Сибирская язва отбор патологического материала почвы

Обновлено: 22.04.2024

Микробиологическая диагностика сибирской язвы. Принципы микробиологической диагностики сибирской язвы. Бактериоскопический, бактериологический, биологический, кожно-аллергический метод диагностики сибирской язвы.

Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы. При патологоанатомическом исследовании забирают кусочки органов или целые органы. Все образцы следует помещать в герметичные сосуды и транспортировать закупоренными в опломбированные боксы или деревянные ящики.

Выделение возбудителя сибирской язвы. Проводят окраску материала по Граму и посев на обычные питательные среды. Затем определяют подвижность микроорганизмов из выросших колоний, изучают их биохимические и культуральные свойства. Серологические исследования проводят для распознавания больных и реконвалесцентов. Возбудитель сибирской язвы можно выявлять AT, меченными флюоресцеинами (особенно в смешанных культурах), диффузией в геле, в РСК, РИГА и ИФА.

Кожные пробы применяют для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях. Проводят внутрикожное введение 0,1 мл бактериального аллергена (антраксина).

Реакция термопреципитации по Асколи имеет большое значение, так как позволяет идентифицировать возбудителей сибирской язвы при отрицательных результатах бактериологических исследований. Для прижизненной же диагностики эта реакция не имеет серьёзных преимуществ перед вышеуказанными бактериологическими и серологическими методами.

Биологическая проба при диагностике сибирской язвы. Заражение лабораторных животных проводят одномоментно с посевом на питательные среды. Материал можно вводить белым мышам (по 0,1-0,2 мл в спину), кроликам и морским свинкам (по 0,2-0,5 мл в область живота). Обычно мыши погибают через 1-2 сут, морские свинки и кролики— через 2-4 сут. При выживании животных наблюдение за ними продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезёнку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца и места введения заразного материала. Затем проводят посев исследуемого материала на питательные среды.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов

(утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)

Введение

Возбудитель сибирской язвы, попадая в почву, на протяжении многих десятилетий не только сохраняется, но и накапливается за счет многократных вегетаций и споруляций. При этом состояние инфицированности почвы представляет собой явление динамическое, подверженное изменчивости во времени количественном и качественном отношении под влиянием меняющихся условий окружающей среды. Наиболее благоприятными являются следующие физико-химические характеристики почв: температура не ниже 12-15°С, влажность в пределах 29-85%, рН - 5,3-7,3; наличие 1-14% гумуса, присутствие 14-38 мг фосфора 6-18 мг калия на 100 г почвы. В зависимости от перечисленных и целого ряда других факторов (антропогенное воздействие, наличие актиномицетов-антагонистов, влияние ризосферы высших растений) происходит накапливание возбудителя сибирской язвы в почве или сохранение единичных микробов с измененными культурально-морфологическими свойствами и сниженной вирулентностью.

Возбудитель сибирской язвы преимущественно находится в почве на глубине от 1,2 до 2 м, так как именно на этом уровне осуществлялось в прошлом захоронение трупов сибиреязвенных животных. В результате ливневых паводковых потоков, эрозионных процессов или антропогенного воздействия возможен вынос возбудителя в поверхностный слой почвы, составляющий до 40 см и наиболее опасный в эпизоотическом и эпидемическом отношении. Кроме того, поверхностное загрязнение почвы происходит при падеже и вынужденном убое сибиреязвенных животных.

Систематическое бактериологическое исследование почвы в местах падежа, вынужденного убоя или захоронения сибиреязвенных животных является важным моментом в системе противоэпидемических мероприятий и позволяет осуществлять оперативное слежение за состоянием очагов сибирской язвы.

До настоящего времени отсутствуют унифицированные подходы к отбору проб почвы и соблюдению противоэпидемического режима при работе на участках, зараженных возбудителем сибирской язвы.

В настоящих методических рекомендациях излагаются методика отбора проб почвы с применением бура Малькова модифицированного авторами, меры личной профилактики, способы обеззараживания инструментария и остатков проб почвы.

Методика отбора проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов

Отбор проб почвы для бактериологического исследования на участках захоронения, в местах падежа или вынужденного убоя сибиреязвенных животных проводится по эпидемиологическим показаниям, а также при осуществлении динамического наблюдения за очагом. При контроле активности очага в местах захоронения отбор проб почвы следует проводить в летне-осенний период, наиболее благоприятный для вегетации возбудителя сибирской язвы. Необходимо максимально охватывать исследованиями весь участок очага как по площади, так и по глубине. Так как вероятность бактериологической находки возбудителя сибирской язвы в местах захоронения составляет 1-2%, число проб из одного очага должно составлять не менее 100.

Работа по отбору проб проводится в защитном костюме II типа с применением дезинфицирующих средств.

Бригада отборщиков проб почвы состоит из двух человек. К месту отбора проб она направляется на выделенном транспорте со специальной укладкой (приложенеие 1).

1. На территории очага выбирается участок размером от 8 до 16 м в зависимости от площади захоронения.

2. Намечаются 5 точек отбора проб почвы (4 точки по углам и одна в центре) при отборе проб почвы на глубину до 2 м или 6 точек (4 точки по углам и две в центре) при отборе проб на глубину до 1,6 м. При захоронении сибиреязвенных животных в траншеи отбор проб необходимо проводить в 5 или 6 точках (в зависимости от глубины отбора проб), расположенных по ходу траншеи.

3. Совком (ножом) производится расчистка намеченных точек отбора проб от мусора, листьев и травы.

4. Отбор проб почвы осуществляется при помощи модифицированного бура Малькова (приложение 2).

5. У места отбора проб почвы расстилается полиэтиленовая пленка размером не менее 100x100 см, над которой отобранная почва ссыпается в мешочки.

6. По эпидпоказаниям (при падеже или прирезке сибиреязвенного животного) определяется поверхностное загрязнение почвы возбудителем сибирской язвы путем отбора проб в каждой намеченной точке на глубине до 40 см. При этом количество проб составляет не более 20.

При динамическом наблюдении за очагом (в местах захоронения сибиреязвенных животных) отбор проб почвы производится на глубине 1,6-2 метров через каждые 10 см (рис.1).

7. Вес каждой пробы, взятой в одной точке отбора, должен быть равен 40-50 г (2 столовых ложки).

8. Отобранные на каждой глубине из 5 или 6 точек пробы объединяются в один матерчатый мешочек, на котором простым карандашом отмечается глубина отбора пробы (10, 20, 30 см и т.д.). Полиэтиленовые мешочки не используются, так как это может привести к гибели возбудителя или изменению его свойств.

9. Пробу почвы для лабораторного исследования на наличие актиномицетов-антагонистов следует отбирать в одной из пяти точек на глубине 20 см весом 10 г в отдельный полиэтиленовый мешочек с целью создания благоприятных условий для сохранения и накопления актиномицетов-антагонистов.

10. Для определения химического состава почв пробу весом 100 г отбирают в матерчатый мешочек в одной точке на глубине 20 см на контрольном участке с однотипной структурой почв, расположенном в 100 м от скотомогильника.

11. Пронумерованные мешочки с пробами почвы для исследования на наличие возбудителя антракса помещают по 5-6 штук в металлические пеналы. В один из этих пеналов помещают пробу почвы, предназначенную для исследования на наличие актиномицетов. Пробу для химического анализа помещают в отдельный пенал.

12. После отбора проб остатки почвы, находящиеся на полиэтиленовой пленке, ссыпают в образовавшиеся шурфы. Сверху засыпают хлорной известью (200 г на каждый шурф) и увлажняют. Использованную полиэтиленовую пленку протирают ветошью, смоченной в 6% растворе перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

13. Пеналы с наружной стороны обрабатывают 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Порядок организации и проведения лабораторной диагностики сибирской язвы для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (А.Н.Куличенко, Е.И.Еременко, А.Г.Рязанова, О.В.Малецкая, Н.П.Буравцева, О.И.Цыганкова, Т.В.Таран, Е.А.Цыганкова, Т.М.Головинская); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора: (В.В.Кутырев, С.А.Щербакова, Ю.А.Попов, Н.А.Осина, И.Н.Шарова, Е.С.Казакова, Е.А.Плотникова, В.Е.Куклев, С.А.Портенко); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Роспотребнадзора (С.В.Балахонов, Т.И.Иннокентьева, З.Ф.Дугаржапова, А.В.Родзиковский, Е.В.Кравец); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (Ю.М.Ломов, Н.Р.Телесманич, В.И.Прометной, С.Ю.Водяницкая, Н.Л.Пичурина, О.С.Бурлакова); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Противочумный центр" Роспотребнадзора (В.Е.Безсмертный, С.М.Иванова); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (А.И.Верещагин, М.В.Зароченцев, В.В.Мордвинова); Федеральным бюджетным учреждением науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Роспотребнадзора (И.А.Дятлов, Л.И.Маринин, С.Ф.Бикетов, А.Е.Хлынцева, М.В.Храмов, А.И.Борзилов); Федеральным государственным бюджетным учреждением "ГИСК им. Л.А.Тарасевича" Минздравсоцразвития России (И.В.Борисевич, Л.В.Саяпина).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 2.06.2011 N 1).

3 Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 14 июля 2011 г. и введены в действие с 14 июля 2011 г.

4. Введены впервые.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики сибирской язвы для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней, формы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, биологической безопасности проведения работ.

1.2. Настоящие методические указания предназначены для органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, лечебно-профилактических и противочумных учреждений.

2. Нормативные ссылки

* Утратило силу с 1 мая 2012 года на основании постановления Правительства Российской Федерации от 16 апреля 2012 года N 317. - Примечание изготовителя базы данных.

2.6. СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности".

2.7. СанПиН 2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами".

2.8. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".

2.9. СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)".

2.12. СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".

2.14. СП 3.1.7.2629-10 "Профилактика сибирской язвы".

2.16. МУ 4.2.1890-04 "Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам".

2.17. МУ 3.3.2.2124-06 "Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии".

2.18. МУК 4.2.2316-08 "Методы контроля бактериологических питательных сред".

2.19. МУК 4.2.2413-08 "Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы".

2.20. МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности".

2.21. МУ 4.2.2495-09 "Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чумы, сибирской язвы, холеры, туляремии, бруцеллеза, сапа и мелиоидоза) к антибактериальным препаратам".

2.22. ГОСТ 21237-75 "Мясо. Методы бактериологического анализа".

2.23. ГОСТ 9792-73 "Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб".

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 54004-2010. - Примечание изготовителя базы данных.

2.25. ГОСТ Р 51447-99 "Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб".

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ Р 52675-2006. - Примечание изготовителя базы данных.

2.30. Рекомендации по правилам перевозки инфекционных материалов 2009-2010. WHO/HSE/EPR/2008.10.

3. Перечень сокращений

МПБ - мясопептонный бульон.

МПА - мясопептонный агар.

ОФ - отечный фактор.

ПА - протективный антиген.

ЛФ - летальный фактор.

ЛПУ - лечебно-профилактическое учреждение.

СП - санитарные правила.

СанПиН - санитарно-эпидемиологические правила и нормативы.

ООИ - особо опасные инфекции.

МУ - методические указания.

МУК - методические указания по контролю.

ПБА - патогенный биологический агент.

МФА - метод флуоресцирующих антител.

ИФА - иммуноферментный анализ.

ПЦР - полимеразная цепная реакция.

РНГА - реакция непрямой гемагглютинации.

MLVA - мультилокусный анализ областей генома с вариабельным числом тандемных повторов (VNTR).

РЛА - реакция латекс-агглютинации.

ИХ-тест - иммунохроматографический тест.

ЦНС - центральная нервная система.

4. Общие положения

Характеристика болезни и возбудителя сибирской язвы

Сибирская язва (Anthrax) - острая зоонозная особо опасная бактериальная инфекционная болезнь, протекающая в локализованной и генерализованной формах. Характеризуется поражением кожи (везикула, отек, карбункул с черно-бурым струпом), лимфатических узлов и других тканей (развиваются кишечная форма, легочная и др.) и тяжелой интоксикацией. В зависимости от путей заражения у человека развивается кожная или висцеральная (кишечная, легочная) формы сибирской язвы. Любая из этих форм может приводить к развитию сепсиса и осложняться сибиреязвенным менингитом (генерализованная форма).

В соответствии с Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем (Десятый пересмотр. - Женева, 2003. МКБ-10) сибирская язва (А22) относится к группе некоторых бактериальных зоонозов А20-А28. Различают следующие клинические формы:

А22.0 - кожная форма сибирской язвы;

А22.1 - легочная форма сибирской язвы;

А22.2 - желудочно-кишечная форма сибирской язвы;

А22.7 - сибиреязвенная септицемия;

А22.8 - другие формы сибирской язвы;

А22.9 - сибирская язва неуточненная.

Источниками инфекции являются домашние и дикие травоядные животные (крупный и мелкий рогатый скот, лошади, ослы, олени, верблюды, свиньи и др.), нередко и плотоядные животные. Резервуаром возбудителя инфекции служит почва. Больной человек эпидемиологической опасности не представляет (кроме больных лёгочной формой).

Механизм передачи возбудителя преимущественно контактный. Аспирационный и трансмиссивный механизмы передачи возбудителя реализуются воздушно-пылевым и инокуляционным путями передачи. Заражения пищевым путем происходят при употреблении термически необработанных мясопродуктов, содержащих достаточную инфицирующую дозу возбудителя. Значительную эпизоотическую и эпидемическую опасность представляют сибиреязвенные скотомогильники, как естественные резервуары сибиреязвенной инфекции.

Возникновение заболевания возможно при нарушениях режима биологической безопасности в лабораториях и использовании сибиреязвенного микроба в качестве биологического агента во время террористических актов.

В структуре заболеваемости выделяют три эпидемиологических типа: профессионально-сельскохозяйственный (встречается у пастухов, животноводов и ветеринаров), профессионально-индустриальный (наблюдается у лиц, работающих на кожевенных, щетиношерстяных, шерстеобрабатывающих производствах) и бытовой (возможен при ношении меховой и кожаной одежды из инфицированных материалов, использовании инфицированных кисточек для бритья, обработке шерсти в домашних условиях).

Методика отбора проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов

Работа по отбору проб проводится в защитном костюме II типа с применением дезинфицирующих средств.

Бригада отборщиков проб почвы состоит из двух человек. К месту отбора проб она направляется на выделенном транспорте со специальной укладкой (приложение 1).

1. На территории очага выбирается участок размером от 8 до 16 в зависимости от площади захоронения.

2. Намечаются 5 точек отбора проб почвы (4 точки по углам и одна в центре) при отборе проб почвы на глубину до 2-х м или 6 точек (4 точки по углам и две в центре) при отборе проб на глубину до 1,6 м. При захоронении сибиреязвенных животных в траншеи отбор проб необходимо проводить в 5 или 6 точках (в зависимости от глубины отбора проб), расположенных по ходу траншеи.

3. Совком (ножом) производится расчистка намеченных точек отбора проб от мусора, листьев и травы.

4. Отбор проб почвы осуществляется при помощи модифицированного бура Малькова (приложение 2).

5. У места отбора проб почвы расстилается полиэтиленовая пленка размером не менее 100X100 см, над которой отобранная почва ссыпается в мешочки.

7. Вес каждой пробы, взятой в одной точке отбора, должен быть равен 40-50 г (2 столовых ложки).

13. Пеналы с наружной стороны обрабатывают 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

14. Бур, лопатку и совок (нож) обжигают пламенем паяльной лампы, затем обрабатывают ветошью, смоченной 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

15. Отборщики обрабатывают обувь 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства и отправляются к месту стоянки транспорта, где снимают защитную одежду (маски, халаты, косынки) и помещают ее в клеенчатый мешок, обрабатывая руки в резиновых перчатках 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства после каждой манипуляции. После снятия перчаток моют руки с мылом.

16. Пеналы оклеивают лейкопластырем, бур и лопатку помещают в чехол, выписывают направления.

Отобранные пробы почвы должны быть доставлены в лаборатории для исследования в течение 1-3 суток.

Примечание. В случае травмы с нарушением кожных покровов в процессе отбора проб почвы в очаге сибирской язвы необходимо промыть рану водой с мылом, обработать настойкой йода и наложить повязку. В дальнейшем предпринять меры по экстренной профилактике заболевания сибирской язвой.

При составлении "Рекомендаций" использованы:

1. Инструкция и методические указания по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей.

2. Организация мероприятий по профилактике сибирской язвы (методические рекомендации).

4. Инструкция о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп.

5. Методические рекомендации по использованию актиномицетов-антагонистов для обеззараживания почв, загрязненных возбудителем сибирской язвы.

Зам. начальника Главного управления
карантинных инфекций Министерства
здравоохранения СССР

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов (утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)

Текст методических рекомендаций приводится по изданию Министерства здравоохранения СССР (Москва, 1984 г.)

Рекомендации разработаны сотрудниками Ростовского-на-Дону государственного научно-исследовательского противочумного института Т.Ф. Богдановой, Ю.Г. Киреевым, В.И. Прометным, М.С. Осиповой, Г.М. Поповым, А.И. Беспаловым

Читайте также: