Технике приготовления сывороток для исследования на вич

Обновлено: 23.04.2024

1. Забор крови, приготовление сыворотки, хранение и транспортировка биологического материала в лабораторию осуществляются в соответствии с национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р 53079.4-2008 "Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа".

2. Перед направлением больного на лабораторное исследование медицинский работник проводит дотестовое консультирование, определяет время посещения процедурного кабинета.

3. Венепункцию проводят на локтевой вене в положении пациента сидя или лежа с использованием вакуумной системы (вакуумная пробирка с активатором сгустка в зависимости от назначенного исследования), держателя одноразового, одноразовой двусторонней иглы.

4. При взятии образца крови из (венозного или артериального) катетера, через который проводилось вливание инфузионного раствора, катетер следует предварительно промыть изотоническим солевым раствором в объеме, соответствующем объему катетера, и отбросить первые 5 мл взятой из катетера крови. Недостаточное промывание катетера может привести к загрязнению образца крови препаратами, вводившимися через катетер.

5. Нельзя брать образцы крови из катетеров, обработанных гепарином.

6. Рекомендуемые типы пробирок и условия подготовки пробы:

Допустимые сроки хранения до исследования

Для получения сыворотки, используемой при иммуносерологических исследованиях (скрининговые исследования на ВИЧ-инфекцию, СПИД-ассоциированные инфекции)

вакуумная пробирка с активатором образования сгустка кремнезем (SiO2), цвет крышки красный (в соответствии с ISO 6710), объем забираемой крови 6 мл, размер пробирки (диаметр и высота) 13 x 100 мм

Не требует перемешивания

1600 - 1800g, 10 минут

не более 24 ч при t 4 - 8 °C; сыворотка: не более 7 суток при t 4 - 8 °C, не более 6 месяцев при t -20 °C, более длительное хранение при t -70 °C

вакуумная пробирка с активатором образования сгустка кремнезем (SiO2) + разделительный инертный полимерный гель, цвет крышки желтый (в соответствии с ISO 6710), объем забираемой крови 6 мл, размер пробирки (диаметр и высота) 13 x 100 мм

Не требует перемешивания

Центрифугировать не позднее 2 часов после забора при 3000g, 20 минут

не более 48 ч при t 4 - 8 °C; сыворотка: не более 7 суток при t 4 - 8 °C, не более 6 месяцев при t -20 °C, более длительное хранение при t -70 °C

Для получения цельной крови на исследование показателей иммунного статуса (CD4/CD8)

вакуумная пробирка с калиевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (К2 ЭДТА), цвет крышки фиолетовый (в соответствии с ISO 6710), объем забираемой крови 4 мл, размер пробирки (диаметр и высота) 13 x 75 мм

Хорошо перемешать кровь с антикоагулянтом сразу же после извлечения пробирки из держателя. Перемешивание осуществлять путем переворачивания пробирки (не менее 8 раз)

в течение 48 ч, но не более 72 ч при t 18 - 23 °C (нельзя хранить в холодильнике)

Для получения плазмы для определения вирусной нагрузки (РНК ВИЧ)

Центрифугировать не позднее 2 часов после забора при 3000g, 20 минут

не более 48 часов при t 4 - 8 °C; не более 1 месяца при t -20 °C; не более 1 года при t -70 °C

Для определения провирусной ДНК ВИЧ (у детей)

вакуумная пробирка с калиевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (К2 ЭДТА), цвет крышки бледно-сиреневый (в соответствии с ISO 6710), объем забираемой крови 2 мл, размер пробирки (диаметр и высота) 13 x 75 мм

не более 6 часов при t 18 - 23 °C (допускается до 24 часов, но нельзя хранить в холодильнике)

7. Оформляется направление (заявка) на лабораторные исследования. Заявки на анализы должны быть согласованы со всеми врачами-специалистами, участвующими в лечении больного, для исключения повторных венепункций. В стационарных условиях составляется общее направление (заявка). При переводе пациента в другое отделение, до получения анализа, лаборатория уведомляется о переводе для исключения утери результатов.

1. Выявите потребности, удовлетворение которых нарушено.

2. Сформулируйте и обоснуйте проблемы пациента.

3. Определите цели и составьте план сестринского вмешательства.

4. Расскажите о технике приготовления сывороток для исследования на ВИЧ.

5. Продемонстрируйте взятие мокроты для бактериологического исследования.

1. Нарушены потребности: дышать, спать, общаться, поддерживать в норме температуру тела.

2. Проблемы пациента:

Настоящие проблемы:

Потенциальная проблема: ухудшение состояния пациента, связанное с прогрессированием ВИЧ-инфекции.

Приоритетная проблема: одышка.

Краткосрочные цели – приведение числа дыхательных движений к норме или устранение одышки.

Долгосрочные цели – улучшение общего состояния, снижение температуры, прекращение кашля.

3. Сестринские вмешательства

План	Мотивация
1. Обеспечить психический и физический покой.	1. Для эффективности лечения.
2. Поднять изголовье кровати или обеспечить полусидячее положение больного в постели.	2. Для облегчения дыхания.
3. Каждые 2 часа оценивать состояние дыхания пациента – частоту и качество дыхания, наличие кашля, цвет кожных покровов.	3. Для ранней диагностики и своевременной помощи в случае возникновения осложнений.
4. Научить пациента способам облегчения дыхания.	4. Для облегчения дыхания.
5. Выполнить назначение врача.	5. Для эффективности лечения.
6. Осуществить забор: а) крови для исследования на ВИЧ и оценки состояния иммунитета. б) мокроты на баканализ.	6. Для диагностики ВИЧ-инфекции и определения уровня иммунодефицита, выяснения этиологии пневмонии.

Оценка эффективности предоставляемой помощи: улучшение состояния пациента, одышка и кашель прекращены, температура снижена. Цель достигнута.

4. Кровь от больного отбирается в процедурном кабинете ЛПУ в количестве 3-5 мл в чистую стерильную посуду, отбор сыворотки проводится после предварительного отстаивания забранных образцов крови в течение 1,5-2 часов при комнатной температуре или в течение 1 часа при 37 градусах в термостате. Снятие сыворотки со сгустка позже 3 часов после взятия крови недопустимо. Отбор сыворотки проводится в отдельной комнате или наспециальном отведенном столе отдельным для каждой порции крови наконечником с помощью груши. Недопустимым является отбор разных образцов сыворотки со сгустка крови одной пипеткой. Для лучшего отделения сыворотки рекомендуется обведение сформировавшегося сгустка крови индивидуальной стеклянной палочкой или пипеткой. Необходимо избегать попадания эритроцитов в сыворотку. Нельзя отбирать сыворотку, переливая ее из пузырька в пузырек. Это приводит к бактериальному загрязнению исследуемого материала, увеличивая риск аварии.

5. Мокроту для бактериологического исследования собирают либо во время кашлевого толчка, либо при бронхоскопии. Медицинская сестра должна обучить пациента правилам сбора мокроты во время кашлевого толчка. Обычно собирают утреннюю порцию мокроты. Пациент не должен прилагать усилия для отхаркивания, если в данный момент он не может выделить мокроту.

Следует помнить, что мокроту до исследования в лаборатории можно хранить не более 1-2 ч. в холодильнике при температуре 4 градуса Цельсия, поэтому нужно доставить материал в лабораторию как можно быстрее, снабдив его сопроводительным документом.

Медицинская сестра хирургического отделения при приготовлении сыворотки крови для исследования на ВИЧ от 5 больных использовала для отсоса сыворотки со сгустка крови 3 пипетки. Сыворотка отстаивалась в термостате 3 часа и хранилась до отправления в лабораторию на подоконнике сутки.

Задания

1. Перечислите нарушения, допущенные медицинской сестрой в ходе работы.

2. Расскажите о режиме дезинфекции рабочего места и пробирок со сгустками крови.

3. Подготовьте бикс с сыворотками крови для транспортировки в иммунно-диагности-ческую лабораторию. Оцените правильность оформления сопроводительного документа (направления). Оформите направление для исследования крови на ВИЧ-инфекцию.

Эталон ответа

1. Нарушениями, допущенными медсестрой в ходе работы, являются следующие:

- количество пипеток (3) для отсоса сыворотки со сгустка крови не соответствует количеству больных (5), в данном случае должно было быть 5 пипеток либо автоматическая пипетка с одноразовыми наконечниками;

- сыворотка в термостате отстаивалась 3 часа вместо 1 часа;

- сыворотка хранилась на подоконнике в течение суток, тогда как приготовленная сыворотка должна храниться в холодильнике при температуре 4-8° С.

2. Отделенную сыворотку переносят в чистую (лучше стерильную) пробирку и хранят при температуре 4-8° С до 7 дней; пробирки или флаконы, герметично закрытые резиновыми (пластиковыми) пробками, устанавливаются в штативы, которые помещают для транспортировки в плотно закрывающуюся крышками металлическую тару или другой обрабатываемый контейнер. Оптимальной считается доставка тары с исследуемым материалом в сумках-холодильниках.

3. Рабочая поверхность столов, оборудования после приготовления сывороток должна обеззараживаться 3% раствором хлорамина. Сгустки крови после отсасывания сыворотки обеззараживаются сухой хлорной известью в соотношении 1:5. Пробирки замачивают в 3% растворе хлорамина на 60 минут.

4. Студент оформляет направление в соответствии с требованием.

Задача № 18

В процессе предстерилизационной очистки лабораторного инструментария в инфекционном отделении для больных ВИЧ-инфекцией лаборантка порезала палец правой руки через резиновую перчатку.

Данный материал взят из книги “Диагностические тест-системы: Радиоиммунный и иммуноферментный методы диагностики” Таранова Анатолия Григорьевича и размещен на сайте с любезного разрешения автора.

ТЕХНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

2.1. Условия взятия и хранения биологического материала

Подготовка к проведению лабораторных исследований содержит два основных момента: необходимость соблюдения стандартных условий взятия биологического материала и предотвращение деградации биологически активного вещества в образцах.

Перед получением образца крови медицинскому работнику необходимо знать следующее:
1) некоторые биологические вещества, например гормоны, после приема пищи могут иметь повышенную концентрацию; ,
2) содержание ряда веществ подвержено влиянию циркадных (суточных) колебаний;

3) множество лекарственных веществ способны влиять на определяемые вещества, повышая или понижая их уровень в крови;

4) взятие исследуемого образца у пациентов в горизонтальном, в вертикальном положении или после физической нагрузки изменяет уровень биологически активных веществ иногда более чем на 10 %.

Желательно, чтобы кровь, предназначенная для исследования, забиралась в однотипные центрифужные пробирки. Такие пробирки должен готовить (мыть, высушивать, добавлять коагулянт или ингибитор ферментов) один сотрудник. Кровь без добавок отстаивают, а с добавками центрифугируют, полученную сыворотку или плазму разливают в такое количество мелких пластмассовых или стеклянных пробирок (стекло не всегда выдерживает низкую температуру), которое равно или превышает число разных типов тестирования.

В биохимической деятельности организма большую роль играют биологические ритмы. Пульсирующий характер секреции многих веществ от нескольких минут до суток - все это должно быть учтено при взятии биологического материала. Вне связи с временным фактором и конкретным физиологическим состоянием не существует абсолютных нормативных показателей вещества. Если не преследуется специальная цель исследовать циркадный ритм биологической активности, периферическую венозную или капиллярную кровь у пациентов желательно брать утром натощак в одно и то же время, в условиях физиологического покоя, что особенно важно при исследовании веществ, секреция и метаболизм которых протекает в течение суток неодинаково.

Во время процедуры взятия крови следует избегать гемолиза, который некоторым возможен при длительном венозном застое, энергичной аспирации крови шприцем, попадании в просвет иглы воды и детергентов, действии на кровь высокой и низкой температур.

2.1.1. Получение сыворотки или плазмы крови

Цельная кровь (капиллярная и венозная) используется в основном в биохимических исследованиях (определение глюкозы, показателей КЩР, определение концентрации электролитов в эритроцитах) и гематологии (исследование LE-клеток, гематокрита, на малярию, проведение стандартного клинического анализа крови). Для радиоиммуиных и иммуноферментных методов получают сыворотку или плазму.

Вопрос о том, что лучше брать для анализа - плазму или сыворотку - не имеет однозначного ответа. Некоторые исследователи предпочитают сыворотку, так как стероиды, например, из нее экстрагируются легче и полнее, чем из плазмы. Кроме того, плазма нередко образует эмульсию с органическими растворителями во время экстракции, а после замораживания и оттаивания в ней появляются хлопья фибрина, мешающие определению. Для биохимических исследований чаще используется сыворотка венозной крови, полученной у пациента при определенных условиях.

При выборе вида материала следует учитывать следующее:

1) При получении сыворотки крови возникает опасность того, что при отстаивании крови из эритроцитов интенсивно освобождаются протеолитические ферменты, которые могут разрушить определяемое вещество и повредить его меченый аналог во время инкубирования. Поэтому для определения содержания белковых соединений предпочтительно готовить плазму крови.

2) При получении плазмы часто используют гепарин или цитрат. Первый блокирует связывание антитела с антигеном, второй существенно изменяет кислотность среды, к которой чрезвычайно чувствительны некоторые вещества. Поэтому в сухую центрифужную пробирку желательно насыпать 50 мг ЭДТА на 5 мл крови (1:100). Сразу же после забора кровь перемешать с ЭДТА и отцентрифугировать. ЭДТА является слабым антикоагулянтом, блокатором протеолитических ферментов и составной частью многих буферных смесей.

2.1.2. Обработка крови для лабораторных исследований

Полученная и доставленная в лабораторию кровь должна быть быстро обработана, или подвергнута исследованию. Длительное стояние сыворотки над эритроцитами может привести к сдвигам концентраций составляющих, поэтому время стояния сыворотки над сгустком должно быть ограничено. Кроме того, биологический полураспад некоторых исследуемых веществ настолько мал, что стояние сыворотки при высокой комнатной температуре может полностью исказить полученные результаты исследования.

В начале обработки чистой сухой стеклянной палочкой сгусток крови осторожно отделяется от стенок пробирки, пробирка взвешивается и подготавливается к центрифугированию.
Подавляющее количество лабораторных образцов для исследований рекомендуется центрифугировать при +4 °С, со скоростью вращения 500 - 1000 g (1500 - 3000 об/мин) не более 15 - 20 минут. Высокая скорость вращения, как правило, приводит к гемолизу сыворотки или плазмы.

Полученную сыворотку (плазму) необходимо быстро отделить от форменных элементов крови и плотно закрыть пробирки крышкой. Если получена липемическая или гемолизированная сыворотка, образец, как правило, выбрасывается.

2.1.3. Хранение крови (плазмы, сыворотки)

Для определения большинства биологического материала считается возможным хранение его при комнатной температуре не более 6-8 часов.

Некоторые образцы разрешается хранить в течение недели при + 4°С. При необходимости хранения сыворотки (плазмы) более суток, образец рекомендуется замораживать при -20°С, что позволяет проводить исследования, например, спустя несколько месяцев - раковые маркеры, мочевину, холестерин, большинство гормонов и т.д.

При работе с кровью общим правилом должно являться немедленное отделение плазмы или сыворотки от форменных элементов, так как некоторые вещества могут поглощаться и инактивироваться эритроцитами и лейкоцитами. Но даже в простых водных растворах они спонтанно окисляются (например, кортизол превращается в 21-дезоксикортизол).

Большинство веществ биологического происхождения при низкой температуре более стабильны, чем при комнатной, поэтому их обычно хранят в замороженном состоянии. В пробах крови после ее взятия происходит огромное количество процессов. Быстро размножающиеся бактерии и ферментативный гидролиз могут кардинально изменять состояние и содержание всех компонентов. Наиболее эффективным средством замедления и предотвращения таких изменений являются замораживание и быстрое центрифугирование. Однако, даже при –20 °С биологическая система не стабильна, поскольку активность многих ферментов при этом не изменяется. Естественным следствием этого является снижение концентрации веществ при длительном хранении при - 40, -70°С. На примере АКТГ видно, что температурный режим и физико-химические параметры среды имеют решающее значение для сохранности вещества. При хранении АКТГ в течение 18 месяцев при –17 °С его активность, измеряемая биологическим методом, не изменяется. При 37 °С через 45 минут гормон инактивируется на 64 %, через один день при комнатной температуре - на 85%, при 3°С - на 58%. Но кортикотропная активность кислого экстракта аденогипофиза, полученного гомогенизацией ткани в 0,1 % соляной кислоте, сохраняется при 2°С не менее 39 дней.

Плазму или сыворотку непосредственно после получения запаивают в стеклянные ампулы или помещают во флакончики с плотно закрывающимися крышками, замораживают и хранят при температуре не выше -20°С. При таких условиях образцы пригодны для анализа в течение нескольких месяцев, иногда до года. При повторном замораживании и оттаивании происходит частичная деградация белковых веществ (соединений), в то время как для веществ с малым молекулярным весом (например, стероидные гормоны) эти процедуры не столь опасны.

Образцы крови необходимо хранить в хорошо закрытых пробирках, так как потеря в образце влаги в замороженном состоянии может привести к концентрированию исследуемого вещества и получению в итоге ошибочного результата.

По экономическим соображениям важно до госпитализации и до любых терапевтических вмешательств взять образцы плазмы или сыворотки и поместить их в банк сывороток. После установления диагноза, если нет нужды в исследовании биологического материала, и образец не нужен для исследований, он может быть изъят из банка сывороток или плазм, однако, в наличия патологического процесса (особенно опухоли) возможно повторное определение уровня исследуемых веществ или их комбинаций. Кроме того, исследуемый образец рекомендуется оставлять в банке сывороток с тем, чтобы при модификации наборов фирмой-поставщиком, можно было корректно продолжить мониторинг больного. Этот подход также может оказаться полезным, если появится новый маркер, отличающийся более высокой чувствительностью и специфичностью.

При медленном замораживании образуются кристаллы льда, которые разрывают молекулы, особенно белковые, поэтому для оптимальной стабильности вещества необходимо быстрое замораживание. Лучше всего замораживание проводить с самого начала в жидком азоте - в этой среде процесс замораживания идет намного быстрее и не сопровождается разрушением охлаждаемых веществ. Нет общих правил относительно размораживания, однако эксперименты показывают, что следует избегать теплового шока образцов. Размораживание следует производить медленно и постепенно. Некорректно переносить образец сразу же из –20 °С в комнатную температуру, особенно учитывая сезонные различия температур помещения. Важно избегать повторного замораживания образца, лучше предварительно разделить его на несколько пробирок, чтобы не было проблем в случае повтора анализа.

Размораживание и повторное замораживание повреждает практически все биологические пробы. Существует ошибочное мнение о том, что такое воздействие не влияет на тиреоидные и стероидные гормоны. Действительно, структура молекул этих гормонов лучше сохраняется в таких ситуациях. Однако следует помнить, что основной пул стероидных и тиреоидных гормонов циркулирует под “защитой” транспортных белков, которые, как и все другие белки, не выдерживают температурных перепадов и, разрушаясь, перестают “защищать” гормоны. Последние, освобождаясь, немедленно включаются в метаболическую цепь, что, в конечном итоге, ведет к искажению истинной картины.

Химическое окружение, в котором находится препарат, также является важным фактором. При хранении белков в растворах концентрация этих белков всегда должна быть больше 1 мг/мл. Известно, например, что разбавленная антисыворотка теряет активность намного быстрее, чем неразбавленная. Молекулы некоторых веществ биологического происхождения особенно легко разрушаются при окислении, поэтому их надо хранить в присутствии какого-нибудь восстановителя или в атмосфере, не содержащей кислорода.

Учитывая высокую скорость разрушения биологически активных веществ в органах и тканях, извлечение их и приготовление навесок анализа необходимо проводить в условиях постоянного охлаждения, хранить образцы только в замороженном состоянии. Предварительная обработка материала позволяет значительно увеличить его срок хранения. Например, после обработки гипофиза ацетоном первоначальный уровень гонадотропной активности сохраняется в нем при хранении в холодильнике без замораживания не менее года. Экстракты гормонов и чистые препараты сохраняются гораздо дольше, чем нативные образцы.

Известно, например, что в тканях гипоталамуса рилизинг-фактор к лютеинизирующему гормону подвергается сравнительно быстрому метаболическому разрушению. В то же время при хранении в стерильных условиях растворов синтетического ЛГ-рилизинг-гормонов в течение 18 месяцев при 40 °С он полностью сохранял свою биологическую активность и иммунореактивные свойства.

2.1.4. Получение, обработка и хранение мочи

Сбор мочи для определения биологически активных веществ проводят в течении заданных интервалов времени, чаще всего за сутки. На протяжении суток скорость образования и экскреции вещества с мочой колеблется весьма значительно, но эти колебания нивелируются при исследовании суточной порции мочи. В последнее время появляется возможность определять не в суммарной суточной моче и не суммарные вещества, а конкретные вещества и в любое время суток. Например, определение андрогена надпочечникового происхождения дегидроэпиандростерона-сульфата, или 17-окси-прегненолона, предназначенного для выявления адреногенитального синдрома.

Из рациона человека, по меньшей мере, за трое суток до сбора мочи
необходимо исключить продукты и лекарственные препараты, влияющие на
секрецию и метаболизм ряда веществ. Присутствие в моче некоторых
веществ эндогенного и экзогенного происхождения может искажать
результаты определения веществ. Сбор мочи производят в сосуды из дифферентного материала (стекла, пластмассы) во избежание разрушения вещества.

При сборе мочи также соблюдают определенные предосторожности, ли моча не содержит стабилизаторов, как, например, при определении стероидов и их метаболитов, она должна храниться до анализа в замороженном виде (как правило, не более 10 дней). Замороженную мочу со стабилизатором, предназначенную для определения катехоламинов, допускается хранить не более трех дней.

2.1.5. Получение экссудатов и транссудатов

Перед сбором экссудатов и транссудатов в посуду для сбора рекомендуется добавить 2 капли гепарина или на кончике ножа сухого цитрата натрия для предотвращения свертывания. Жидкость собирается в чистую сухую посуду и немедленно доставляется в лабораторию.

2.1.6. Сбор и хранение кала

Для исключения возможных погрешностей в диагностике запрещено доставлять кал после использования клизм, введения свечей, приема внутрь касторового и вазелинового масел и красящих веществ. Кал, взятый для исследования на дисбактериоз, должен быть срочно доставлен в лабораторию, или поставлен в холодильник при 4°С. При исследовании на простейшие запрещено сохранять кал в термостате или теплой воде, поскольку при этом происходит гибель и регенеративные изменения простейших.

2.1.7. Сбор и хранение мокроты

Мокроту рекомендуется собирать при кашле в сухую чистую посуду не более суток, так как при длительном хранении происходит разложение флоры и аутолиз элементов мокроты. Кратковременное хранение ее рекомендуется проводить в холодильнике при 4°С. Для бактериологических исследований мокрота не должна стоять более 4 часов с момента получения.

2.1.8. Сбор и хранение ликвора

Спинномозговая жидкость (ликвор), полученная при люмбальной пункции или пункции желудочков мозга, собирается в сухую чистую посуду и доставляется в лабораторию немедленно, так как при хранении в связи с разрушением клеточных элементов результат исследования может быть недостоверным.

2.2. Обработка лабораторной посуды

В специальных пособиях приводится много советов по тех лабораторных работ, поэтому мы ограничимся лишь некоторыми рекомендациями, имеющими существенное значение для постановки реакции и получения высококачественного результата в радиоиммунных и иммуноферментных методах диагностики. При работе с буферными системами, органическими растворителями и другими веществами, применяемыми для постановки реакции, особое внимание нужно обращать на чистоту реактивов. Вода для буферного раствора должна быть бидистиллированной и деионизированной. Органические растворители, как правило, подлежат очистке (например, эфир пропускается через колонку с оксидом алюминия) и двойной перегонке с дефлегматором (напр., при получении абсолютного этанола).

Лабораторная посуда должна быть тщательно обрабатывается механическими и химическими способами.

Приготовление моющего раствора:

на 1 л дистиллированной воды 20 г порошка типа "Лотос".

Приготовление хромовой смеси:

в фарфоровом стакане растворяют 50 г бихромата калия (K 2 Cr 2 O 7 ) в 100 мл воды. Раствор сливают в сосуд большего размера и добавляют (очень осторожно) 1 л серной кислоты (концентрированной).

Внимание! Добавлять серную кислоту в раствор, но не наоборот!

2.2.1. Обработка посуды с низкой радиоактивностью

Флаконы - снять надписи с крышек ватой, смоченной в спирте, снять крышки в коробку с надписью “грязные крышки”, слить из флаконов сцинтилляционную жидкость в сосуд для жидких радиоактивных отходов, под струей горячей воды прополоскать флаконы от толуола (до исчезновения запаха), загрузить в бак с моющим раствором, оставить на ночь. На следующий день промыть флаконы сначала под струей холодной воды (налить-вылить 10-15 раз), затем также под струей горячей воды и окончательно под струей дистиллированной воды. Сушить в сушильном шкафу при температуре 150-200 °С вниз горлышком.

Пробирки - снять надписи ватой, смоченной спиртом, промыть под струей горячей воды (налить-вылить 10-15 раз), высушить в термостате или сушильном шкафу при температуре до 150 °С, дать остыть и загрузить в (хромовую смесь на 2-3 часа, (БУДЬТЕ ПРЕДЕЛЬНО ОСТОРОЖНЫ!) , вынуть их из хромовой смеси и промыть как флаконы (см. выше).

Крышки - тщательно протираются ватой, смоченной спиртом (два тампона на крышку), высушиваются при комнатной температуре и хранятся в коробке с надписью “чистые крышки”.

2.2.2. Обработка посуды с высокой радиоактивностью

Флаконы - обрабатывать 96° спиртом: заполнить флакон спиртом, перелить спирт во второй флакон, затем в третий, . в десятый, слить в сосуд для жидких радиоактивных отходов. Процедуру повторить. Последующая обработка флаконов аналогична обработке флаконов с низкой активностью. Крышки загрузить в сосуд, залить ацетоном или 96° спиртом с полным погружением крышек, перемешать 3-5 мин, стеклянной палочкой, жидкость слить в емкость для радиоактивных отходов. Процедуру повторить. Разложить на фильтровальной бумаге в один слой и сушить в вытяжном шкафу. Хранить в коробке с надписью “чистые пробирки”.

Все вышеописанные работы проводить только в вытяжном шкафу при полном отсутствии открытого огня.

Для выполнения биохимических исследований в лаборатории посуда проходит определенный цикл обработки в соответствии с требованиями санитарно-гигиенических и противоэпидемических служб. При выполнении в лабораториях коагулологических исследований или проведения исследований определения ряда пептидных гормонов биологическими методами помимо обычной чистой стеклянной посуды используют силиконированную посуду для взятия и хранения крови и плазмы.

2.2.3. Силиконирование посуды

Силиконирование посуды осуществляют для предотвращения контаминации исследуемого образца со стеклом, в котором проводят химическую реакцию. Силиконирование тормозит активацию свертывания крови, предохраняя распад некоторых веществ (например, пептидных гормонов) при инкубации их со встряхиванием.

Стекло покрывается мономолекулярной пленкой силикона:

5% раствор дихлордиметилсилана в толуоле. Чистая сухая посуда заполняется раствором и сразу же выливается. Силиконирование проводят в вытяжном шкафу, затем проводят сушку посуды в сушильном шкафу 180°С в течение часа.

Раствор для силиконирования хранят в посуде с притертой пробкой
в вытяжном шкафу.

Использовать силиконированную посуду не более 5 раз, затем силиконирование необходимо повторить.

Е.Б. Лукоянычева–заведующая иммунологической лабораторией ГУЗ КОКБ.

Правила забора биологического материала для иммунологических исследований: Методические рекомендации / Авт.-составитель О.М.Луппова.- Кемерово: ГУЗ КОКБ ,2008.-25 стр.

Введение 4
Раздел 1. Общие правила забора биологического материала и оформления сопроводительных документов
Раздел 2.Технология забора крови из периферической вены для лабораторного исследования
Раздел 3.Правила взятия венозной крови с помощью закрытой системы (вакуумного шприца-контейнера)
Раздел 4.
Транспортировка образцов крови
Раздел 5.
Требование к маркировке пробирок
Раздел 6
Образец оформления пробирок и заполнения сопроводительных документов
Приложение № 1
Забор крови на иммунограмму
Приложение №2.
Забор крови на циркулирующий иммунный комплекс
Приложение №.3
Забор крови на криоглобулины
Приложение №.4
Забор крови на группу крови и резус принадлежность
Приложение №5.
Забор крови на реакцию Кумбса
Приложение №6
Забор крови на гемоконтактные гепатиты В и С (HBsAg, анти – HCV)
Приложение №7.
Забор крови на развернутый комплекс маркеров гепатитов
Приложение №8.
Забор крови на клещевой энцефалит, боррелиоз
Приложение №9.
Забор крови на антитела к антигенам описторхисов, лямблий, хеликобактеру
Приложение №10.
Забор крови на цитомегаловирус, токсоплазмоз, герпес
Приложение №.11
Забор крови на а/т к тироидной пероксидазе
Приложение №12
Забор крови на ВИЧ 23
Приложение № 4(образец заполнения)
Список литературы

Данное методическое пособие предназначено для медицинских сестер Кемеровской областной клинической больницы.

Методическое пособие поможет правильно произвести забор биологического материала и оформить сопроводительные документы.

Правильно произведенный забор биологического материала и правильно оформленные направления исключат ошибку на преаналитическом этапе исследования.

Формы сопроводительных документов составлены так, чтобы сократить время медицинской сестры, затрачиваемое на оформление направлений.

Необходимо, чтобы образцы крови были правильно взяты и вовремя доставлены в лабораторию. Нарушения, допущенные на преаналитическом этапе, могут повлиять на результат исследования и его дальнейшую интерпретацию.

Раздел 1.
Общие правила забора биологического материала и оформления сопроводительных документов

Перед забором крови пациенту следует сообщить:

1. На какой вид исследования будет проводиться забор крови.

2. Требования необходимые для данного исследования.

Порядок забора венозной крови

1. Исследование проводится утром натощак, последний прием пищи за 12 часов до взятия крови.

2. Исключение приема алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия крови.

3. Утренний прием лекарственных препаратов, лечебно-диагностических процедур (массаж, ЭКГ, физиотерапевческое лечение и др.) проводится после взятия крови.

5. Пациент перед процедурой должен находиться в покое, сидеть или лежать не менее 5 минут.

6. Продолжительность пережатия сосудов жгутом должна составлять не более 1 минуты.

7. Нельзя просить работать пациента кулаком и массировать предплечье по ходу вен.

Раздел 2
Технология забора крови из периферической вены для лабораторного исследования

подготовить на манипуляционном столе стандартный набор для забора крови из периферической вены, проверив целостность упаковок и сроки годности:

1. лоток для использованных материалов;

2. пробирки для крови;

3. упаковка с 2-мя стерильными салфетками (5х5см) или 4-5 шариками;

5. кожный спиртовой антисептик во флаконе с дозатором;

сделать необходимые надписи на пробирках;

оформить сопроводительные документы в лабораторию;

обеспечить удобное освещение;

помочь пациенту найти удобное положение;

разъяснить пациенту суть предстоящей процедуры, создавая атмосферу доверия, предоставляя возможность задать вопросы;

обработать руки спиртовым антисептиком;

вскрыть упаковки со стерильными материалами;

руку больного уложить в положении максимального разгибания, для чего под руку следует положить валик, имеющий влагостойкое покрытие.

наложить жгут на 10 - 15 см выше выбранной зоны, не нарушая ток крови;

выбрать вену для венепункции;

обработать место венепункции кожным антисептиком и дать высохнуть самостоятельно;

Не пальпируйте вену повторно!

надеть на стерильный шприц иглу;

снять с иглы защитный колпачок;

пальцами левой руки фиксировать кожу над веной;

ввести под кожу иглу срезом вверх под углом 30-40 0 ;

установить иглу параллельно вене и быстрым движением проколоть ее стенку;

иглу продвинуть немного вверх по длине вены;

набрать необходимое количество крови в шприц

- запрещается забор крови свободным кровотоком из иглы в пробирку, а также присоединение к игле нового шприца;

- для безопасного забора крови предпочтительно использовать вакуумный шприц-контейнер.

иглу извлечь из вены;

прижать место венепункции стерильной салфеткой на 2-3 минуты;

осторожно, предупреждая разбрызгивание крови, вылить содержимое шприца через иглу в одну или несколько пробирок.

Раздел 3
Правила взятия венозной крови с помощью закрытой системы (вакуумного шприца-контейнера)

Закрытые системы взятия венозной крови представляют собой новое поколение вакуумных шприцев - контейнеров с реактивами. Их использование имеет следующие преимущества перед традиционными способами:

полностью исключается контакт медперсонала с кровью на всех этапах взятия крови и ее транспортировки;

особо прочный пластик закрытых систем позволяет осуществить безопасную доставку крови на любые расстояния;

благодаря наличию широкого спектра пробирок с заранее добавленными реагентами для различных видов анализов (ЭДТА для гематологии, цитрат натрия для коагулогии, активатор свертывания для получения сыворотки), значительно облегчается работа медсестер и лаборатории. Международная цветовая маркировка предотвращает их не правильное применение;

уменьшается количество ошибочных анализов, связанных с неправильным взятием проб крови и неверным соотношением реагентов.

закручивающаяся крышка предотвращает "аэрозольный эффект" при открывании;

1. Надеть иглу на контейнер и закрепить легким поворотом по часовой стрелке. Провести пункцию вены.

1. Провести пункцию вены иглой. Благодаря защитной мембране кровь из иглы не вытекает.

2. Медленно оттягивая поршень, наполнить контейнер кровью. После заполнения кровью контейнер вместе с иглой вынуть из вены. Поршень зафиксировать в конечном положении до характерного щелчка. В случае взятия нескольких образцов крови, контейнер отсоединить. Иглу оставить в вене и на нее надеть следующий контейнер.

2. Создать вакуум в контейнере.
Для этого отвести поршень в конечное положение (до характерного щелчка) и отломить его

3. По окончании взятия крови, шток поршня обломить. Вы получаете транспортный контейнер с кровью и антикоагулянтом или готовую пробирку для сепарации сыворотки.

3. Насадить контейнер на иглу. Взятие крови осуществляется под действием вакуума. В этом случае вы также получаете транспортный контейнер с кровью и антикоагулянтом или готовую пробирку для сепарации сыворотки.

Транспортировка образцов крови

При транспортировке образца внутри лечебно-диагностического учреждения, пробирки с кровью должны находиться в контейнере, который в случае повреждения пробирки будет предотвращать разлитие крови.

Порядок доставки крови в лаборатории

Штативы с кровью поместить в герметичный контейнер;

наружные части контейнера двукратно с интервалом в 15 минут протереть дезинфицирующим средством (концентрация по режиму для вирусных гепатитов);

доставить контейнер в лабораторию;

вынимать образцы крови из контейнера только в перчатках!

после возвращения из лаборатории контейнер вновь двукратно с интервалом в 15 минут протереть дезинфицирующим средством (концентрация по режиму, предусмотренному для гемоконтактных вирусных гепатитов).

Требование к маркировке пробирок.

Маркировку пробирок и заполнение сопроводительных документов следует проводить аккуратно и четко.

Фамилию, имя, отчество пациента писать четко и разборчиво.

В направлении заполнять все графы.

Не допускается, чтобы этикетка на пробирке была размыта, порвана или плохо приклеена.

Читайте также: