаконы, автоклавировать при 1 атм. 20 минут.

Перед употреблением среду растопить, охладить до 50 о С, добавить 5% лизированной двукратным замораживанием и оттаиванием цитратной крови донора и витамин К₁ из расчета 0,1 мл 1% раствора на 100мл среды, и канамицин из расчета 1 мг/мл (бактероиды обладают природной устойчивостью к аминогликозидам и желчи). Перемешать, разлить в чашки Петри. После застывания подсушить 10-15 мин.

Свежеразлитую (в течение 2 ч после приготовления) или прередуцированную, т.е. выдержанную в течение суток в анаэростате, среду используют для первичного выделения бактероидов группы B.fragilis, субкультивирования, определения чувствительности к антибактериальным препаратам.

Среда для бактероидов Хенеля-NH – неомицин-агар

Среда NH –основная

Натрия хлорид – 3, 0 г

Na2HPO4*2H2O – 2, 0г

Мясной экстракт – 3, 0 (30, 0 мл мясной воды)

Дрожжевой экстракт – 4, 0 г (40 мл)

Декстроза – 6, 0 г

Агар-агар – 20, 0 г

Дистиллированная вода –до 1000 мл

стерилизация 0, 5 атм.30 минут.

Перед розливом в чашки к основному агару добавляют неомицина или неовитина – 0, 08 г, дезоксихолата натрия – 0, 2г, крови 30 мл или эритроцитарной массы – 20 мл.

Обогащенная питательная среда для контроля стерильности с канамицином и желчью.

Канамицин добавить в среду из расчета 1 мг/мл. для этого 1 г канамицина растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Весь объем раствора канамицина и 20 г сухой желчи добавляют к 1 л среды до стерилизации.

Среда может быть использована для селективного выделения бактероидов группы B.fragilis/

Кровяной агар для бактероидов (КАБ)

Цитратная кровь человека – 7% (70 мл)

Дрожжевой аутолизат – 6% (60 мл)

Глюкоза – 0, 6% (6, 0 г)

Na2HPO4*2H2O – 0, 2% (2, 0г)

Твин -80 – 0, 1% (1 мл)

Na2SO3 – 0, 05% (0, 5 г)

Тиогликолевая кислота – 0, 04% (0, 4 мл)

Цистеин – 0, 025% (250 мг)

МПА расплавленный – 86% (869 мл)

Среду готовят на мясо-пептонном агаре (МПА). 2 г Na2HPO4*2H2O и 1 г твина-80 растворяют при подогревании в 60 мл дрожжевого аутолизата. После фильтрации добавляют смесь к 860 мл МПА. Стерилизуют при 0, 5 атм. 20 минут

После фильтрации добавляют 250 мг цистеина, 0, 04 мл тиогликолевой кислоты и 6 г глюкозы. Устанавливают рН 7, 0, разливают в проьирки по 10 мл. стерилизуют при 0, 5 атм.20 минут. Перед посевлом среду расплавляют на водяной бане, и после охлаждения (до 60°С) прибавляют в каждую пробирку по 0, 2 мл 2, 5% раствора Na2SO3 9приготовленный заранее на стерильной дистиллированной воде) и 0, 7 мл цитратной крови человека (без анотибиотиков).

В селективные питательные среды представляют собой те агары и бульоны, которые служат для изоляции определенной группы микроорганизмов, подавляя развитие других. Они идеально подходят для посева полимикробных образцов, позволяя выделить патоген из сопутствующей микробиоты.

Существует множество селективных сред, от твердых до жидких. Некоторые из них предназначены для изоляции грамположительных бактерий, таких как коагулазоположительные стафилококки, лактобациллы, бифидобактерии и т. Д.

Другие для восстановления грамотрицательных патогенов, таких как виды родов Salmonella, Shigella, Vibrio, Bordetella, Brucella, Pseudomonas и другие.

Также есть они, способствующие росту грибов и дрожжей, таких как виды Candida, Histoplasma, Cryptococcus, дерматофиты и другие.

Следует отметить, что некоторые неселективно обогащенные среды могут становиться селективными при добавлении антибиотиков. Кроме того, некоторые питательные среды могут быть одновременно селективными и дифференцированными.

С другой стороны, существуют селективные жидкие питательные среды; некоторые могут служить в качестве среды обогащения, способствуя обострению отобранной группы бактерий и подавляя обострение других.

Селективные питательные среды широко используются в микробиологических лабораториях для анализа различных типов образцов; а также для выделения большого количества разнообразных микроорганизмов, представляющих клинический, промышленный, экологический и пищевой интерес.

Основа

Селективные культуральные среды основаны на содержании питательных веществ, которые способствуют росту конкретной бактерии или грибка или определенной их группы, и в то же время они должны содержать ингибирующие вещества, которые не позволяют развиваться другим нежелательным микроорганизмам.

Среди пищевых веществ, которые они могут содержать: панкреатический перевар казеина, дрожжевой экстракт, полипептоны и другие.

Среди ингибирующих веществ: антибиотики, соли желчных кислот, ярко-зеленый, кристаллический фиолетовый, основной фуксин, эозин, метиленовый синий, дезоксихолат натрия, сульфит натрия, монолеат сорбитана, цитрат аммония, цетримид, хлорид лития, теллурит калия. , малахитовый зеленый и другие.

Иногда СМИ могут быть как избирательными, так и дифференцированными. Точно так же степень селективности варьируется от одной среды к другой.

Некоторые из них обладают высокой избирательностью, характеризуются экстремальными условиями враждебности для большинства микроорганизмов, и лишь небольшое количество видов способны противостоять условиям окружающей среды и, следовательно, удовлетворительно расти. Например, агар TCBS и агар MRS, среди прочего.

В то время как другие являются умеренно избирательными, то есть те, которые подавляют определенную группу микроорганизмов, таких как грамположительные бактерии. С другой стороны, они способствуют росту большого разнообразия грамотрицательных бактерий; например, агар Mac Conkey.

Наконец, существуют питательные среды с низкой селективной способностью, то есть те, которые позволяют расти широкому спектру грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторых дрожжей, подавляя при этом лишь небольшую группу микроорганизмов. Пример: агар EMB.

Селективные твердые питательные среды

Агар Бэрда-Паркера

Среда, предназначенная для выявления коагулазоположительных стафилококков (Золотистый стафилококк). Содержит в качестве ингибирующих веществ хлорид лития и теллурит калия.

BCYE Agar или забуференный агар с экстрактом дрожжевого угля

Это высокообогащенная питательная среда, особенно для изоляции видов Legionella и Nocardia. Эта среда становится селективной при добавлении противомикробных препаратов, таких как полимиксин B, ванкомицин и анизомицин.

BHI-агар с антибиотиками

Изначально агар BHI является обогащенной средой, но при добавлении хлорамфеникола и циклогексимида он идеально подходит для селективного выделения грибов, представляющих клинический интерес.

БОЛЬШОЙ агарили агар Никерсона

Селективная и дифференциальная среда для выделения видов Candida. Он содержит цитрат аммония, висмут и сульфит натрия, которые действуют как ингибиторы роста бактерий.

Bordet Gengou Agar

Обогащенная и селективная питательная среда, особенно для выделения Bordetella pertussis Y Bordetella parapertussis. Он содержит цефалексин для подавления сопутствующей флоры.

Кампи-агар с кровью

Среда, используемая для выделения рода Campylobacter. Содержит цефоперазон, ванкомицин и амфотерицин B для подавления роста грамотрицательных, грамположительных бактерий и грибов.

Кампилобактер агар Батцлера

Специальная среда для изоляции видов рода Campylobacter. Помимо других питательных веществ, он содержит кровь лошади. Он также содержит различные ингибирующие вещества, такие как новобиоцин, колистин, цефазолин, бацитрацин и циклогексимид.

Кампилобактер Скирроу Агар

Селективная среда для выделения видов Campylobacter. Содержит конскую кровь и другие питательные вещества. В качестве ингибирующих веществ он содержит ванкомицин, полимиксин B и триметоприм.

CCF агар или фруктозный агар, циклосерин, цефокситин

Как следует из названия, он содержит циклосерин и цефокситин в качестве ингибирующих веществ и используется для выделения Clostridium diffcile в образцах стула, среди других образцов кишечника.

Цетримидный агар

Селективная среда, предназначенная для изоляции Синегнойная палочка, способствуя производству пигментов. Цетримид (бромид цетилтриметиламмония) - это вещество, подавляющее рост других бактерий, кромеP. aeruginosa.

Шоколадный агар с изовиталексом и ванкомицином

Эта среда изначально очень обогащенная. Добавление ванкомицина полезно для селективного выделения штаммов Neisseria gonorrhoeae Y N. meningitidis.

ЦИН агар или цефсулодин агар, иргасан, новобиоцин

Это умеренно селективная питательная среда для выделения видов Yersinia.

CNA-агар (колистин, налидиксовая кислота)

Это специальная селективная среда для изоляции грамположительных бактерий, таких как стафилококк, энтерококк, стрептококк и дрожжи, но она подавляет развитие грамотрицательных бактерий, таких как Pseudomonas и виды семейства Enterobacteriaceae.

Чапек агар

Среда предназначена для выращивания сапрофитных бактерий и грибов. Эта среда содержит неорганический азот. По этой причине эта среда считается селективной, поскольку могут развиваться только микроорганизмы, способные использовать неорганические соединения в качестве единственного источника азота.

EMB агар

Слегка селективная и дифференциальная среда, используемая для выделения Enterobacteriaceae. кишечная палочка это особенно заметно на этой среде по блестящему зеленовато-черному цвету его колоний. Его селективность обусловлена наличием анилиновых красителей (эозин и метиленовый синий).

Эндо агар

Минимально селективная и дифференциальная среда, используемая для выделения и дифференциации ферментирующих лактозу и неферментирующих грамотрицательных бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae и другим семействам.

Сульфит натрия и основной фуксин подавляют большинство грамположительных бактерий. кишечная палочка на этой среде образуются характерные темно-красные колонии с переливающимся зеленоватым металлическим блеском.

Гектоен агар

Селективная и дифференциальная среда для выделения энтеропатогенных бактерий родов Shigella и Salmonella. В качестве ингибирующего вещества он содержит соли желчных кислот, подавляющие развитие грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий.

Агар Левенштейна-Йенсена

Среда, специально разработанная для изоляции и развития бактерий рода Mycobacterium, особенно видов туберкулеза, среди прочих.

Среда содержит малахитовый зеленый; Это вещество подавляет сопутствующую грамположительную и грамотрицательную флору, которая была способна противостоять предыдущей дезинфекции образца. Он также содержит глицерин, который стимулирует рост M. tuberculosis, но тормозит развитие М. bovis и другие микроорганизмы.

Мак Конки агар

Это селективная и дифференциальная среда. Он используется для выделения не привередливых к лактозе, ферментирующих и неферментирующих грамотрицательных палочек.

Его селективный характер обеспечивается наличием солей желчных кислот и кристаллического фиолетового. Эти вещества подавляют рост грамположительных бактерий и некоторых привередливых грамотрицательных палочек.

Соленый маннитовый агар

Селективный и дифференциальный агар для выделения Золотистый стафилококк. Эта среда имеет высокую концентрацию хлорида натрия, который подавляет рост большинства бактерий.

СС агар

Умеренно селективная и дифференциальная среда для изоляции родов Salmonella и Shigella. Среда содержит ингибирующие вещества, такие как соли желчных кислот, цитрат натрия и ярко-зеленый цвет. Эти вещества подавляют рост грамположительных бактерий, некоторых грамотрицательных бактерий и некоторых колиформ.

Реган Лоу Агар

Селективный агар для выделенияBordetella pertussis. Среда содержит уголь, цефалексин и амфотерицин B в качестве ингибирующих веществ.

SABHI агар

Селективная среда для изоляции патогенных грибов, таких как дерматофиты, Blastomyces dermatitidis а также Histoplasma capsulatum. Содержит хлорамфеникол.

Конский кровяной агар с бацитрацином

Специальная среда для изоляции Haemophilus influenzae. Бацитрацин подавляет сопутствующую флору.

Угольный агар с лошадиной кровью

Селективная среда, полезная для восстановления штаммов Bordetella pertussis Y Б. парапертуш из клинических образцов. Он содержит цефалексин для подавления сопутствующей флоры.

Канамицин-ванкомицин (KV) Кровяной агар

Селективная среда, специально предназначенная для изоляции анаэробных бактерий, таких как Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium и Veillonella.

Висмут-сульфитный агар

Селективная среда для изоляции Salmonella enterica подгруппа enterica серотипа Typhi. Эта среда содержит ярко-зеленый сульфит висмута для подавления роста грамположительных микроорганизмов и некоторых грамотрицательных бактерий.

Агар TCBS (тиосульфат, цитрат, соли желчных кислот)

Высокоселективная среда для изоляции видов рода Vibrio. Он содержит цитрат натрия, бычью желчь и щелочной pH, подавляющий сопутствующую флору.

Агар Тайера-Мартина

Очень питательная и селективная среда для изоляцииNeisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae. Сопутствующая флора подавляется наличием ванкомицина, колистина и нистатина.

Ярко-зеленый агар

Селективная среда для выделения штаммов рода Salmonella. Как следует из названия, он содержит ярко-зеленый как ингибирующее вещество. Это предотвращает рост грамположительных бактерий и большого количества грамотрицательных микроорганизмов.

Агар Фогеля-Джонсона

Это селективная и дифференциальная культуральная среда, разработанная для изоляцииЗолотистый стафилококк и он подавляет рост грамотрицательных бактерий и даже некоторых грамположительных. Ингибирующие вещества - теллурит калия, хлорид лития и глицин.

XLD агар

Это селективная и дифференциальная среда для изоляции энтеропатогенов сальмонелл и шигелл. Дезоксихолат натрия придает среде селективный характер.

CHROMagar (Candida Medium)

Это селективная и дифференциальная среда, помогающая изолировать и идентифицировать виды Candida. Среда содержит хлорамфеникол для подавления роста бактерий.

Средний Эллингхаузен Маккалоу Джонсон и Харрис (EMJH)

Селективная среда для выращивания лептоспир. Он содержит полисорбат 80, подавляющий рост большинства бактерий.

Селективные жидкие питательные среды

Бульон BHI NaCL 6.5%

Селективный отвар для выздоровления энтерококков. Высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост сопутствующей микробиоты.

ЭК бульон

Селективный бульон для выделения общих и фекальных колиформ. Он содержит соли желчных кислот, которые подавляют рост других микроорганизмов.

Бульон GN

Селективный бульон для восстановления сальмонелл и шигелл. Содержит цитрат натрия и дезоксихолат натрия, подавляющие грамположительные бактерии и колиформные бактерии.

Бульон Раппапорта-Василиадиса

Это селективная среда для обогащения сальмонелл. Содержит малахитовый зеленый в качестве ингибирующего вещества.

Селенитовый бульон

Это селективная питательная среда, полезная для обогащения образцов, в которых предполагается присутствие энтеропатогенных бактерий рода Salmonella.

Как следует из названия, он содержит селенит натрия в качестве ингибирующего вещества, подавляющего рост грамположительных бактерий и большинства бактерий в желудочно-кишечном тракте.

Тетратионатный бульон

Селективный бульон для обогащения и восстановления штаммов рода Salmonella.

Тетратионат, образующийся в результате реакции между тиосульфатом натрия и йодированным раствором, присутствующим в среде, подавляет рост колиформных бактерий и способствует развитию бактерий, содержащих фермент тетратионатредуктазу (сальмонелла).

Он также содержит соли желчных кислот, а некоторые разновидности включают ярко-зеленый цвет; оба вещества подавляют большинство грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий (колиформ).

Тиогликолятный бульон Campy

Специальный бульон, способствующий развитию C. jejuni subsp jejuni. Содержит амфотерицин B, цефалотин, полимиксин B, триметоприм и ванкомицин.

Бульон Тодда-Хьюитта с кровью и антибиотиками

Он служит для обогащения образцов и способствует развитию Streptococcus agalactiae вагинальных выделений. В качестве ингибиторов он содержит налидиксовую кислоту и гентамицин или колистин.

Бактероиды группы Bacteroides fragilis. Бактероиды группы Bacteroides ureolytсus. Принципы микробиологической диагностики бактероидов. Лечение заражений бактероидами.

Бактерии группы Bacteroides fragilis. Включают 9 видов неподвижных бактерий, образующих капсулу. Наиболее часто вызывают внутри-брюшинные и тазовые абсцессы, бактериемию, инфекции пролежней, артриты и остеомиелиты (основные возбудители В. thetalotaomicron, В. ovatus, В. vulgatus, В. distasonis). В мазках из клинического материала представлены бледными полиморфными палочками с закруглёнными концами.

Бактероиды часто неравномерно окрашиваются по Граму. На 5-7-е сутки образуют серовато-белые, прозрачные или мутноватые негемолизирующие S-колонии 1-3 мм в диаметре. На бульонах дают гомогенное помутнение. Ключевые признаки группы — способность расти на средах с 20% содержанием желчных солей; резистентность к канамицину (100 мкг), ванкомицину (5 мкг) и колистину (10 мкг). Чувствительны к действию производных имидазола.

Бактерии группы Bacteroides ureolytсus Группу образуют Bacteroides ureolyticus и Bacteroides gracilis; основное их отличие — инертность к углеводам. Вызывают инфекции женских половых органов, поражения дыхательных путей, костей и мягких тканей. В мазках из клинического материала представлены тонкими палочками с закруглёнными концами. На КА образуют мелкие полупрозрачные колонии, у некоторых штаммов — распластанные на поверхности. Часто вызывают позеленение и коррозию сред, содержащих кровь. Ключевые признаки группы — неспособность к росту на средах с 20% содержанием жёлчных солей, резистентность к канамицину (100 мкг) и колистину (10 мкг), но чувствительность к ванкомицину (5 мкг).

Принципы микробиологической диагностики бактероидов

Принципы получения и транспортировки образцов аналогичны таковым при подозрении на анаэробную инфекцию — следует избегать контакта образца с атмосферным воздухом. Образование супероксид дисмутазы В. fragilis позволяет бактериям сохранять жизнеспособность при непродолжительном контакте с атмосферным воздухом.

Бактероиды культивируют на КА, тиогликолевой среде. Оптимальны для роста анаэробные условия при 10% содержании С02 в атмосфере, температура 37 °С, рН 7,6-7,8.

Лечение заражений бактероидами

Бактероиды резистентны к пенициллинам, клиндамицину, цефалоспоринам 1-го и 2-го поколений. Препараты выбора — левомицетин, метронидазол и имипенем.

Читайте также: