T-spot диагностика туберкулезной инфекции где сделать

Обновлено: 19.04.2024

Универсальный альтернативный вариант иммунологического исследования in vitro диагностики туберкулезного процесса путем количественного определения мононуклеарных клеток периферической крови, продуцирующих ИФН-γ в ответ на присутствие белков CFP-10 и ESAT-6 M. tuberculosis.

Синонимы русские

Иммунологический тест на туберкулез

Синонимы английские

Testing for tuberculosis infection

Метод исследования

Прямая оценка функции T-клеток энзим-связывающий иммуноспотингом (ELISPOT).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.

Общая информация об исследовании

Возбудителем туберкулёза является микобактерия туберкулеза (МБТ, палочка Коха, Mycobacterium tuberculosis) – высокоустойчивый микроорганизм. В настоящее время описано около 150 видов микобактерий, но клинически значимыми признаны М. tuberculosis (более 90 % всех случаев туберкулезной инфекции), М. bovis (5 %) и М. africanum (около 3 % – главным образом среди населения стран тропической Африки).

Источником инфекции являются больные люди и животные. Наиболее распространен воздушно-капельный путь заражения, при котором возбудитель проникает в организм через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки пищеварительного тракта или через поврежденную кожу.

Попадая в окружающую среду, возбудитель способен длительно сохраняться: в высохшей мокроте он выживают до 10 месяцев, на предметах, окружающих больного (белье, книги), – более 3 месяцев, в воде – более года, в почве – до 6 месяцев.

В настоящее время описаны следующие варианты развития ситуации после проникновения МБТ в организм человека: [1]

полная элиминация (удаление) возбудителя из организма;
развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении МБТ);
инфицирование, или "латентная туберкулезная инфекция" (ЛТИ), [2] – состояние стойкого иммунного ответа на антигены МБТ при отсутствии клинических проявлений активной формы туберкулеза.

Присутствующий в организме возбудитель способен не только длительно бессимптомно персистировать в организме, но при определенных обстоятельствах (интенсивное размножение МБТ на фоне малоэффективного иммунитета и т.д.) реактивироваться и вызвать развитие заболевания. В настоящее время установлено, что с момента инфицирования МБТ в течение первого года заболевание развивается у 5 % инфицированных людей, в течение всей оставшейся жизни туберкулез развивается еще у 5 %, то есть пожизненный риск заболевания туберкулезом среди инфицированных составляет 10 %.

Вместе с тем наличие различных факторов может способствовать повышению риска развития локального туберкулеза: так, при ВИЧ-инфицировании ежегодный риск заболевания туберкулезом на фоне ЛТИ составляет 10 %, а пожизненный риск – 50 %.

Диагностика туберкулеза является комплексной и включает, согласно регламентирующим документам, [3] аллергические внутрикожные пробы (реакция Манту и "Диаскинтест"), инструментальное обследование (ФЛГ, рентген) и лабораторные – направленные как на выявление и идентификацию возбудителя с определением спектра его чувствительности к препаратам этиотропной терапии, так и на изучение выраженности иммунологической реакции на патоген.

Одним из современных и высокоинформативных методов определения специфической иммунной реакции на МБТ, особенно при отсутствии или минимальных клинико-инструментальных признаках инфекции и сомнительных результатах общепринятых методов лабораторной диагностики туберкулеза, является тест T-SPOT.

Исследование иммунного Т-клеточно-опосредованного ответа: количественное определение в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Эти белки входят в состав клинически значимых МБТ (М. tuberculosis, М. bovis, М. africanum) и отсутствуют у бактерий, используемых при производстве вакцины БЦЖ и у непатогенных для человека микобактерий.

Метод определения T-SPOT.TB (Oxford Immunotec) с применением специально подобранных антигенов ESAT-6 и CFP-10, входящих в состав микобактерий комплекса M. tuberculosis. Используется технология ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot), позволяющая выявлять в образце крови присутствие реактивных (специфически сенсибилизированных) Т-эффекторных клеток, продуцирующих интерферон в ответ на воздействие указанных антигенов.

Исследование крови, допустимое в качестве альтернативы кожному тесту (проба Манту) для выявления туберкулезной инфекции.

Туберкулез – инфекционное хроническое заболевание, вызываемое микобактериями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex). Варианты развития ситуации после проникновения возбудителя туберкулеза в организм человека следующие:

полная элиминация (удаление) микобактерий туберкулеза из организма;
развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении бактерий);
латентная инфекция (микобактерии персистируют в организме в неактивном состоянии, обуславливая стойкий иммунный ответ на антигены возбудителя при отсутствии клинических проявлений активной формы заболевания). Это состояние у многих инфицированных может сохраняться на протяжении всей жизни. Такие лица не распространяют инфекцию, но у части пациентов латентная инфекция в течение жизни может перейти в клинически манифестированное заболевание. Риск прогрессии латентной инфекции в активное заболевание увеличивается при ослаблении иммунной системы.

Активная туберкулезная инфекция диагностируется по комплексу клинических симптомов, медицинской истории пациента, данным рентгенологических исследований и результатам прямых методов лабораторного выявления Mycobacterium tuberculosis в мокроте или мазках (микробиологические культуральные методы, выявление ДНК возбудителя с применением ПЦР).

Диагностика латентной инфекции затруднена отсутствием клинических и рентгенологических признаков заболевания, а также отсутствием возбудителя в пробах доступного биоматериала. Однако ее выявление важно для определения лиц, нуждающихся в контроле и превентивной терапии.

В настоящее время существуют два подхода к выявлению вероятной латентной инфекции:

in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
in vitro: оценка ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).

Оба подхода основаны на оценке характера иммунной реакции человека на антигены возбудителя, т. е. не являются методами прямого выявления инфекционного агента.

В связи с достаточно высокой распространенностью туберкулеза в нашей стране, Министерство здравоохранения РФ рекомендует ежегодно проводить скрининговое обследование детей в возрасте от 1-го года до 17-ти лет на наличие туберкулезной инфекции (в том числе при поступлении в детские сады и школы). Профилактическое скрининговое обследование обычно проводят с использованием внутрикожных проб. При наличии определенных противопоказаний или информированном отказе родителей от применения внутрикожных проб ребенку допускается назначение альтернативных методов обследования. Они включают исследование крови, основанное на выявлении высвобождения гамма-интерферона специфически сенсибилизированными лимфоцитами. На данный момент имеются два коммерческих диагностических теста этого направления: 1) QuantiFERON®-TB Gold; и 2) T-SPOT.TB.

Тест T-SPOT.TB допускается к использованию клиническими рекомендациями МЗ РФ и Российского общества фтизиатров по выявлению и диагностике туберкулеза у детей (2017). В соответствии с рекомендациями, при проведении скринингового обследования детей отрицательный результат T-SPOT.TB при отсутствии клинических симптомов заболевания (респираторного и интоксикационного характера, других локальных патологических проявлений) позволяет врачу-фтизиатру выдать справку об отсутствии у ребенка в настоящий момент активного туберкулеза.

К достоинствам этого метода можно отнести то, что подбор специфических антигенов исключает ложноположительные реакции, связанные с предшествующей вакцинацией БЦЖ (такие антигены отсутствуют на линиях Bacillus Calmette-Guerin, BCG) и перекрестными реакциями с большинством нетуберкулезных микобактерий окружающей среды (за исключением M. kansasii, M. szulgai и M. marinum). Напротив, лица, инфицированные микобактериями туберкулезного комплекса (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canetti) обычно имеют в крови Т-клетки, распознающие эти и другие антигены таких бактерий.

T-SPOT.TB тест не позволяет различать латентную инфекцию и активное заболевание.

Следует учитывать, что чувствительность и специфичность подобных методов в целях скрининга туберкулезной инфекции не достигают 100%. Поэтому такие тесты следует применять с учетом общей оценки индивидуального риска в комплексе со стандартными методами диагностики.

Материал для исследования: цельная кровь (с литий гепарином) для детей до 10 лет – 1 пробирка, 4 мл, для детей старше 10 лет и взрослых – 2 пробирки, 4 мл. См. тест 1321ВЗР .

Приём биоматериала в медицинских офисах Москвы и области (кроме медицинского офиса Нагатинская) принимают биоматериал ежедневно до 12:30. МО Нагатинская - принимают биоматериал ежедневно круглосуточно.

предварительно уточнить допустимое время, день недели и медицинский офис, где можно сдать пробу крови для проведения данного исследования. Специальной подготовки не требуется. Применение T-SPOT.TB теста не оценивали у лиц, получавших более одного месяца противотуберкулезную терапию.

в качестве альтернативы кожным пробам (Манту, Диаскин) в целях скринингового обследования детей на наличие туберкулезной инфекции;
как часть комплексной оценки риска наличия латентной туберкулезной инфекции (в том числе у лиц, вакцинированных БЦЖ или получавших БЦЖ-терапию);
для диагностики активной туберкулезной инфекции в совокупности с оценками риска, клиническими, рентгенологическими и другими лабораторными показателями (в качестве дополнительного метода обследования).

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

В ответе указывается количество спотов (специфически сенсибилизированных Т-лимфоцитов) после инкубации по антигенам А (ESAT-6) и B (CFP-10). Приводится общая оценка результата теста в качественной форме.

≤ 4 – отрицательный;
5-7 – сомнительный;
≥ 8 – положительный.

Для использования в целях установления диагноза или исключения туберкулеза, а также для оценки вероятности наличия латентной туберкулезной инфекции, при интерпретации результатов T-SPOT.TB необходимо принимать во внимание весь комплекс эпидемиологических, анамнестических и клинических данных и результаты других проведенных диагностических исследований.

Примечание. Отрицательный результат не исключает возможности экспозиции к M. tuberculosis или текущей инфекции. При получении отрицательного результата T-SPOT.TB теста лицам, имевшим недавний контакт с инфицированными и отрицательный результат T-SPOT.TB теста, а также при наличии значимых клинических признаков возможной инфекции следует повторить тестирование через шесть недель. По оценкам, приведенным производителем, чувствительность метода при исследовании лиц с подтвержденным культуральным методом туберкулезом составила 95,6%.

Положительный результат не позволяет различить латентную инфекцию и активное заболевание. Для подтверждения активной формы туберкулеза следует применить другие тесты (ПЦР или культуральное исследование мокроты, рентгенографию грудной клетки). Хотя применяемые в данном тесте антигены отсутствуют в вакцине БЦЖ и у большинства других микобактерий, ложноположительный результат может отмечаться у лиц с инфекцией M. kansasii, M. szulgai, M. gordonae или M. marinum. При подозрении на такие инфекции могут потребоваться альтернативные тесты. Применение T-SPOT.TB теста не оценивали у лиц, получавших более одного месяца противотуберкулезную терапию. По оценкам, приведенным производителем, специфичность метода в группе лиц с низким риском туберкулеза составила 97,1%.

полная элиминация (удаление) микобактерий туберкулеза из организма;
развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении бактерий);
латентная инфекция (микобактерии персистируют в организме в неактивном состоянии, обуславливая стойкий иммунный ответ на антигены возбудителя при отсутствии клинических проявлений активной формы заболевания). Это состояние у многих инфицированных может сохраняться на протяжении всей жизни. Такие лица не распространяют инфекцию, но у части пациентов латентная инфекция в течение жизни может перейти в клинически манифестированное заболевание. Риск прогрессии латентной инфекции в активное заболевание увеличивается при ослаблении иммунной системы.

В настоящее время существуют два подхода к выявлению вероятной латентной инфекции:

in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
in vitro: оценка ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).

T-SPOT.TB тест не позволяет различать латентную инфекцию и активное заболевание.

в качестве альтернативы кожным пробам (Манту, Диаскин) в целях скринингового обследования детей на наличие туберкулезной инфекции;
как часть комплексной оценки риска наличия латентной туберкулезной инфекции (в том числе у лиц, вакцинированных БЦЖ или получавших БЦЖ-терапию);
для диагностики активной туберкулезной инфекции в совокупности с оценками риска, клиническими, рентгенологическими и другими лабораторными показателями (в качестве дополнительного метода обследования).

≤ 4 – отрицательный;
5-7 – сомнительный;
≥ 8 – положительный.

полная элиминация (удаление) микобактерий туберкулеза из организма;
развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении бактерий);
латентная инфекция (микобактерии персистируют в организме в неактивном состоянии, обуславливая стойкий иммунный ответ на антигены возбудителя при отсутствии клинических проявлений активной формы заболевания). Это состояние у многих инфицированных может сохраняться на протяжении всей жизни. Такие лица не распространяют инфекцию, но у части пациентов латентная инфекция в течение жизни может перейти в клинически манифестированное заболевание. Риск прогрессии латентной инфекции в активное заболевание увеличивается при ослаблении иммунной системы.

В настоящее время существуют два подхода к выявлению вероятной латентной инфекции:

in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
in vitro: оценка ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).

T-SPOT.TB тест не позволяет различать латентную инфекцию и активное заболевание.

Материал для исследования: цельная кровь (с литий гепарином) – 2 пробирки, 4 мл.

в качестве альтернативы кожным пробам (Манту, Диаскин) в целях скринингового обследования детей на наличие туберкулезной инфекции;
как часть комплексной оценки риска наличия латентной туберкулезной инфекции (в том числе у лиц, вакцинированных БЦЖ или получавших БЦЖ-терапию);
для диагностики активной туберкулезной инфекции в совокупности с оценками риска, клиническими, рентгенологическими и другими лабораторными показателями (в качестве дополнительного метода обследования).

≤ 4 – отрицательный;
5-7 – сомнительный;
≥ 8 – положительный.

Метод T-SPOT исследует иммунные клетки крови, чувствительные к возбудителю туберкулёза. Тест обладает высокой чувствительностью и специфичностью, крайне редко даёт ложноположительные и ложноотрицательные результаты и может использоваться при сомнительных результатах традиционных методов исследования (в том числе для людей с иммунодефицитом).

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Диагностика туберкулезной инфекции методом T-SPOT?

скрининговое обследование детей на инфицирование туберкулёзом;
обследование людей из группы риска по латентной туберкулёзной инфекции;
комплексная диагностика туберкулёза у взрослых и детей;
положительный результат реакции Манту у ребёнка, вакцинированного БЦЖ.

Подробное описание исследования

Туберкулёз — это инфекционное заболевание, вызываемое микобактериями туберкулёза, которое обычно поражает лёгкие, но способно повреждать любые органы и ткани тела, кроме волос и ногтей.

Туберкулёз входит в перечень социально значимых заболеваний и заболеваний, представляющих опасность для окружающих.

Ежегодно регистрируется около 10 млн новых случаев болезни и порядка 1,4 млн смертей от заболевания.

Пути передачи туберкулёзной инфекции:

воздушно-капельный: бактерии рассеиваются вокруг больного туберкулёзом при кашле, чихании, смехе;
воздушно-пылевой: высохшие на поверхностях капли мокроты и слизи с пылью поднимаются в воздух, откуда и попадают в организм человека;
алиментарный: заражение происходит при употреблении в пищу инфицированного молока или мяса больных животных;
контактный: при совместном использовании предметов личной гигиены, посуды и др.;
внутриутробный: от больной матери к ребёнку (встречается редко).

Основной механизм передачи инфекции — воздушно-капельный.

Инфекционный процесс, когда у человека нет симптомов болезни при наличии жизнеспособных микобактерий туберкулёза в организме, называют инфицированием, а инфицированных людей — латентными носителями. Они незаразны. Но, если иммунитет таких людей ослабляется, латентная форма заболевания может перейти в активную, заразную.

По оценкам ВОЗ, в настоящее время около одной четверти населения Земли — латентные носители туберкулёза.

Произойдёт ли инфицирование и разовьётся ли в дальнейшем заболевание, зависит от продолжительности контакта с больным туберкулёзом, массивности инфекции и состояния иммунной системы человека.

Туберкулёз переходит из латентной стадии в активную в 5–15% случаев, чаще всего у людей с ослабленной иммунной системой (например, с ВИЧ-инфекцией), недостаточным питанием, диабетом, у курильщиков.

заключённые,
медицинские работники,
пациенты, получающие иммуносупрессивную терапию.

Болезнь может развиваться двумя основными путями:

первичный туберкулёз: после инфицирования туберкулёзный процесс развивается быстро;
вторичный процесс: очаги туберкулёзной инфекции, которые уже были в организме инфицированного, на фоне ослабления иммунитета активируются / микобактерии туберкулёза попадают в организм извне повторно (экзогенная суперинфекция).

Туберкулёз не имеет специфических признаков: симптомы болезни многообразны, так как она может поражать различные органы и ткани, а иногда локализуется сразу в нескольких органах. Это затрудняет диагностику заболевания.

Для скрининга туберкулёзной инфекции — выявления болезни до появления симптомов, а также латентной инфекции — используют методы иммунодиагностики (оценка иммунной реакции человека на антигены микобактерий). Есть два типа таких тестов:

Тесты in vivo. Проводятся на теле человека. Это кожные пробы, когда вводят туберкулёзный аллерген и проверяют реакцию (например, проба Манту).
Тесты in vitro. Проводятся в лаборатории. При исследовании пробы крови оценивают высвобождение иммунными клетками гамма-интерферона. Такие исследования называют IGRA-тестами. Один из них — T-SPOT.

Для правильной постановки диагноза при положительном результате скринингового теста проводят дополнительное обследование пациента: рентгенографию и/или компьютерную томографию органов грудной клетки.

Описание возбудителя

Туберкулёз вызывают патогенные микобактерии, относящиеся к классу Actinobacteria, порядку Actinomycetales, семейству Mycobacteriaceae, образующие группу Mycobacterium tuberculosis complex. В неё входят Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis и её вариант — бацилла Кальметта — Герена (БЦЖ) и др. Однако до 95% случаев заболевания туберкулёзом вызваны Mycobacterium tuberculosis.

В состав микобактерий туберкулёза входят белки — туберкулопротеиды, которые вызывают тканевую воспалительную реакцию с образованием гранулёмы — разрастания ткани, с помощью которой организм локализует очаг инфекции и изолирует его от остальных тканей.

Микобактерии туберкулёза устойчивы к температурному воздействию: выдерживают нагревание до +90 °C и охлаждение вплоть до −260 °C. Кислоты, щёлочи и спирты также не представляют опасности для возбудителей: они легко выдерживают действие стандартных концентраций дезинфицирующих средств и могут сохраняться на поверхностях бытовых предметов до 6 месяцев.

Для лечения туберкулёза используют различные антибиотики и их сочетания, однако некоторые штаммы микобактерий туберкулёза адаптировались к их действию и выработали устойчивость к противотуберкулёзным препаратам. В таком случае подбор подходящей схемы антибиотикотерапии усложняется.

Особенности и преимущества методики

T-SPOT — метод для диагностики туберкулёза in vitro. При исследовании выявляют клетки крови, реагирующие на стимуляцию антигеном микобактерий туберкулёза, и подсчитывают количество таких клеток (их называют спотами).

В 2017 году тест T-SPOT был включён в рекомендации Минздрава РФ в качестве скринингового диагностического метода для выявления туберкулёзной инфекции у детей в возрасте от 1 года до 17 лет. Обследование проводится ежегодно, оно обязательно перед поступлением в детские дошкольные учреждения и школы. Отрицательный результат исследования методом T-SPOT, отсутствие клинических проявлений заболевания, в том числе интоксикации и респираторного синдрома, позволяет сделать вывод об отсутствии у ребёнка туберкулёза. Тест подходит для применения у детей, прошедших иммунопрофилактику вакциной БЦЖ.

Читайте также: