Среда м17 для определения лактококков и термофильного стрептококка

Обновлено: 18.04.2024

Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочную продукцию и устанавливает методы определения молочнокислых бактерий:

- посевом в стерильное молоко и подсчетом наиболее вероятного числа (НВЧ);

- посевом на или в твердые питательные среды и подсчетом КОЕ.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 * Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 32901-2014 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 молочнокислые бактерии: Грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, каталазоотрицательные, нитрат-редуктаза-отрицательные и цитохром-оксидазоотрицательные, не разжижающие желатин и не продуцирующие индол кокки или прямые палочки.

Примечание - Основные роды и виды молочнокислых бактерий в производстве молочных продуктов: вид Lactococcus lactis, род Lactobacillus, вид Streptococcus thermophilus, род Leuconostoc.

4.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы - по ГОСТ 32901 со следующими дополнениями:

- стерильное обезжиренное молоко; -гидролизованное молоко;

- агар с гидролизованным молоком;

- подкисленная среда MRS;

- среда MRS агаризованная;

- основа селективного агара;

- среда для определения L. casei;

- раствор мальтозы;

- среда для определения лактококков и термофильных стрептококков.

4.2 Допускается применять одноразовую посуду, если она отвечает соответствующим требованиям.

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 13928, ГОСТ 26809.1 и ГОСТ 32901.

6.1 Подготовка посуды и материалов - по ГОСТ 32901.

6.2 Приготовление питательных сред

Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см 3 и затем стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение (10 ± 1) мин.

Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4 ± 2) °С в течение 30 дней.

Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим паром в течение 20 мин, охлаждают до температуры (45 ± 1) °С и устанавливают активную кислотность рН (7,6 - 7,8). К 1000 см 3 молока добавляют (0,5 - 1,0) г порошка панкреатина и 5 см 3 хлороформа. Колбу со смесью закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате при температуре 40 °С в течение (18 - 24) ч. В течение первых (3 - 5) ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через (18 - 24) ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1, устанавливают активную кислотность рН (7,0 - 7,2) и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение (15 ± 1) мин.

Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4 ± 2) °С в течение 30 дней.

К 1000 см 3 гидролизованного молока (6.2.2) или гидролизованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение (10 ± 1) мин.

Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4 ± 2) °С в течение 30 дней.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 33,25 г порошка М929 или 52,25 г порошка М1063 или 42,25 г порошка М1029 в 1000 мл дистиллированной воды. Добавить 19,0 г динатрий-b-глицерофосфата в среду М929. Размешать 48,25 г порошка М1019 в 950 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45°С и асептично нанести 50 мл стерилизованного отдельно 10%-ного (вес/об) раствора лактозы в среду М1019. Тщательно перемешать и разлить в соответствующую посуду.

Принцип и оценка результата:

Эти среды предложены Terzaghi и Sandine (1) для культивирования и подсчета молочных стрептококков, а также их бактериофагов. На них можно изучать лизогению и морфологические особенности фагов. Бульон М17 является модификацией бульона М16 (2).

Молочнокислые стрептококки – прихотливые микроорганизмы, требующие для оптимального роста сложные среды (3, 4). Динатрий-b-глицерофосфат обеспечивает поддержание рН выше 5,7, что важно, так как при более низких значениях клетки повреждаются и выделяемость таких стрептококков снижается. Глицерофосфат не дает преципитата с ионами кальция, что необходимо для исследования бактериофагов молочнокислых стрептококков методом бляшкообразования.

Гидролизат казеина, пептический перевар животной ткани, папаиновый перевар соевой муки, биопептон, дрожжевой, мясной и говяжий экстракты служат источником углерода, азота, минеральных веществ, витаминов В и других важных факторов роста данных бактерий. Лактоза служит ферментируемым углеводом. Аскорбиновая кислота стимулирует рост молочнокислых стрептококков. Сульфат магния обеспечивает присутствие в среде важнейших ионов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,0%-ному (М929, М1063) или 1,1%-ному (М1019) агаровому гелю .

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-желтую окраску, слегка опалесцирует, если в пробирках или чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М929 (3,33% вес/об), М1063 (5,23% вес/об) или М1029 (4,23% вес/об) имеют рН 7,1 ± 0,2, раствор М1019 (4,83% вес/об) имеет рН 6,9 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С.

Ссылки:

1. Terzaghi B.E. and Sandine W.E., 1975, Appl. Microbiol., 29:807.
2. Lawrie and Pearee, 1971, J. Dairy Sci. Technol., 6:166.
3. Anderson A.W. and Elliker P.R., 1953, J. Dairy Sci., 36:161.
4. Reiter B. and Oran J.D., 1962, J. Dairy Res., 29:63.
5. Shankar P.A. and Davies F.L., 1977, Soc. Dairy Technol., 30:28.
6. International Dairy Federation, 1981, Joint IDF/ISO/AOAC Group E44.
7. International Organization for Standardization, 1985, ISO/DIS:7889.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.

МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ

Методы определения молочнокислых микроорганизмов

Milk and milk products. Methods for determination of the lactic acid bacteria

Дата введения 2017-09-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" (ФГБНУ "ВНИМИ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 октября 2016 г. N 92-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Казахстан

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 ноября 2016 г. N 1827-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33951-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2017 г.

5 ВЗАМЕН ГОСТ 10444.11-89 в части молока и молочной продукции

6. Исключен. (Поправка. ИУС N 4-2017).

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 4, 2017 год

Поправка внесена изготовителем базы данных

1 Область применения

- посевом в стерильное молоко и подсчетом наиболее вероятного числа (НВЧ);

- посевом на или в твердые питательные среды и подсчетом КОЕ.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 32901-2014 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

Примечание - Основные роды и виды молочнокислых бактерий в производстве молочных продуктов: вид Lactococcus lactis, род Lactobacillus, вид Streptococcus thermophilus, род Leuconostoc.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы

- стерильное обезжиренное молоко;

- агар с гидролизованным молоком;

- подкисленная среда MRS;

- среда MRS агаризованная;

- основа селективного агара;

- среда для определения L. casei;

- среда для определения лактококков и термофильных стрептококков.

4.2 Допускается применять одноразовую посуду, если она отвечает соответствующим требованиям.

5 Отбор проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 13928, ГОСТ 26809.1 и ГОСТ 32901.

6 Подготовка к проведению анализа

6.1 Подготовка посуды и материалов - по ГОСТ 32901.

6.2 Приготовление питательных сред

6.2.1 Приготовление стерильного обезжиренного молока

Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см и затем стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.

Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

6.2.2 Приготовление гидролизованного молока

Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

6.2.3 Приготовление агара с гидролизованным молоком или бульоном

К 1000 см гидролизованного молока (6.2.2) или гидролизованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.

Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

Читайте также: