Сифилис материал для микробиологических исследований

Обновлено: 23.04.2024

Заболевание распространяется не только половым путем, но и при использовании зубной щетки, кухонной посуды, полотенца и других бытовых предметов вместе с больным человеком. Иногда болезнь может протекать бессимптомно (пассивный вид), при этом остается риск заражения окружающих. Сдать анализ на сифилис можно в районной поликлинике и частном врачебном кабинете анонимно. Как называется анализ и где его можно сдать.

Материал для исследования

Наиболее часто для анализа на сифилис используется кровь пациента. Иногда в крови содержатся антитела, вызывающие ложноположительную реакцию.

В таких случаях возможный диагноз может быть подтвержден исследованиями другого биологического материала:

Распространяются по организму и затрагивают спинной мозг. Специальный анализ крови на сифилис Реакция по Вассерману, может подтвердить наличие болезни
Жидкость, взятая из язвы (твердого шанкра). Исследование вещества имеет высокую достоверность и может быть назначено по клиническим показаниям
Лимфоузлы в паховой области при развитии болезни воспаляются и увеличиваются. Обследование воспаленных участков может помочь диагностике
Венозная или артериальная кровь. Кровь на сифилис должна сдаваться натощак из вены или пальца в зависимости от типа анализа

Чтобы узнать, где сдать все анализы на сифилис, нужно обратиться к врачу при первых признаках заболевания. Лабораторные исследования проводятся во многих частных и государственных лабораториях. Сдачу крови на сифилис можно провести в медицинском учреждении или вызвать лаборанта на дом. Должный вид теста определяет врач. Лаборатория проведет тест на сифилис и исследование покажет наличие и отсутствие болезни.

Прямые тесты

Какие анализы сдают на сифилис, этот вопрос часто можно услышать от пациентов. Сегодня существует несколько видов тестов, которые могут показать наличие инфекции в крови. Анализ крови на сифилис, известный как темнопольная микроскопия, является современным методом диагностики с достаточно высокой достоверностью результатов. Исследуемый материал изучается при большом увеличении и специальном подсвечивании образца.

Исследование выявляет наличие бледных трепонем (возбудителя сифилиса) на более темном фоне.

При простом исследовании образца под микроскопом достоверность метода составляет 97% и позволяет обнаружить болезнь у 8 из 10 зараженных. Если анализ крови при сифилисе показывает отрицательный результат, но у пациента имеются ярко выраженные клинические симптомы сифилиса, назначается дополнительное исследование.

Самые точные исследования называются ПЦР анализы на сифилис или полимеразная цепная реакция. Для проведения исследования требуется современное медицинское оборудование и квалифицированные специалисты. Где же можно сдать анализы на сифилис по данному методу? К сожалению, анализ ПЦР могут предложить только частные лаборатории. Ввиду сложности проведения и высокой стоимости анализа, немногие лаборатории предлагают исследование с помощью полимеразной цепной реакции.

В предоставленном образце крови определяется наличие или отсутствие молекул ДНК возбудителя болезни. Достоверность ПЦР на сифилис приближена к 100% и является основой для подтверждения или опровержения диагноза лечащим врачом. Современное молекулярное исследование позволяет обнаружить в исследуемом образце наличие всего двух молекул заболевания. Получить самый точный результат ПЦРа на сифилис можно только при соблюдении всех правил и норм лабораторных исследований. Тест на сифилис может быть готов уже через 5 часов после забора крови. Стоит отметить, что общий анализ крови не выявляет данную инфекцию.

Нетрепонемные исследования

Серологическая диагностика сифилиса предусматривает анализ крови на наличие антител. Существует несколько видов исследований, кровь на которые можно сдать в лаборатории. При проведении медицинских осмотров и обследовании большого количества пациентов назначаются, как правило, один из нетрепонемных (неспецифических) анализов. Если в крови обнаруживаются антитела к сифилису, результат анализа считается положительным. Какие анализы на сифилис следует сдавать пациенту, зависит от клинической картины. На сифилис анализ должен быть назначен квалифицированным врачом.

Слабоположительный результат маркируется одним или двумя плюсами (+, ++), положительный тремя плюсами (+++) и четыре плюса (++++) означают резко положительную реакцию.

Также к нетрепонемным методам исследований относится RPR тест. Это исследование считается более современным и точным по отношению к RW анализу. RPR проводится на венозной крови пациента и выявляет наличие антител к фосфолипидам цитоплазматической мембраны. РПР тест можно сделать в частной клинике.

Похожим способом является реакция микропреципитаци, которую используют в современных лабораториях.

Микрореакция преципитации (МРП или ) проводится спустя 4–5 недель после предполагаемого заражения. Для исследования используется капиллярная кровь. Микрореакция на сифилис не относится к точным методам диагностики. Положительная серологическая реакция на сифилис по МРА должна быть подтверждена одним из специфических тестов. Отрицательный результат теста означает начальную стадию или отсутствие заболевания.

Трепонемные исследования

Почему нужно сдавать анализ на сифилис повторно? Часто трепонемные исследования используются в качестве контрольного анализа, чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз после нетрепонемного теста. Сомнительный результат первого теста означает, что придется сдать анализы на сифилис повторно.

Реакция пассивной агглютинации (РПГА, РНГА). Анализ на сифилис РПГА является быстрым методом исследования, результат можно узнать уже через час. Чтобы проверить кровь на наличие сифилиса по , анализ проводится спустя месяц после контакта с больным. Гемагглютинация может давать ложноположительный результат при мононуклеозе и ряде других заболеваний.

Для диагностики болезни на ранних стадиях применяется Реакция иммунофлюоресценции (). Анализ крови из пальца или вены с помощью РИФ может выявить заболевание спустя 1,5–2 месяца после контакта с больным.

Во время проведения антитела четко выделяются свечением в ультрафиолетовом свете.

При беременности или наличии системных заболеваний соединительной ткани (ревматоидный артрит и пр.) может оказаться ложноположительным. Поэтому очень важно предоставить врачу достоверную информацию о себе и медицинскую карту. Положительная реакция обозначается знаками «+" от одного до четырех.

Реакция иммобилизации бледной трепонемы, также известная как пользуется высокой популярностью. Серодиагностика по методу РИБТ достоверна в 99% случаев. Однако анализы крови могут быть назначены только спустя 12 недель после контакта с носителем болезни.

проводится спустя 3,5–4 месяца после возможного заражения. Заболевание определяется с вероятностью 99%.

Иммуноблотинг способен дать 100% результат и реагирует даже на очень маленькое содержание антител в крови пациента.

Иммуноферментный анализ или ИФА способен выявить болезнь уже спустя 3 недели после возможного заражения. Достоверность положительного результата составляет 98%. Этот анализ называют одним из самых точных. Как же очистить кровь от сифилиса? Как лечат сифилис какие нужны повторные обследования скажет квалифицированный врач. Не занимайтесь самолечением!

Набор РМП на сифилис состоит из пластиковой формы с тестовой полоской, острого инструмента для прокалывания кожи на пальце, одноразовой пластиковой пипетки, бутылочки с раствором для разведения крови и подробной инструкции на русском языке. Перед проведением анализа нужно придерживаться тех же правил, что и в медучреждении, очищать руки и поверхность стола перед работой.

При помощи острого приспособления из набора прокалывают палец, одноразовой пипеткой набирают 1 каплю крови и помещают на обозначенное место . Затем добавляют 2 капли раствора и оставляют на 10 минут. Спустя указанное время, будет готов результат. Какие могут быть варианты? Результата всего два: одна полоса означает отсутствие заболевание, две полосы свидетельствуют о положительной реакции и являются поводом обратиться к врачу.

Подтвердить или опровергнуть результаты домашнего теста может серодиагностика.

Стоит отметить, что тест может показать положительный результат и уже после успешного лечения сифилиса. Все дело в том, что организм помнит о перенесенной инфекции еще несколько лет и продолжает вырабатывать антитела к сифилису. Однако количество этих антител постепенно снижается, и при отсутствии повторного заражения перестают вырабатываться в среднем в течение 2–3 лет после успешного лечения. Однако некоторые факторы могут замедлять этот процесс. К ним относится прием алкоголя и наркотических средств. Поэтому задумываясь, как очистить кровь после сифилиса, в первую очередь откажитесь от вредных привычек.

Лечение

Как избавиться от сифилиса и какое лечение нужно пройти? Сразу стоит отметить, что лечение должен назначать только опытный врач. Терапия от сифилиса проводится с помощью антибиотиков в течение долгого времени. Чтобы кровь очистилась от антител нужно не менее 2 лет. Кровь очищается медленно и постепенно. То есть после полученного лечения антитела вырабатываются все меньше и в конце концов перестают определяться в крови. Чтобы контролировать этот процесс пациентам приходится сдавить анализы в течение 3 лет.

Исследование крови на сифилис обязательно для людей многих профессий (врачи, военные, повара и пр.) для получения допуска к работе. В таком случае постоянно, при каждом медосмотре, будет назначена серология или другой тип анализа. При беременности также обязательно проводится исследование на сифилис, анализы назначает врач. Некоторые типы анализов, например РИФ, часто бывает ложноположительным. Какие сегодня самые точные анализы на сифилис, вам подскажет врач.

Хотите читать всё самое интересное о красоте и здоровье, подпишитесь на рассылку!

Диагностика сифилиса. Лечение сифилиса. Профилактика сифилиса. Предупреждение сифилиса.

Выделение возбудителя сифилиса обычно не проводят. Основа диагностики сифилиса — методы, направленные на обнаружение возбудителя в материале микроскопией и выявление AT серологическими реакциями. Материал для исследования — отделяемое шанкра, пунктата лимфатических узлов, соскобы розеол, кровь, СМЖ. Наиболее оптимальные микроскопические методы — темнопольная и фазово-контрастная микроскопия. Также возможно приготовление гистологических препаратов, импрегнированных серебром по Морозову или Левадити (трепонемы выглядят как чёрные спирали).

Для ранней диагностики сифилиса применяют иммунофлюоресцентные методы; наибольшее распространение получила РНИФ с адсорбированной сывороткой. Основное значение в микробиологической диагностике сифилиса имеют серологические методы. Их разделяют на неспецифические и специфические.

Основные методы диагностики сифилиса — РСК, предложенная А. Вассерманном, и VDRL-реакция [от англ. Venereal Disease Research Laboratory, лаборатория изучения венерических заболеваний] — специализированная флоккуляционная проба на предметных стёклах с использованием кардиолипин-лецитин-холестеринового Аг. В качестве метода экспресс-диагностики применяют тест на реагины плазмы, представляющий собой РА частиц угля, нагруженных кардиолипином.

Специфические тесты диагностики сифилиса

Наибольшее значение имеют реакция иммобилизации бледной спирохеты (реакция Нельсона-Мейера) и РА (микроагглютинации).

Лечение сифилиса

Проблему лечения первичного и вторичного сифилиса решило открытие пенициллинов, в настоящее время составляющих основную группу противосифилитических средств. При третичном сифилисе применяют симптоматические средства.

Профилактика сифилиса. Предупреждение сифилиса.

Средства специфической иммунопрофилактики сифилиса отсутствуют; общие меры во многом аналогичны предупреждению большинства заболеваний, передающихся половым путём.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Возбудителем сифилиса является Treponema pallidum subsp. pallidum. Заболевание характеризуется хроническим течением и стадийностью. Больной высоко контагиозен на 1-й и II-и стадиях, когда трепонема присутствует в элементах поражения.

Первичные поражения возникают через 3-4 недели после заражения в виде одиночного или нескольких безболезненных твёрдых шанкров. Шанкр – характерная язва с твердым основанием. Болезненность отмечается при присоединении вторичной инфекции. Шанкр может находится на губах, языке, небе, десне, миндалинах. Шанкры в полости рта составляют 55% от всех других экстрагенитальных локализаций.

Вторичный период, продолжающийся 2-3 года, характеризуется полиморфной сыпью (розеолезной, папулезной, пустулезной) на коже и слизистых оболочках. На слизистой оболочке полости рта сифилитические папулы располагаются на щеках по линии смыкания зубов, на твердом небе, на миндалинах в виде плотных элементов со слегка белесоватой гладкой поверхностью. Папулы могут сливаться в сплошные бляшки с сероватым налетом, безболезненные. Нередко аналогичные высыпания имеют место на гортани, и у больного отмечается охриплость голоса. Изъязвления могут также находиться в области мягкого неба, миндалин и напоминать афты, сопровождаясь болезненностью и повышением температуры.

Заражение врача-стоматолога возможно в результате попадания возбудителя при пальцевом обследовании пациента.

Диагноз сифилиса проводят в специальных учреждениях на основе микроскопического метода (исследование в темном поле зрения), иммунофлюоресценции и иммобилизации трепонем и серологических реакций (реакция связывания комплемента Вассермана).

Микробиологическая диагностика сифилиса

Материал для исследования: отделяемое шанкра (I период заболевания); аспират из высыпных элементов, пунктат регионарных лимфатических узлов (II период); кровь (II, III); спинномозговая жидкость (нейросифилис).

Методы диагностики

Бактериоскопическое исследование. В ранних стадиях заболевания (I, II период) возбудитель в исследуемом материале (отделяемом шанкра, аспирате из высыпных элементов, пунктате регионарных лимфатических узлов) может быть выявлен методом микроскопии в темном поле (схема). Из исследуемого материала готовят препарат "раздавленная" капля. При положительном результате видны тонкие извитые нити длиной 6—14 мкм, имеющие 10—12 равномерных мелких завитков правильной формы. Для бледной трепонемы характерны маятникообразные и поступательно-сгибательные движения. При развитии поражений на слизистой оболочке рта при вторичном сифилисе, а также при локализации твердого шанкра в полости рта приходится дифференцировать этот микроорганизм от сапрофитных трепонем, являющихся представителями нормальной микрофлоры. В этом случае решающее диагностическое значение имеет обнаружение типичных трепонем в пунктате регионарных лимфатических узлов.

Бактериологическое исследование. Не применяется в связи со сложностью культивирования возбудителя.

Экспресс-методы диагностики: биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Наиболее доступна и применяется как основной метод диагностики сифилиса. Используют комплекс серологических реакций (КСР), который включает реакцию Вассермана (РСК), реакцию микропреципитации, реакцию иммобилизации трепонем (РИТ) и реакцию непрямой ИФ (РИФ) и др. Необходимо помнить, что первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательными серологическими реакциями. Антитела в крови больных удается обнаружить не ранее чем через 2—3 нед после появления твердого шанкра.

Реакцию Вассермана ставят одновременно с двумя антигенами: 1) специфическим, содержащим антиген возбудителя — разрушенные ультразвуком трепонемы; 2) неспецифическим — кардиолипиновым. Исследуемую сыворотку разводят в соотношении 1:5 и ставят РСК по общепринятой методике. При положительной реакции наблюдается задержка гемолиза, при отрицательной — происходит гемолиз эритроцитов, интенсивность реакции оценивается соответственно (++++).

Первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательной реакцией Вассермана. У 50 % больных реакция становится положительной не ранее чем через 2—3 нед после появления твердого шанкра. Во II и III периоде сифилиса частота положительных реакций достигает 75—90 %. После успешно проведенного курса лечения реакция Вассермана становится отрицательной.

Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса можно ставить реакцию Вассермана, используя спинномозговую жидкость, с теми же антигенами, что и в реакции с сывороткой больного.

РИФ — реакция непрямой иммунофлюоресценции является специфической при диагностике сифилиса. В качестве антигена используют взвесь тканевых трепонем. Разработаны разные методики постановки реакции; обычно используют модификацию РИФ-200. Сыворотку больного инактивируют так же, как для реакции Вассермана, и разводят в соотношении 1:200. На предметные стекла наносят каплю антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне. Затем на препарат наносят сыворотку больного, через 30 мин промывают и высушивают. Следующим этапом является обработка препарата флюоресцирующей сывороткой против иммуноглобулинов человека. Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая степень свечения трепонем.

Реакция иммобилизации трепонем также является специфической. Принцип реакции заключается в угнетении движения трепонем (иммобилизация) антителами сыворотки крови пациента в присутствии комплемента. Живую культуру трепонем получают при культивировании в яичке кролика. Яичко зараженного животного измельчается в специальной среде, в которой трепонемы сохраняют подвижность. Ставят реакцию следующим образом: взвесь тканевых (подвижных) трепонем смешивают в пробирке с исследуемой сывороткой и добавляют свежий комплемент. В одну контрольную пробирку вместо исследуемой сыворотки добавляют сыворотку здорового человека, в другую — вместо свежего комплемента добавляют инактивированный. После инкубации при 35 °С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок готовят препарат "раздавленная" капля и в темном поле определяют количество подвижных и неподвижных трепонем.. Результат реакции считают положительным, если процент иммобилизации выше 50, слабоположительным ~ от 31 до 50, сомнительным — от 21 до 30 и отрицательным — ниже 20. Для обнаружения специфических антител к T.pallidum используют и другие серологические реакции, в частности РИГА.

Микробиологическое исследование при сифилисе

Отделяемое твердого шанкра, пунктат из лимфатических узлов,

аспират из высыпных элементов

(I, II период болезни)

Сыворотка крови, спинномозговая жидкость (II, III, IV период болезни)

Предварительный ответ

Бактериоскопическое исследование

Нативный препарат: темнопольная, люминесцентная микроскопия

Фиксированный препарат:серебрение

Экспресс-методы диагностики

Биохимические

и молекулярно-

биологические

исследования

Предварительный ответ

ОКОНЧАТЕЛЬНЫЙ ОТВЕТ

Серодиагностика

Комплекс серологических реакций Неспецифические реакции: микропреципитации, Вассермана и др. Специфические реакции: РИТ, РИФ, РИГА, иммуноблотинг и др.

8. Микробиология кариеса

РОЛЬ МИКРОБОВ В РАЗВИТИИ КАРИЕСА ЗУБОВ

Зубные бляшки - это скопления микроорганизмов в матриксе органических веществ, протеинов и полисахаридов слюны или продуцируемых самими микроорганизмами.

Различают над - и поддесневые бляшки. Наддесневые бляшки имеют патогенетическое значение при развитии кариеса зубов. Поддесневые бляшки имеют важное значение при развитии патологических процессов в пародонте. Процесс бляшкообразования начинается с взаимодействия гликопротеинов слюны с поверхностью зуба, причём кислые группы гликопротеинов соединяются с ионами кальция зубной эмали, а основные взаимодействуют с фосфатами гидроксиапатитов. Происходит образование плёнки на поверхности зуба - пелликулы. Присутствие микроорганизмов активизирует указанный процесс.

Зубная бляшка начинает образовываться уже через 1-2 часа после чистки зубов, причем в динамике ее формирования происходят значительные изменения характера микробиоценоза. Общей тенденцией является изменение состава флоры от доминирования аэробных и факультативно-анаэробных форм, преимущественно кокков, к облигатно-анаэробным грамотрицательным палочкам и извитым формам.

1-я фаза формирования зубной бляшки - первые 2-4 часа после тщательной чистки зубов. Она преимущественно состоит из кокков (стрептококки, нейссерии и стафилококки) и коротких палочек (лактобактерии). Это так называемая "ранняя" зубная бляшка.

2-я фаза - от 4-5 дней. Характеризуется уменьшением доли грамположительных кокков и превалированием грамвариабельных нитевидных форм - лептотрихий, а также фузобактерий.

3-я фаза - от 6-7 дней и далее. Зубная бляшка принимает окончательный по составу симбионтов вид, хотя количественные сдвиги в ней происходят постоянно. Резко снижается количество аэробных видов - нейссерий, ротий, факультативно-анаэробных стрептококков. Доминируют грамотрицательные облигатно-анаэробные бактерии - бактероиды, фузобактерии, вейллонеллы и грамположительные - актиномицеты, микроаэрофильные стрептококки и пептострептококки.

Общее количество бактерий в зубной бляшке увеличивается от 90-100 в 1-ой фазе формирования до 1-10 млн во 2-ой фазе. В 3-й фазе формирования, в зависимости от многих факторов, количество бактерий исчисляется десятками и сотнями миллиардов в 1 г.

Микрофлора бляшек на зубах верхней и нижней челюстей различна по составу, что объясняется разницей рН среды. На бляшках зубов верхней челюсти чаще обитают стрептококки и лактобактерии, на бляшках зубов нижней челюсти - встречаются вейллонеллы и нитевидные бактерии. Актиномицеты выделяются из бляшек и верхней и нижней челюстей в одинаковом количестве.

Установлено, что микробы обладают разной аффинностью даже в отношении различных поверхностей зуба. Кроме того, на процесс адгезии влияют и механические факторы, связанные с процессом жевания, физико-химические условия и т.п. Поэтому на разных поверхностях зубов, в ямках и фиссурах состав микрофлоры несколько отличается даже в пределах одного зуба.

Зубная бляшка формируется также и на поверхности пломб, причем состав ее несколько отличается и зависит от характера и качества пломбировочного материала.

Приведённые данные имеют важное практическое значение в связи с тем, что состояние зубной бляшки, как известно, является ключевым механизмом возникновения и развития кариеса зубов.

Кариес (от лат. сaries - гниение) зубов - это прогрессирующее разрушение твердых тканей зуба с образованием дефекта в виде полости. В основе кариеса лежит поражение эмали, дентина, цемента. В зависимости от степени поражения твёрдых тканей зуба выделяют следующие стадии развития болезни:

Кариес в стадии пятна. Появление пятна на зубе происходит незаметно для больного.

Поверхностный кариес - поражена эмаль, но дентин не затронут.

Средний кариес - поражена эмаль и периферическая часть дентина.

Глубокий кариес - поражение, охватившее глубокую часть дентина.

Кариес зубов относится к одному из самых распространенных заболеваний населения земного шара.

Более 400 теорий и концепций было предложено для объяснения возможных причин появления кариеса зубов. Так, Гиппократ объяснял причину кариеса зубов "дурными соками", появляющимися у человека при заболевании печени, желудка и других органов. В семнадцатом веке появилась химическая теория кариеса зубов. Исходя из нее, кариес обусловлен влиянием кислот, попадающих в ротовую полость. Затем была предложена паразитарная теория появления кариеса, в основе которой лежали данные микробиологии о наличии микробов в зубном налете.

Зубной налет - это источник микробов, место ферментации углеводов и как следствие этого формирования органических кислот. Полисахариды мягкого зубного налета адсорбируют попадающую в ротовую полость сахарозу. В экспериментальных условиях показано, что даже если после приема сахара полоскать полость рта водой, то тем не менее содержание сахарозы увеличивается в зубном налете в 2,7 раза.

В настоящее время общепризнанно участие микробов в возникновении кариеса зубов. При этом ведущая роль отводится стрептококку мутанс (S.mutans). Данный вид стрептококка обнаруживается в зубных бляшках, в слюне, в испражнениях и в крови. S.mutans отличается от других стрептококков по морфологии колоний, способности ферментировать маннит, сорбит, ферментирует рамнозу, салицин и инулин, не образует перекиси водорода, даёт положительную реакцию Фогеса-Проскауэра, обладает выраженной способностью прилипать к гладкой поверхности в присутствии сахарозы. Изучение антигенного строения S. mutans позволило выявить 8 серотипов: a,b,c,d,e,f,g,h. В зубных бляшках человека чаще всего обнаруживается серовар с. Они являются наиболее кислотообразующими представителями среди стрептококков полости рта, развивающимися при низких значениях рН.

Существует также несколько видов других кариесогенных стрептококков S.macacae, S.sobrinus, S.rattus, S.ferus, S.cricetus. Основные различия между кариесогенными стрептококками представлены в таблице 2.

Впервые S.mutans выделен от больных кариесом в 1924 году. При этом была установлена адгезия этих бактерий к поверхности зубов, то есть потенциальная способность этих микробов вызывать повреждение эмали зубов. Однако лишь спустя 36 лет ученые обратили внимание на эти данные и подтвердили их. Интенсивное изучение биологии, иммунологии и кариесогенности этих микробов проводится в последние 20 лет. Уже имеются убедительные данные об исключительной роли S.mutans в развитии кариеса зубов у людей и животных.

Изучение кариесогенной роли этих микробов выявило незначительное их количество у детей перед прорезыванием зубов и у взрослых беззубых людей, свидетельствующее о непосредственной связи микробов с эмалью зубов. Установлено, что S.mutans преимущественно находясь на поверхности эмали, формирует большую часть микробной флоры зубной бляшки. В то же время эти микробы обычно отсутствуют на поверхности неповрежденной эмали вне бляшки.

Возбудителем сифилиса - хронической инфекции со специфическим поражением кожи, внутренних органов и нервной системы, является бледная трепонема (Treponema palladium). Методы лабораторной диагностики этой инфекции зависят от ее стадии.

Материалом для микроскопического исследования при сифилисе являются отделяемое твердого шанкра, пунктат лимфатических узлов, отделяемое слизистых оболочек и кожи при вторичном сифилисе, а также сыворотка крови и спинномозговая жидкость для серологической диагностики. Методы микробиологической диагностики сифилиса представлены в схеме 17.

Схема 17. Методы микробиологической диагностики сифилиса

Исследуемый материал: отделяемое твердого шанкра, пунктат лимфатических узлов, отделяемое слизистых оболочек и кожи при вторичном сифилисе, а также сыворотка крови и спинномозговая жидкость ( для серологической диагностики).

Микроскопический метод - темнопольная микроскопия, окраска спирохеты по Романовскому-Гимзе, Бурри, импрегнацией серебром по Морозову

Серологический метод – МР, ИФА, РНГА, РИФ, РИБТ, РСК для определения антител к бледной спирохете в крови больного

Генодиагностика - ПЦР

Рис. 24. Бледная спирохета (Treponema palladum). Прямая РИФ. х900

Методы окраски бледной спирохеты (по Романовскому-Гимзе, при котором она окрашивается в бледно-розовый цвет, импрегнацией серебром по Морозову), а также метод Бурри (изготовление негативных препаратов в капле туши) с последующим исследованием препаратов в обычном световом микроскопе имеют низкую воспроизводимость и существенно уступают темнопольной микроскопии по степени разрешающей способности, поэтому в реальной практике эти методы не применяются.

Бактериологический метод диагностики сифилиса не применяется в связи с трудностью культивирования бледных трепонем и отсутствием эффективных питательных сред.

Серологический метод. Рекомендуется использование следующих методов серодиагностики сифилиса, направленных на обнаружение в крови больных специфических антител к бледной трепонеме:

Для проведения отборочных исследований на сифилис ставят неспецифический тест - микрореакцию преципитации (МР). В лунку полистироловой пластины вносят 3 капли исследуемой сыворотки и 1 каплю кардиолипинового антигена, смесь встряхивают и учитывают результаты. Положительная реакция характеризуется выпадением хлопьев. МР обладает высокой чувствительностью и специфичностью, хорошо сочетается с подтверждающими диагноз специфическими трепонемными тестами, позволяет объективно оценить эффективность лечения, однако необходимо ее подтверждение одним из специфических тестов (ИФА, РНГА, РИФ, РИБТ, РСК).

ИФА применяется как для отборочных целей, так и для диагностики сифилиса. Разработаны тест-системы для определения антител к бледной спирохете классов GиM, что имеет важное значение для диагностики ранних форм сифилиса (в том числе врожденного), дифференциальной диагностики рецидивов, реинфекции, оценки эффективности лечения и т.д.

РНГА также используется для целей отбора и диагностики. Обладает более высокой чувствительностью и специфичностью, чем другие серологические реакции при сифилисе, отличается простотой в постановке.

РИФ сопоставима по своим результатам с ИФА и РНГА. Сыворотку больного адсорбируют взвесью непатогенных трепонем или разводят 1:200, наносят на предметное стекло, содержащее фиксированные ацетоном бледные трепонемы из тестикул зараженного кролика, после чего на препарат наносят люминесцирующий иммуноглобулин кролика против глобулинов человека. Мазки исследуют с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая при положительном результате наличие ярко-зеленого свечения трепонем.

РИБТ. Сущность реакции заключается в способности антител к бледной трепонеме иммобилизировать (обездвиживать) их в присутствии комплемента. Подсчитывают процент иммобилизации, при этом при показателе 0-20% реакция считается отрицательной, от 21 до 50% - слабо положительной, от 51 до 100% - положительной.

РСК ставится по общепринятой методике с неспецифическим кардиолипиновым (экстракт липидных фракций из бычьего сердца – реакция Вассермана) и специфическим (из разрушенных ультразвуком трепонем) антигенами. Положительная реакция характеризуется задержкой гемолиза.

Иммуноблотинг – вариант ИФА для определения антител в крови больного к антигенам бледной спирохеты.

В настоящее время ставится вопрос о повсеместном введении более информативных, простых и экономичных ИФА и РНГА для диагностики сифилиса с одновременной отменой РСК и РИБТ.

Генодиагностика. Разработана ПЦР и метод ДНК-зондов для диагностики сифилиса.

Сифилис – общее инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой, склонное к хроническому рецидивирующему течению с характерной периодизацией клинических симптомов, способное поражать все органы и системы, передающееся преимущественно половым путем; может передаваться внутриутробно.

Этиология

Возбудитель сифилиса – бледная трепонема, была открыта в 1905 г. Schaudinn и Hoffmann. По классификации Bergey она относится к отделуGracillicutes, порядку Spirochaetales, семейству Spirochaetoceae, роду Treponema, виду Treponema pallidum, подвиду pallidum.

Род Treponema представлен спиральными бактериями длиной от 5 до 20 мкм, которые образуют туго закрученные правильные или неправильные спирали. Грамотрицательные хорошо окрашиваются серебрением по Морозову, но плохо по Романовскому–Гимзе.

Представители рода – хемоорганотрофы с бродильным метаболизмом, утилизируют аминокислоты и/или углеводы. По типу дыхания – анаэробы или микроаэрофилы. Ферментативная активность очень низкая: каталаза-, уреаза- и оксидазаотрицательны, не восстанавливают нитраты.

Лабораторная диагностика сифилиса

Сифилис весьма многолик, характеризуется богатой палитрой манифестных и латентных форм, полисиндромностью поражений, распознавание которых основывается на комплексном клинико-лабораторном обследовании больного.

Выбор материала для исследования и метода микробиологической диагностики определяется стадией патогенеза болезни. 1 период заболевание – отделяемое шанкра, 2 период – аспират из высыпных элементов, пунктат регионарных лимфатических узлов, 2,3,4 периоды – кровь, 4 период – СМЖ (нейросифилис).

Бактериологическое исследование обычно не проводят, так как доступные методы выделения чистой культуры возбудителя не разработаны.

В связи с тем, что возбудитель сифилиса – Treponema pallidum – в отличие от других микроорганизмов плохо культивируется на питательных средах invitro, а также слабо воспринимает анилиновые красители, все существующие методы ее обнаружения можно подразделить на прямые и непрямые.

Прямые тесты основаны на непосредственном выявлении возбудителей в очагах поражения. К ним относятся: темнопольная микроскопия, RIT (rabbitinfektivitytest) – заражение материалом от больных кроликов, прямой тест с флюоресцентными антителами. Непрямые тесты основаны на выявлении АТ к возбудителю сифилиса в сыворотке крови. Это серологическая диагностика, а также редко используемые гистологические исследования.

Все существующие в настоящее время серологические тесты на сифилис подразделяются на две основные группы:

• нетрепонемные [реакция связывания комплемента с кардиолипиновым АГ (РСКк), реакция микропреципитации (РМП), тест быстрых плазменных реагиновRapidPlasmaReagins (RPR), VeneralDiseaseResearchLaboratory (VDRL), тест с толуидиновым красным – ToluidinRedUnheatedSerumTest (TRUST)];

• трепонемные [реакция связывания комплемента с трепонемным АГ (РСКт), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ или РИТ), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) (за рубежом – FTA – Fluorescenttreponemalanibody) с вариантами: РИФ-200 (FTA-200), РИФ-абс (FTA-abs), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – за рубежом – Treponemapafluidumhaemagglutinationassay (TPHA), иммуноферментный анализ (ИФА) – за рубежом – Enzymelynkedimmunosorbentasay (ELISA), иммуноблоттинг (WesternBlot)].

Прямая визуализация трепонем методом темнопольной микроскопии является убедительным доказательством трепонемной природы заболевания. Наиболее эффективен этот метод при первичном и вторичном сифилисе, наличии поражения кожи и слизистых оболочек. При микроскопии следует дифференцировать Т. pallidum, подвид pallidum, с нитями фибрина, а также с трепонемами нормальной микрофлоры организма человека – Т. refringens и Т. denticola. Т. refringens колонизирует слизистые оболочки наружных половых органов и отличается выраженной подвижностью и отсутствием сгибательных движений. Т. denticola колонизирует слизистую оболочку ротовой полости, ее завитки короче и направлены под более острым углом.

Темнопольная микроскопия обладает чувствительностью 74–86% и специфичностью до 97% в зависимости от квалификации исследователя. Чувствительность может снижаться, если повреждение было протерто антисептиком. Вместе с тем отрицательный результат, обусловленный различными факторами, не является основанием для исключения диагноза сифилиса и требует дальнейшего подтверждения методами серологической диагностики. Кроме того, с помощью этого метода невозможно наблюдать за динамикой инфекционного процесса и оценивать эффективность терапии.

Прямой тест на Т. pallidum с флюоресцентными антителами (DFA-TP) использует флюоресцеинконъюгированные АТ для окраски организма в мазках и срезах тканей. DFA-TP не требует подвижных организмов, является более чувствительным и специфичным, но более дорогим и технически сложным, чем темнопольная микроскопия. На чувствительность обоих микроскопических методов может отрицательно повлиять давность возникновения или состояние повреждения, а также то, получал ли пациент лечение.

В нетрепонемных тестах применяется АГ нетрепонемного происхождения (как правило, кардиолипин-лецитин-холестериновый АГ). АТ к фосфолипидным АГ на поверхности трепонем дают перекрестную реакцию с кардиолипиновыми АГ млекопитающих. Флоккуляционные (хлопьеобразующие) методики для обнаружения этих АТ к фосфолипидам были разработаны как неспецифичные скрининговые тесты. К ним относятся РМП и ее модификации: RPR-, VDRL-, TRUST-тест. В данных тестах обнаруживаются IgG- и IgM-АТ к липидам клеточной стенки Т. pallidum, которые появляются в крови примерно через 1 нед после формирования твердого шанкра.

Скрининговые тесты имеют свои плюсы и минусы. К плюсам нетрепонемных тестов можно отнести их невысокую стоимость, сравнительно короткое время для получения ответа при постановке отдельных тестов, пригодность для проведения скрининга большого количества образцов. К минусам большинства нетрепонемных тестов относят их сравнительно низкую чувствительность при первичном (70—90%) и позднем (30—50%) сифилисе, наличие феномена прозоны в отдельных случаях (появление ложноотрицательных или слабоположительных результатов при наличии избыточного количества антител в неразведенной исследуемой сыворотке (блокировка реакции антиген-антитело), в то время как при разведении исходной сыворотки получаются резко положительные результаты). Нетрепонемные тесты дают ложноположительные результаты почти в 2,5% случаев, чаще у женщин. Основные причины ложноположительных нетрепонемных тестов: аутоиммунные заболевания (ревматизм, системная красная волчанка, системная склеродермия, узелковый периартериит, криоглобулиновая пурпура, саркоидоз), онкологические заболевания и болезни крови, некоторые вирусные и бактериальные инфекции, малярия, цирроз печени, наркомании, алкоголизм, беременность, эндокринные заболевания (сахарный диабет, аутоиммунный тиреоидит), старческий возраст и др.

Трепонемные тесты, такие как РСКт, РИБТ или РИТ, РИФ (за рубежом – FTA и FTA-ABS), РПГА (TPHA или ТРРА), используются для подтверждения позитивных скрининговых тестов, распознавания ложноположительных результатов нетрепонемных тестов, при клиническом, эпидемиологическом и анамнестическом подозрении на сифилис, для диагностики скрытых форм заболевания. В трепонемных тестах применяются АГ трепонемного происхождения.

Реакция Вассермана

Самой привычной и испытанной временем является реакция Вассермана (РВ) на сифилис. Для ее проведения берут 5 мл крови из локтевой вены, из пробы получают сыворотку, инактивируют собственный комплемент и потом одну часть обрабатывают трепонемным антигеном, а другую – кардиолипиновым.Результат оценивают по скорости гемолиза (интенсивность оценивается от ++++ до -). Первый период сифилиса характеризуется отрицательной реакцией Вассермана, у 50% людей она становится положительной не ранее, чем через 2-3 недели после появления твердого шанкра. Во 2 и 3 периоде – 75-90% (+). После успешного лечения – снова отрицательная.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Препарат для теста готовят из эритроцитов животных путем сенсибилизации антигеном Treponemapallidum. Клетки добавляют к сыворотке крови пациента. Время проведения теста – 1 час. В присутствии антител происходит реакция агглютинации, а лаборант видит специфические рисунки в микролунках.

Расшифровка теста: кольцо из агглютинированных клеток – положительный результат (4+, 3+, 2+);

неплотное кольцо – сомнительный результат (+/-, 1+);

точка в центре – отрицательный результат (-).

РИТ и РИФ обладают более высокой чувствительность (74–94 и 84–99%) и специфичностью (99 и 97% соответственно). Метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси бактерий обрабатывают антителами антимикробной диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся с антигенами, отмывают, а оставшиеся антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс антигены + антитела + антиглобулины антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе.

В основе РИБТ лежит способность сыворотки больного сифилисом обездвиживать бледные трепонемы, в то время как сыворотка здоровых людей этой способностью не обладает. Реакция ставится в условиях анаэробиоза.В мировой практике метод РИБТ в настоящее время не применяется.

отрицательный

иммобилизация до 20 % бледных трепонем

слабоположительный

иммобилизация от 21 до 50 % бледных трепонем

положительный

иммобилизация от 51 до 100%

Иммуноблоттинг предполагался как альтернатива РИФ-абс (FTA-ABS) в качестве подтверждающего теста. Он более чувствителен, чем РИФ-абс (FTA-ABS), но менее чувствителен, чем РПГА (ТРРА). Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их (блоттинг - от англ, blot, пятно) из геля на активированную бумагу (1) или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с "блотами" антигенов * . На эти полоски наносят сыворотку больного (2). Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека (IgMили IgG), меченную ферментом (3). Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата (4), изменяющего окраску под действием фермента.IgG-иммуноблотинг (IgGWesternblot)по чувствительности и специфичности соответствует РИФ-абс.IgM -иммуноблотинг (IgMWesternblot) применяется как диагностический тест при врожденном сифилисе.

В последние годы в отечественную практику лабораторной диагностики сифилиса внедряются стандартизированные высокоинформативные методы серодиагностики – ИФА и РПГА. Принцип ИФА заключается в соединении комплекса АГ-АТ с конъюгатом, содержащим ферментную метку (пероксидаза). После инкубации с субстратом и индикатором оценивают ферментативную активность по интенсивности окраски. РПГА применяется для выявления специфических АТ к T. pallidum в сыворотке крови: при соединении АГ T. pallidum со специфическими АТ в реакции на микропланшете наблюдается феномен агглютинации эритроцитов (плотное кольцо - положительно, неплотное кольцо – сомнительный результат, точка – отрицательный).

НТТ – отрицательные, ТТ – отрицательные. Подобное сочетание может наблюдаться в следующих случаях:

а) Обследуемый пациент здоров и никогда не страдал сифилисом.

б) Первичный сифилис на первой неделе развития. Показано, что у 30—40 % больных с положительными результатами темнопольной микроскопии определяются отрицательные НТТ и у 25 % — отрицательные ТТ.

в) Больные первичным сифилисом после лечения. Спустя 6—12 месяцев после лечения НТТ становятся отрицательными практически у 98—100 %, а ТТ – у 25—50 % больных.

2. НТТ – отрицательные, ТТ – положительные. Такое сочетание серологических тестов может наблюдаться при ранних формах манифестного сифилиса после успешного лечения, у больных первичным сифилисом, когда сероконверсия НТТ отстает от таковой при ТТ; при вторичном сифилисе и феномене прозоны; при позднем нелеченом сифилисе НТТ бывают отрицательными у 20—40 % больных; при биологически ложноположительных ТТ, наблюдающихся у больных аутоиммунными заболеваниями, у онкологических и инфекционных больных, у беременных; в терминальной стадии ВИЧ-инфекции.

3. НТТ – положительные, ТТ – отрицательные. Это сочетание чаще всего встречается при биологически ложноположительных серологических реакциях у названных контингентов больных аутоиммунными, онкологическими и инфекционными заболеваниями, лепрой, а также у лиц преклонного возраста и наркоманов.

4. Сочетание положительных НТТ и ТТ наблюдается у нелеченых больных сифилисом в любой стадии инфекции, у леченых больных поздним сифилисом, серорезистентным сифилисом, при других трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта), при боррелиозе, ложноположительные НТТ и ТТ — у больных системной красной волчанкой и другими заболеваниями с аномальной или избыточной продукцией антител.

В настоящее время разрабатываются новые диагностические методы, основанные на выявлении молекулярных маркеров органных поражений при сифилисе методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС). Привлечение в арсенал методов лабораторной диагностики сифилиса ГХ-МС позволяет с высокой степенью достоверности определить наличие T. pallidum в организме по наличию специфического молекулярного маркера. В соответствии с данными исследованиями было показано, что биохимический состав сыворотки крови больных сифилисом отличается от сыворотки здоровых доноров. В сыворотке крови больных сифилисом присутствуют липидные, углеводные и аминокислотные компоненты, которые могут служить молекулярными маркерами присутствия T. pallidum в организме (К.А.Осман, 2004). Также методом ГХ-МС были установлены химические соединения, являющиеся молекулярными маркерами органных поражений на ранних стадиях заболевания. По данным исследования К.А. Осман (2004 г.), такими соединениями при поражении ЦНС являются D-галактоза, D-трентол, глюкоза и ее циклический изомер – инозитол, при поражении печени – ароматические производные жирных кислот (фенилпропионовая и фенилуксусная кислота), аминокислотные фрагменты, липидно-белковый комплекс, при поражении костей – летучие жирные кислоты, липополисахариды. Таким образом, привлечение в диагностический арсенал методов газовой хроматографии и масс-спектрометрии позволяет с высокой степенью достоверности определить наличие поражения органов и систем при отсутствии положительных серологических реакций и выраженных клинических проявлений болезни.

Новые методы (журнал Вестник дерматологии и венерологии).

Получение рекомбинантного белка ТрF1, цитоплазматического бактериоферритина T. pallidum, и исследование его иммуногенности на образцах сыворотки крови, полученных от больных различными формами сифилитической инфекции и от здоровых добровольцев. Проведена гетерологическая экспрессия белка ТрF1 в клетках E. coli и очистка полученного ТрF1 с помощью аффинной хроматографии на металл-хелатном сорбенте. Далее рекомбинантный ТрF1 использовали в качестве антигена для определения специфических IgG к исследуемому белку в сыворотках крови больных первичным, вторичным, и ранним/ поздним скрытым сифилисом. Показано, что антитела к ТрF1 обнаруживаются на всех стадиях сифилиса, однако их уровень у больных вторичным, ранним и поздним скрытым сифилисом статистически достоверно отличался от такового в группе здоровых добровольцев. Наибольшее различие было отмечено в группах скрытого сифилиса. Полученные данные характеризуют белок ТрF1 как перспективный антиген для диагностики сифилитической инфекции. Кроме этого, ТрF1 можно расценивать как потенциальный антиген для проведения диференцированной диагностики скрытых форм сифилиса.

Иммуноферментный анализ (ИФА) белка ТрF1 на выборке сывороток крови больных сифилисом и здоровых добровольцев. Для исследования иммуногенности белка ТрF1 были применены образцы сыворотки крови следующих групп больных: 20 больных первичным сифилисом, 21 больного вторичным сифилисом, 20 больных скрытым ранним сифилисом и 16 больных скрытым поздним сифилисом. В качестве группы контроля применяли сыворотку крови (9 образцов) здоровых добровольцев, не имевших в анамнезе указаний на заболевание сифилисом и показавших отрицательные результаты исследования.

С использованием методов генной инженерии разработана технология получения рекомбинантного варианта новых целевыхбелков T. pallidum Tp0453 и Tp0319. Белок Tp0453 является гипотетическим белком наружной мембраны возбудителя сифилиса. Данный белок представляет интерес для серодиагностики си- филиса в связи с предполагаемой локализацией на наружной мембране возбудителя, высокой иммуногенностью и отсутствием гомологов среди бактерий других родов. Белок Тр0319 (TmpC, PnrA) — мембранный липопротеин T. pallidum, предположительно ABC-транспортный белок. Предположительно данный липопротеин является заякоренным во внутренней мембране посредством липидной части молекулы.

В соответствии с разработанной технологией были получены очищенные рекомбинантные белки T. pallidum Tp0319 и Tp0453. Эти белки были использованы в качестве антигенов в составе твердофазного иммуносорбента для выявления специфических IgG к исследуемому белку в сыворотке крови больных с разными формами приобретенного сифилиса. Применение полученного рекомбинантного белка позволило выявить антитела к T. pallidum в сыворотке крови больных сифилисом (первичным, вторичным, скрытым ранним и поздним). При исследовании образцов сыворотки крови, полученных от здоровых доноров, антитела не обнаруживались. Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о возможности использования полученного рекомбинантного белка Тр0319 в качестве дополнительного антигена при диагностике сифилиса. Включение нового антигена в состав иммуносорбента тест-систем для диагностики сифилиса (в формате иммуноферментного анализа, иммуноблотинга) расширяет возможности серологической диагностики данного заболевания за счет увеличения спектра определяемых антител к T. pallidum.

Читайте также: