Серологический метод исследования в диагностике инфекционных заболеваний

Обновлено: 22.04.2024

Серологическими называют такие методы (реакции) для которых используется сыворотка крови больного содержащая антитела или токсины микроорганизмов и специальные диагностики, в которых содержатся токсины известных микроорганизмов или известные иммуноглобулины

Впервые серологические методы лабораторной диагностики были предложены в 1886 году французом Видалем для диагностики брюшного тифа.(РА) Эта реакция была основана на обнаружении специфических О и Н антител в сыворотке крови больного брюшным тифом

В настоящий момент применяют более чувствительные методы серологического исследования, позволяющие обнаружить в крови антител в 10 раз меньше содержания. Эти реакции дают положительный результат в 82%.

Важнейшее место в диагностике занимает иммуннофлюоресцентный метод. (ИФА) Этот метод позволяет выявить возбудителя в исследуемом материале без выделения его в питательной культуре, но, к сожалению, он применяется редко, т.к. дорогостоящ и сложен по проведению. Окончательный диагноз ставится только на основании бактериологических и серологических исследований.

С помощью серологических реакций идентифицируются микроорганизмы, токсины, а природу антитела в крови больного определяют с помощью известного диагностического антигена.

Общие закономерности серологических реакций

1. Реакции ставят вне организма человека

2.Реакции проявляются при иммунологическом соответствии

антигена и антитело в соответствующих оптимальных условиях температуры и кислотности среды

Иммунные диагностические сыворотки получают от крупных животных, путем многократного заражения или введения токсинов.

К диагностическим сывороткам относятся:

1. Агглютинирующие бактерии;

2. Прецепитирующие бактерии;

3. Гемолизирующие бактерии;

4. Антивирусные сыворотки;

5. Антитоксические сыворотки;

6. Люминесцентные сыворотки;

7. Флюорохромные сыворотки;

К диагностическим антигенам относятся взвеси живых и убитых микроорганизмов и их токсины.

Серологическая идентификация микробов

Серологическая идентификация микробов основана на их антигенной структуре. Для проведения лабораторного исследования применяют специфические иммунные сыворотки, полученные искусственным путем. Сыворотки позволяют установить родовую, видовую и типовую принадлежность микроба. В основе реакции лежит специфическое взаимодействие антигена с антителом. Могут бить использованы реакции агглютинации, преципитации и лизиса.

Виды сывороточных реакций.

1. Реакция агглютинации (склеивания)

Агглютинацией называю склеивание бактерий при действии на них специфических антител в присутствии электролита. Её применяют для определения вида и серовара отдельных бактерий, обнаружения антител в сыворотке крови больного.

В качестве диагностикума применяют монорецепторную, типоспецифическую, абсорбированную сыворотку. Реакции ставят на покровном стекле.

Особую ценность имеет в том случае, если выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров АТ , в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10 – 20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным). Антитело обычно появляется в крови на 1-2ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Ig четко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс – диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию.

В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля, ее разновидности, РНГА, РСК и более информативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.).

РА — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РИГА и РНГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундировать в геле. РСК титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. PH - способность антител нейтрализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный анализ — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.

Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего, его лучше осуществлять самотеком, а не шприцом. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3—5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворотку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при температуре +4 °С до постановки реакции. Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекционных болезней развивается с 5-7-го дня, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические методы менее пригодны для ранней диагностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшифровки этиологии уже перенесенного инфекционного заболевания.

Особую ценность имеет в том случае, если выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров АТ , в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10 – 20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным). Антитело обычно появляется в крови на 1-2ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Igчетко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс – диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Серология — современный метод лабораторной диагностики различных заболеваний, отличающийся эффективностью и надежностью. В первую очередь с помощью серологического исследования выявляют инфекционные процессы в организме. Анализ дает возможность идентифицировать возбудителя инфекции и подобрать правильную схему медикаментозной терапии. Также тест можно проводить для подтверждения аутоиммунных расстройств, при которых иммунная система ошибочно атакует здоровые клетки и ткани. Серология часто назначается при целиакии. Открытие этого метода позволило с большей точностью выявлять ВИЧ-инфекцию, гепатит, сифилис и иные патологии.

Что это за исследование?

В крови человека присутствуют так называемые форменные элементы, выполняющие определенные функции. Это красные кровяные клетки (эритроциты), лейкоциты, тромбоциты. Жидкий компонент крови называют плазмой. В ней присутствуют разнообразные химические соединения, включая иммунологические комплексы. Их выявление требуется для постановки диагноза и проведения лечения. Например, забор крови проводится для оценки уровня глюкозы, гормональных веществ, ферментов, иммуноглобулинов. Для правильного выполнения анализа полученную плазму превращают в сыворотку. Для этого необходимо вывести из жидкости фибриноген, ответственный за свертывание крови.

Серологическое исследование — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаружить в полученной жидкости определенные иммуноглобулины. Это компоненты гуморального иммунитета, вырабатываемые лимфоцитами для связывания и нейтрализации чужеродных компонентов. Антитела действуют против бактериальных клеток, грибков, вирусов, простейших, паразитов, аллергенов и других угроз. Клетки иммунитета умеют вырабатывать специфические иммуноглобулины, соответствующие определенным агентам. Это свойство позволяет проводить диагностику заболеваний.

Серология не ограничивается идентификацией возбудителей инфекции с помощью антител. Иммунитет вырабатывает иммуноглобулины разных классов в зависимости от этапа развития патологического процесса. Определение типа этих иммунных комплексов в крови дает возможность уточнить, когда пациент был инфицирован, и как быстро болезнь развивается.

Что показывает серология?

Это исследование требуется для обнаружения определенных патологических состояний. Нет общих анализов, направленных на обнаружение всех возможных иммуноглобулинов крови. По этой причине серология назначается только врачом при наличии строгих показаний. Пациенты приходят с определенными жалобами, а специалист проводит необходимые обследования для постановки диагноза. Серологическое исследование отвечает на вопрос, почему у человека появились симптомы.

В педиатрической практике серологическая диагностика играет важную роль в своевременном выявлении опасных инфекций, вызывающих серьезные осложнения у ребенка. С помощью анализа крови педиатр может обнаружить краснуху, ветряную оспу, скарлатину, коклюш или другую инфекцию. Это исследование обязательно выполняется при обследовании у венеролога. Правильно подобранный тест помогает идентифицировать патогенный микроорганизм, передающийся половым путем. Ставится диагноз сифилис, трихомониаз, герпес, ВИЧ.

Серологическая диагностика — часть скрининга у беременных женщин. Это необходимо для раннего выявления факторов риска возникновения серьезных осложнений. Обнаружение специфических антител в крови дает возможность исключить токсоплазмоз, цитомегаловирусную инфекцию, герпес и другие патологии. Они могут крайне негативно сказаться на внутриутробном развитии ребенка.

В гепатологической практике серология выполняется для обнаружения вирусного поражения печени. Повторные тесты делают для оценки эффективности лечебных мероприятий. Врач проверяет уровень вирусной нагрузки, оценивает динамику состояния больного. Подобная диагностика иногда требуется после вакцинации от гепатита В. Антитела класса IgG — эффективный компонент иммунитета, поэтому их уровень нужно определить для подтверждения результативности иммунизации.

Как проводится серология?

Это простая процедура, к которой не нужно специально готовиться. Уровень иммуноглобулинов в крови определяется только активностью присутствующих в организме патогенных микроорганизмов, вроде бактериальных клеток или вирусов. В некоторых случаях пациента просят отказаться от приема пищи в утренние часы перед выполнением процедуры.

Есть определенные исключения, при которых подготовительный этап требуется для повышения достоверности результатов:

Проведение контрольного исследования для оценки динамики состояния во время медикаментозной терапии. В таком случае диагностика выполняется только после окончания курса лечения. Врач отменяет прием медикаментов минимум за семь суток до сдачи крови.
Серологический тест требуется провести во время лечебных мероприятий — врач хочет удостовериться в эффективности подобранной схемы. В таком случае пациент продолжает принимать препараты.
Иногда требуется изменение рациона. Например, при лабораторной диагностике по поводу различных видов аллергии.

Сама процедура ничем не отличается от стандартного забора крови. Материал получают из локтевой вены. Медицинский работник использует жгут, протирает место прокола спиртом и вводит иглу в сосуд. Производится забор небольшого количества крови. Образец направляют в лабораторию.

Расшифровка

Распространенным видом серологии является иммуноферментное исследование, проводимое для обнаружения антител разных классов. Такой способ диагностики применяют для выявления острой или хронической болезни, ее обострения, иммунной защиты от определенных инфекционных агентов. В этом случае интерпретация результатов теста проводится с учетом следующих показателей:

IgM. Это первичный иммуноглобулин, вырабатываемый почти сразу после столкновения организма с патогеном. Может появляться при обострении.
IgG. Такие антитела синтезируются на более поздних сроках и перед выздоровлением. Если другие факторы не были обнаружены, в бланке указывается присутствие стойкой иммунной защиты или хронической формы заболевания.
IgA. Антитела этого класса указывают на протекание определенного патологического процесса. Если они сочетаются с IgM, врач делает вывод о наличии острого заболевания, его постепенного развития. При сочетании с IgG можно предположить, что хроническая инфекция обострилась.

Если по результатам серологии антитела не были обнаружены в целом, интерпретация теста меняется. Врач говорит об отсутствии инфекционного процесса или иммунной защиты от него. Требуются дополнительные сведения для правильной трактовки таких клинических данных. Например, если до этого была введена вакцина, отсутствие иммуноглобулинов в некоторых случаях свидетельствует об ее неэффективности. Может потребоваться исключение иммунодефицита и определенных факторов, ослабляющих защитную систему организма.

Важно понимать, что интерпретировать серологическое исследование будет врач. Специалист ориентируется не только на результаты такого теста. Нужно оценивать анамнез в целом, результаты других видов диагностики.

Читайте также: