Стандартные панели для вич
Обновлено: 28.03.2024
от 21 июля 2016 года N 95
____________________________________________________________________
Утратило силу с 1 сентября 2021 года на основании
постановления Главного государственного санитарного врача
Российской Федерации от 28 января 2021 года N 4
____________________________________________________________________
В соответствии с Федеральным законом от 30.03.99 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст.1650; 2002, N 1 (ч.I), ст.2; 2003, N 2, ст.167; N 27 (ч.I), ст.2700; 2004, N 35, ст.3607; 2005, N 19, ст.1752; 2006, N 1, ст.10; N 52 (ч.I), ст.5498; 2007, N 1 (ч.I), ст.21; N 1 (ч.I), ст.29; N 27, ст.3213; N 46, ст.5554; N 49, ст.6070; 2008, N 29 (ч.I), ст.3418; N 30 (ч.II), ст.3616; 2009, N 1, ст.17; 2010, N 40, ст.4969; 2011, N 1, ст.6; N 30 (ч.I), ст.4563, ст.4590, ст.4591, ст.4596; N 50, ст.7359; 2012, N 24, ст.3069; N 26, ст.3446; 2013, N 27, ст.3477; N 30 (ч.I), ст.4079; N 48, ст.6165; 2014, N 26 (ч.I), ст.3366, ст.3377; 2015, N 1 (ч.I), ст.11; N 29 (часть I), ст.4339; N 29 (часть I), ст.4359; N 48 (часть I), ст.6724; 2016, N 27 (часть I), ст.4160; N 27 (часть II), ст.4238) и Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.2000 N 554 "Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 31, ст.3295; 2004, N 8, ст.663; N 47, ст.4666; 2005, N 39, ст.3953)
в Министерстве юстиции
20 октября 2016 года,
регистрационный N 44101
Приложение
УТВЕРЖДЕНЫ
Постановлением
Главного государственного
санитарного врача
Российской Федерации
от 21 июля 2016 года N 95
1. Главу II дополнить словами "ИХЛА - иммунохемилюминесцентный анализ", заменить слова "ЛПО - лечебно-профилактическая организация" словами "МО - медицинская организация" и далее по тексту.
2. В пункте 3.7.3.2 после слов "ее компонентов" дополнить словами "и препаратов".
3. Пункт 3.10.1 изложить в редакции: "Инкубационный период. Инкубационный период при ВИЧ-инфекции - это период от момента заражения до ответа организма на внедрение вируса (появление клинической симптоматики или выработки антител), обычно составляет 3 месяца, однако при наличии иммунодефицитных состояний у пациента на фоне лечения цитостастатиками или антиретровирусными препаратами может увеличиваться до 12 месяцев. В данном периоде у инфицированного антитела к ВИЧ не обнаруживаются, в связи с чем возрастает риск передачи от него инфекции, в том числе при оказании медицинской помощи.".
4. Пункт 3.10.2 изложить в редакции:
У 30-50% инфицированных появляются симптомы острой ВИЧ-инфекции, которая сопровождается различными проявлениями: лихорадка, лимфаденопатия, неспецифические (пятнисто-папулезные, уртикарные, петехиальные) высыпания на коже и слизистых, миалгии или артралгии, диарея, головная боль, тошнота и рвота, увеличение печени и селезенки, менингиальный синдром. Эти симптомы проявляются на фоне высокой вирусной нагрузки и снижения количества CD4 лимфоцитов в разных сочетаниях, имеют разную степень выраженности и продолжительность. В редких случаях уже на этой стадии при отсутствии антиретровирусной терапии могут развиваться тяжелые вторичные заболевания, приводящие к гибели пациентов. В данном периоде возрастает частота обращаемости инфицированных в медицинские организации; риск передачи инфекции - высокий в связи с высокой вирусной нагрузкой, большим количеством вируса в крови.".
5. В пункте 3.10.4 после слов "к смерти пациента" дополнить словами "при отсутствии АРТ".
6. Пункт 3.11 дополнить предложением: "По данным исследований при сексуальных контактах риск инфицирования снижается".
"4.1. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции основана на выявлении антител к ВИЧ и вирусных антигенов, а также, в особых случаях, выявлении провирусной ДНК ВИЧ и вирусной РНК ВИЧ (у детей первого года жизни и лиц, находящихся в инкубационном периоде).
4.2. Лабораторные исследования по диагностике ВИЧ-инфекции осуществляются в учреждениях государственной, муниципальной или частной системы здравоохранения на основании санитарно-эпидемиологического заключения и лицензии, предоставляемой в порядке, установленном законодательством Российской Федерации.
4.3. Стандартным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции служит одновременное определение антител к ВИЧ 1,2 и антигена р25/24 ВИЧ с помощью диагностических тестов ИФА и ИХЛА, разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке. Для подтверждения результатов в отношении ВИЧ применяются подтверждающие тесты (иммунный, линейный блот). У детей первого года жизни и лиц, находящихся в инкубационном периоде, для подтверждения диагноза и своевременного назначения АРТ может быть использовано определение РНК или ДНК ВИЧ молекулярно-биологическими методами.
4.4. Диагностический алгоритм тестирования на наличие антител к ВИЧ состоит из двух этапов - скрининга и подтверждения результатов скринингового исследования.
4.4.1. На первом этапе (скрининг).
Если получен положительный результат в ИФА или ИХЛА, анализ проводится последовательно еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе, вторая сыворотка запрашивается только в случае невозможности направления для дальнейшего исследования первой сыворотки). Если получены два положительных результата из трех постановок, сыворотка считается первично-положительной и направляется в референс-лабораторию для дальнейшего исследования.
4.4.2. На втором этапе (подтверждение результатов скринингового исследования в референс-лаборатории).
Первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА или ИХЛА во второй тест-системе другого производителя, отличающейся от первой по составу антигенов, антител или формату тестов. При получении отрицательного результата сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе, отличающейся от первой и второй по составу антигенов, антител или формату тестов. Используемые вторая и третья тест-системы должны иметь аналогичные и более высокие аналитические характеристики (чувствительность, специфичность) по сравнению со скрининговой тест-системой. В случае получения отрицательного результата (во второй и третьей тест-системах) выдается заключение об отсутствии антител/антигенов ВИЧ. При получении положительного результата (во второй и/или третьей тест-системе) сыворотку необходимо исследовать в иммунном или линейном блоте. Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются как положительные, неопределенные и отрицательные.
4.4.2.1. В целях обеспечения контроля и учета исследований референс-диагностика должна осуществляться в том же субъекте Российской Федерации, где проводилось скрининговое обследование в лаборатории уполномоченной специализированной медицинской организации, осуществляющей организационно-методическую работу по проведению диагностических, лечебных, профилактических и противоэпидемических мероприятий по ВИЧ-инфекции и сопутствующим заболеваниям.
Референс-диагностика может проводиться также в ФБУН, на базе которых функционируют федеральный и окружные центры по профилактике и борьбе со СПИД, и в ФКУ Республиканская клиническая инфекционная больница (г.Санкт-Петербург).
4.4.3. Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела как минимум к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ (env). Пациент с положительным результатом исследования в иммунном или линейном блоте направляется к врачу-инфекционисту уполномоченной специализированной медицинской организации, осуществляющей организационно-методическую работу по проведению диагностических, лечебных, профилактических и противоэпидемических мероприятий по ВИЧ-инфекции для клинического осмотра, сбора анамнеза, установления диагноза ВИЧ-инфекции.
4.4.4. Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживаются антитела ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ.
4.4.5. Неопределенными (сомнительными) считаются сыворотки с белковым профилем в иммунном блоте, не отвечающим критериям позитивности. При получении неопределенного результата с белковым профилем, включающим белки сердцевины (gag) р25/р24, проводится исследование для диагностики ВИЧ-2.
4.4.6. При получении отрицательного и сомнительного результата в иммунном или линейном блоте рекомендуется исследовать биологический образец в тест-системе для определения р25/24 антигена или ДНК/РНК ВИЧ.
4.4.7. При получении отрицательного или неопределенного результата в подтверждающем тесте и выявлении антигена р25/24 или выявлении ДНК/РНК ВИЧ пациент направляется к врачу-инфекционисту уполномоченной специализированной медицинской организации, осуществляющей организационно-методическую работу по проведению диагностических, лечебных, профилактических и противоэпидемических мероприятий по ВИЧ-инфекции для клинического осмотра, сбора анамнеза, установления диагноза ВИЧ-инфекции или (если исследование не проводилось ранее) забора крови для определения РНК/ДНК ВИЧ молекулярно-биологическими методами.
Если получены отрицательные результаты при определении ДНК/РНК ВИЧ, то проводятся повторные исследования на антитела/антигены к ВИЧ через 3 месяца. Если через 3 месяца после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты в ИБ, ИФА или ИХЛА, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения, ДНК/РНК ВИЧ и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный. (При наличии эпидемиологических и клинических показаний серологические исследования проводятся повторно по назначению лечащего врача или эпидемиолога).
4.4.8. В особых случаях (у лиц, находящихся в инкубационном периоде), когда диагноз ВИЧ-инфекции поставлен на основании клинических и лабораторных показателей (выявление ДНК/РНК ВИЧ), следует провести повторное исследование на наличие антител к ВИЧ в иммунном или линейном блоте через 6 месяцев, а при получении пациентом антиретровирусной терапии - через 12 месяцев.
4.4.9. При получении положительных результатов в 2-х тест-системах на этапе подтверждения результатов скрининга и отрицательных результатов в иммунном блоте и тесте для определения антигена р25/24 необходимо повторить исследование через 2 недели.
4.4.10. Исключить проведение повторных обследований методом иммунного блота у лиц с установленным ранее диагнозом "ВИЧ-инфекция".
4.4.11. Принять меры по обеспечению сохранности сывороток ВИЧ-инфицированных в течение не менее одного года с момента постановки диагноза.
4.5. Для диагностики ВИЧ-инфекции у детей в возрасте до 18 месяцев, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, в связи с наличием материнских антител применяются иные подходы.
4.5.1. Для диагностики ВИЧ-инфекции у детей в возрасте до 18 месяцев, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, используют методы, направленные на выявление генетического материала ВИЧ (ДНК или РНК). Метод выявления ДНК ВИЧ является предпочтительным. При наличии высокого риска заражения ВИЧ исследование проводится в первые 48 часов жизни ребенка (нельзя исследовать кровь из пуповины) и в возрасте 14-21 дня. Первое обязательное исследование на ДНК/РНК ВИЧ проводится через 2 недели после окончания курса АРТ. При получении положительного результата второе исследование проводится в кратчайшие сроки. При получении отрицательного результата второе обязательное исследование проводится в возрасте 4-6 месяцев. Получение положительных результатов обследования на ДНК ВИЧ или РНК ВИЧ в двух отдельно взятых образцах крови у ребенка в любом возрасте является лабораторным подтверждением диагноза ВИЧ-инфекции. Получение двух отрицательных результатов обследования на ДНК ВИЧ или РНК ВИЧ в возрасте 1,5-2 месяцев и 4-6 месяцев (при отсутствии грудного вскармливания) свидетельствует против наличия у ребенка ВИЧ-инфекции, однако снятие ребенка с диспансерного учета по поводу интранатального и перинатального контакта по ВИЧ-инфекции может производиться в возрасте старше 6 месяцев.
4.5.2. Снятие с диспансерного учета по перинатальному контакту по ВИЧ-инфекции в возрасте старше 6 месяцев проводится по решению врачебной комиссии при одновременном наличии следующих условий:
- два и более отрицательных результата исследования на антитела к ВИЧ методом ИФА или ИХЛА;
- отсутствие выраженной гипогаммаглобулинемии на момент исследования крови на антитела к ВИЧ;
- два и более отрицательных результата исследования ДНК или РНК ВИЧ в возрасте 1,5-2 месяцев и старше 4 месяцев;
- ребенок не прикладывался к груди ВИЧ-инфицированной женщины;
- отсутствие клинических проявлений ВИЧ-инфекции.
4.5.3. Ребенок, получавший грудное вскармливание от ВИЧ-инфицированной женщины, должен быть обследован на ДНК/РНК ВИЧ после его полного прекращения: через 4-6 недель, 3 месяца и 6 месяцев. Ребенок, получавший грудное вскармливание, может быть снят с диспансерного учета при отсутствии ДНК или РНК ВИЧ и получении как минимум двух отрицательных результатов исследования на антитела к ВИЧ (с интервалом не менее 1 месяца), проведенных минимум через 6 месяцев после полного прекращения грудного вскармливания.
4.5.4. Диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями и достигших возраста 18 месяцев, осуществляется так же, как у взрослых.
4.6. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции может осуществляться только при использовании сертифицированных стандартизованных диагностических тест-систем (наборов), разрешенных к использованию на территории Российской Федерации в установленном порядке.
В целях проведения входного контроля качества используемых тест-систем для выявления лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, применяются стандартные панели сывороток (отраслевые стандартные образцы), разрешенные к использованию в установленном порядке.
4.7. В заключении об отсутствии или наличии антител к ВИЧ 1,2 и антигена ВИЧ, выдаваемом лабораторией по результатам ИФА, ИХЛА, ИБ, указывается наименование тест-системы, срок ее годности, серия, результат ИФА или ИХЛА (положительный, отрицательный), результат иммунного, линейного блота (перечень выявленных белков и заключение: положительный, отрицательный, неопределенный). При конфиденциальном исследовании документ должен содержать паспортные данные: полные Ф.И.О., полную дату рождения, адрес места жительства, код контингента. При анонимном обследовании документ маркируется специально установленным кодом.
4.8. Простые/быстрые тесты для определения специфических антител к ВИЧ - это тесты, которые можно выполнить без специального оборудования менее чем за 60 минут. В качестве исследуемого материала может использоваться кровь, сыворотка, плазма крови и слюна (околодесенная жидкость).
4.8.1. Области применения простых/быстрых тестов:
- вертикальная профилактика - тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в предродовом периоде (для назначения медикаментозной профилактики ВИЧ-инфекции в родах);
- постконтактная профилактика ВИЧ - тестирование на ВИЧ в случае аварийной ситуации;
- скрининговое обследование на ВИЧ-инфекцию в случае проведения профилактических и противоэпидемических мероприятий на выездных или мобильных пунктах добровольного консультирования и тестирования на ВИЧ в местах организованного или массового пребывания представителей целевых групп населения;
- проведение экспресс-оценки распространенности ВИЧ-инфекции в целевых группах населения при осуществлении дозорного эпидемиологического надзора за ВИЧ-инфекцией.
4.8.2. Каждое исследование на ВИЧ с применением простых/быстрых тестов должно сопровождаться обязательным параллельным исследованием той же порции крови стандартными методами ИФА, ИХЛА, ИБ или направлением пациента на обследование стандартными методами. Выявление положительных результатов простых/быстрых тестов при обследовании на ВИЧ-инфекцию во время проведения выездных профилактических мероприятий по ВИЧ-инфекции должно сопровождаться обязательным направлением пациента в Центр по профилактике и борьбе со СПИД или уполномоченную медицинскую организацию. В случае получения отрицательного результата тестирования на ВИЧ при обследовании в рамках выездных профилактических мероприятий направление на обследование стандартными методами выдается по желанию пациента.
4.9. Выдача заключения о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции только по результатам простого/быстрого теста не допускается. Результаты простых/быстрых тестов используются только для своевременного принятия решений в экстренных ситуациях, при массовом добровольном исследовании населения, и при экспресс-оценке эпидемиологической ситуации в целевых группах населения при осуществлении дозорного эпидемиологического надзора за ВИЧ-инфекцией.".
"5.1. Основным методом выявления ВИЧ-инфекции является проведение тестирования на антитела к ВИЧ и антиген р25/24 с обязательным до- и послетестовым консультированием. Присутствие антител к ВИЧ, РНК или ДНК ВИЧ является лабораторным доказательством наличия ВИЧ-инфекции.
Распространение ВИЧ инфекции приобрело характер глобальной катастрофы. Около 33,3 млн. человек в мире инфицировано ВИЧ, среди них 15,9 млн. женщин и 2,5 млн. детей до 15 лет [1]. Своевременное выявление ВИЧ, внедрение новых, усовершенствование существующих методов диагностики остается основным направлением по предотвращению распространения ВИЧ.
При скрининговых обследованиях населения на ВИЧ используют иммуноферментный анализ (ИФА). В тест-системах III и IV поколений рекомбинантные полипептиды используются в составе иммуносорбента (твёрдой фазы) и конъюгата, что позволило выявлять суммарные антитела (АТ) разных классов (IgG, IgM, IgA) и сократило серологическое окно. Тест-системы IV поколения (комбинированные) позволяют выявлять не только специфические АТ, но и антиген р24 ВИЧ-1 (АГ) посредством введения в систему моноклональных антител (МКАТ) к белку р24 ВИЧ-1 [5], что повышает чувствительность тест-системы и позволяет выявлять ВИЧ на ранних сроках, когда АТ к нему отсутствуют.
Тестирования коммерческих ВИЧ-сероконверсионных панелей сывороток производства Boston Biomedica Inc и ZeptoMetrix Corp. (США) различными тест-системами показывает, что чувствительность комбинированных ИФА-тестов приближается к показателю ПЦР анализа.
Широкое использование комбинированных тестов в службе крови делает актуальной задачу их дальнейшего совершенствования. Разработчики и производители постоянно исследуют новые подходы дальнейшего улучшения параметров чувствительности и специфичности комбинированных тестов.
Тест-система DIA-HIV Ag/Ab для одновременного определения АТ к ВИЧ ½ и АГ р24 ВИЧ-1 содержит полноразмерные рекомбинантные белки ВИЧ ½ и укороченные синтетические АГ, а также мощную систему биотин-стрептавидинового усиления с применением полимерной пероксидазы в составе конъюгата. Тест-система разработана российскими и украинскими учёными, выпускается в промышленных объёмах с 2011 года. Тест-система имеет регистрационное удостоверение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения ФСЗ 2012/1336 от 30 ноября 2012 года.
Для установления достоверности полученных данных использованы показатели среднего арифметического результатов трёх повторов анализа исследуемых образцов в ИФА, стандартной ошибки и среднеквадратичного отклонения.
Тест-система DIA-HIV Ag/Ab, предназначена для скрининговых и подтверждающих исследований сывороток и плазмы крови человека на наличие АГ р24 ВИЧ-1 и суммарных АТ (IgG, IgM, IgA) к ВИЧ-1, ВИЧ-2.
Стандарт ABI | Стандарт NIBSC | ||||
---|---|---|---|---|---|
Концентрация, пкг/мл | ОП | ОП/ГЗ | Концентрация, МЕ | ОП | ОП/ГЗ |
40 | 0,804±0,024 | 5,5±0,16 | 8 | 0,531±0,016 | 3,6±0,11 |
20 | 0,621±0,018 | 4,2±0,12 | 4 | 0,384±0,011 | 2,6±0,08 |
10 | 0,519±0,015 | 3,5±0,1 | 2 | 0,253±0,007 | 1,72±0,05 |
5 | 0,263±0,008 | 1,8±0,05 | 1 | 0,148±0,004 | 1,1±0,03 |
2,5 | 0,185±0,005 | 1,25±0,04 | 0,5 | 0,083±0,002 | 0,56±0,01 |
Примечание: ОП – оптическая плотность, ОП/ГЗ – соотношение оптической плотности к граничному значению, МЕ – международные единицы.
Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению стандарта р24 ВИЧ-1 ABІ составила 2,5 пкг/мл.
Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению АГ р24 ВИЧ-1 составляет 20 пкг/мл.
№ образца панели | АТ к субтипам и группам ВИЧ | Результаты | |
---|---|---|---|
ОП | ОП/ГЗ | ||
1 | Анти-ВИЧ-1 субтип А группа М | 3,387±0,10 | 23,0±0,69 |
2 | Анти-ВИЧ-1 субтип В группа М | 3,565±0,11 | 24,2±0,72 |
3 | Анти-ВИЧ-1 субтип С группа М | 3,319±0,10 | 22,5±0,67 |
4 | Анти-ВИЧ-1 субтип Е группа М | 3,233±0,09 | 21,9±0,66 |
5 | Анти-ВИЧ-1 группа 0 | 1,098±0,03 | 7,5±0,22 |
6 | Анти-ВИЧ-2 | 3,195±0,09 | 21,7±0,65 |
7 | Отрицательный контроль | 0,063±0,002 | 0,42±0,012 |
Тест-система выявляет АТ к субтитам А, В, С и Е ВИЧ-1 группы М, АТ к ВИЧ-1 группы О и АТ к ВИЧ-2, причём показатели соотношения ОП/ГЗ достаточно высокие.
№ образца панели | Результаты | № образца панели | Результаты | ||
---|---|---|---|---|---|
ОП | ОП/ГЗ | ОП | ОП/ГЗ | ||
1 | 3.196±0,096 | 20.2±0,606 | 9 | 3.14±0,094 | 20.1±0,603 |
2 | 3.374±0,101 | 21.3±0,639 | 10 | 3.372±0,101 | 21.3±0,639 |
3 | 3.476±0,104 | 22.0±0,66 | 11 | 3.418±0,102 | 21.9±0,657 |
4 | 3.231±0,096 | 20.8±0,624 | 12 | 3.136±0,094 | 20.0±0,600 |
5 | 3.375±0,101 | 21.3±0,639 | 13 | 3.326±0,099 | 21.3±0,639 |
6 | 3.399±0,102 | 21.4±0,642 | 14 | 3.344±0,100 | 21.4±0,642 |
7 | 3.296±0,099 | 21.2±0,636 | 15 | 3.342±0,100 | 21.4±0,642 |
8 | 3.659±0,109 | 23.1±0,693 | 16 | 3.416±0,102 | 21.9±0,657 |
№ образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||||
---|---|---|---|---|---|
День забора крови | Abbott HIV1/2 | Organon Teknika HIV | Abbott HIV Ag | DIA-HIV-Ag/Ab | |
PRB 950-1 | 0 | 0,2 | 0,3 | 0,5 | 0,4±0,012 |
PRB 950-2 | 18 | 0,2 | 0,3 | 0,7 | 1,2±0,036 |
PRB 950-3 | 21 | 0,2 | 0,3 | 3,3 | 5,9±0,177 |
PRB 950-4 | 28 | 15,5 | 0,4 | 4,1 | 6,4±0,192 |
№ образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||||
---|---|---|---|---|---|
День забора крови | Abbott HIV1/2 | Organon Teknika HIV | Abbott HIV Ag | DIA-HIV-Ag/Ab | |
PRB-959-1 | 0 | 0,3 | 0,4 | 0,3 | 0,5±0,015 |
PRB-959-2 | 7 | >16,7 | 0,8 | 12,5 | 25,1±0,753 |
PRB-959-3 | 9 | >16,7 | 0,8 | 8,1 | 24,9±0,747 |
PRB-959-4 | 14 | >16,7 | 5,9 | >12,5 | 8,3±0,249 |
PRB-959-5 | 19 | >16,7 | 5,6 | >12,5 | 5,4±0,162 |
PRB-959-6 | 21 | >16,7 | 5,9 | >12,5 | 6,1±0,183 |
PRB-959-7 | 26 | >16,7 | 5,4 | >12,5 | 6,7±0,201 |
№ образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||||
---|---|---|---|---|---|
Abbott Monoclonal HIV Ag | Dupont HIV Ag | Organon Teknik HIV Ag | IVCOMBI.CE 4 th Generation | DIA-HIV-Ag/Ab | |
PRА203-01 | 4,3 | 5,7 | 16,8 | 2,3 | 2,3±0,069 |
PRА203-02 | 12,2 | 6,2 | 16,4 | 4,1 | 20,5±0,615 |
PRА203-03 | 6,0 | 8,7 | 9,3 | 1,4 | 4,2±0,126 |
PRА203-04 | 3,0 | 3,1 | 4,1 | 1,9 | 3,5±0,106 |
PRА203-05 | 4,9 | 1,2 | 8,2 | - | 27,9±0,837 |
PRА203-06 | 1,3 | 1,3 | 1,5 | 1,0 | 25,8±0,774 |
PRА203-07 | 5,7 | 2,8 | 12,1 | 2,9 | 25,9±0,777 |
PRА203-08 | 1,5 | 1,0 | 2,0 | 3,0 | 27,5±0,825 |
PRА203-09 | 0,5 | 0,2 | 0,2 | 0,4 | 0,8±0,024 |
PRА203-10 | 12,2 | 9,6 | 25,3 | 3,6 | 15,3±0,459 |
PRА203-11 | 3,1 | 3,9 | 5,8 | 2,4 | 2,8±0,086 |
PRА203-12 | 3,5 | 2,9 | 6,6 | 1,6 | 24,9±0,747 |
PRА203-13 | 2,1 | 1,1 | 2,4 | 1,2 | 9,3±0,279 |
PRА203-14 | 0,9 | 0,7 | 2,5 | 0,4 | 2,5±0,075 |
PRА203-15 | 2,5 | 2,8 | 5,9 | 3,3 | 2,8±0,084 |
PRА203-16 | 1,8 | 1,4 | 3,7 | 1,1 | 28,5±0,855 |
PRА203-17 | 6,3 | 4,0 | 6,1 | 2,5 | 17.5±0,525 |
PRА203-18 | 2,4 | 0,8 | 2,3 | 1,7 | 24.8±0,744 |
PRА203-19 | 0,5 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0.3±0,009 |
PRА203-20 | 17,0 | 9,1 | 26,4 | 4,6 | 10.7±0,321 |
№ образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||
---|---|---|---|
№1 | №2 | DIA-HIV-Ag/Ab | |
1 | 7,3 | 11,1 | 25,1±0,753 |
2 | 17,6 | 11,2 | 22,0±0,66 |
3 | 17,3 | 11,2 | 24,7±0,741 |
4 | 17,4 | 11,1 | 23,9±0,717 |
5 | 4,8 | 11,6 | 22,8±0,684 |
6 | 6,1 | 10,0 | 22,5±0,675 |
7 | 7,7 | 10,6 | 22,8±0,684 |
8 | 13,4 | 11,4 | 22,2±0,666 |
9 | 16,8 | 11,6 | 23,4±0,702 |
10 | 17,6 | 11,2 | 22,9±0,687 |
11 | 16,3 | 11,2 | 23,3±0,699 |
12 | 17,1 | 11,2 | 25,6±0,768 |
13 | 17,1 | 11,5 | 23,2±0,696 |
14 | 18,7 | 10,2 | 23,8±0,714 |
15 | 5,7 | 10,9 | 23,4±0,702 |
16 | 9,2 | 11,4 | 24,6±0,738 |
17 | 11,3 | 10,4 | 23,7±0,711 |
18 | 16,1 | 10,6 | 22,9±0,687 |
19 | 17,0 | 0,5 | 22,1± |
20 | 15,6 | 0,4 | 21,2± |
№ сыворотки | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||
---|---|---|---|
№1 | №2 | DIA-HIV-Ag/Ab | |
1 | 1,4±0,042 | 4,3±0,126 | 4,3±0,129 |
2 | 0,4±0,012 | 1,9±0,042 | 3,3±0,099 |
3 | 0,69±0,021 | 1,4±0,042 | 1,6±0,048 |
4 | 0,77±0,023 | 9,4±0,282 | 1,4±0,042 |
5 | 17,6±0,528 | 11,5±0,345 | 3,1±0,093 |
6 | 14,9±0,447 | 10,0±0,30 | 5,0±0,150 |
7 | 5,9±0,177 | 5,4±0,162 | 4,4±0,132 |
8 | 3,96±0,119 | 3,6±0,108 | 3,7±0,111 |
9 | 9,69±0,291 | 4,2±0,126 | 7,4±0,222 |
По результатам анализа донорских сывороток и образцов стандартных панелей специфичность тест-системы составила 100%.
Чувствительность тест-системы при исследовании образцов стандартных панелей и неразведенных сывороток от ВИЧ-инфицированных пациентов составила 100%. Тест-система выявляет АТ к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в низких титрах и с более высокими сигналами, чем коммерческие аналоги ведущих мировых производителей.
Разработанная тест-система способна диагностировать ВИЧ-инфекцию на более ранних этапах заболевания, чем её коммерческие аналоги.
Разработанная тест-система обладает высокой специфичностью: при испытаниях в условиях предприятия - 100% (2519 образцов), в клинических лабораториях - 99,8% (134486 исследований).
Следует отметить высокую стабильность и точность тест-системы: показатель межсерийных различий коэффициента позитивности для 12 выпущенных промышленных серий тест-системы составил 5,87% (CV).
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
от 10 февраля 1997 года N 42
О проведении сравнительных испытаний диагностических
иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке
крови человека, выпускающихся в Российской Федерации
В настоящее время для диагностики ВИЧ-инфекции применяются тест-системы отечественного производства, хорошо зарекомендовавшие себя при массовом скрининге на антитела к ВИЧ.
Вместе с тем с середины 1996 года отмечены признаки резкого ухудшения эпидемической обстановки по ВИЧ-инфекции. Число выявленных ВИЧ-инфицированных в 1996 году выросло в 5 раз по сравнению с предыдущим годом. Резкое увеличение числа ВИЧ-инфицированных требует серьезного внимания к обеспечению ранней диагностики ВИЧ-инфекции на стадиях первичной сероконверсии, что позволит в первую очередь более полно обеспечить предотвращение передачи ВИЧ-инфекции через донорскую кровь, другие биологические жидкости и ткани.
Сложившаяся ситуация требует проведения оценки применяемых в здравоохранении диагностических тест-систем, предназначенных для выявления антител к ВИЧ на ранней стадии сероконверсии, когда концентрация антител к ВИЧ может быть минимальной. В целях повышения эффективности диагностики ВИЧ-инфекции
1. Провести в первом квартале 1997 года сравнительные испытания диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека, включенных в Перечень предприятий и производимых ими наборов иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ, участвующих в проведении испытаний (приложение 1).
2. Ввести в действие Инструкцию по проведению испытаний диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека (приложение 2).
3. Назначить базой для проведения испытания Российский научно-методический центр по профилактике и борьбе со СПИДом.
4. Государственному НИИ стандартизации и контроля медицинских иммунобиологических препаратов им. Л.А.Тарасевича предоставить для проведения испытаний стандартные контрольные панели в необходимом количестве.
5. Финансирование работ, связанных с проведением испытаний диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека, обеспечить за счет производителей диагностических иммуноферментных тест-систем, участвующих в сравнительном испытании.
6. Комиссии по организации и проведению сравнительных испытаний диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека (приложение 3) по результатам испытаний представить отчет и разработать рекомендации по дальнейшему использованию испытанных тест-систем в диагностической практике и представить их в Минздрав России к 01.05.97.
7. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на начальника Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России Монисова А.А.
Первый заместитель министра
Г.Г.Онищенко
Приложение 1
к приказу Минздрава России
от 10 февраля 1997 года N 42
ПЕРЕЧЕНЬ
предприятий и производимых ими наборов иммуноферментных тест-систем
для выявления антител к ВИЧ, участвующих в проведении испытаний
Диагностика ВИЧ-инфекции, обычно, базируется на выявлении антител к ВИЧ. Классические серологические тесты для выявления антител к ВИЧ делятся на тест-системы для скрининга антител (первичная диагностика) и тест-системы для подтверждения, т.е. идентификации ВИЧ – позитивных образцов сывороток крови человека.
Проведение обследования единичных тестов на ВИЧ необходимо в регионах с низким показателем распространения ВИЧ-инфекции. При этом требуется использовать высокоспецифичные, одноразовые тесты для индивидуального обследования единичных сывороток крови человека.
Это особенно важно в тех регионах, где отсутствуют условия функционирования диагностической лаборатории – отсутствует специальное оборудование, электричество, нет персонала, обученного постановке иммуноферментного анализа или иммунного блоттинга. Кроме того, могут отсутствовать условия для забора на анализ и обработки крови из локтевой вены для получения образцов сывороток или плазмы крови.
Для проведения оперативных мероприятий по дальнейшему предотвращению распространения ВИЧ-инфекции, анализ должен быть проведен максимально быстро. В последние годы для этого разработаны и приобретают всё большее значение простые/быстрые тесты исследования, когда время анализа одного образца – до 15 минут или максимально – до 40 минут.
Технология производства одноразовых, простых/быстрых тестов (П/Б) настолько усовершенствована в последние годы, как свидетельствуют многочисленные испытания, проведенные в различных странах мира, что по качеству и результатам П/Б – тесты вполне могут быть приравнены к классическим тест-системам. ВОЗ рекомендует лабораториям, для которых приобретение тест-систем для иммунного блоттинга является сложным из-за высокой стоимости этих наборов, использовать комбинации ИФА – тест-систем и П\Б-тестов. Поэтому понятно, насколько важно качество П/Б-тестов, особенно при использовании их для первичного анализа – ложноотрицательный результат такого анализа и отсутствие возможности проведения анализа классическим методом ИФА может иметь неблагоприятные последствия. Такая же ситуация может сложиться и при применении П/Б-тестов при ургентных ситуациях – родовспоможении, травмах и т.д.
П/Б-тесты должны быть устроены таким образом, чтобы максимально минимизировать риск заражения для оператора, производящего как забор пробы на анализ, так и непосредственно анализ. П\Б-тесты должны сохранять свои свойства при хранении и транспортировании при различных температурных условиях окружающей среды, т.е. при температуре от 2 o C до 30 o C, а иногда до 45 o C.
Индивидуальный одноразовый П/Б-тест должен содержать все необходимые реагенты, готовые к употреблению, включать обязательно внутренний контроль и быть предельно простым в применении, чтобы максимально сократить возможность технических ошибок.
Начиная с 1988 года, когда появились первые разработки П/Б-тестов, ВОЗ была предложена Программа объективного изучения операционных характеристик этих тестов: чувствительность, специфичность, температура инкубации при проведении анализа, срок годности, температура хранения и транспортирования, простота постановки теста, использование для анализа не только образцов сыворотки или плазмы крови, но и цельной крови человека.
Для производства П/Б-тестов применяются различные технологии – метод иммунохроматографии, метод иммунофильтрации, метод латекс-агглютинации, модифицированный метод ИФА – иммуно-дот.
Анализ проведенных исследований в институте Тропической медицины (Бельгия) показывает, что большая часть применяемых в настоящее время быстрых тестов пригодна для исследования как сыворотки и плазмы, так и цельной крови человека. По чувствительности и специфичности эти тесты не уступают классическому ИФА, и при этом имеют преимущества по простоте и быстроте проводимого исследования индивидуальных проб сывороток.
Три из пяти представленных тестов являются тестами, в основе которых лежит принцип иммунохроматографии.
На мембране иммобилизованы рекомбинантные и пептидные антигены ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Каждый из 3-х тестов имеет свои принципиальные особенности технологии и проведения анализа, однако, главная цель – быстро (15-30 мин) провести анализ пробы сыворотки (плазмы) крови человека без применения специального оборудования и особых лабораторных условий.
Тест представляет собой набор реагентов для качественного и дифференцированного выявления антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке (плазме) крови человека.
Все реагенты, необходимые для постановки теста, в готовом виде размещены в ячейках проявочной ванны (6 рядов по 12 ячеек).
В ячейки проявочной ванны опускаются зубцы пластикового гребня. На поверхности каждого зубца этого гребня нанесены в разных точках пептидные антигены ВИЧ-1, рекомбинантный антиген ВИЧ-2 и внутренний контроль реакции – антитела к человеческому IgG.
В ячейках разных рядов проявочной ванны, в которые опускаются зубцы пластикового гребня, находятся необходимые для проведения ИФА-реакции реагенты: разбавитель образца сыворотки, конъюгат, промывочный раствор (в 3 рядах) и раствор хромогенного субстрата.
Препарат представляет собой оригинальную разработку, которая позволяет проводить иммуноферментный анализ без применения специального оборудования и с минимальным участием оператора.
Оператор должен только через определенные промежутки времени извлекать зубцы гребня из ячеек одного ряда и помещать их в ячейки следующего ряда. С помощью одного гребня могут быть исследованы одновременно 10 сывороток и 2 контроля (К+ и К-). Постановка анализа на 1 гребне занимает не более 40 мин.
По окончании анализа и выявлении в исследованной сыворотке антител к ВИЧ-1 и/или к ВИЧ-2 на зубцах гребня в определенных местах должны проявиться 2 или 3 пятна, при отрицательном результате – одно пятно.
Во всех анализах были получены результаты, соответствующие исходным характеристикам сывороток, входящих в данную панель (табл. 20)
№пп | ВИЧ-экспресс | Иммунокомб Биспот ВИЧ1,2 | Multispot HIV1/HIV2 | Genie II | Determine HIV1/2 | ||
С.23 | С.24 | С.25 | С.010216010220 | MS 350 | С.010121 | 70218U100 | |
1 | - | - | - | - | - | - | - |
2 | - | - | - | - | - | - | - |
3 | - | - | - | - | - | - | - |
4 | - | - | - | +сл. | - | - | - |
5 | + | + | + | + | + | + | + |
6 | + | + | + | + | + | + | + |
7 | + | + | + | + | + | + | + |
8 | + | + | + | + | + | + | + |
9 | + | + | + | + | + | + | + |
10 | + | + | + | + | + | + | + |
11 | + | + | + | + | + | + | + |
12 | + | + | + | + | + | + | + |
13 | + | + | + | + | + | + | + |
14 | + | + | + | + | + | + | + |
15 | + | + | + | + | + | + | + |
16 | + | + | + | + | + | + | + |
17 | + | + | + | + | + | + | + |
18 | + | + | + | + | + | + | + |
19 | + | + | + | + | + | + | + |
20 | + | + | + | + | + | + | + |
21 | + | + | + | + | + | + | + |
22 | + | + | + | + | + | + | + |
23 | + | + | + | + | + | + | + |
24 | + | + | + | + | + | + | + |
Быстрый подтверждающий тест – иммуноблот ИммуноКомб ВИЧ 1+2 КомбФирм по результатам этих же Госиспытаний рекомендован для постановки окончательного диагноза и подтверждений наличия антител к ВИЧ (приказ 292 от 30.07.2001).
В 2003 году согласно Указанию Зам. Министра здравоохранения РФ – Г.Г.Онищенко были проведены Государственные испытания препаратов, предназначенных для серодиагностики ВИЧ-инфекции.
Для изучения были предоставлены следующие П/Б-тесты:
Для изучения пяти П/Б-тестов, представленных на Госиспытания 2003 г. были использованы следующие материалы:
Результаты испытания П/Б-тестов представлены в табл.21
Таблица 21. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тесты)на стандартных панелях ГИСК им.Л.А.Тарасевича.
П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Determine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1/HIV2 | Retrocheck HIV WB | |
Стандартные панели | ВИЧ 1+ ОСО 422821202П 16 сывороток | 16/16 | 16/16 | 16/16 | 15/16 | - |
ВИЧ 2+ ОСО 422821602П 8 сывороток | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 | - | |
ВИЧ - ОСО 422821402П 20 сывороток | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | |
Референс-сыворотка ВИЧ-2 1 сыворотка | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 | - | |
Референс-панель ОСО 422832704 24 сыворотки | - | - | - | 0/4 20/20 |
Пять вышеуказанных П/Б-тестов были изучены на клиническом материале, специально отобранном для этих исследований и аттестованном предварительно методом ИФА и в иммуноблоте.
В панели клинического материала были представлены:
Характеристика сывороток и результаты испытаний пяти П/Б-тестов представлены в таблицах 22,23,24.
Таблица 22. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на клиническом ВИЧ-позитивном материале.
П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Deter-mine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1/ HIV2 | Retro- check HIV WB | ||||
Характеристика сывороток в ИФА и ИБ | шифр | ИФА (О.П.) | иммуно-блот*** | ||||||
анти-тела* | анти-ген** | ||||||||
1г | >3,0 | 0,391 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
2г | >3,0 | 0,198 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
3г | >3,0 | 0,231 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
5г | 1,24 | 2,008 | неопред | + | + | + | - | + | |
6г | >3,0 | 0,026 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
7г | >3,0 | 0,229 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
8г | >3,0 | 0,364 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
9г | >3,0 | 0,360 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
10г | >3,0 | 0,157 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
11г | >3,0 | 0,252 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
12г | >3,0 | 1,196 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
1т | 0,312 | 0,056 | отрицат | - | - | - | - | - | |
2т | 1,08 | 0,049 | отрицат | + | - | - | - | - | |
3т | 1,02 | 0,183 | отрицат | + | - | - | - | - | |
4т | >3,0 | 0,135 | неопред | + | + | + | + | + | |
5т | >3,0 | 0,325 | неопред | + | + | + | + | + | |
6т | >3,0 | 0,151 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
7т | 1,83 | 0,053 | отрицат | - | - | - | - | - | |
8т | >3,0 | 0,849 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | - | |
9т | >3,0 | 0,034 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
10т | >3,0 | 0,024 | неопред | + | + | + | + | + | |
11т | 2,39 | 0,022 | неопред | + | + | + | + | + | |
12т | 1,97 | 0,126 | неопред | + | + | - | - | - | |
13т | >3,0 | 0,036 | ВИЧ-1 | + | + | + | - | + | |
14т | >3,0 | 0,048 | неопред | + | + | + | + | + | |
15т | 0,167 | 0,032 | отрицат | - | - | - | - | - |
* - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,172)
** - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,101)
*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"
Таблица 23. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на сероконверсионной панели BBI № 9017
П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Deter-mine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1 /HIV2 | Retro-check HIV WB | ||||
Сыворотки панели | шифр | ИФА (О.П.) | иммуно-блот*** | ||||||
анти-тела* | анти- ген** | ||||||||
1 | 0,032 | 0,041 | отрицат | - | - | - | - | - | |
2 | 0,022 | 0,046 | отрицат | - | - | - | - | - | |
3 | 0,041 | 0,034 | отрицат | - | - | - | - | - | |
4 | 0,70 | 0,035 | отрицат | - | - | - | - | - | |
5 | 0,113 | 0,033 | отрицат | - | - | - | - | - | |
6 | 0,248 | 0,036 | отрицат | - | - | + | - | - | |
7 | 0,822 | 0,053 | отрицат | - | - | + | - | - | |
8 | 2,142 | 0,110 | отрицат | - | - | + | - | + | |
9 | 1,824 | 0,195 | неопред | + | - | + | - | + | |
10 | 2,878 | 0,176 | неопред | + | + | + | + | + | |
11 | >3,0 | 0,085 | неопред | + | + | + | + | + |
* - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,106)
** - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,108)
*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"
При исследовании сывороток беременных (18 образцов), сывороток крови пациентов с диагнозом гепатит В и С (25 образцов), сывороток крови доноров (34 образца) , ни в одном случае не было выявлено ложно-положительных результатов, т.е. специфичность – 100% (табл.24).
Таблица 24. Специфичность простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на серонегативных сыворотках
П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Determine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1/HIV2 | Retrocheck HIV WB | |
сыворотки | доноры | 0/34 | 0/34 | 0/34 | 0/34 | 0/34 |
беременные | 0/18 | 0/18 | 0/18 | 0/18 | 0/18 | |
гепатит С | 0/8 | 0/8 | 0/8 | 0/8 | 0/8 | |
гепатит В+С | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | |
гепатит В | 1±/12 | 0/12 | 0/12 | 0/12 | 0/12 |
Таким образом, результаты испытаний П/Б-тестов показали, что все исследованные препараты обладают выраженной специфичностью, что особенно важно при проведении быстрого тестирования неизвестного сывороточного материала.
Можно сказать, что П/Б-тесты гарантированы, при правильной постановке и хорошем качестве сывороток, от ложно-положительных реакций.
Большинство исследованных П/Б-тестов имеют достаточную чувствительность при выявлении антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, не уступающую чувствительность тест-систем для классического иммуноферментного анализа.
Это подтверждает предлагаемую ВОЗ стратегию, по которой в определенных случаях простые/ быстрые тесты (П/Б-тесты) могут с успехом заменять классический иммуноферментный анализ. При этом постановка серологического диагноза ВИЧ-инфекции ускоряется и значительно упрощается.
Весь клинический материал аттестован в лаборатории стандартизации и контроля МИБП против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им. Л.А. Тарасевича.
По-видимому, будущее серодиагностики ВИЧ-инфекции за простыми/ быстрыми тестами при условии их высокого качества, развитых и стандартизованных технологий и выраженной стабильности.
Читайте также: