Сыворотка для диагностики сифилиса для рмп

Обновлено: 27.03.2024

Набор применяется при диагностике сифилиса для исследования плазмы или инактивированной сыворотки в реакции микропреципитации (РМП).

Набор рассчитан на проведение 1000 определений.

ПРИНЦИП МЕТОДА

В антигенных структурах Treponema pallidum имеется липопротеиновый антиген, в ответ на который в организме больного формируются "реагины", представляющие собой смесь антител классов M и G. Реагины появляются в сыворотке нелеченных больных через 2-3 недели, а в спинно-мозговой жидкости через 4-8 недель после заражения. Антигенный комплекс, возникающий в спиртовом растворе кардиолипина, лецитина и холестерина (АгКЛ), способен связываться с реагинами, что и регистрируется в реакции микропреципитации (выпадение хлопьев разной величины).

СОСТАВ НАБОРА:

Реагент 1 – антиген кардиолипиновый (АгКЛ) - раствор в спирте этиловом абсолютированном трех высокоочищенных липидов: кардиолипина - 0,03 %; лецитина - 0,27 % и холестерина - 0,9 %; 10 ампул (по 2,0 мл).

Реагент 2 – раствор холин-хлорида в 0,9 % растворе натрия хлористого; 2 флакона (по 5,0 мл).

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ

Реакцию проводят с плазмой или инактивированной сывороткой обследуемых лиц. Для постановки реакции кровь берут из пальца. Перед взятием крови в пробирку вносят 5,0%-ный раствор натрия лимоннокислого, взятого капилляром аппарата Панченкова до метки “50”. Затем тем же капилляром набирают кровь дважды до отметки “0” и вносят в ту же пробирку, перемешивают с раствором натрия лимоннокислого и центрифугируют (если необходимо вскоре после взятия крови приступить к исследованию) при 1000-2000 об/мин в течение 15 минут.

Полученную плазму используют для проведения реакции микропреципитации. При постановке реакции с сывороткой кровь берут из вены в объеме 5-10 мл, отделяют ее от сгустка, инактивируют при температуре (56+1) 0 С в течение 30 мин и используют в реакции.

Пробы, предназначенные для исследования, могут храниться до 5 дней при температуре (6+2) о С или не более 6 недель при минус 20 о С.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ

Потенциальный риск применения набора – класс 1.

Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ:

· Центрифуга лабораторная, обеспечивающая угловую скорость 1000-2000 об/мин;

· термостат или водяная баня, обеспечивающие температуру прогревания (37+1) 0 С или (56+1) 0 С, соответственно;

· пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 и 5,0 мл;

· пробирки вместимостью 10 мл;

· вода очищенная (дистиллированная или деионизированная);

· 0,9% раствор натрия хлористого;

· стекло или пластина из плексигласа;

· перчатки резиновые или пластиковые.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Приготовление эмульсии АгКЛ

Перед приготовлением эмульсии проверить прозрачность ампулированного антигена. При выпадении кристаллов холестерина их растворить нагреванием ампул в термостате или водяной бане при температуре (37+1) 0 С или (56+1) 0 С, соответственно.

К определенному объему 0,9 % раствора натрия хлористого добавить равный объем антигена кардиолипинового. Смесь перемешать и оставить при комнатной температуре на 30 мин, после чего центрифугировать при 1000-2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость слить. К осадку добавить 3,5 объема (по отношению к взятому антигену) 10 % раствора холин-хлорида на 0,9 % растворе натрия хлористого.

Хранить антигенную эмульсию в плотно закрытой стеклянной емкости без доступа света не более 6 сут. при температуре (4+2) 0 С.

Допускается хранение антигенной эмульсии при комнатной температуре в течение 14 сут. при условии внесения в нее мертиолята натрия до конечной концентрации 0,01 %.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

На обычное стекло или углубление пластинки из плексигласа наносят 3 капли нативной плазмы или инактивированной сыворотки, затем добавляют 1 каплю антигенной эмульсии. Ингредиенты перемешивают покачиванием пластины в течение 5 мин, затем в каждую лунку добавляют по три капли 0,9 % раствора натрия хлористого, вновь перемешивают покачиванием пластины и оставляют при комнатной температуре на 5 мин (оптимальный температурный режим реакции 23-28 0 С).

Учет результатов реакции

Результаты реакции учитываются при освещении не ниже 300 люкс. При исследовании плазмы или инактивированной сыворотки от больных сифилисом наблюдается положительная реакция в виде выпадения хлопьев разной величины, а с плазмой или инактивированной сывороткой от здоровых лиц наблюдается отрицательная реакция в виде опалесценции.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте при температуре от 10 до 25 о С в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.

Срок годности набора – 1 год.

трепонемные и нетрепонемные методы серологической диагностики сифилиса

Наибольшее значение в лабораторной диагностике сифилиса имеет серологическая диагностика, целью которой является выявление антител к бледной трепонеме. Материалом исследования является сыворотка крови. Забор крови, для анализа на сифилис проводится натощак из локтевой вены. Все современные методы серологической диагностики сифилиса можно разделить на трепонемные и нетрепонемные.

Нетрепонемные тесты реакция Вассермана (реакция Вассермана (RW) имеет более чем столетнюю историю, в настоящее время ее отменили) и реакция микропреципитации определяют антитела к липоидному материалу, высвобождаемому из повреждаемых при сифилисе клеток макроорганизма, а не антитела непосредственно к бледной трепонеме.

РМП - реакция микропреципитации, микрореакция

Достоинства классических серологических реакций: 1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод; 2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.

Ложноположительные реакции могут быть обусловлены перекрестной реактивностью между бледной спирохетой и другими микробами, нарушениями липидного и белкового обмена, нестабильностью клеточных мембран, образованием аутоантител.

При анализе на сифилис ложноположительные реакции отмечаются при острых (малярия, инфекционный мононуклеоз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно – при СКВ), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей. Ложноположительными могут быть КСР в последние недели беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время mensis. Ложноотрицательные результаты КСР могут быть связаны с ВИЧ-инфекцией.

Наименее надежным методом диагностики сифилиса является реакция микропреципитации (РМП), которую нельзя применять как единственный метод для обследования доноров, беременных. При установлении диагноза сифилиса также обязательно подтверждение результатов РМП трепонемными тестами.

Трепонемные тесты на сифилис служат для подтверждения результатов нетрепонемных тестов (особенно необходимо при диагностике скрытых форм), а также для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда КСР отрицательные.

РИФ - реакция иммунофлюоресценции

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – наиболее чувствительный метод в серологической диагностике сифилиса.

У РИФ есть несколько модификаций: РИФ10 более чувствительна, РИФ200 и РИФабс – более специфичны. С ликвором проводят РИФц. ЛПР при постановке РИФ бывают редко (при коллагенозах, боррелиозе).

РИБТ - реакция иммобилизации бледных трепонем

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – наиболее специфичный метод в серологической диагностике сифилиса. Принцип метода: к живым трепонемам, полученным из тканей яичка кролика после искусственного создания специфического орхита, добавляют сыворотку крови исследуемого. При наличии в сыворотке противотрепонемных антител-иммобилизинов, бледные трепонемы прекращают движение (иммобилизируются).

Позитивность РИБТ оценивают при темнопольной микроскопии, исходя из процента трепонем, утративших подвижность: 51-100% – положительная, 31-50% – слабоположительная, 21-30% – сомнительная и 0-20% – отрицательная. Антитела-иммобилизины – поздние антитела, поэтому РИБТ становится положительной лишь в конце первичного – начале вторичного периода сифилиса. В дальнейшем РИБТ остается положительной. Отмечается высокая чувствительность реакции при поздних формах сифилиса.

ЛПР при РИБТ отмечаются редко (при саркоидозе, СКВ, туберкулезе, циррозе печени). Ложноположительный результат РИБТ может быть следствием приема трепонемоцидных антибиотиков, поэтому обследование не проводят лицам, получавшим антибиотики в течение последнего месяца. Достоинствами РИФ и РИБТ являются: 1) Высокая чувствительность (особенно для РИФ); 2) Высокая специфичность (особенно для РИБТ).

Недостатки РИФ и РИБТ: 1) Техническая сложность, дороговизна методов. Особенно сложной является РИБТ, в настоящее время она применяется в основном для научных целей; 2) Субъективность оценки результатов, отсутствие автоматизации; 3) РИФ и РИБТ у больных сифилисом могут оставаться положительными в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение.

Поэтому эти реакции невозможно использовать для контроля излеченности. Исходя из сложности и дороговизны РИФ и РИБТ, имеет смысл применять их для диагностики поздних и скрытых форм сифилиса.

ИФА - иммуноферментный анализ и РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

Иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – новые высокочувствительные и высокоспецифичные, удобные в постановке (с возможностью автоматизации), хорошо воспроизводимые, недорогие методы серологической диагностики сифилиса. ИФА по механизму реакции, чувствительности и специфичности близок к РИФ. В обеих реакциях принимают участие одни и те же антитела. При ИФА для визуализации реакции антиген-антитело используют реакцию фермента (щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена) с субстратом, который при этом меняет свою окраску. Интенсивность окраски определяет позитивность реакции (от + до ++++). Благодаря автоматизации, этот тест можно применять для скрининга на сифилис больших групп обследуемых: беременных, доноров, больных психоневрологических и кардиологических стационаров и др. Возможна постановка ИФА с ликвором. В настоящее время планируется замена комплекса КСР на сочетание РМП и ИФА.

Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах.

При постановке ИФА возможно выявление суммарных антител и дифференцированное определение трепонемоспецифических IgM и IgG. IgM появляются в крови больных лишь в первые недели и месяцы болезни, а затем – исчезают. Поэтому, их выявление при ИФА свидетельствует о наличии ранних нелеченых форм сифилиса, раннего врожденного сифилиса, реинфекции. При выявлении IgG принципиальным является их количество, что отражается с помощью коэффициента позитивности (порядок величин этого показателя варьирует при применении разных тест-систем).

При РПГА в качестве антигена используются заформалиненные эритроциты барана, покрытые антигенами патогенных бледных трепонем. При добавлении к этим эритроцитам сыворотки, содержащей специфические антитела, происходит их агглютинация.

Результаты РПГА оценивают как реактивные, слабореактивные и нереактивные.

Помимо качественного исследования, во всех тест-системах предусмотрен количественный анализ с определением титра. Как и ИФА, РПГА проста в исполнении, не требует высокой квалификации персонала и специального оборудования, возможна ее автоматизация.

РПГА становится положительной уже в инкубационном периоде и может оставаться таковой спустя много лет после выздоровления (не может использоваться для контроля излеченности). По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.

ЛПР при постановке ИФА и РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта), коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, инфекционном мононуклеозе, лепре, а также у беременных. Ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Разрабатываются новые высокоспецифичные методы серологической диагностики сифилиса, такие как иммуноблотинг, IgM-серология и др.

Август Пауль фон Вассерман фото

Август Пауль фон Вассерман (Wassermann, August von) (1866–1925), немецкий микробиолог и иммунолог.


Родился 21 февраля 1866 в Бамберге. Учился в Страсбургском, Венском и Берлинском университетах, где его учителями были Р.Кох и П.Эрлих. С 1891 – ассистент Института Р.Коха, с 1901 – приват-доцент этого института, с 1902 – профессор. В 1911 Вассерман стал профессором Берлинского университета, в 1913 – директором Института экспериментальной терапии Фридриха Вильгельма в Берлине.
Основные труды ученого посвящены изучению антибактериального и антитоксического иммунитета при холере, тифе, дифтерии. Изучая эпидемию гриппа, Вассерман обнаружил явление относительного иммунитета. Доказал иммунологическую видоспецифичность белков (независимо от П.Уленгута). Предложил методы серологической диагностики туберкулеза.
Значительным достижением Вассермана стала разработка в 1906 (совместно с А.Нейссером и К.Бруном) метода диагностики сифилиса (реакция Вассермана).
Последние годы жизни занимался усовершенствованием серологической диагностики сифилиса, туберкулеза и новообразований.
Умер Август Пауль фон Вассерман в Берлине 16 марта 1925.

Клиника венерологии и дерматологии

Самый простой способ записаться на прием к дерматологу, венерологу без очереди и анонимно - позвонить по телефону
8 903 618 8184 записаться по WhatsApp, через Telegram или заполнить форму:

Причин по которым пациенты не могут прийти в дерматологическую клинику очень много. Мы не будем их рассматривать, а просто предложим вызвать врача на дом или офис.


Вызвать врача дерматолога на дом в нашей клиники очень просто: позвоните по телефону: 8 903 618 8184 написать по WhatsApp или заполнить форму:

Вызвать врача на дом

Адрес венерологической клиники где можно пройти обследование, курс лечения, сдать анализы без очередей и анонимно

улица Большая Татарская, дом 35, строение 3
10 минут пешком от станций метро Павелецкая, Новокузнецкая, Третьяковская

Венерология

Дерматология

Микология

Онлайн запись

Все виды анализов

Сдать мазок на половые инфекции:


В любое удобное для вас время вы можете узнать все волнующие вопросы, касающиеся половых инфекций и не только, записавшись на прием к нашим специалистам. Результаты мазка готовы в вашем присутствии.

Сдать анализ крови на СПИД:


Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови, который будет готов в вашем присутствии.

Сдать анализ крови на сифилис:


Пациенты нашей клиники узнают результат анализа на сифилис в течении 10-15 минут.

Сдать анализ крови на гепатит В и С:


Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови на гепатиты В и С.

Сдать анализ крови на ВИЧ:


В течение 10-15 минут в нашей клинике вы можете провериться на ВИЧ и получить заключение врача.

Анализ ELISA

Для диагностики сифилиса применяется множество методов исследования, различающихся по технике проведения и предназначению. Прямые методы направлены на обнаружение возбудителя в исследуемом материале с помощью микроскопии (микроскопия в темном поле и др.) или ПЦР.

Помимо методов прямой детекции бледной трепонемы (T. pallidum), при обследовании на сифилис широкое применение получили непрямые (серологические) методы исследования, выявляющие антитела к возбудителю сифилиса в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости. К непрямым методам диагностики сифилиса относятся серологические реакции ИФА, РПГА, КСР, РИФ и РИФ-абс, РИБТ, ПЦР, экспресс-метод, иммуноблот и другие.

Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний.

Серологические критерии диагностики основаны на специфических реакциях "антиген-антитело". Реагируют антигены (компоненты клеточных стенок, жгутиков, капсул, ДНК и токсинов) тех микроорганизмов, которые необходимо определить, с антителами, содержащимися в сыворотках. Между антигенами и соответствующими им антителами происходит связывание, что и положено в основу методов серологической диагностики. Серологические реакции применяются для определения неизвестного антигена (источником которого является бактерия, вирус, токсин и др.) с помощью известного антитела или для определения антитела в сыворотке с помощью известного антигена.

Серологические реакции классифицируют в зависимости от состояния антигена и особенностей среды, в которой взаимодействуют антиген и антитело, а также по способу проведения.

Для проведения серологических реакций испольуют множество лабораторных методов, таких, как агглютинация, преципитация, связывание комплемента, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный анализ и другие. Эти реакции позволяют эффективно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов.

Сыворотки, которые необходимы для постановки серологических реакций, получают экспериментальным путем, в частности, их производят институты вакцин и сывороток, и предлагают в составе коммерческих диагностических наборов.

Серологические методы являются важным инструментом в диагностике и лечении инфекционных заболеваний человека и животных, поскольку с их помощью можно не только идентифицировать возбудителя заболевания, но и обнаружить в крови больных и переболевших специфические антитела к соответствующим возбудителям. Серологические методы в настоящее время являются самыми эффективными методами диагностики при невозможности или трудностях выделения возбудителя, и сравнительно редко дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Использование серологических методов для диагностики сифилиса

В основе серологических лабораторных методов диагностики сифилиса лежит способность организма давать иммунный ответ на появление возбудителя. С помощью серологических реакций в сыворотке (плазме) крови (или цереброспинальной жидкости) выявляют следы иммунного ответа на заражение, а именно антитела к антигенам бледной трепонемы, или же сами антигены.

Для того, чтобы установить специфический характер имеющихся клинических проявлений (т.е. что они являются следствием именно сифилиса) и, в дальнейшем, контролировать динамику патологического процесса, предложено большое количество серологических методов исследований. Эти же методы также широко применяют для скрининга населения.

В соответствии с действующими национальными руководствами и клиническими методическими рекомендациями, во многих странах мира при обследованиях населения с целью выявления больных сифилисом и при установлении клинического диагноза используются передовые серологические методы. Их применяют как при наличии клинических признаков болезни у пациентов, так и в латентные периоды.

Постановка серологических реакций — один из наиболее надежных методов диагностики сифилиса. Стандартизованные серологические реакции с регламентированной методикой постановки называются серологическими тестами на сифилис. Учитывая то, что почти все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными или ложноотрицательными, их следует ставить в комплексе и, при необходимости, в динамике.

Серологические реакции, которые используются для определения антител в сыворотке крови больного, отличаются друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Помимо классических методов, для эффективной серодиагностики сифилиса используются иммунологические тесты и технологии, получившие в 21 веке новый импульс к развитию.

Антитела выявляются различными иммунохимическими (серологическими) методами, среди которых осадочные реакции, иммуноферментный, иммунохемилюминесцентный, иммунохроматографический анализы, линейный иммуноблоттинг, исследование с применением проточной флюорометрии, технология иммуночипов и другие.

  • подтверждения клинического диагноза сифилиса,
  • постановки диагноза скрытого сифилиса,
  • контроля за эффективностью лечения, как один из критериев излеченности больных сифилисом,
  • профилактики сифилиса (скрининговое обследование определенных групп населения с целью выявления патологии).

Важнейшие свойства, необходимые серологическим тестам - чувствительность, специфичность, воспроизводимость

Решающим критерием при выборе метода лабораторной диагностики является его эффективность — чувствительность, специфичность и воспроизводимость.

Чувствительность — это доля положительных результатов у больных. Чувствительность метода определяется процентом положительных результатов исследования проб, заведомо содержащих специфические маркеры возбудителя (нпр., антигены возбудителя или антитела к ним).

Специфичность — доля отрицательных результатов теста у здоровых пациентов. Специфичность метода определяется процентом отрицательных результатов исследования проб, заведомо не содержащих специфические маркеры возбудителя. Таким образом, чем выше чувствительность и специфичность, тем надежнее и достовернее метод исследования.

К важным диагностическим критериям также относится воспроизводимость результатов при повторных исследованиях одних и тех же проб. Следует отметить, что, несмотря на значительные достижения в области высоких технологий, не существует методов, обеспечивающих 100% (абсолютную) чувствительность и специфичность во всех исследуемых биопробах.

В настоящее время в России официально регистрируются тест-системы, наборы, ингредиенты, обладающие при постановке реакции менее 95% чувствительностью и специфичностью. Таким образом, всегда существует возможность получения неадекватного результата.

Классификация тестов по типу применяемого антигена. Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис

В современной венерологии для диагностических целей используется более десятка вариантов серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить по разным критериям на различные категории. Классификацию проводят по методологии проведения исследований, области применения, скорости, дешевизне, требованиям к лабораторной оснащенности и т.д.

По типу используемых антигенов, диагностические тесты традиционно разделяют на две группы— нетрепонемные и трепонемные серологические тесты.

Трепонемные реакции теоретически более специфичны, однако они также дают ложноположительные результаты. Более того, они не позволяют дифференцировать нелеченный и излеченный сифилис. Результаты трепонемных реакций будут положительными в обоих случаях. Нетрепонемные реакции позволяют различать нелеченную или недавно перенесенную и излеченную инфекцию.

При обследовании рекомендуется проводить и трепонемную, и нетрепонемную реакции. Для установки и подтверждения диагноза "сифилис" требуются положительные результаты при проведении тестов обоих типов — трепонемных и нетрепонемных. Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами, и проводятся до начала, в процессе и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

1. Нетрепонемные тесты

  • RW — реакция Вассермана с липидными антигенами (реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, РСКк)
  • реакция Канна (не используется в настоящее время),
  • цитохолевая реакция Закс-Витебского (не используется в настоящее время),
  • микрореакция преципитации с плазмой или инактивированной сывороткой (МРП или РМП),
  • RPR (тест быстрых плазменных реагинов, Rapid Plasma reagin),
  • TRUST (тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой, Toluidin Red Unheated Serum Test).

Реактивность в нетрепонемных тестах обычно указывает на повреждение тканей и не всегда специфична в отношении сифилиса. Простота выполнения и низкая стоимость позволяет использовать их как отборочные реакции при установлении предварительного диагноза сифилиса.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются специфические антигены трепонем. Эти тесты обязательны для подтверждения диагноза (РПГА, РИТ, РИФ и ИФА). Они являются более сложными и дорогостоящими, чем тесты 1-й группы, но и более специфичными и чувствительными. Выявление антител в спинно-мозговой жидкости также производится с помощью трепонемных тестов.

Традиционные трепонемные реакции, подтверждающие диагноз сифилиса, требуют дорогого лабораторного оборудования и опытного персонала, поэтому они редко проводятся вне специализированных лабораторий. Однако сейчас их можно заменить простыми и быстрыми трепонемными реакциями, которые возможно проводить на местах и в которых используется цельная кровь. Проведение этих реакций не требует длительного обучения, специальных условий для хранения реактивов и оборудования.

Сравнительная дешевизна, удобство и практичность трепонемных экспресс- реакций привлекают к ним внимание не только как к методам подтверждения диагноза. Эти реакции могут применяться для скрининга сифилиса в рамках оказания первичной медицинской помощи (их можно проводить на местах, в том же лечебно-профилактическом учреждении) или в районах, где лаборатории не доступны. Однако поскольку антитела к T. pallidum определяются на протяжении ряда лет независимо от того, лечился больной или нет, трепонемные экспресс-реакции нельзя использовать для оценки эффективности лечения и дифференциальной диагностики нелеченного и излеченного сифилиса.

Классификация серологических методов диагностики сифилиса по типу определяемых антител

В современной дерматовенерологии для диагностики используются различные серологические реакции на сифилис. Часть методов, которые были актуальны ещё десять лет назад, перестают применяться из-за сложности или недостаточной специфичности. В зависимости от выявляемых антител, методы серологической диагностики сифилиса подразделяются на три группы:

1) флокуляционные: микрореакция на стекле с липидными антигенами —экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации — МРП), VDRL, CMF (cardiolipin microflocculation test), RPR и др.;

2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами: реакция Вассермана (РВ), качественная и количественная методика постановки, термостатная и на холоде (реакция Колмера);

3) осадочные реакции, которые в настоящее время не используются: реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса — Витебского и др.;

II. Групповые трепонемные реакции — определяются антитела к групповым трепонемным антигенам (входящим в состав микробной клетки как патогенных, так и сапрофитных трепонем):

III. Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции — определяются антитела к специфическим видовым антигенам Treponema pallidum:

Практическое использование серологических реакций на сифилис

За рубежом при массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются нетрепонемные отборочные реакции (VDRL, RPR и др.). Для постановки диагноза требуется подтверждение в трепонемных тестах РИФ-Абс (FTA-ABS), РПГА или TPPA. В настоящее время, рекомендуется использовать ИФА, как замену VDRL в скрининговых тестах. Это связано с тем, что тест ИФА отличается чувствительностью, специфичностью, возможностью автоматизировать исследования, а также с разработкой диагностических тест-наборов. Кроме того, обосновывается реверсивная схема порядка исследования на сифилис, когда первыми используются трепонемные тесты.

С целью контроля за эффективностью терапии и для оценки активности инфекции рекомендуют VDRL в количественном исполнении. В качестве подтвердающего/дополнительного теста используется тест ИФА на противотрепонемные антитела IgM.

В отечественной практике используют комплекс серологических реакций (КСР), включающий реакцию микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном и РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами. В последнее время рекомендуется в КСР заменять РСК на ИФА или РПГА. Также используются РИФ (и ее модификации — РИФ-Абс и остальные), РИБТ.

Подходы к лабораторной серологической диагностике сифилиса в Российской Федерации

Внедрение в практику унифицированных методов клинических лабораторных исследований в СССР и Российской Федерации позволило ввести более прогрессивные диагностические методы, упорядочить работу клинико-диагностических лабораторий, повысить производительность труда, сократить дублирование лабораторных исследований и стало основой для разработки рациональных форм готовых наборов реактивов.

В 1985 году в СССР, в целях совершенствования диагностики сифилиса, нетрепонемная реакция РСК с неспецифическим (вассермановским) антигеном и осадочные реакции (цитохолевая и Кана) были исключены из диагностического комплекса, как менее чувствительные и не дающие дополнительной информации.

Вместо них, в составе комплекса серологических реакций на сифилис (КСР), было предусмотрено применение реакции связывания комплемента с трепонемным и кардиолипиновым антигенами (РСКт) и микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (РМП). Более высокая чувствительность и информативность этого комплекса реакций обеспечивала выявление не только реагинов, но и противотрепонемных антител.

1. РМП с кардиолипиновым антигеном с плазмой крови и инактивированной сывороткой крови. Отборочный тест в случае изолированного применения.

2. РСК с трепонемным и кардиолипидовым антигенами; качественная и количественная методики постановки, термостатная и на холоде;

4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в следующих модификациях: РИФ с абсорбцией (РИФ-абс) с сывороткой крови и капиллярной кровью, РИФ-200, РИФ с цельной спинномозговой жидкостью (РИФ-ц); качественные и количественные методики постановки. Диагностика скрытых и поздних форм сифилиса, распознавание ЛПР (ложно-положительных результатов)

5. Комплекс классических серологических реакций (КСР): РСК (реакции Вассермана) с кардиолипиновым и трепонемным антигенами + РМП. Профилактическое обследование населения на сифилис, диагностика всех форм сифилиса, контроль эффективности лечения, обследование лиц, контактных по сифилису.

С целью совершенствования лабораторной диагностики сифилиса, повышения качества работы и предупреждения дальнейшего распространения заболеваемости сифилисом рекомендовано заменить РСК в комплексе серореакций (КСР) при диагностике сифилиса на ИФА и РПГА в качестве отборочных и подтверждающих тестов, т.к. эти тест-системы являются высокочувствительными, специфическими и воспроизводимыми.

1. РМП и зарубежные аналоги (VDRL, RPR и аналогичные микрореакции) в качестве отборочных тестов при обследовании населения на сифилис. Постановка РМП осуществляется с плазмой или инактивированной сывороткой крови.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Диагностические реакции, в том числе для ликвородиагностики. В связи с простотой постановки и наличием коммерческих тест-систем могут использоваться как отборочные тесты.
3. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Отборочные и диагностические реакции.
4. Качественный и количественный варианты РИФ (РИФ-абс, РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца). Антиген - патогенная бледная трепонема штамма Никольса.
5. Комплекс серологических реакций (КСР) на сифилис, состоящий из реакции связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами, и РМП. Возможно заменить реакцию связывания комплемента на ИФА или РПГА также в сочетании с РМП. КСР относится к диагностическим тестам.
6. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса. РИБТ относятся к диагностическим подтверждающим тестам.

Таким образом, последовательность обследования пациентов на сифилис в учреждениях здравоохранения рекомендуется планировать следующим образом:

1. При первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или ее модификации (RPR, TRUST, VDRL) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата - любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ);

2. После окончания терапии ставится РМП или ее модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года.

3. По окончании этого срока осуществляется постановка той же специфической реакции, что и при первичном обследовании. Следует учитывать, что специфические трепонемные тесты могут оставаться положительными (не негативировать) в течение ряда лет, а в отдельных случаях остаются положительными на всю жизнь.

Реакция микропреципитации (РМП) – экспресс-метод диагностики сифилиса. Это исследование позволяет определить в крови пациента наличие или отсутствие возбудителей сифилиса. Сейчас оно проводится вместо реакции Вассермана (RW).

Суть анализа заключается в выявлении антител к кардиолипину — компоненту внутренней мембраны бактерий и митохондрий. Такие антитела формируются на стадии первичного сифилиса, в течение 7–10 дней после образования твердого шанкра. РМП может быть положительным и при других заболеваниях, при которых возможно разрушение тканей. Это связано с присутствием кардиолипина в качестве фосфолипида в различных клеточных мембранах.


Особенности анализа

Сифилис у человека вызывает бледная трепонема. Это одноклеточная бактерия, относящаяся к спирохетам. На ранних стадиях развития возбудитель заболевания активно размножается, но, в результате иммунных реакций, а также действия факторов неспецифического иммунитета, часть трепонем погибает.

Гибель клеток бактерии вызывает появление большого количества липоидных молекул из разрушенных клеточных мембран возбудителя сифилиса. Иммунная система формирует по отношению к ним защитные антитела.

Ткани, которые были повреждены действием бледной трепонемы, разрушаются. Клеточные митохондрии, которые при этом повреждаются, высвобождают фосфолипиды, в числе которых – кардиолипин. Последний представляет собой собственный антиген организма липидного происхождения. Он появляется в организме при разрушении клеток. Антиген схож с липидными антигенами бледной трепонемы.

Реакция микропреципитации – микрореакция крови на кардиолипиновый антиген (экстракт бычьей сердечной мышцы), который по своей природе схож с возбудителем сифилиса. Когда в пробу с кровью пациента вводится антиген, проводится проверка на ответную реакцию. Если в организме человека сформировались антитела к вирусу (защитные белки), то они отреагируют на этот реагент.

Качественная оценка реакции определяется по объему выпавшего осадка и величине хлопьев. Образование осадка оценивают в условных единицах, плюсами (+), от одного до четырех.

Результат РМП получают всего через 10-40 минут.

В отличие от RW, анализ РМП более чувствителен. В то же время он уступает первому по специфичности.

Это исследование позволяет не только выявить наличие инфекции в организме, но и проследить динамику течения заболевания.

Реакция микропреципитации – нетрепонемный тест, который позволяет определить заражение сифилисом через 1–2 недели с момента образования первичной сифиломы (твердого шанкра). Сифилома – клиническое проявление защитных процессов, куда входят местные клеточные и гуморальные специфические реакции, направленные на уничтожение бледных трепонем в месте их изначального внедрения в организм.

Показания к проведению

Анализ РМП назначают при обнаружении у пациента симптомов, характерных для сифилиса. Это:

  • повышение температуры до 37–38,5 градусов, ее сохранение в течение длительного времени;
  • общая слабость, сопровождающаяся кашлем и насморком;
  • регулярные суставные и мышечные боли;
  • локальное облысение;
  • образование на месте внедрения шанкра – язвы с твердым основанием и плотными краями;
  • появление багровых пятен на слизистой оболочке горла;
  • появление многочисленных пустул с белыми кончиками;
  • появление бледно-розовых пятен на коже, которые не причиняют боль и дискомфорт;
  • кондиломы багрового или фиолетового цвета.

На поздних стадиях сифилиса на коже образуются инфекционные бугры и гуммы, которые периодически изъязвляются и оставляют рубцы. Это сочетается с поражением головного мозга, сердечно-сосудистой системы, печени, костей, глаз.

РМП обязательно назначают лицам, которые проходят обследование для получения санитарной книжки. Также анализ показан при:

  • срочной госпитализации;
  • подготовке пациента к операции;
  • наличии ВИЧ;
  • беременности;
  • проверке состояния здоровья потенциального донора органов.

Также этот тест назначают пациенту, завершившему курс лечения сифилиса, для оценки его эффективности.

Расшифровка анализа

Качественный анализ на реакцию микропреципитации позволяет получить всего 2 результата: положительный и отрицательный.


Результат РМП может быть ложноположительным. Это бывает у пожилых людей, а также при наличии ряда заболеваний. Это:

  • СПИД;
  • туберкулез;
  • красная волчанка;
  • ревматоидный артрит;
  • хламидиоз;
  • сахарный диабет;
  • подагра;
  • лептоспироз;
  • тиреоидит;
  • мононуклеоз;
  • вирусный гепатит;
  • склеродермия.

При инфаркте миокарда анализ на определение антител к бледной трепонеме также может быть ложноположительным.

Для пациентов со всеми перечисленными заболеваниями и отклонениями РМП не может быть использован в качестве единственного метода определения сифилиса. Дополнительно антитела нужно определять методами ИФА (иммуноферментного анализа) или пассивной гемагглютинации.

Подготовка к анализу

Чтобы получить достоверный результат, к сдаче крови нужно подготовиться. Основные рекомендации:

  • сдавать натощак, после сна;
  • утром перед сдачей не завтракать, не пить кофе и чай, а также другие напитки (можно пить воду);
  • не курить перед анализом в течение двух часов;
  • в течение двух дней перед забором крови соблюдать щадящий режим питания, исключив жареное, жирное, острое, а также отказаться от спиртного;
  • за день до анализа ограничить повышенные физические и психоэмоциональные нагрузки.

Анализ РМП не сдают после физиотерапевтических процедур и инструментальных исследований (УЗИ, рентгенография и т.д.).

Treponema pallidum или бледная трепонема — микроорганизм, вызывающий сифилис. Это спирохета спиралевидной формы, передающаяся от человека к человеку преимущественно половым путем. Инфекция опасна из-за постепенного поражения многочисленных органов и систем с риском инвалидизации пациента при несвоевременном лечении. Современная медицина может предложить несколько эффективных методов диагностики заболевания. Анализ на антитела к бледной трепонеме — один из них. Специалисты могут выявить инфекционный процесс на любой стадии при правильном комбинировании исследований.


Особенности сифилиса

Это распространенная инфекция, отличающаяся постепенным прогрессированием и продолжительным развитием. Для болезни характерно волнообразное течение.

Сифилис — системная патология, поскольку бледная трепонема распространяется во всем организме. Она поражает нервные ткани, сердце, сосуды, кожу, слизистые оболочки, суставы, кишечник и другие анатомические структуры. При несвоевременном или неправильном лечении заболевание развивается в течение многих лет и в конечном итоге вызывает необратимые изменения, делающие пациента инвалидом.

Во время активной фазы сифилис характеризуется кожными симптомами, поражением слизистых оболочек и внутренних органов. Во время латентной фазы симптомы отсутствуют. Эти периоды периодически сменяют друг друга, из-за чего диагностика инфекции может быть затруднена. По мнению врачей, это одна из самых опасных и распространенных патологий, передающихся половым путем.

Treponema pallidum обычно обитает в лимфоузлах и лимфатических сосудах, где происходит ее активное размножение. В кровотоке большая концентрация патогенов наблюдается при вторичном сифилисе. Микроорганизм способен в течение продолжительного периода времени сохранять жизнеспособность во внешней среде.

Передается обычно половым путем, однако реже возможно инфицирование гематогенным, внутриутробным или контактным способом.

Что это за анализ?

Это исследование дает возможно обнаружить и оценить общее количество иммуноглобулинов (антител) к возбудителю сифилиса. Анализ на антитела к бледной спирохете — достоверный и высокочувствительный метод скрининга, применяемый повсеместно. В сумме иммуноглобулинов учитывают количество специфических молекул IgM и IgG, выделяемых гуморальным иммунитетом с целью нейтрализации патогенного микроорганизма. Первичный механизм иммунного ответа — выделение антител IgM. Они появляются уже через 8–14 суток после заражения. Молекулы IgG выделяются на более поздних стадиях, примерно через месяц после заражения. Могут сохраняться в организме в течение года и дольше.

Наибольший уровень IgG возникает на шестой неделе протекания заболевания, когда антител этого класса становится больше всего. Исследование на иммуноглобулины к Treponema Pallidum показывает наличие сифилиса примерно через три недели после заражения, когда в кровотоке появляется много таких молекул. Из-за этого подобный анализ применяется с целью раннего выявления инфекционного процесса. При использовании эффективных методов лечения концентрация IgG понижается, но иммуноглобулины в целом не пропадают. Они остаются в кровотоке гораздо дольше, благодаря чему врачи могут оценивать эффективность назначенной схемы терапии.


Показания к применению

Сифилис — инфекция с подчас сложной клинической картиной, маскирующей реальную природу патологического процесса. Периоды обострения симптомов сменяются латентными фазами, когда у пациента отсутствуют жалобы. По этой причине важен скрининг, направленный на обнаружение сифилиса на ранних стадиях.

Основные показания:

  • скрининговое исследование в рамках обследования пациента у венеролога при наличии симптомов или факторов риска;
  • скрининговое обследование во время вынашивания ребенка;
  • подготовка к донорству крови или органов;
  • сдача анализов перед трудоустройством в определенных профессиональных сферах.

Анализ снижает вероятность дальнейшего распространения инфекции. Помогает выявить болезнь на ранних стадиях, когда еще нет серьезных осложнений. Если у пациента выявили сифилис, важно обследовать близко контактировавших с ним людей.

Подготовка и проведение

Специально готовиться к анализу на антитела IgM и IgG к Treponema pallidum не нужно. Желательно проводить забор крови примерно через 4–6 часов с момента приема пищи. Врачи рекомендуют отказаться от курения и употребления алкогольных напитков перед диагностикой. В зависимости от режима работы клиники пациент получает результаты через несколько часов или в течение 1–3 дней.

Факторы, способные снизить точность диагностики сифилиса:

  • иммунопатологические состояния, вроде системной красной волчанки;
  • присутствие злокачественных новообразований;
  • гематологические расстройства;
  • сахарный диабет;
  • применение наркотиков в виде инъекций;
  • преклонный возраст;
  • частое проведение гемотрансфузии;
  • присутствие других инфекций.

Выше перечислены случаи, при которых возможен ложный положительный результат на сифилис. Ложный отрицательный результат характерен для людей, страдающих от ослабления иммунной системы. По этой причине важно проводить исследование под контролем врача. Специалист оценит все данные, включая анамнез больного, и при необходимости назначит дополнительные тесты.


Процедура ничем не отличается от обычного забора венозной крови, когда пациент проходит биохимическое или клиническое исследование. Материал направляют в лабораторию, где антитела выявляют с помощью реагентов.

Положительный и отрицательный результат анализа

Нормальный показатель — отрицательный результат, когда иммуноглобулины к бледной трепонеме не обнаружены. Положительный результат указывает на активное (или латентное) протекание инфекции в настоящий момент или перенесенное ранее заболевание. Следует учитывать, что отрицательный результат не всегда говорит о том, что человек здоров. Иммуноглобулины отсутствуют в крови в течение примерно 14 суток с момента заражения. Врач может назначить дополнительные исследования, если у пациента есть характерные симптомы. Проводится повторный анализ на антитела через 2–3 недели.

Это исследование не подходит для оценки результативности лечения сифилиса, поскольку иммуноглобулины остаются в кровотоке в течение нескольких лет даже при успешной терапии. Такие пациенты часто здоровы, однако тесты до сих пор дают положительный результат. Во время обследования необходимо исключить носительство других видов трепонем, аутоиммунные расстройства, лепру, онкологию, гормональные нарушения и иные факторы, влияющие на точность диагностики.

Читайте также: