Сероконверсия вич больше 6 месяцев

Обновлено: 27.03.2024

После того, как ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) попал в организм, он начинает размножаться в клетках, которые имеют определенные рецепторы. Преимущественно это клетки иммунной системы – Т-лимфоциты, макрофаги, клетки Лангерганса, клетки микроглии. Больше всего от воздействия ВИЧ страдают именно Т-лимфоциты, так называемые СD4-клетки, или Т-хелперы. В результате размножения вируса внутри этих клеток они разрушаются, постепенно их число уменьшается. Таким образом, для того чтобы выяснить, как далеко зашла инфекция, и насколько активен вирус в организме человека, используются два основных показателя – количество CD4-клеток в периферической крови и вирусная нагрузка (количество вирусных частиц, которое исследуется также в периферической крови).

Анализ на вирусную нагрузку необходимо сдавать всем пациентам в следующих случаях:

  • при выявлении ВИЧ-инфекции
  • перед началом АРТ (антиретровирусной терапии), если оно по каким-либо причинам было отложено на месяц и более после выявления заболевания
  • через 4 недели после начала или смены схемы АРТ (по любым причинам)
  • с определенной периодичностью (1 раз в 3-6 месяцев) на фоне лечения

Кровь на вирусную нагрузку при ВИЧ-инфекции необходимо сдавать не ранее, чем через 3 часа после последнего приема пищи, при этом можно пить воду без газа.

Как правило, у пациентов, у которых впервые выявлена ВИЧ-инфекция, и которые еще не получали АРТ, выявляется высокая вирусная нагрузка – это несколько десятков, сотен тысяч, а иногда и миллионов копий вируса в 1 мл крови. Прием антиретровирусных препаратов подавляет размножение вируса, и постепенно показатели вирусной нагрузки падают. Число CD4-лимфоцитов при этом увеличивается (если изначально этот показатель был снижен). Однако анализ на вирусную нагрузку является более чувствительным маркером эффективности проводимой терапии, чем количество CD4-лимфоцитов. Снижение количества вируса в организме происходит постепенно. В течение первого месяца лечения ожидаемое снижение вирусной нагрузки составляет около 1lg, (то есть она должна упасть в 10 раз по сравнению с уровнем до лечения). К 12-16 неделе терапии обычно показатели вирусной нагрузки составляют менее 400 копий/мл или становятся неопределяемым . Затем, если терапия подобрана правильно, пациент не прерывает и не пропускает прием препаратов, вирусная нагрузка остается нулевой. Нулевая вирусная нагрузка не означает, что вируса совсем нет в организме.

Mask_Group (3).jpg

Это значит, что его количество так мало, что оно не улавливается существующими тест-системами. Чувствительность имеющихся в распоряжении лабораторий тест-систем может быть различной – наиболее часто используются анализаторы, которые могут выявить более 20, 40 и 150 копий ВИЧ в 1 мл крови. Считается нормой, если пациент достигает нулевой вирусной нагрузки в течение 6 месяцев непрерывного лечения (нередко это происходит быстрее).

В дальнейшем на фоне АРТ показатели вирусной нагрузки в норме сохраняются на неопределяемом уровне, однако допускаются единичные подъемы не более 200 коп/мл. Если же в нескольких подряд анализах крови выявляется повышение количества вируса, у пациента, дисциплинированно принимающего препараты, в первую очередь необходимо исключить устойчивость вируса к одному или нескольким применяемым лекарствам. Для этого также существует специальный тест. При подтверждении резистентности ВИЧ показана смена схемы терапии с учетом того, к каким препаратам вирус по-прежнему чувствителен, а к каким – приобрел устойчивость, и их применение нецелесообразно.


Mask_Group (4).jpg

Медицинский редактор: руководитель Университетской клиники, к.м.н., врач-инфекционист Коннов Данила Сергеевич

Статистика
За сутки добавлено 6 вопросов, написано 2 ответа, из них 1 ответ от 2 специалистов в 0 конференции.

СПИД - статьи.

Рейтинг жалоб

Рейтинг лекарств

СПИД | 6 причин заявлений о поздних сроках сероконверсии

Вернуться в конференцию: СПИД.

Статьи всех конференций.

Статья написана Andrew

Повторю наших 6 причин заявлений о поздних сроках сероконверсии, которые мы повторяем каждой волне фобов на этом форуме (слава Богу, люди пока уходили отсюда рано или поздно):
1. Неправильная оценка ситуации риска, когда у человека действительно есть ВИЧ. Многие до сих пор думают, что ВИЧ заражаются с первого контакта, хотя на самом деле заражение произошло позже, что собственно и показывает такой результат теста. То же самое касается заражения от другого партнера - люди слишком часто судят о том, от кого заразились, по внешнему виду, порядочности и пр субъективным критериям, а не по единственному правильному - конкретному ВИЧ-статусу партнера.
2. Сдача теста на позднем сроке со слишком большим разрывом. Если человек сдал тест на 1-1,5 и получил затем плюс н.п. на 5 месяце, это не значит что у него антитела стали определяться в 5 месяцев. Они наверняка у него определялись к 2 месяцам, как у подавляющего бол-ва.
3. Ложноположительный ИФА, не проверенный иммуноблотом. Увы, в условиях нашей медицины случаи не единичны по причине некомпетентности и простого наплевательства. Есть даже случаи постановки по ложноположительному ПЦР. Как сказал один подобный авиценна, а зачем сдавать иммуноблот, если все ясно
4. Те редкие исключения из правила 3 месяцев, о которых мы постоянно упоминаем, - первичные иммунодефициты и более частое исключение - регулярный прием иммунодепрессантов для лечения аутоиммунных заболеваний.
5. Тестирование на старых системах 90-хх, возможно в начале 2000 гг. Минздрав РФ вывел из обращения ряд тест-систем , не обладающих достаточной чувствительностью, в 2003 г.
6. Провокаторство с целью досадить консультантам и/или фобам. Причем чем больший заявляемый человеком срок, чем невероятнее факты, тем больше вероятность именно этого варианта (у нас в этом году уже двое заявило о том, что у них положительные рез-ты после 3 месяцев на самом деле, не имея их). Те, которые с фантазией побогаче, могут добавлять еще творческие истории.
Каждый раз, если разобраться в конкретных обстоятельствах таких заявлений, вы обязательно наткнетесь минимум на одну из этих причин.
На современных системах подавл. бол-во показывает пол. ИФА уже к 2 месяцам, 3 месяц - для отлавливания того малого кол-ва, которое не попадает в 2 месяца. Люди с фобией всегда склоняются к самому худшему - таково св-во это расстройства, и то, что они полагают в этом сугубо медицинско-техническом вопросе, не имеет значения. Подобного рода вещи - одна из причин, почему первый совет людям с фобией - перестать бродить по ВИЧ сайтам. Никакого лекарства от фобии там не найти, а вот если кто-то что-то напишет, то вы, не зная ничего этого и не зная достоверных фактов этого случая, будете травмировать себя месяцами.

В США тестирование на ВИЧ большую часть времени с момента его появления было целенаправленным и проводилось пациентам, принадлежащим к определенным группам риска: 1) взрослым из групп населения, в которых, по оценкам эпидемиологов, количество серопозитивных лиц составляет более 1%; 2) беременным; 3) жертвам сексуального насилия; 4) после контакта с ВИЧ на рабочем месте; 5) всем, кто выразил желание пройти тестирование на ВИЧ (N Engl J Med 2006; 355:647; Clin Infect Dis 2004; 39:609). Однако CDC недавно рекомендовал изменить подход к тестированию на ВИЧ, предложив основные принципы нового подхода:

  • тестирование на ВИЧ должно войти в число стандартных процедур оказания медицинской помощи пациентам 13–64 лет и должно проводиться во всех медицинских учреждениях с большим потоком пациентов, таких как отделения неотложной помощи, клиники первичной медицинской помощи, приемные покои больниц, женские консультации и венерологические клиники;
  • согласие на получение медицинской помощи в этих учреждениях будет подразумевать и согласие на проведение тестирования на ВИЧ; пациент может отказаться от тестирования на ВИЧ так же, как он может отказаться от любого другого обследования или вмешательства;
  • в случае положительного результата тестирования на ВИЧ пациенты должны направляться в медицинское учреждение, предоставляющее помощь по поводу ВИЧ-инфекции;
  • пациентам из групп высокого риска следует проводить тестирование на ВИЧ ежегодно;
  • результаты тестирования на ВИЧ должны выдаваться таким же образом, как результаты любых других исследований;
  • консультирование по вопросам профилактики желательно, но не обязательно.

Стандартный протокол серологического тестирования

Стандартный протокол серологического тестирования на ВИЧ включает скрининговый иммуноферментный анализ (ИФА), положительный результат которого подтверждается с помощью вестерн блота. Показанием к проведению вестерн блота служит неоднократное получение положительного результата с помощью ИФА. Вестерн блот позволяет обнаружить антитела к белкам ВИЧ-1, в том числе белкам сердцевины вируса (p17, p24, p55), гликопротеинам оболочки (gp41, gp120, gp160) и ферментам (p31, p51, p66). Положительный результат ИФА всегда следует подтверждать при помощи вестерн блота, поскольку у ИФА 2% ложноположительных результатов. Результаты вестерн блота интерпретируются следующим образом (Am J Med 2000; 109:568):

  • отрицательный: отсутствие полос;
  • положительный: полосы, указывающие на наличие антител к gp120/160 + либо к gp41, либо к p24;
  • неопределенный: наличие любых полос, сочетание которых не удовлетворяет критериям положительного результата.
Точность.

У пациентов с установившейся инфекцией (>3 месяцев после инфицирования) чувствительность стандартного протокола серологического тестирования (ИФА и вестерн блот или иммунофлюоресцентный анализ) составляет 99,5% (ДИ 98–99,9%), а специфичность — 99,994% (N Engl J Med 2005; 352:570; JAMA 1991; 266:2861; Am J Med 2000; 109:568). При получении положительных результатов следует подтвердить диагноз при помощи повторных серологических тестов на ВИЧ, либо клиническими или лабораторными данными.

Ложноотрицательные результаты.
Ложноположительные результаты.

Частота ложноположитель- ных результатов стандартного протокола серологического тестирования на ВИЧ (ИФА с последующим вестерн блотом) отмечалась в диапазоне от 0,0004% до 0,0007% (JAMA 1998; 280:1080; Arch Intern Med 2003; 163:1857; Arch Intern Med 2000; 160:2386). Ложноположительный результат можно заподозрить, если у пациента отсутствуют факторы риска инфицирования ВИЧ, не определяется вирусная нагрузка и показатели количества лимфоцитов CD4 в пределах нормы (Arch Intern Med 2003; 163:1857). Если у пациента отсутствуют другие лабораторные признаки ВИЧ-инфекции, серологическое тестирование следует провести повторно. Возможные причины ложноположительных результатов:

Неопределенные результаты

Неопределенные результаты вестерн блота получают в 4–20% всех случаев, когда выявляются полосы, соответствующие белкам ВИЧ-1. Возможные причины неопределенных результатов:

  • Серологическое обследование проводилось в периоде сероконверсии; обычно первыми появляются антитела к р24.
  • Поздние стадии ВИЧ-инфекции, когда обычно исчезают антитела к белкам сердцевины вируса.
  • Наличие перекрестно реагирующих неспецифических антител, которые появляются при коллагенозах, васкулитах, других аутоиммунных заболеваниях, лимфомах, заболеваниях печени, инъекционном употреблении наркотиков, рассеянном склерозе, во время беременности и после недавней вакцинации.
  • Инфекция штаммом О или ВИЧ-2.
  • Вакцинация против ВИЧ (см. выше).
  • Техническая или канцелярская ошибка.

При получении неопределенных результатов наиболее важно оценить риск инфицирования. Пациенты из групп низкого риска с неопределенными результатами тестирования почти никогда не инфицированы ни ВИЧ- 1, ни ВИЧ-2, при этом повторные обследования часто продолжают давать неопределенные результаты, причину которых удается установить достаточно редко (N Engl J Med 1990; 322:217). Поэтому таким пациентам следует сообщать, что вероятность ВИЧ-инфекции у них крайне мала, однако для абсолютной уверенности в ее отсутствии рекомендуется провести повторное серологическое тестирование по стандартному протоколу через три месяца. У пациентов с неопределенным результатом вестерн блота, проведенного до завершения сероконверсии, положительный результат можно получить уже через месяц. Как правило, пациентам с неопределенными результатами вестерн блота рекомендуется пройти повторное обследование через 1, 2 и 6 месяцев, а также принимать соответствующие профилактические меры для предотвращения передачи вируса, пока не будет подтверждено его отсутствие (J Gen Intern Med 1992; 7:640; J Infect Dis 1991; 164:656; Arch Intern Med 2000; 160:2386; J Acquir Immune Defic Syndr 1998; 17:376).

Частота тестирования на ВИЧ.

Пациентам, образ жизни которых характеризуется высоким риском заражения ВИЧ, рекомендуется регулярно проходить тестирование на ВИЧ. Периодичность в этом случае может быть произвольной, но чаще всего пациентам, принадлежащим к группам высокого риска, рекомендуется обследоваться ежегодно (MMWR 2002; 51:736; MMWR 2002; 57[RR-6]:7). Ежегодные показатели процента сероконверсий в различных группах населения оцениваются следующим образом: население в целом — 0,001%, новобранцы — 0,04%, МСМ — 0,5–2% (выше среди молодых МСМ), ПИН в регионах с высокой распространенностью ВИЧ-инфекции — 0,7–6% (Am J Epidemiol 1991; 134:1175; J Acquir Immune Defic Syndr 1993; 6:1049; Arch Intern Med 1995; 155:1305; Am J Public Health 1996; 86:642; Am J Public Health 2000; 90:352; MMWR 2001; 50:440).

Большинство алгоритмов тестирования требует применения весьма специфических анализов, таких как Вестерн блот, непрямой анализ с использованием флуоресцирующих антител или радиоиммунопреципитация (РИП) для подтверждения положительных результатов, полученных в ходе скрининга. При правильном выполнении и интерпретации эти исключительно специфические анализы не должны давать биологических ложно-положительных результатов. Однако, они являются более трудоемкими и более дорогостоящими по сравнению с теми анализами, которые применяются для скрининга.

Эти подтверждающие анализы не должны быть разрешены FDA для применения в США, если они используются не для тестирования доноров крови, а для других целей. В случаев доноров используется лицензированный подтверждающий анализ для целей повторного использования доноров, когда результаты тестирования должны быть отрицательными. Основная задача подтверждающих анализов заключается в том, что неинфицированные лица, дающие положительный результат по данным скрининга, не идентифицируются ошибочно как лица, инфицированные ВИЧ.

Анализ на основе Вестерн блота

Методология
Вестерн блот представляет собой вероятно наиболее широко применяемый подтверждающий анализ для выявления антител к ретровирусам; большинство авторитетных исследователей в этой области считают его "золотым стандартом" для подтверждения результатов в отношении ВИЧ. Метод основан на использовании электрофореза для разделения антигенов ВИЧ, полученных из лизата вируса, выращенного в культуре. Это позволяет денатурировать компоненты вируса, придает им отрицательный заряд и разделяет их преимущественно на основании молекулярного веса. Разделение антигенов позволяет выявлять специфические антитела к каждому из антигенов вируса в ходе последующего набора этапов, являющегося сходным с методологией иммуноферментного анализа.

Смесь очищенных антигенов ВИЧ наносят на блок геля, содержащего додецилсульфат натрия и полиакриламид, после чего проводится электрофорез. Вирусные белки (антигены ВИЧ) мигрируют через молекулярные поры геля со скоростями, которые определяются электрическим зарядом и молекулярным весом; более высокомолекулярные белки мигрируют на меньшее расстояние и образуют полосу, находящуюся ближе к точке старта. Белки, разделенные в геле, затем переносят (осуществляется их "блоттинг") на нитроцеллюлозу с помощью другой процедуры электрофореза. Нитроцеллюлозная мембрана разрезается на тонкие полоски, каждая из которых содержит полное распределение полос антигенов, соответствующих вирусным белкам. Индивидуальная тест полоска инкубируется с разведением исследуемого образца или контроля (1:50 ил 1:100), после чего отмывается и инкубируется с меченым глобулином против антител человека. В этот момент процедура становится подобной процедурам любого непрямого иммуноанализа. Меткой обычно является фермент (пероксидаза хрена или щелочная фосфатаза), который реагирует со специфическим бесцветным субстратом с образованием нерастворимого окрашенного вещества (окрашенной полосы на полоске) в тех местах, где присутствует комплекс антиген-антитело. Реакция с положительным образцом сыворотки дает набор полос на полоске, который характерен для ВИЧ. Многие из этих полос идентифицированы со специфическими продуктами вирусных генов.

Вирусные антигены ВИЧ-1 разделяются на следующие компоненты (сверху вниз): gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17 и p15.


Примеры Вестерн-блотов при анализе на ВИЧ-инфекцию. (1) Положительный контроль (сильный); (2) Положительный контроль (слабый); (3) Отрицательный (негативный) контроль; (4) Неопределенный результат; (5) Неопределенный результат (с высокой вероятностью положительного).

Обозначение "gp" относится к гликопротеидам; "p" означает белки. Цифры (x100) обозначают молекулярные веса. Важно помнить, что невирусные белки, происходящие из клеток хозяина, в которых выращивают вирус, также присутствуют на полоске нитроцеллюлозы. Они могут образовывать полосы во многих местах, однако чаще находятся вблизи средних значений молекулярного веса (40,000- 60,000). Наличие этих невирусных белковых полос может создавать трудности при интерпретации результатов за счет неспецифических реакций.

Интерпретация результатов

В зависимости от присутствующих в образце конкретных антител, реагирующих с разделенными антигенными компонентами, получаются разные профили полос. Тип профиля (комбинация и интенсивность присутствующих полос) определяет, является ли лицо, сыворотка которого анализируется, положительным в отношении антител к ВИЧ. Классификация результатов Вестерн блота определяется рядом критериев. Большинство учреждений в настоящее время следует рекомендациям Центра по контролю за заболеваниями (CDC), которые требуют для вывода о положительном результате наличия реагирования по крайней мере для следующих антигенов: p24, gp41, gp120/160. В настоящее время является общепринятым, что отрицательным результатом является отсутствием всех полос. Однако две организации, включая ВОЗ, придерживаются мнения, что результаты могут считаться отрицательными, если присутствует только очень слабая полоса p17. Вывод о неопределенных результатах делается, когда присутствует один или несколько антигенов, которые, однако, не удовлетворяют критериям для положительного результата. На Рис. 1 представлены примеры положительного, отрицательного и неопределенного результата Вестерн блота.

К сожалению, сыворотки ряда неинфицированных лиц показывают определенную способность к реагированию с одним или несколькими антигенами при анализе с помощью Вестерн блота. Такое реагирование может давать до 15% нормальных неинфицированных лиц, и это неоднократно происходит у лиц, которые оказываются отрицательными в результате применения методов скрининга. Соответственно, если сыворотки, дающие отрицательные результаты при использовании метода ИФА, тестируют с помощью Вестерн блота, многие из таких сывороток дают неопределенный результат. Большинство сывороток, дающих неопределенный результат, обнаруживают лишь слабую реакцию в отношении белков gag (обычно p17, p24 и/или p55); бывают и другие комбинации, но они являются нечастыми. Любая положительная реакция с использованием метода Вестерн блот, которая не отвечает требованиям, необходимым для вывода о положительном или отрицательном результате, должна считаться дающей неопределенный результат.

У некоторых лиц с неопределенными результатами (например, реакции с p24 и p55) впоследствии происходит сероконверсия; это свидетельствует о том, что наличие профиля, состоящего из p24 и p55, может быть индикатором ранней инфекции. Наоборот, у других лиц с аналогичным профилем, наблюдавшимся в течение длительных сроков (годы), сероконверсия никогда не происходила (т.е. они не являются инфицированными). По существу, большинство неопределенных результатов, получаемых при анализах Вестерн блот, связаны с неинфицированными лицами, которые дают профиль p24 и/или p55. Поэтому неопределенный результат Вестерн блота не может предсказывать ранние стадии инфекции.

Большинство авторитетных специалистов считает, что лица, дающие неопределенный результат, должны быть подвергнуты повторному анализу через несколько месяцев, хотя сероконверсия может быть обнаружена через более короткое время. Если это возможно, повторное тестирование в более поздний срок должно выполняться параллельно с повторным определением исходного образца в одном и том же опыте с одним и тем же набором и в одинаковых условиях определения, чтобы гарантировать возможность прямого сравнения образцов. Всемирная организация здравоохранения рекомендует повторное тестирование через 2 недели, если исходно получены "подозрительные профили" в Вестерн блотах, хотя другие организации рекомендуют подождать от 1 до 6 месяцев перед проведением повторного анализа. Если повторное тестирование выполняется в течение 6 месяцев и результаты становятся отрицательными или если не имеется прогрессии в отношении характера полос, инфекцию ВИЧ, как правило, можно исключить. Вследствие причин, которые остаются непонятными, у многих лиц неопределенные результаты сохраняются на протяжении многих лет, однако эти лица не являются инфицированными. Если имеет место серологическая прогрессия (большее число положительных полос или более интенсивные полосы) или имеет место конверсия к положительному результату (сероконверсия) при повторном анализе, то это означает, что соответствующее лицо было вероятно инфицировано на момент первого анализа (ранняя инфекция). Следует отметить, что лица, вакцинированные против ВИЧ (например, субъединицей gp160), могут неправильно выявляться как положительные на основании реакции только с антигенами оболочки вируса.

Непрямой анализ с иммунофлуоресцентными антителами (IFA)

При использовании этой методики клетки (обычно лимфоциты) инфицируются ВИЧ и далее фиксируются на предметном стекле. Добавляют сыворотку, содержащую анти-ВИЧ антитела, которые реагируют с внутриклеточным ВИЧ. Предметное стекло промывают, после чего добавляют антитела к иммуноглобулинам человека с ковалентно связанной флуоресцентной меткой. Реакцию считывают с помощью флуоресцентного микроскопа. Эта методика имеет то преимущество, что иногда она дает возможность определения для образцов, которые давали неопределенные результаты в анализе Вестерн блот. Недостатки, связанные с ее использованием, включают необходимость дорогостоящего микроскопа и субъективную интерпретацию, что требует хорошо подготовленных специалистов.

Модифицированный Вестерн блот

Линейный иммунный анализ

"Тест-системы на ВИЧ-специфические антитела" Н. Константайн, Медицинская школа Университета Мэрилэнд

Читайте также: