Среда питательная для выделения иерсиниоза и псевдотуберкулеза
Обновлено: 28.03.2024
Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, сухая.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для бактериологических исследований
НАЗНАЧЕНИЕ
Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.
2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Совокупность компонентов, входящих в состав набора, обеспечивает питательные потребности для роста, дифференциации возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, а также ингибиции отдельных видов микроорганизмов.
2.2. СОСТАВ набора
Панкреатический гидролизат рыбной муки……………….. | 23,5 |
Желчь очищенная, сухая ……………………………….. | 4,0 |
Натрия хлорид …………………. ……………………………… | 3,0 |
Д-глюкоза …………………………………………………. | 10,0 |
Мочевина ….…………………………………………….. | 5,0 |
Бромтимоловый синий …………………………………..…….. | 0,128 |
Натрий углекислый………………………………………….……… | 0,1-0,3 |
Бриллиантовый зеленый …………………………………………. | 66×10 -5 |
Агар микробиологический ………………………………. | 10,0±3,0 |
АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
При визуальном просмотре чашек колонии указанных штаммов должны выглядеть следующим образом:
Y.enterocolitica 287-II — круглые, гладкие, блестящие, сине-зеленые, диаметром не менее 1,5 мм;
Y.pseudotuberculosis III — матовые, шероховатые, зеленовато-синие, с фестончатым краем и темным, выпуклым центром, диаметром не менее 1,0 мм.
Дифференцирующие свойства среды. Питательная cреда должна обеспечивать дифференциацию тест-штаммов Y.enterocolitica 287-II и Y.pseudotuberculosis III от тест-штаммов E. coli 3912/41 (055:K59) и S. flexneri 1а 8516 на всех засеянных чашках Петри при посеве по 0,1 мл смеси тест-штамма Y.enterocolitica 287-II с E. coli 3912/41 (055:K59), Y.enterocolitica 287-II с S. flexneri 1а 8516, Y.pseudotuberculosis III с E. coli 3912/41 (055:K59), Y.pseudotuberculosis III с S. flexneri 1а 8516 через 48 ч инкубации при температуре (28±1) °С.
При визуальном просмотре чашек колонии указанных штаммов должны выглядеть следующим образом:
- coli 3912/41 (055:K59) — ярко-желтые, сочные, круглые, выпуклые, диаметром не менее 2,0 мм;
- flexneri 1а 8516 — желтые, плоские, диаметром не менее 1,0 мм.
Ингибирующие свойства среды. Иерсиния-агар должен полностью подавлять рост тест-штамма Staphylococcus aureus Wood-46 на всех засеянных чашках Петри при посеве 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10 -2 через 48 ч культивирования при температуре (28±1) °С.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
- ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
- Весы лабораторные 2 класса точности
- Автоклав
- Пробирки стеклянные
- Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
- Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
- Чашки Петри стерильные
- Вода дистиллированная
- Колбы
- Воронки стеклянные
Объекты исследований в санитарной, клинической микробиологии и научные исследования.
Исследования образцов проводятся по соответствующим Методическим указаниям и ГОСТам.
7.1. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Препарат в количестве, необходимом для приготовления конкретной серии питательной среды, размешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и кипятят 5 мин на медленном огне. Затем фильтруют через ватно-марлевый фильтр и вновь кипятят 1-2 мин. Охлаждают до 45-50 °С и разливают в чашки Петри слоем 5-6 мм, закрывают крышками и ставят для застывания. Перед посевом чашки со средой подсушивают на рабочем столе с открытыми крышками в течение 30-40 мин.
Разлитая в чашки Петри среда может быть использована в течение 2-х сут при температуре хранения 2-8 °С.
Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее, чем в трех повторностях.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Срок годности – 1 год.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
Медицинская микробиология:
Питательные среды, тесты для выделения, культивирования и идентификации бактерий рода Haemophilus
А. ШКА, в том числе для посевов спинномозговой жидкости от больного с подозрением на гнойный менингит.
К расплавленному питательному агару добавляют 5% дефибринированной крови барана, лошади, кролика, подогревают в водяной бане при температуре 80°С 5 мин, постоянно помешивая, затем добавляют еще 5% крови и продолжают прогрев при этом же режиме еще 5 мин, после чего остужают до 50"С и разливают в чашки и/или пробирки.
Б. ШКА, пригодный только для гемофилов.
Состав. 2%-ный мясопептонный агар (МПА), pH 7,4-7,6, 10% крови барана или лошади, или 5% эритроцитарной массы крови человека (возможно использование лизированной крови, хранившейся в морозильной камере) и 0,5% дрожжевого экстракта или раствора НАД.
К 100,0 мл охлажденного до 75°С МПА асептически добавляют половину необходимого объема крови (5,0 мл), тщательно перемешивают и нагревают на водяной бане в течение 3-5 мин при температуре 80-90°С, непрерывно помешивая. Остужают при комнатной температуре до 50°С и добавляют вторую половину крови, снова прогревают при 80-90°С в течение 3-5 мин. Смесь остужают до 45-50°С и добавляют в нее дрожжевой экстракт (5,0 мл) или НАД (см. ниже) до конечной концентрации 15 мкг/мл (0,3 мл). Агар тщательно перемешивают, разливают по чашкам и/или пробиркам.
Готовую среду ШКА хранят в холодильнике не более 1 нед.
Для Н.ducreyi раствор НАД в среду можно не добавлять.
г) Селективный агар для выделения гемофилов при смешанной микрофлоре. 500,0 мг бацитрацина растворяют в 50,0 мл стерильной дистиллированной воды. К 100,0 мл приготовленного ШКАб, охлажденного до 45°С, добавляют 3,0 мл раствора бацитрацина. Среду тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.
д) Среда НТМ для определения чувствительности к антибиотикам. Состав. Агар Мюллера-Хинтона с НАД (15 мкг/мл) и гемином (15 мкг/мл).
После растворения агаровой основы в нее добавляют сухой дрожжевой экстракт до конечной концентрации 5 мг/мл и раствор гемина до конечной концентрации 15 мкг/мл. Для приготовления маточного раствора гемина к 50,0 мг коммерческого препарата гемина добавляют 100,0 мл 0,01N раствора NaOH и нагревают при тщательном перемешивании до полного растворения. Раствор гемина добавляют к агаровой основе из расчета 0,3 мл на 100,0 мл агаровой среды. После автоклавирования и охлаждения на водяной бане до 50°С в агаровую среду асептически вносят маточный раствор НАД (3,0 мл на 1 л агаровой среды) до конечной концентрации 15 мкг/мл.
е) Маточный раствор НАД (никотинамид аденин динуклеотид). 50,0 мг НАД растворяют в 10,0 мл стерильной дистиллированной воды и стерилизуют через мембранный фильтр с размером пор 0,22—0,45 мкм.
ж) Приготовление дрожжевого экстракта (по D.Turk a. J.May). Пекарские дрожжи измельчают и смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:1, доводят pH до 4,5 при помощи гидрохлорида НС1. Прогревают при помешивании в кипящей водяной бане 3 мин. Охлажденную взвесь центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 20-30 мин. Надосадочную жидкость фильтруют сначала через бумажный фильтр, затем через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм и добавляют в ШКАБ или в ШКБ до концентрации 0,5%.
з) Определение потребности гемофила в X- и/или V-факторах. Используют полоски или диски, пропитанные X,V- и XV-факторами (BBL, Oxoid и др.), наложенные на поверхность питательного агара без этих факторов, засеянного испытуемой бактериальной суспензией.
л) Определение бета-лактамазы. Используют бумажный диск, пропитанный хромогенным цефалоспорином (ни-троцефином). Перед постановкой теста диск пропитывают каплей дистиллированной воды, после чего на него наносят несколько изолированных колоний испытуемой суточной культуры с ШКА.
Учет реакции производят через 5 мин. При положительной реакции на месте нанесения культуры цвет диска переходит в красный, при отрицательной реакции цвет не изменяется. При проведении этого теста необходима постановка контроля качества с двумя штаммами, дающими положительную (Staphylococcus aureus, АТСС 29213) и отрицательную (Haemophilus influenzae, АТСС 10211) реакции.
Медицинская микробиология:
Среды для выделения, культивирования, идентификации и хранения кампилобактеров
Для выделения возбудителей кампилобактериоза используют плотные питательные среды, обогащенные кровью (5-10% крови барана, кролика, лошади или человека, без добавления консервантов) с содержанием 3-5 антибактериальных и противогрибковых препаратов, подавляющих рост нормальной флоры кишечника.
а) Селективная среда для выделения кампилобактерий — железо-эритригный кровяной агар (ЖЭКА). Состав основы:
Эритрит агар (сухой) — 36,0 г
Экстракт кормовых дрожжей — 4,0 г
Сернокислое железо (FeSO4*7H2O) — 0,04 г
Вода дистиллированная — до 1000,0 мл
pH 7,2±0,2
Ингредиенты размешивают в 1000,0 мл дистиллированной воды, доводят до кипения и кипятят 2-3 мин до полного растворения. Среду разливают по 200,0 мл в колбы или флаконы и стерилизуют автоклавированием 20 мин при 121°С.
В остуженную до 50-55°С питательную основу вносят аэротолерантную добавку (метабисульфит натрия — 0,1 г/л и пируват натрия — 0,25 г/л), гемолизированную баранью, лошадиную кровь — 7%, селективную добавку (амфотерицин В — 3,0 мг, фузидин натрия — 10,0 мг, цефалотин — 15,0 мг, рифампицин — 20,0 мг). Разливают в чашки Петри по 15-20,0 мл.
б) Железо-эритрит-кровяной агар (ЖЭКА), сухой. Среда предназначена для выделения кампилобактерий.
Состав основы, г/л:
Гидролизат кильки — 17,9
Эритрит — 0,0122
Тиаминбромид — 0,005
Железа закисного сульфат — 0,04
Экстракт кормовых дрожжей — 4,0
Глюкоза — 1,0
Натрия хлорид — 5,9
Натрия карбонат — 2,5
Агар — 11,2
Вода дистиллированная — 1000,0 мл
pH 7,3±0,2
Бактерии рода Campylobacter на плотных питательных средах образуют колонии без гемолиза двух типов. Чаще встречается плоская форма колоний с ровными краями диаметром 2-8 мм. Колонии бесцветные или светло-серого цвета, гомогенные, напоминающие капли жидкости, расплескавшейся по поверхности агара. Колонии второго типа — мелкие (1,0-2,0 мм в диаметре) круглые с ровными краями, гладкие блестящие, заметно возвышающиеся над поверхностью, гомогенные, бесцветные, приобретающие желтоватый оттенок при длительном культивировании. Выпускается коммерческая отечественная среда.
в) Мясопептонно-печеночный полужидкий агар (МПППА). Среда может быть использована для обнаружения и кратковременного хранения культур, а также проведения температурного теста.
Состав:
Мясная вода — 250,0 мл
Печеночный отвар — 250,0 мл
Пептон бактериологический —10,0 г
Хлорид натрия NaCl — 5,0 г
Агар — 1,6 г
Вода дистиллированная — 500,0 мл
pH 7,3+0,1
После растворения всех ингредиентов и расплавления агара устанавливают pH. При необходимости среду фильтруют, стерилизуют при 121°С 20 мин, охлаждают до 45-50°С и разливают по 5,0-7,0 мл в пробирки. Кампилобактер сохраняет жизнеспособность в этой среде до 6-7 сут.
В пробирочных полужидких средах кампилобактер образует зону роста в виде диска на глубине 1,0-2,0 мм от поверхности среды.
Среду после приготовления разливают в пробирки по 9-10,0 мл и стерилизуют при 112°С 30 мин. Посевы инкубируют при 37°С в течение 72 ч в аэробных условиях. Учет результатов — по общепринятой методике.
д) Модифицированная среда для теста продукции сероводорода. Состав:
Дрожжевой экстракт — 3,0 г
Пептон — 20,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 3,0 г
Агар — 15,0 г
Железа (III) аммоний цитрат — 0,18 г
Натрия тиосульфат (Na2S2O3) безводный — 0,18 г
Глюкоза — 0,6 г
Феноловый красный (0,2%-ный водный раствор) — 12 мл
Дистиллированная вода — до 1000 мл
pH 7,0-7,1
Готовую среду разливают в пробирки по 7 мл, стерилизуют при 112°С 30 мин и скашивают в горячем виде. Учет — по наличию или отсутствию почернения среды в нижней части пробирки (в месте соприкосновения среды и конденсата).
е) Криоконсервант для низкотемпературного замораживания чистых культур кампилобактерий и аркобактеров (пропись H.Lior). Состав:
Пептон ферментативный — 1,0 г
Глицерин — 25,0 мл
NaCl - 0,5 г
Вода дистиллированная — 75,0 мл
pH 7,2
Криопротектор стерилизуют автоклавированием при 121°С 15 мин.
ж) Модифицированная среда для лиофилизации штаммов кампилобактерий и аркобактеров (на 100,0 мл готовой среды). Состав:
Фетальная телячья сыворотка — 50,0 мл
Уголь активированный бактериологический — 2,0 г
Желатина (10% раствор) — 50,0 мл
Среду стерилизуют автоклавированием при 121°С 15 мин.
Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза сухая (Иерсиния-агар) 250 г.
Артикул: | О55-К |
Производитель: | ФБУН ГНЦ ПМБ Оболенск (Россия) |
Модель: | Иерсиния-агар |
Фасовка: | 250 гр. |
Срок годности: | 1 год |
Наличие: | Есть в наличии |
2662.00 руб.
Приготовление: Питательную среду в количестве указанном на этикетке, размешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и кипятят 5мин на медленном огне. Затем фильтруют через ватно-марлевый фильтр и вновь кипятят 1-2 мин. Охлаждают до 45-50°С и разливают в чашки Петри слоем 5-6 мм, закрывают крышками и ставят для застывания. Перед посевом чашки со средой подсушивают на рабочем столе с открытыми крышками в течение 30-40 мин.
Разлитая в чашки Петри среда может быть использована в течение 2-х суток при температуре хранения 2-8°С.
Взятие и посев исследуемого материала производят в соответствии с “Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями“ (М.,1984 г.) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85, №535 “Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений”.
Учет производят через 24-48 ч инкубации при температуре (28±1)°С. За время инкубации через 20-24 ч на данной среде возбудители псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза вырастают в виде мелких желто-зеленых колоний. Через 44-48 ч инкубации при той же температуре колонии Y. enterocolitica - круглые, гладкие, блестящие, сине-зеленые, диаметром не менее 1,5 мм, колонии Y. pseudotuberculosis - матовые, шероховатые, зеленовато-синие, с фестончатым краем и темным, выпуклым центром, диаметром не менее 1,0 мм.
Колонии других энтеробактерий (шигелл, сальмонелл, эшерихий) приобретают ярко-желтый цвет и характерную морфологию. Рост S. aureus подавлен.
Хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищен-ном от света месте при температуре от 2 до 30°С.
Читайте также: