Стандартные панели для вич

Обновлено: 28.03.2024

от 21 июля 2016 года N 95

____________________________________________________________________
Утратило силу с 1 сентября 2021 года на основании
постановления Главного государственного санитарного врача
Российской Федерации от 28 января 2021 года N 4
____________________________________________________________________

В соответствии с Федеральным законом от 30.03.99 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст.1650; 2002, N 1 (ч.I), ст.2; 2003, N 2, ст.167; N 27 (ч.I), ст.2700; 2004, N 35, ст.3607; 2005, N 19, ст.1752; 2006, N 1, ст.10; N 52 (ч.I), ст.5498; 2007, N 1 (ч.I), ст.21; N 1 (ч.I), ст.29; N 27, ст.3213; N 46, ст.5554; N 49, ст.6070; 2008, N 29 (ч.I), ст.3418; N 30 (ч.II), ст.3616; 2009, N 1, ст.17; 2010, N 40, ст.4969; 2011, N 1, ст.6; N 30 (ч.I), ст.4563, ст.4590, ст.4591, ст.4596; N 50, ст.7359; 2012, N 24, ст.3069; N 26, ст.3446; 2013, N 27, ст.3477; N 30 (ч.I), ст.4079; N 48, ст.6165; 2014, N 26 (ч.I), ст.3366, ст.3377; 2015, N 1 (ч.I), ст.11; N 29 (часть I), ст.4339; N 29 (часть I), ст.4359; N 48 (часть I), ст.6724; 2016, N 27 (часть I), ст.4160; N 27 (часть II), ст.4238) и Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.2000 N 554 "Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 31, ст.3295; 2004, N 8, ст.663; N 47, ст.4666; 2005, N 39, ст.3953)

в Министерстве юстиции

20 октября 2016 года,

регистрационный N 44101

Приложение

УТВЕРЖДЕНЫ
Постановлением
Главного государственного
санитарного врача
Российской Федерации
от 21 июля 2016 года N 95

1. Главу II дополнить словами "ИХЛА - иммунохемилюминесцентный анализ", заменить слова "ЛПО - лечебно-профилактическая организация" словами "МО - медицинская организация" и далее по тексту.

2. В пункте 3.7.3.2 после слов "ее компонентов" дополнить словами "и препаратов".

3. Пункт 3.10.1 изложить в редакции: "Инкубационный период. Инкубационный период при ВИЧ-инфекции - это период от момента заражения до ответа организма на внедрение вируса (появление клинической симптоматики или выработки антител), обычно составляет 3 месяца, однако при наличии иммунодефицитных состояний у пациента на фоне лечения цитостастатиками или антиретровирусными препаратами может увеличиваться до 12 месяцев. В данном периоде у инфицированного антитела к ВИЧ не обнаруживаются, в связи с чем возрастает риск передачи от него инфекции, в том числе при оказании медицинской помощи.".

4. Пункт 3.10.2 изложить в редакции:

У 30-50% инфицированных появляются симптомы острой ВИЧ-инфекции, которая сопровождается различными проявлениями: лихорадка, лимфаденопатия, неспецифические (пятнисто-папулезные, уртикарные, петехиальные) высыпания на коже и слизистых, миалгии или артралгии, диарея, головная боль, тошнота и рвота, увеличение печени и селезенки, менингиальный синдром. Эти симптомы проявляются на фоне высокой вирусной нагрузки и снижения количества CD4 лимфоцитов в разных сочетаниях, имеют разную степень выраженности и продолжительность. В редких случаях уже на этой стадии при отсутствии антиретровирусной терапии могут развиваться тяжелые вторичные заболевания, приводящие к гибели пациентов. В данном периоде возрастает частота обращаемости инфицированных в медицинские организации; риск передачи инфекции - высокий в связи с высокой вирусной нагрузкой, большим количеством вируса в крови.".

5. В пункте 3.10.4 после слов "к смерти пациента" дополнить словами "при отсутствии АРТ".

6. Пункт 3.11 дополнить предложением: "По данным исследований при сексуальных контактах риск инфицирования снижается".

"4.1. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции основана на выявлении антител к ВИЧ и вирусных антигенов, а также, в особых случаях, выявлении провирусной ДНК ВИЧ и вирусной РНК ВИЧ (у детей первого года жизни и лиц, находящихся в инкубационном периоде).

4.2. Лабораторные исследования по диагностике ВИЧ-инфекции осуществляются в учреждениях государственной, муниципальной или частной системы здравоохранения на основании санитарно-эпидемиологического заключения и лицензии, предоставляемой в порядке, установленном законодательством Российской Федерации.

4.3. Стандартным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции служит одновременное определение антител к ВИЧ 1,2 и антигена р25/24 ВИЧ с помощью диагностических тестов ИФА и ИХЛА, разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке. Для подтверждения результатов в отношении ВИЧ применяются подтверждающие тесты (иммунный, линейный блот). У детей первого года жизни и лиц, находящихся в инкубационном периоде, для подтверждения диагноза и своевременного назначения АРТ может быть использовано определение РНК или ДНК ВИЧ молекулярно-биологическими методами.

4.4. Диагностический алгоритм тестирования на наличие антител к ВИЧ состоит из двух этапов - скрининга и подтверждения результатов скринингового исследования.

4.4.1. На первом этапе (скрининг).

Если получен положительный результат в ИФА или ИХЛА, анализ проводится последовательно еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе, вторая сыворотка запрашивается только в случае невозможности направления для дальнейшего исследования первой сыворотки). Если получены два положительных результата из трех постановок, сыворотка считается первично-положительной и направляется в референс-лабораторию для дальнейшего исследования.

4.4.2. На втором этапе (подтверждение результатов скринингового исследования в референс-лаборатории).

Первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА или ИХЛА во второй тест-системе другого производителя, отличающейся от первой по составу антигенов, антител или формату тестов. При получении отрицательного результата сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе, отличающейся от первой и второй по составу антигенов, антител или формату тестов. Используемые вторая и третья тест-системы должны иметь аналогичные и более высокие аналитические характеристики (чувствительность, специфичность) по сравнению со скрининговой тест-системой. В случае получения отрицательного результата (во второй и третьей тест-системах) выдается заключение об отсутствии антител/антигенов ВИЧ. При получении положительного результата (во второй и/или третьей тест-системе) сыворотку необходимо исследовать в иммунном или линейном блоте. Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются как положительные, неопределенные и отрицательные.

4.4.2.1. В целях обеспечения контроля и учета исследований референс-диагностика должна осуществляться в том же субъекте Российской Федерации, где проводилось скрининговое обследование в лаборатории уполномоченной специализированной медицинской организации, осуществляющей организационно-методическую работу по проведению диагностических, лечебных, профилактических и противоэпидемических мероприятий по ВИЧ-инфекции и сопутствующим заболеваниям.

Референс-диагностика может проводиться также в ФБУН, на базе которых функционируют федеральный и окружные центры по профилактике и борьбе со СПИД, и в ФКУ Республиканская клиническая инфекционная больница (г.Санкт-Петербург).

4.4.3. Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела как минимум к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ (env). Пациент с положительным результатом исследования в иммунном или линейном блоте направляется к врачу-инфекционисту уполномоченной специализированной медицинской организации, осуществляющей организационно-методическую работу по проведению диагностических, лечебных, профилактических и противоэпидемических мероприятий по ВИЧ-инфекции для клинического осмотра, сбора анамнеза, установления диагноза ВИЧ-инфекции.

4.4.4. Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживаются антитела ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ.

4.4.5. Неопределенными (сомнительными) считаются сыворотки с белковым профилем в иммунном блоте, не отвечающим критериям позитивности. При получении неопределенного результата с белковым профилем, включающим белки сердцевины (gag) р25/р24, проводится исследование для диагностики ВИЧ-2.

4.4.6. При получении отрицательного и сомнительного результата в иммунном или линейном блоте рекомендуется исследовать биологический образец в тест-системе для определения р25/24 антигена или ДНК/РНК ВИЧ.

4.4.7. При получении отрицательного или неопределенного результата в подтверждающем тесте и выявлении антигена р25/24 или выявлении ДНК/РНК ВИЧ пациент направляется к врачу-инфекционисту уполномоченной специализированной медицинской организации, осуществляющей организационно-методическую работу по проведению диагностических, лечебных, профилактических и противоэпидемических мероприятий по ВИЧ-инфекции для клинического осмотра, сбора анамнеза, установления диагноза ВИЧ-инфекции или (если исследование не проводилось ранее) забора крови для определения РНК/ДНК ВИЧ молекулярно-биологическими методами.

Если получены отрицательные результаты при определении ДНК/РНК ВИЧ, то проводятся повторные исследования на антитела/антигены к ВИЧ через 3 месяца. Если через 3 месяца после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты в ИБ, ИФА или ИХЛА, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения, ДНК/РНК ВИЧ и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный. (При наличии эпидемиологических и клинических показаний серологические исследования проводятся повторно по назначению лечащего врача или эпидемиолога).

4.4.8. В особых случаях (у лиц, находящихся в инкубационном периоде), когда диагноз ВИЧ-инфекции поставлен на основании клинических и лабораторных показателей (выявление ДНК/РНК ВИЧ), следует провести повторное исследование на наличие антител к ВИЧ в иммунном или линейном блоте через 6 месяцев, а при получении пациентом антиретровирусной терапии - через 12 месяцев.

4.4.9. При получении положительных результатов в 2-х тест-системах на этапе подтверждения результатов скрининга и отрицательных результатов в иммунном блоте и тесте для определения антигена р25/24 необходимо повторить исследование через 2 недели.

4.4.10. Исключить проведение повторных обследований методом иммунного блота у лиц с установленным ранее диагнозом "ВИЧ-инфекция".

4.4.11. Принять меры по обеспечению сохранности сывороток ВИЧ-инфицированных в течение не менее одного года с момента постановки диагноза.

4.5. Для диагностики ВИЧ-инфекции у детей в возрасте до 18 месяцев, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, в связи с наличием материнских антител применяются иные подходы.

4.5.1. Для диагностики ВИЧ-инфекции у детей в возрасте до 18 месяцев, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, используют методы, направленные на выявление генетического материала ВИЧ (ДНК или РНК). Метод выявления ДНК ВИЧ является предпочтительным. При наличии высокого риска заражения ВИЧ исследование проводится в первые 48 часов жизни ребенка (нельзя исследовать кровь из пуповины) и в возрасте 14-21 дня. Первое обязательное исследование на ДНК/РНК ВИЧ проводится через 2 недели после окончания курса АРТ. При получении положительного результата второе исследование проводится в кратчайшие сроки. При получении отрицательного результата второе обязательное исследование проводится в возрасте 4-6 месяцев. Получение положительных результатов обследования на ДНК ВИЧ или РНК ВИЧ в двух отдельно взятых образцах крови у ребенка в любом возрасте является лабораторным подтверждением диагноза ВИЧ-инфекции. Получение двух отрицательных результатов обследования на ДНК ВИЧ или РНК ВИЧ в возрасте 1,5-2 месяцев и 4-6 месяцев (при отсутствии грудного вскармливания) свидетельствует против наличия у ребенка ВИЧ-инфекции, однако снятие ребенка с диспансерного учета по поводу интранатального и перинатального контакта по ВИЧ-инфекции может производиться в возрасте старше 6 месяцев.

4.5.2. Снятие с диспансерного учета по перинатальному контакту по ВИЧ-инфекции в возрасте старше 6 месяцев проводится по решению врачебной комиссии при одновременном наличии следующих условий:

- два и более отрицательных результата исследования на антитела к ВИЧ методом ИФА или ИХЛА;

- отсутствие выраженной гипогаммаглобулинемии на момент исследования крови на антитела к ВИЧ;

- два и более отрицательных результата исследования ДНК или РНК ВИЧ в возрасте 1,5-2 месяцев и старше 4 месяцев;

- ребенок не прикладывался к груди ВИЧ-инфицированной женщины;

- отсутствие клинических проявлений ВИЧ-инфекции.

4.5.3. Ребенок, получавший грудное вскармливание от ВИЧ-инфицированной женщины, должен быть обследован на ДНК/РНК ВИЧ после его полного прекращения: через 4-6 недель, 3 месяца и 6 месяцев. Ребенок, получавший грудное вскармливание, может быть снят с диспансерного учета при отсутствии ДНК или РНК ВИЧ и получении как минимум двух отрицательных результатов исследования на антитела к ВИЧ (с интервалом не менее 1 месяца), проведенных минимум через 6 месяцев после полного прекращения грудного вскармливания.

4.5.4. Диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями и достигших возраста 18 месяцев, осуществляется так же, как у взрослых.

4.6. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции может осуществляться только при использовании сертифицированных стандартизованных диагностических тест-систем (наборов), разрешенных к использованию на территории Российской Федерации в установленном порядке.

В целях проведения входного контроля качества используемых тест-систем для выявления лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, применяются стандартные панели сывороток (отраслевые стандартные образцы), разрешенные к использованию в установленном порядке.

4.7. В заключении об отсутствии или наличии антител к ВИЧ 1,2 и антигена ВИЧ, выдаваемом лабораторией по результатам ИФА, ИХЛА, ИБ, указывается наименование тест-системы, срок ее годности, серия, результат ИФА или ИХЛА (положительный, отрицательный), результат иммунного, линейного блота (перечень выявленных белков и заключение: положительный, отрицательный, неопределенный). При конфиденциальном исследовании документ должен содержать паспортные данные: полные Ф.И.О., полную дату рождения, адрес места жительства, код контингента. При анонимном обследовании документ маркируется специально установленным кодом.

4.8. Простые/быстрые тесты для определения специфических антител к ВИЧ - это тесты, которые можно выполнить без специального оборудования менее чем за 60 минут. В качестве исследуемого материала может использоваться кровь, сыворотка, плазма крови и слюна (околодесенная жидкость).

4.8.1. Области применения простых/быстрых тестов:

- вертикальная профилактика - тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в предродовом периоде (для назначения медикаментозной профилактики ВИЧ-инфекции в родах);

- постконтактная профилактика ВИЧ - тестирование на ВИЧ в случае аварийной ситуации;

- скрининговое обследование на ВИЧ-инфекцию в случае проведения профилактических и противоэпидемических мероприятий на выездных или мобильных пунктах добровольного консультирования и тестирования на ВИЧ в местах организованного или массового пребывания представителей целевых групп населения;

- проведение экспресс-оценки распространенности ВИЧ-инфекции в целевых группах населения при осуществлении дозорного эпидемиологического надзора за ВИЧ-инфекцией.

4.8.2. Каждое исследование на ВИЧ с применением простых/быстрых тестов должно сопровождаться обязательным параллельным исследованием той же порции крови стандартными методами ИФА, ИХЛА, ИБ или направлением пациента на обследование стандартными методами. Выявление положительных результатов простых/быстрых тестов при обследовании на ВИЧ-инфекцию во время проведения выездных профилактических мероприятий по ВИЧ-инфекции должно сопровождаться обязательным направлением пациента в Центр по профилактике и борьбе со СПИД или уполномоченную медицинскую организацию. В случае получения отрицательного результата тестирования на ВИЧ при обследовании в рамках выездных профилактических мероприятий направление на обследование стандартными методами выдается по желанию пациента.

4.9. Выдача заключения о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции только по результатам простого/быстрого теста не допускается. Результаты простых/быстрых тестов используются только для своевременного принятия решений в экстренных ситуациях, при массовом добровольном исследовании населения, и при экспресс-оценке эпидемиологической ситуации в целевых группах населения при осуществлении дозорного эпидемиологического надзора за ВИЧ-инфекцией.".

"5.1. Основным методом выявления ВИЧ-инфекции является проведение тестирования на антитела к ВИЧ и антиген р25/24 с обязательным до- и послетестовым консультированием. Присутствие антител к ВИЧ, РНК или ДНК ВИЧ является лабораторным доказательством наличия ВИЧ-инфекции.

Распространение ВИЧ инфекции приобрело характер глобальной катастрофы. Около 33,3 млн. человек в мире инфицировано ВИЧ, среди них 15,9 млн. женщин и 2,5 млн. детей до 15 лет [1]. Своевременное выявление ВИЧ, внедрение новых, усовершенствование существующих методов диагностики остается основным направлением по предотвращению распространения ВИЧ.

При скрининговых обследованиях населения на ВИЧ используют иммуноферментный анализ (ИФА). В тест-системах III и IV поколений рекомбинантные полипептиды используются в составе иммуносорбента (твёрдой фазы) и конъюгата, что позволило выявлять суммарные антитела (АТ) разных классов (IgG, IgM, IgA) и сократило серологическое окно. Тест-системы IV поколения (комбинированные) позволяют выявлять не только специфические АТ, но и антиген р24 ВИЧ-1 (АГ) посредством введения в систему моноклональных антител (МКАТ) к белку р24 ВИЧ-1 [5], что повышает чувствительность тест-системы и позволяет выявлять ВИЧ на ранних сроках, когда АТ к нему отсутствуют.

Тестирования коммерческих ВИЧ-сероконверсионных панелей сывороток производства Boston Biomedica Inc и ZeptoMetrix Corp. (США) различными тест-системами показывает, что чувствительность комбинированных ИФА-тестов приближается к показателю ПЦР анализа.

Широкое использование комбинированных тестов в службе крови делает актуальной задачу их дальнейшего совершенствования. Разработчики и производители постоянно исследуют новые подходы дальнейшего улучшения параметров чувствительности и специфичности комбинированных тестов.

Тест-система DIA-HIV Ag/Ab для одновременного определения АТ к ВИЧ ½ и АГ р24 ВИЧ-1 содержит полноразмерные рекомбинантные белки ВИЧ ½ и укороченные синтетические АГ, а также мощную систему биотин-стрептавидинового усиления с применением полимерной пероксидазы в составе конъюгата. Тест-система разработана российскими и украинскими учёными, выпускается в промышленных объёмах с 2011 года. Тест-система имеет регистрационное удостоверение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения ФСЗ 2012/1336 от 30 ноября 2012 года.

Для установления достоверности полученных данных использованы показатели среднего арифметического результатов трёх повторов анализа исследуемых образцов в ИФА, стандартной ошибки и среднеквадратичного отклонения.

Тест-система DIA-HIV Ag/Ab, предназначена для скрининговых и подтверждающих исследований сывороток и плазмы крови человека на наличие АГ р24 ВИЧ-1 и суммарных АТ (IgG, IgM, IgA) к ВИЧ-1, ВИЧ-2.

Стандарт ABI Стандарт NIBSC
Концентрация, пкг/мл ОП ОП/ГЗ Концентрация, МЕ ОП ОП/ГЗ
40 0,804±0,024 5,5±0,16 8 0,531±0,016 3,6±0,11
20 0,621±0,018 4,2±0,12 4 0,384±0,011 2,6±0,08
10 0,519±0,015 3,5±0,1 2 0,253±0,007 1,72±0,05
5 0,263±0,008 1,8±0,05 1 0,148±0,004 1,1±0,03
2,5 0,185±0,005 1,25±0,04 0,5 0,083±0,002 0,56±0,01

Примечание: ОП – оптическая плотность, ОП/ГЗ – соотношение оптической плотности к граничному значению, МЕ – международные единицы.
Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению стандарта р24 ВИЧ-1 ABІ составила 2,5 пкг/мл.

Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению АГ р24 ВИЧ-1 составляет 20 пкг/мл.

№ образца панели АТ к субтипам и группам ВИЧ Результаты
ОП ОП/ГЗ
1 Анти-ВИЧ-1 субтип А группа М 3,387±0,10 23,0±0,69
2 Анти-ВИЧ-1 субтип В группа М 3,565±0,11 24,2±0,72
3 Анти-ВИЧ-1 субтип С группа М 3,319±0,10 22,5±0,67
4 Анти-ВИЧ-1 субтип Е группа М 3,233±0,09 21,9±0,66
5 Анти-ВИЧ-1 группа 0 1,098±0,03 7,5±0,22
6 Анти-ВИЧ-2 3,195±0,09 21,7±0,65
7 Отрицательный контроль 0,063±0,002 0,42±0,012

Тест-система выявляет АТ к субтитам А, В, С и Е ВИЧ-1 группы М, АТ к ВИЧ-1 группы О и АТ к ВИЧ-2, причём показатели соотношения ОП/ГЗ достаточно высокие.

№ образца панели Результаты № образца панели Результаты
ОП ОП/ГЗ ОП ОП/ГЗ
1 3.196±0,096 20.2±0,606 9 3.14±0,094 20.1±0,603
2 3.374±0,101 21.3±0,639 10 3.372±0,101 21.3±0,639
3 3.476±0,104 22.0±0,66 11 3.418±0,102 21.9±0,657
4 3.231±0,096 20.8±0,624 12 3.136±0,094 20.0±0,600
5 3.375±0,101 21.3±0,639 13 3.326±0,099 21.3±0,639
6 3.399±0,102 21.4±0,642 14 3.344±0,100 21.4±0,642
7 3.296±0,099 21.2±0,636 15 3.342±0,100 21.4±0,642
8 3.659±0,109 23.1±0,693 16 3.416±0,102 21.9±0,657
№ образца панели Тест-системы, ОП/ГЗ
День забора крови Abbott HIV1/2 Organon Teknika HIV Abbott HIV Ag DIA-HIV-Ag/Ab
PRB 950-1 0 0,2 0,3 0,5 0,4±0,012
PRB 950-2 18 0,2 0,3 0,7 1,2±0,036
PRB 950-3 21 0,2 0,3 3,3 5,9±0,177
PRB 950-4 28 15,5 0,4 4,1 6,4±0,192
№ образца панели Тест-системы, ОП/ГЗ
День забора крови Abbott HIV1/2 Organon Teknika HIV Abbott HIV Ag DIA-HIV-Ag/Ab
PRB-959-1 0 0,3 0,4 0,3 0,5±0,015
PRB-959-2 7 >16,7 0,8 12,5 25,1±0,753
PRB-959-3 9 >16,7 0,8 8,1 24,9±0,747
PRB-959-4 14 >16,7 5,9 >12,5 8,3±0,249
PRB-959-5 19 >16,7 5,6 >12,5 5,4±0,162
PRB-959-6 21 >16,7 5,9 >12,5 6,1±0,183
PRB-959-7 26 >16,7 5,4 >12,5 6,7±0,201
№ образца панели Тест-системы, ОП/ГЗ
Abbott Monoclonal HIV Ag Dupont HIV Ag Organon Teknik HIV Ag IVCOMBI.CE 4 th Generation DIA-HIV-Ag/Ab
PRА203-01 4,3 5,7 16,8 2,3 2,3±0,069
PRА203-02 12,2 6,2 16,4 4,1 20,5±0,615
PRА203-03 6,0 8,7 9,3 1,4 4,2±0,126
PRА203-04 3,0 3,1 4,1 1,9 3,5±0,106
PRА203-05 4,9 1,2 8,2 - 27,9±0,837
PRА203-06 1,3 1,3 1,5 1,0 25,8±0,774
PRА203-07 5,7 2,8 12,1 2,9 25,9±0,777
PRА203-08 1,5 1,0 2,0 3,0 27,5±0,825
PRА203-09 0,5 0,2 0,2 0,4 0,8±0,024
PRА203-10 12,2 9,6 25,3 3,6 15,3±0,459
PRА203-11 3,1 3,9 5,8 2,4 2,8±0,086
PRА203-12 3,5 2,9 6,6 1,6 24,9±0,747
PRА203-13 2,1 1,1 2,4 1,2 9,3±0,279
PRА203-14 0,9 0,7 2,5 0,4 2,5±0,075
PRА203-15 2,5 2,8 5,9 3,3 2,8±0,084
PRА203-16 1,8 1,4 3,7 1,1 28,5±0,855
PRА203-17 6,3 4,0 6,1 2,5 17.5±0,525
PRА203-18 2,4 0,8 2,3 1,7 24.8±0,744
PRА203-19 0,5 0,2 0,3 0,4 0.3±0,009
PRА203-20 17,0 9,1 26,4 4,6 10.7±0,321
№ образца панели Тест-системы, ОП/ГЗ
№1 №2 DIA-HIV-Ag/Ab
1 7,3 11,1 25,1±0,753
2 17,6 11,2 22,0±0,66
3 17,3 11,2 24,7±0,741
4 17,4 11,1 23,9±0,717
5 4,8 11,6 22,8±0,684
6 6,1 10,0 22,5±0,675
7 7,7 10,6 22,8±0,684
8 13,4 11,4 22,2±0,666
9 16,8 11,6 23,4±0,702
10 17,6 11,2 22,9±0,687
11 16,3 11,2 23,3±0,699
12 17,1 11,2 25,6±0,768
13 17,1 11,5 23,2±0,696
14 18,7 10,2 23,8±0,714
15 5,7 10,9 23,4±0,702
16 9,2 11,4 24,6±0,738
17 11,3 10,4 23,7±0,711
18 16,1 10,6 22,9±0,687
19 17,0 0,5 22,1±
20 15,6 0,4 21,2±
№ сыворотки Тест-системы, ОП/ГЗ
№1 №2 DIA-HIV-Ag/Ab
1 1,4±0,042 4,3±0,126 4,3±0,129
2 0,4±0,012 1,9±0,042 3,3±0,099
3 0,69±0,021 1,4±0,042 1,6±0,048
4 0,77±0,023 9,4±0,282 1,4±0,042
5 17,6±0,528 11,5±0,345 3,1±0,093
6 14,9±0,447 10,0±0,30 5,0±0,150
7 5,9±0,177 5,4±0,162 4,4±0,132
8 3,96±0,119 3,6±0,108 3,7±0,111
9 9,69±0,291 4,2±0,126 7,4±0,222

По результатам анализа донорских сывороток и образцов стандартных панелей специфичность тест-системы составила 100%.

Чувствительность тест-системы при исследовании образцов стандартных панелей и неразведенных сывороток от ВИЧ-инфицированных пациентов составила 100%. Тест-система выявляет АТ к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в низких титрах и с более высокими сигналами, чем коммерческие аналоги ведущих мировых производителей.

Разработанная тест-система способна диагностировать ВИЧ-инфекцию на более ранних этапах заболевания, чем её коммерческие аналоги.

Разработанная тест-система обладает высокой специфичностью: при испытаниях в условиях предприятия - 100% (2519 образцов), в клинических лабораториях - 99,8% (134486 исследований).

Следует отметить высокую стабильность и точность тест-системы: показатель межсерийных различий коэффициента позитивности для 12 выпущенных промышленных серий тест-системы составил 5,87% (CV).

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

от 10 февраля 1997 года N 42

О проведении сравнительных испытаний диагностических
иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке
крови человека, выпускающихся в Российской Федерации

В настоящее время для диагностики ВИЧ-инфекции применяются тест-системы отечественного производства, хорошо зарекомендовавшие себя при массовом скрининге на антитела к ВИЧ.

Вместе с тем с середины 1996 года отмечены признаки резкого ухудшения эпидемической обстановки по ВИЧ-инфекции. Число выявленных ВИЧ-инфицированных в 1996 году выросло в 5 раз по сравнению с предыдущим годом. Резкое увеличение числа ВИЧ-инфицированных требует серьезного внимания к обеспечению ранней диагностики ВИЧ-инфекции на стадиях первичной сероконверсии, что позволит в первую очередь более полно обеспечить предотвращение передачи ВИЧ-инфекции через донорскую кровь, другие биологические жидкости и ткани.

Сложившаяся ситуация требует проведения оценки применяемых в здравоохранении диагностических тест-систем, предназначенных для выявления антител к ВИЧ на ранней стадии сероконверсии, когда концентрация антител к ВИЧ может быть минимальной. В целях повышения эффективности диагностики ВИЧ-инфекции

1. Провести в первом квартале 1997 года сравнительные испытания диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека, включенных в Перечень предприятий и производимых ими наборов иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ, участвующих в проведении испытаний (приложение 1).

2. Ввести в действие Инструкцию по проведению испытаний диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека (приложение 2).

3. Назначить базой для проведения испытания Российский научно-методический центр по профилактике и борьбе со СПИДом.

4. Государственному НИИ стандартизации и контроля медицинских иммунобиологических препаратов им. Л.А.Тарасевича предоставить для проведения испытаний стандартные контрольные панели в необходимом количестве.

5. Финансирование работ, связанных с проведением испытаний диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека, обеспечить за счет производителей диагностических иммуноферментных тест-систем, участвующих в сравнительном испытании.

6. Комиссии по организации и проведению сравнительных испытаний диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека (приложение 3) по результатам испытаний представить отчет и разработать рекомендации по дальнейшему использованию испытанных тест-систем в диагностической практике и представить их в Минздрав России к 01.05.97.

7. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на начальника Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России Монисова А.А.

Первый заместитель министра
Г.Г.Онищенко

Приложение 1
к приказу Минздрава России
от 10 февраля 1997 года N 42

ПЕРЕЧЕНЬ
предприятий и производимых ими наборов иммуноферментных тест-систем
для выявления антител к ВИЧ, участвующих в проведении испытаний


Диагностика ВИЧ-инфекции, обычно, базируется на выявлении антител к ВИЧ. Классические серологические тесты для выявления антител к ВИЧ делятся на тест-системы для скрининга антител (первичная диагностика) и тест-системы для подтверждения, т.е. идентификации ВИЧ – позитивных образцов сывороток крови человека.

Проведение обследования единичных тестов на ВИЧ необходимо в регионах с низким показателем распространения ВИЧ-инфекции. При этом требуется использовать высокоспецифичные, одноразовые тесты для индивидуального обследования единичных сывороток крови человека.

Это особенно важно в тех регионах, где отсутствуют условия функционирования диагностической лаборатории – отсутствует специальное оборудование, электричество, нет персонала, обученного постановке иммуноферментного анализа или иммунного блоттинга. Кроме того, могут отсутствовать условия для забора на анализ и обработки крови из локтевой вены для получения образцов сывороток или плазмы крови.

Для проведения оперативных мероприятий по дальнейшему предотвращению распространения ВИЧ-инфекции, анализ должен быть проведен максимально быстро. В последние годы для этого разработаны и приобретают всё большее значение простые/быстрые тесты исследования, когда время анализа одного образца – до 15 минут или максимально – до 40 минут.

Технология производства одноразовых, простых/быстрых тестов (П/Б) настолько усовершенствована в последние годы, как свидетельствуют многочисленные испытания, проведенные в различных странах мира, что по качеству и результатам П/Б – тесты вполне могут быть приравнены к классическим тест-системам. ВОЗ рекомендует лабораториям, для которых приобретение тест-систем для иммунного блоттинга является сложным из-за высокой стоимости этих наборов, использовать комбинации ИФА – тест-систем и П\Б-тестов. Поэтому понятно, насколько важно качество П/Б-тестов, особенно при использовании их для первичного анализа – ложноотрицательный результат такого анализа и отсутствие возможности проведения анализа классическим методом ИФА может иметь неблагоприятные последствия. Такая же ситуация может сложиться и при применении П/Б-тестов при ургентных ситуациях – родовспоможении, травмах и т.д.

П/Б-тесты должны быть устроены таким образом, чтобы максимально минимизировать риск заражения для оператора, производящего как забор пробы на анализ, так и непосредственно анализ. П\Б-тесты должны сохранять свои свойства при хранении и транспортировании при различных температурных условиях окружающей среды, т.е. при температуре от 2 o C до 30 o C, а иногда до 45 o C.

Индивидуальный одноразовый П/Б-тест должен содержать все необходимые реагенты, готовые к употреблению, включать обязательно внутренний контроль и быть предельно простым в применении, чтобы максимально сократить возможность технических ошибок.

Начиная с 1988 года, когда появились первые разработки П/Б-тестов, ВОЗ была предложена Программа объективного изучения операционных характеристик этих тестов: чувствительность, специфичность, температура инкубации при проведении анализа, срок годности, температура хранения и транспортирования, простота постановки теста, использование для анализа не только образцов сыворотки или плазмы крови, но и цельной крови человека.

Для производства П/Б-тестов применяются различные технологии – метод иммунохроматографии, метод иммунофильтрации, метод латекс-агглютинации, модифицированный метод ИФА – иммуно-дот.

Анализ проведенных исследований в институте Тропической медицины (Бельгия) показывает, что большая часть применяемых в настоящее время быстрых тестов пригодна для исследования как сыворотки и плазмы, так и цельной крови человека. По чувствительности и специфичности эти тесты не уступают классическому ИФА, и при этом имеют преимущества по простоте и быстроте проводимого исследования индивидуальных проб сывороток.

Три из пяти представленных тестов являются тестами, в основе которых лежит принцип иммунохроматографии.

На мембране иммобилизованы рекомбинантные и пептидные антигены ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Каждый из 3-х тестов имеет свои принципиальные особенности технологии и проведения анализа, однако, главная цель – быстро (15-30 мин) провести анализ пробы сыворотки (плазмы) крови человека без применения специального оборудования и особых лабораторных условий.

Тест представляет собой набор реагентов для качественного и дифференцированного выявления антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке (плазме) крови человека.

Все реагенты, необходимые для постановки теста, в готовом виде размещены в ячейках проявочной ванны (6 рядов по 12 ячеек).

В ячейки проявочной ванны опускаются зубцы пластикового гребня. На поверхности каждого зубца этого гребня нанесены в разных точках пептидные антигены ВИЧ-1, рекомбинантный антиген ВИЧ-2 и внутренний контроль реакции – антитела к человеческому IgG.

В ячейках разных рядов проявочной ванны, в которые опускаются зубцы пластикового гребня, находятся необходимые для проведения ИФА-реакции реагенты: разбавитель образца сыворотки, конъюгат, промывочный раствор (в 3 рядах) и раствор хромогенного субстрата.

Препарат представляет собой оригинальную разработку, которая позволяет проводить иммуноферментный анализ без применения специального оборудования и с минимальным участием оператора.

Оператор должен только через определенные промежутки времени извлекать зубцы гребня из ячеек одного ряда и помещать их в ячейки следующего ряда. С помощью одного гребня могут быть исследованы одновременно 10 сывороток и 2 контроля (К+ и К-). Постановка анализа на 1 гребне занимает не более 40 мин.

По окончании анализа и выявлении в исследованной сыворотке антител к ВИЧ-1 и/или к ВИЧ-2 на зубцах гребня в определенных местах должны проявиться 2 или 3 пятна, при отрицательном результате – одно пятно.

Во всех анализах были получены результаты, соответствующие исходным характеристикам сывороток, входящих в данную панель (табл. 20)

№пп ВИЧ-экспресс Иммунокомб
Биспот ВИЧ1,2
Multispot
HIV1/HIV2
Genie II Determine
HIV1/2
С.23 С.24 С.25 С.010216010220 MS 350 С.010121 70218U100
1 - - - - - - -
2 - - - - - - -
3 - - - - - - -
4 - - - +сл. - - -
5 + + + + + + +
6 + + + + + + +
7 + + + + + + +
8 + + + + + + +
9 + + + + + + +
10 + + + + + + +
11 + + + + + + +
12 + + + + + + +
13 + + + + + + +
14 + + + + + + +
15 + + + + + + +
16 + + + + + + +
17 + + + + + + +
18 + + + + + + +
19 + + + + + + +
20 + + + + + + +
21 + + + + + + +
22 + + + + + + +
23 + + + + + + +
24 + + + + + + +

Быстрый подтверждающий тест – иммуноблот ИммуноКомб ВИЧ 1+2 КомбФирм по результатам этих же Госиспытаний рекомендован для постановки окончательного диагноза и подтверждений наличия антител к ВИЧ (приказ 292 от 30.07.2001).

В 2003 году согласно Указанию Зам. Министра здравоохранения РФ – Г.Г.Онищенко были проведены Государственные испытания препаратов, предназначенных для серодиагностики ВИЧ-инфекции.

Для изучения были предоставлены следующие П/Б-тесты:

Для изучения пяти П/Б-тестов, представленных на Госиспытания 2003 г. были использованы следующие материалы:

Результаты испытания П/Б-тестов представлены в табл.21

Таблица 21. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тесты)на стандартных панелях ГИСК им.Л.А.Тарасевича.

П/Б тесты Serodia
HIV 1/2
Determine
HIV1/2
Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот Genie II HIV1/HIV2 Retrocheck
HIV WB
Стандартные панели ВИЧ 1+ ОСО 422821202П
16 сывороток
16/16 16/16 16/16 15/16 -
ВИЧ 2+ ОСО 422821602П
8 сывороток
8/8 8/8 8/8 8/8 -
ВИЧ - ОСО 422821402П
20 сывороток
0/20 0/20 0/20 0/20 0/20
Референс-сыворотка ВИЧ-2
1 сыворотка
1/1 1/1 1/1 1/1 -
Референс-панель
ОСО 422832704
24 сыворотки
- - - 0/4 20/20

Пять вышеуказанных П/Б-тестов были изучены на клиническом материале, специально отобранном для этих исследований и аттестованном предварительно методом ИФА и в иммуноблоте.

В панели клинического материала были представлены:

Характеристика сывороток и результаты испытаний пяти П/Б-тестов представлены в таблицах 22,23,24.

Таблица 22. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на клиническом ВИЧ-позитивном материале.

П/Б тесты Serodia
HIV 1/2
Deter-mine HIV1/2 Иммунокомб II ВИЧ1+2
Биспот
Genie II
HIV1/
HIV2
Retro-
check
HIV WB
Характеристика
сывороток
в ИФА и ИБ
шифр ИФА (О.П.) иммуно-блот***
анти-тела* анти-ген**
>3,0 0,391 ВИЧ-1 + + + + +
>3,0 0,198 ВИЧ-1 + + + + +
>3,0 0,231 ВИЧ-1 + + + + +
1,24 2,008 неопред + + + - +
>3,0 0,026 ВИЧ-1 + + + + +
>3,0 0,229 ВИЧ-1 + + + + +
>3,0 0,364 ВИЧ-1 + + + + +
>3,0 0,360 ВИЧ-1 + + + + +
10г >3,0 0,157 ВИЧ-1 + + + + +
11г >3,0 0,252 ВИЧ-1 + + + + +
12г >3,0 1,196 ВИЧ-1 + + + + +
0,312 0,056 отрицат - - - - -
1,08 0,049 отрицат + - - - -
1,02 0,183 отрицат + - - - -
>3,0 0,135 неопред + + + + +
>3,0 0,325 неопред + + + + +
>3,0 0,151 ВИЧ-1 + + + + +
1,83 0,053 отрицат - - - - -
>3,0 0,849 ВИЧ-1 + + + + -
>3,0 0,034 ВИЧ-1 + + + + +
10т >3,0 0,024 неопред + + + + +
11т 2,39 0,022 неопред + + + + +
12т 1,97 0,126 неопред + + - - -
13т >3,0 0,036 ВИЧ-1 + + + - +
14т >3,0 0,048 неопред + + + + +
15т 0,167 0,032 отрицат - - - - -

* - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,172)

** - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,101)

*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"

Таблица 23. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на сероконверсионной панели BBI № 9017

П/Б тесты Serodia
HIV 1/2
Deter-mine HIV1/2 Иммунокомб
II ВИЧ1+2
Биспот
Genie II
HIV1
/HIV2
Retro-check
HIV WB
Сыворотки панели шифр ИФА (О.П.) иммуно-блот***
анти-тела* анти-
ген**
1 0,032 0,041 отрицат - - - - -
2 0,022 0,046 отрицат - - - - -
3 0,041 0,034 отрицат - - - - -
4 0,70 0,035 отрицат - - - - -
5 0,113 0,033 отрицат - - - - -
6 0,248 0,036 отрицат - - + - -
7 0,822 0,053 отрицат - - + - -
8 2,142 0,110 отрицат - - + - +
9 1,824 0,195 неопред + - + - +
10 2,878 0,176 неопред + + + + +
11 >3,0 0,085 неопред + + + + +

* - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,106)

** - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,108)

*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"

При исследовании сывороток беременных (18 образцов), сывороток крови пациентов с диагнозом гепатит В и С (25 образцов), сывороток крови доноров (34 образца) , ни в одном случае не было выявлено ложно-положительных результатов, т.е. специфичность – 100% (табл.24).

Таблица 24. Специфичность простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на серонегативных сыворотках

П/Б тесты Serodia
HIV 1/2
Determine
HIV1/2
Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот Genie II HIV1/HIV2 Retrocheck
HIV WB
сыворотки доноры 0/34 0/34 0/34 0/34 0/34
беременные 0/18 0/18 0/18 0/18 0/18
гепатит С 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8
гепатит В+С 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5
гепатит В 1±/12 0/12 0/12 0/12 0/12

Таким образом, результаты испытаний П/Б-тестов показали, что все исследованные препараты обладают выраженной специфичностью, что особенно важно при проведении быстрого тестирования неизвестного сывороточного материала.

Можно сказать, что П/Б-тесты гарантированы, при правильной постановке и хорошем качестве сывороток, от ложно-положительных реакций.

Большинство исследованных П/Б-тестов имеют достаточную чувствительность при выявлении антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, не уступающую чувствительность тест-систем для классического иммуноферментного анализа.

Это подтверждает предлагаемую ВОЗ стратегию, по которой в определенных случаях простые/ быстрые тесты (П/Б-тесты) могут с успехом заменять классический иммуноферментный анализ. При этом постановка серологического диагноза ВИЧ-инфекции ускоряется и значительно упрощается.

Весь клинический материал аттестован в лаборатории стандартизации и контроля МИБП против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им. Л.А. Тарасевича.

По-видимому, будущее серодиагностики ВИЧ-инфекции за простыми/ быстрыми тестами при условии их высокого качества, развитых и стандартизованных технологий и выраженной стабильности.

Читайте также: