Трипаносомозы верблюдов и лошадей

Обновлено: 13.05.2024

Су-ауру (трипаносомоз, казах., буквально — болезнь от воды, от су — вода и ауру — болезнь) — это трансмиссивная кровопаразитарная болезнь верблюдов, лошадей, ослов и собак, вызываемая трипаносомой Trypanosoma ninaekohlyakimovae.

Наиболее неблагополучными по су-ауру верблюдов и лошадей являются пастбища по берегам водоемов с зарослями тростника.

Сведения о возбудителе. Возбудитель – Trypanosoma evansi var ninaekohljakimovi. Локализуется она в плазме крови, лимфоузлах, внутренних органах, нервной системе. Движется оживленно, поступательно. Размеры в среднем 25 х 2 мкм. Размножается продольным делением на 2, 4 и 6 дочерних особей. Трипаносомы имеют, веретенообразное тело, напоминающее бурав. В цитоплазме имеются ядро, кинетопласт, базальное тело, от которого начинается жгутик. Далее жгутик продолжается снаружи клетки до ее переднего конца, где имеет свободную часть. Между жгутиком и телом имеется перепонка (ундулирующая мембрана).

Эпизоотологические данные. Изучена недостаточно. Переносчиками возбудителя является слепни рода Tabanus (только самки) и мухи-жигалки рода Stomoxys (самцы и самки). Передача возбудителей происходит механически, т.е. без какого-либо развития в организме насекомых. Трипаносомы легко проникают через поврежденные кожу и слизистые оболочки. Су-ауру постоянно регистрируется в Закавказье, Средней Азии и Казахстане. В России это заболевание отмечено в Красноярском и Алтайском краях, Омской, Читинской, Челябинской областях. Возбудитель передается при укусах слепней и мух–жигалок, а также при использовании необеззараженных хирургических и акушерских инструментов. Источниками инвазии служат больные животные и носители, причем носительство может длится более года. Неблагополучные пастбища прилегают к стоячим водоемам с зарослями тростника и кустарников, где скапливается много кровососущих насекомых. Острое течение болезни обычно совпадает с периодом лёта переносчиков, хроническое длится месяцами. Суррой болеют, в основном, верблюды и лошади всех возрастов, причем рабочие и чистокровные лошади болеют тяжелее. В табунном коневодстве в местах скопления слепней, одна больная лошадь может служить источником массового заражения. У ослов болезнь чаще протекает хронически, но у них периодически проявляется паразитемия. У крупного и мелкого рогатого скота клинические признаки выражены слабо, эти животные часто являются резервуарными хозяевами. Носителями возбудителя сурры являются многие дикие животные (волки, шакалы и др.), что позволяет считать заболевание природно-очаговым. Хищники, как правило, заражаются при поедании мяса инвазированных животных, однако собаки как источник заражения насекомых значения не имеют.

Патогенез. Трипаносомы в организме животных быстро размножаются в крови и проникают во все органы и ткани. При массовом размножении выделяют токсические продукты их жизнедеятельности — трипанотоксины, которые и воздействуют на нервную и сосудистую системы больного организма, вызывая нарушение обменных процессов, а последнее и приводит к лихорадке и истощению животных. Организм в борьбе с возбудителем вырабатывает антитела — трипанолизины, которые и вызывают гибель трипаносом.

Иммунитет. После переболевания животные приобретают нестерильный иммунитет продолжительностью до года.

Клинические признаки. У лошадей инкубационный период 2- 3 недели. У верблюдов заболевание протекает чаще всего подостро или хронически. При подостром течении болезни характерны высокая температура тела (непостоянная), понижение аппетита, вялость, быстрая утомляемость, потение. Животные больше лежат, отстают от здоровых при перегоне, худеют, волосяной покров теряет блеск, местами выпадает. Лимфатические узлы увеличены. Видимые слизистые оболочки вначале гиперемированы, из носа и глаз слизистое истечение, развивается конъюнктивит, кератит, нередко и понос. Самки абортируют в первые месяцы беременности.

В местах распространения су-ауру верблюдов болеют трипаносомозом и лошади. Болезнь у них протекает с явлениями перемежающейся лихорадки, отеками в области губ, ушей, век, половых органов и подгрудка. В тяжелых случаях наблюдают отеки конечностей и нервные расстройства в виде возбуждения или сильного угнетения.

Патологоанатомические изменения. Трупы павших животных истощены, наблюдают отёки в разных частях тела. Слизистые оболочки анемичны. Лимфатические узлы увеличены. Селезенка увеличена, на разрезе темно-вишневого цвета. Мышца сердца бледная. Кровь плохо свертывается. На эпи — и эндокарде кровоизлияния. Слизистая оболочка кишечника набухшая, местами кровоизлияния, в просвете мало слизи.

Диагноз ставят на основании комплексных исследований. Учитывают эпизоотологические данные, клинические признаки, а также проводят микроскопические исследования крови (мазок или раздавленную каплю) для определения в ней живых подвижных трипаносом. Если их обнаружить не удается, от лошадей берут кровь и направляют в лабораторию для исследования РСК, а у верблюдов реакцией агглютинации, кроме того, также ставят формалиновую пробу.

При дифференциальной диагностике у лошадей имеют в виду случную болезнь, нутталлиоз, инфекционную анемию лошадей и эпизоотический энцефалит. У верблюдов — туберкулёз и гельминтозы.

Лечение. Больным верблюдам внутривенно вводят дважды наганин в дозе 0,03 г/кг в 10%-ном разведении на изотоническом растворе натрия хлорида. Интервал введения препарата семь дней. Слабым верблюдам дозу препарата рекомендуют назначать в два приема с интервалом в 24 ч.

Лошадям и собакам наганин вводят внутривенно в дозе 0,01- 0,015 г/кг в 10%-ном разведении. Через 20 дней инъекцию повторяют. При недостаточном эффекте рекомендуют азидин в дозе 3,5 мг/кг в виде 7%-ного раствора на 5%-ном растворе глюкозы внутримышечно, двукратно с интервалом 24 часа. Параллельно животным применяют сердечные средства и витамин В12. При лечении лошадей наганином им обязательно рекомендуют проводку для предупреждения развития пододерматита.

Профилактика. В стационарно неблагополучных хозяйствах всем животным с профилактической целью вводят наганин (с появлением кровососущих насекомых). Через полтора месяца введение препарата повторяют. Регулярно, два раза в год (зимой и в середине лета), проводят диагностические исследования животных на трипаносомоз.

Клинические признаки. Инкубационный период равен 2-3 неделям. Су-ауру протекает в острой, подострой и хронической формах. У больных животных отмечают лихорадку (40-41°) перемежающего типа, уменьшение аппетита в периоды подъема температуры, вялость, сильную потливость, увеличение лимфатических узлов, анемичность слизистых оболочек, истечение из носовых отверстий и глаз, исхудание, отеки, нервные явления (резкое угнетение или возбуждение, парезы задней части тела). У больных наблюдается гелиотропизм (поворачивание головы к солнцу). При отсутствии ветеринарной помощи падеж животных может быть высоким (до 50%).

Диагноз. Для установления диагноза на су-ауру используют клинические (отеки) и эпизоотологические данные (заболевание животных в период лёта кровососущих насекомых), серологические (формалиновая реакция у верблюдов и РСК у лошадей), микроскопические (исследование под микроскопом мазков крови) и биологические методы (заражение лабораторных животных с последующим исследованием их крови в течение 25-30 дней).

Для постановки формалиновой реакции к 1 мл сыворотки крови больного верблюда добавляют две капли неразведенного формалина. После смешивания содержимого в пробирке ее ставят в термостат на одни сутки (температура 36-38°). При положительной реакции жидкость в пробирке приобретает желеобразную консистенцию (не вытекает из пробирки). При отрицательной реакции содержимое пробирки жидкое (легко выливается из пробирки). Положительная формалиновая реакция должна быть подтверждена микроскопически. Су-ауру необходимо дифференцировать от случной болезни, которая регистрируется в виде спорадических случаев во всех широтах: возбудитель болезни обнаруживается в соскобах со слизистой-оболочки половых органов, лабораторные животные не заражаются.

Лечение. Лошадям применяют наганин внутривенно (0,01-0,015/кг в 10%-ном растворе). Верблюдам технический наганин можно вводить внутривенно в повышенной дозе (0,06-0,07 на 1 кг веса). Эффективными средствами также являются фурациллин в дозе 0,1-0,15 на 1 кг веса животного в форме водной суспензии внутрь и антрацид - 0,01 на 1 кг веса животного в водной суспензии подкожно.

Профилактика. Необходимо уничтожать кровососущих насекомых, изолировать трипанозомоносителей от слепней в неблагополучных хозяйствах, подвергать химиопрофилактической обработке верблюдов и лошадей наганином, стерилизовать иглы во время инъекций лечебных препаратов и прививок, утилизировать трупы животных, павших от су-ауру.

от 6 сентября 1994 года N 13-7-2/150

Методические указания по лабораторным исследованиям на трипаносомозы лошадей, верблюдов, ослов, мулов и собак

(с изменениями на 27 января 1997 года)

Документ с изменениями, внесенными:

УТВЕРЖДАЮ
Заместитель начальника
Департамента ветеринарии
В.М.Авилов

1. Общие положения

1.1 Трипаносомозы (су-ауру, случная болезнь) - протозойные болезни животных, протекающие преимущественно хронически.

Су-ауру вызываются Trypanosoma evansi поражает верблюдов, лошадей, ослов, мулов и собак. Заболевание сопровождается анемией, увеличением лимфатических узлов, особенно шейных, отеком головы и нервными явлениями.

Случная болезнь вызывается Trypasoma equiperdum и характеризуется появлением отеков половых органов, язв на коже, парезом и параличом лицевых и крестцовых нервов. Болеют лошади, ослы, мулы.

1.2. Диагноз на трипаносомозы ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований (на случную болезнь - микроскопического, серологического; на су-ауру -микроскопического, биологического, серологического и формалиновой реакции).

1.3. В лаборатории для исследования направляют:

на су-ауру - тонкие мазки крови периферических сосудов (уха, хвоста, венчика) от подозреваемого в заболевании животного или сердце, часть печени, селезенку, лимфатические узлы от павшего. Исследование крови в раздавленной капле можно проводить в хозяйстве: на случную болезнь - соскобы с примесью крови из различных мест слизистой оболочки влагалища, мочеиспускательного канала, сперму, экссудат из надрезов отеков и бляшек.

Соскобы из различных мест слизистой оболочки уретры берут с помощью уретральной ложки. Для этого жеребца фиксируют и вводят внутримышечно в области крупа рометар в дозе 7,5 куб.см на 100 кг массы тела. Через 7-10 мин вводят уретральную ложку на глубину 5-6 см и делает 3-4 возвратно-поступательных движения по стенке уретра. После чего уретральную ложку осторожно извлекают, опускают материал в пробирку физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывают резиновой пробкой.

Сперму от жеребцов получают на искусственную вагину, переливают в стерильные пробирки по 2 куб.см и закрывают пробками.

Соскобы со стенок влагалища берут уретральной ложкой через влагалищное зеркало. Материал осторожно опускают в пробирку с 2 см физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывают пробкой. Экссудат из надрезов отеков и бляшек собирают шприцем, переносят в пробирку и закрывают пробкой.

Для серологического исследования направляют 1-2 см сыворотки крови, нативной или консервированной 5%-ным раствором фенола (1 капля на 1 см сыворотки) или сухой борной кислотой (2-4% к объему); для биологического - гепаринированную (5 Ед гепарина на 1 куб.см крови) или цитрированную (1 капля 6%-ного водного раствора лимонно-кислого натрия на 1 куб.см крови).

Мазки упаковывают в чистую бумагу, патологический материал во влагонепроницаемую тару.

1.4. Патологический материал доставляют в лабораторию в термосе со льдом не позднее 4 ч, кровь и сыворотку - не позднее 2 дней с момента взятия.

2. Микроскопическое исследование

2.1. При исследовании на месте каплю крови периферических сосудов наносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют в раздавленной капле под средним увеличением микроскопа в затемненном поле зрения.

Пробирки с соскобами, экссудатом и спермой помещают в термостат при 37°С на 15-20 мин. Затем берут 3-4 капли из разных слоев содержимого пробирки и готовят препараты, как указано выше.

При микроскопии обнаруживают живых трипаносом по колебанию ундулирующей мембраны.

2.2. Из доставленных соскобов, экссудата, спермы, каждого органа делают по 2 тонких мазка и высушивают на воздухе.

Мазки крови периферических сосудов, из внутренних органов, соскобов экссудата и спермы фиксируют этиловым ректификованным спиртом массовой долей 96% в течение 20-25 мин, окрашивают по Романовскому 30-50 мин (краску Гимза используют в разведении 1:20), промывают дистиллированной или водопроводной водой рН 7,0-7,2 до исчезновения следов краски на фильтровальной бумаге, высушивают и исследуют под иммерсионной системой микроскопа.

При микроскопии необходимо учитывать, что трипаносомы вызывающие су-ауру и случную болезнь, морфологически не дифференцируются, имеют веретенообразную форму, заостренную с переднего и слегка округленную с заднего конца. Цитоплазма трипаносом окрашивается в синевато-фиолетовый цвет, ядро - в красный, кинетопласт и жгутик - в розовый (интенсивность окрашивания зависит от времени окраски, качества краски).

3. Биологическое исследование

3.1. Заражение лабораторных животных проводят в случае получения отрицательных результатов микроскопического исследования на су-ауру и наличии клинических признаков у больного животного, а также при необходимости дифференциации су-ауру от случной болезни.

З.2. Для заражения используют нативную, консервированную кровь или суспензию из паренхиматозных органов.

Кусочки органов массой 1,0-1,5 г измельчают и тщательно растирают в стерильной ступке с 1-2 куб.см физиологического раствора. Для заражения суспензию разводят стерильным физиологическим раствором рН 7,0-7,2 в соотношении 1:10.

3.3. Консервированную или нативную кровь вводят подкожно в области спины или внутриутробно в нижней трети живота, суспензию из паренхиматозных органов - подкожно в дозе 0,4 куб.см 3 белым мышам массой 12-15 г.

З.4. Наблюдение за зараженными белыми мышами ведут в течение 10 дней.

3.5. Гибель белых мышей наступает через 3-4 дня. Из паренхиматозных органов павших животных делают тонкие мазки, окрашивают как указано в п.2.2 и исследуют на наличие возбудителя су-ауру, так как возбудитель случной болезни в организме белой мыши не размножается.

При отсутствии гибели зараженных животных в указанные сроки, от них, начиная с 5 дней после заражения, ежедневно исследует кровь, взятую из хвостовой вены, на наличие возбудителя су-ауру в раздавленной капле или окрашенном препарате.

4. Серологическое исследование

4.1. Исследование сывороток крови лошадей, ослов, мулов и собак проводят в реакции связывания комплемента (РСК), верблюдов - в формалиновой реакции (ФР).

4.2. Постановка реакции связывания комплемента (РСК).

4.2.1. Компоненты реакции и подготовка их к работе.

- антиген трипаносомный жидкий или лиофилизированный, используют в рабочем разведении, указанном на этикетке;

- комплемент - нативная, консервированная или сухая (изготовленная на биофабрике) сыворотка крови морской свинки. При использовании сухого комплемента содержимое необходимого количества ампул растворяют в физиологическом растворе и сливают в одну пробирку. Полученный раствор комплемента используют для титрования (в разведении 1:20) и главного опыта;

- гемолитическая сыворотка (гемолизин) с титром не ниже 1:1000, которую используют в реакцию в удвоенном титре. Например, при титре гемолизина 1:1000 его берут в реакцию в разведении 1:500. Гемолизин титруют 1 раз в 3 мес по общепринятой схеме:

испытуемая, трипаносомная и нормальная сыворотки, разведенные для главного опыта и титрования комплемента, инактивируют при 60-62 гр.С (сыворотки ослов, мулов - при 64-65 гр.С) - 30 мин;

- 2,5%-ная взвесь эритроцитов барана, отмытых физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об/мин в течение 10-15 мин до полной прозрачности надосадочной жидкости.

Перед постановкой реакции готовят разведение каждого компонента в соответствии с указаниями на этикетках и в количестве, необходимом для всего опыта, включая титрование.

В процессе работы не допускается дополнительно разводить компоненты, смешивать их с ранее разведенными и использовать в реакции без титрования.

Физиологический раствор - 0,85%-ный раствор химически чистого хлорида натрия на дистиллированной воде рН 7,0-7,2 готовят в день постановки реакции и кипятят в течение 5 мин.

Гемолитическую систему готовят путем смешивания равных объемов 2,5%-ной взвеси эритроцитов и гемолизина в удвоенном титре, выдерживают ее при комнатной температуре в течение 20-30 мин.

4.2.2. Титрование комплемента в гемолитической системе проводят при получении каждой новой серии сухого комплемента или при использовании нативной сыворотки крови морской свинки.

4.2.3. Титрование комплемента в бактериолитической системе проводят перед каждой постановкой реакции на 3 сыворотках: позитивной (трипаносомной), негативной и одной из опыта. Сыворотки, разведенных физиологическим раствором 1:5, инактивируют, как указано в п.4.2.1, и разливают каждую 2 ряда пробирок штатива Флоринского по 0,2 куб.см. Комплемент титруют в разведении 1:20, начиная о дозы 0,02 куб.см и до 0,2 куб.см с интервалом 0,02 куб.см.

Для более точной дозировки рекомендуется приготовить в дополиительном ряду пробирок необходимые разведения комплемента в 10-кратных объемах и аппаратом Флоринского с пипетками объемом 0,2 куб.см перенести разведения комплимента в ряды с сыворотками для титрования.

Порядок внесения компонентов и режим титрования указаны в таблице 1 на примере негативной сыворотки.

Титром комплемента в бактериолитической системе считают минимальное количество его, вызывающего полный гемолиз эритроцитов в пробирках с негативной и испытуемой сыворотками с антигеном и без антигена, а также с трипаносомной сывороткой без антигена, при полной задержке гемолиза в пробирках с трипаносомной сывороткой и антигеном (в таблице 1 титр равен 0,12).

Для главного опыта берут дозу комплемента, полученную при титровании.

4.2.4. Общее количество комплемента для главного опыта определяют по формуле:

где Х - количество комплемента для главного опыта;

Т - титр комплемента в бактериологической системе;

П - количество пробирок в опыте;

20 - разведение комплемента при титровании.

Например, в опыте 100 пробирок, титр комплемента 0,12, расчет его на опыт:

куб.см

Необходимое количество разведенного комплемента для реакции равно 20 куб.см (0,2 х 100), следовательно, к 0,6 куб.см основного разведения комплемента нужно добавить 19,4 куб.см физиологического раствора.

4.2.5. Постановка главного опыта.

Реакцию ставят в объеме 1,0 куб.см по 0,2 куб.см каждого компонента.

Испытуемые сыворотки исследуют в разведении 1:5 и 1:10 с антигеном и 1:5 без антигена (контроль). Для этого в первую пробирку вносят 0,1 куб.см сыворотки и добавляют 0,4 куб.см физиологического раствора (разведение 1:5). Из первой пробирки переносят 0,2 куб.см во вторую и 0,1 куб.см - в третью, куда добавляют 0,1 куб.см физиологического раствора (разведение 1:10) и инактивируют как указано в п.4.2.1.

Таблица 1

Титрование комплемента в бактериологической системе.

(на примере негативной сыворотки)

Затем в пробирки второго и третьего рядов вносят по 0,2 куб.см трипаносомного антигена в рабочем разведении, в пробирки первого ряда - по 0,2 куб.см физиологического раствора, во все пробирки - по 0,2 куб.см комплемента в установленном титре.

Реакцию помещают в водяную баню на 20 мин при 37-38 гр.С, затем, в каждую пробирку вносят по 0,4 куб.см гемолитической системы и вновь выдерживают в бане при том же режиме.

При массовых исследованиях допускается постановка реакции в одной пробирке с разведением сыворотки 1:5, для чего с 0,05 куб.см сыворотки аппаратом Флоринского вносят 0,2 куб.см физиологического раствора. Все сыворотки, давшие положительный или сомнительный результат, подлежат переисследованию в 3 пробирках, как указано выше.

4.2.6. Контроли главного опыта:

позитивная сыворотка в разведениях от 1:5 до ее предельного титра с антигеном и в разведении 1:5 без антигена, негативная - в тех же разведениях, что и испытуемые;

антиген в двойной дозе без сыворотки (на антикомплементарность);

антиген в двойной дозе без сыворотки и комплемента (на гемотоксичность).

4.2.7. Учет и оценка результатов реакции.

Результаты реакции учитывают дважды, сразу после выдержки в водяной бане и на следующий день при хранения реакции в холодильнике.

СЛУЧНАЯ БОЛЕЗНЬ ЛОШАДЕЙ, МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ, ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Актуальность и практическая значимость работы. Случная болезнь лошадей (дурина) инвазионная болезнь лошадей, ослов, мулов, протекает преимущественно хронически. Возбудитель — Trypanosoma equiperdum . По данным МЭБ, случную болезнь, вызываемую T. еquiperdum , регистрируют в Южной Африке, на юге Запад ной Европы, в Южной Америке, КНР, Среднем Востоке, Средней Азии (Киргизии, Узбекистане) и в России (Сибири). У лошадей случная болезнь протекает наиболее тяжело с высоким уровнем смертности (30…50 %) [12].

Трипаносомозы лошадей и верблюдов по данным ряда исследователей имеют широкое распространение в Казахстане, наносят значительный экономический ущерб, препятствуют развитию племенного дела в коневодстве [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11].

Несмотря на большие усилия научных и практических работников, результаты борьбы с трипаносомозом лошадей во многих случаях остаются неудовлетворительными [9, 12, 13].

Одной из главных причин такого положения является несовершенность методов диагностики болезни. Диагностика является основным звеном в цепи построения научно-обоснованного комплекса мероприятий по борьбе с трипаносомозом [9, 17]. Диагностика трипаносомозов животных трудоемкая работа. Иногда в природных условиях клинические признаки трипаносомоза у животных не проявляется, а предлагаемые серологические реакции при некоторых условиях не дают положительных результатов [2,4].

По международным правилам, ввоз лошадей из неблагополучных по случной болезни стран разрешен только при условии исключения у них данного трипаносомоза. С этой целью, в основном, применяют серологические тесты (чаще РСК и дополнительно ИФА) микроскопию и биопробу на лабораторных животных [9, 11,12,13] .

По данным Кодекса международного эпизоотологического бюро (МЭБ) во всем мире для диагностики трипаносомоза лошадей применяют реакцию связывания комплемента, а в качестве специального теста применяют методы иммунофлуоресценции и ИФА [8].

Наша страна является экспортером и импортером чистокровных лошадей, поэтому диагностика трипаносомоза приобретает особую значимость. Распространенность случной болезни лошадей в Казахстане с каждым годом растет. Причиной такого положения является завоз чистокровных лошадей из зарубежных стран, в частности, из России, без диагностических исследований.

Взятую в коневодческих хозяйствах кровь для серологических реакций от лошадей с явно выраженными клиническими признаками трипаносомоза (отеки половых органов; паралич губ, ушей, зада; керато-конъюнктивит, талерные бляшки, характерная депигментация) исследуют в РСК с использованием российского антигена, которого нет в достаточных количествах в республике, а в некоторых регионах вообще не имеется в арсенале ветеринарных специалистов. Положительно реагирующих на трипаносомоз (случную болезнь) лошадей согласно Ветеринарного законодательства направляют на убой, при этом хозяйству и частному лицу наносится огромный экономический ущерб, так как животные обычно бывают приобретены за значительное количество иностранной валюты.

В работе использованы общепринятые клинические и паразитологические методы исследований. При решении поставленных на разрешение вопросов учитывались природно-климатические особенности, условия ведения коневодства в хозяйстве, породные качества исследуемых лошадей и другие факторы.

В табунах животных подвергали клиническому обследованию с акцентированием внимания на частоту пульса и дыхания, температурную реакцию, характер окрашивания видимых слизистых оболочек, наличие отеков, паралича лицевого нерва, отвисание уха, керато-конъюнктивит, талерные бляшки .

Диагноз подтверждали микроскопическими исследованиями. Материалом для микроскопического исследования служили соскобы со слизистой оболочки вагины (кобылы) и мочеиспускательного канала (жеребца), а также экссудативные выделения из отеков и бляшек.

Соскобы из различных мест слизистой оболочки уретры брали с помощью уретральной ложки. Для этого жеребца фиксировали и вводили внутримышечно в области крупа рометар в дозе 7,5 см 3 на 100 кг массы тела. Через 7-10 мин вводили уретральную ложку на глубину 5-6 см и делали 3-4 возвратно-поступательных движения по стенке уретры. После чего уретральную ложку осторожно извлекали, опускали материал в пробирку физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывали резиновой пробкой.

Соскобы со стенок влагалища брали уретральной ложкой через влагалищное зеркало. Материал осторожно опускали в пробирку с 2 см 3 физиологического раствора рН 7,0-7,2 и закрывали пробкой.

Экссудат из надрезов отеков и бляшек собирали шприцем, переносили в пробирку и закрывали пробкой.

Материал должен содержать некоторое количество крови. Экссудативные выделения из отеков и бляшек брали путем проколов кожи полой иглой или при помощи неглубоких надрезов кожи скальпелем.

Для серологического исследования использовали нативную или консервированную сухой борной кислотой (2-4% к объему). Отрицательный результат микроскопического исследования не может опровергнуть положительных результатов по РСК и клинического исследования.

Пробирки с соскобами и экссудатом помещали в термостат при 37 °С на 15-20 мин. Затем брали 3-4 капли из разных слоев содержимого пробирки и просматривали в темном поле микроскопа. При микроскопии обнаруживали живых трипаносом по колебанию ундулирурщей мембраны.

Из доставленных соскобов, экссудата каждого органа делали по 2 тонких мазка и высушивали на воздухе.

Мазки соскобов и экссудата фиксировали этиловым ректификованным спиртом массовой долей 96 % в течение 20-25 мин, окрашивали по Романовскому 30-50 мин (краску Гимза используют в разведеиии 1:20), промывали дистиллированной или водопроводной водой рН 7,0-7,2 до исчезновения следов краски на фильтровальной бумаге, высушивали и исследовали под иммерсионной системой микроскопа.

При микроскопии возбудитель су-ауру имеет веретенообразную форму, заостренную с переднего и слегка округленную с заднего конца. Цитоплазма трипаносом окрашивается в синевато-фиолетовый цвет, ядро - в красный, кинетопласт и жгутик - в розовый (интенсивность окрашивания зависит от времени окраски, качества краски).

Кровь для РСК брали обычным способом (из яремной вены). Отрицательные результаты при РСК не могут опровергнуть положительных результатов по клинике и микроскопическому исследованию.

Исследовали неконсервированные сыворотки, при необходимости позднего исследования сыворотки консервировали, для длительного хранения сыворотки замораживали.

Примечание. Лошади, больные су-ауру, дают положительные результаты по РСК на случную болезнь. Для дифференциальной диагностики пользуются: исследованием периферической крови (из уха) и прививкой крови белым мышам. При су-ауру трипанозомы в периферической крови обнаруживаются легко, белые мыши заражаются и возможна перепрививка от одного вида лабораторных животных другому. Возбудитель случной болезни в периферической крови лошадей и ослов не обнаруживается, материалом от больных белые мыши заражаются в виде исключения, перепрививка другим белым мышам обычно невозможна.

Просмотр мазков проводили по линии Меандра в 200 п.з. микроскопа, определяли среднюю зараженность животных в процентах.

Подбор лабораторных и сельскохозяйственных животных для проведения экспериментов проводился по общепринятой методике, в основе которой лежат требования методик биологического эксперимента. Затем формировали опытные и контрольные группы по принципу аналогов, т.е. по породности, возрасту, весу, упитанности, интенсивности роста и продуктивности. Подопытных и контрольных животных во все периоды содержали в одинаковых условиях ухода, кормления, водопоя, содержания.

Лабораторных животных (кроликов) заражали интратестикулярно биологическим материалом, содержащим живых трипаносом, в дозе 10 см 3 в каждый тестикул. Начиная с 3-его дня после заражения за животными вели клинический контроль, учитывая состояние животного, а также микроскопический контроль за появлением и нарастанием паразитемии, исследуя интратестикулярную жидкость.

Материалом для получения трипаносомного антигена служил тестикулярный экссудат кроликов. Далее полученный штамм поддерживали на белых крысах и морских свинках с перезаражением 2 раза в месяц. Затем заражали собак путем внутрибрюшинного введения в среднюю треть живота вблизи белой линии живота, вводя 40 – 50 см 3 цитратной крови (сборной крови от 4 – 5 крыс), в зависимости от размеров собаки.

На 2 - 3 день заражения у собак в периферической крови появляются трипаносомы, количество которых периодически нарастает или уменьшается. Собак обескровливали в момент первого накопления трипаносом, кровь собирали в широкий сосуд с 2 %-ным цитратом натрия на физиологическом растворе при постоянном помешивании стеклянной палочкой, из расчета 1 часть крови и 2 части раствора.

Центрифугирование производили в предварительно прокипяченных стаканчиках емкостью 80 – 100 мл в течение 15 – 20 минут при 3000 об/мин. В результате центрифугирования в стаканчике образуется три слоя: верхний – прозрачный, желтоватый, состоящий из плазмы и цитрата; нижний – форменные элементы крови, а на границе между ними – средний, в виде толстой рыхлой массы белого цвета, состоящий из трипаносом (рисунок 6).

Верхний слой сливали в банку, а трипаносомозную массу вынимали при помощи стеклянной палочки или шпателя и переносили в отдельную стерильную посуду. Всю собранную трипаносомную массу отмывали трехкратно в физиологическом растворе по 10 минут при 5000 об/мин.

Результаты исследований. Распространенность среди лошадей Северо-Казахстанской области случной болезни изучали клиническими и микроскопическими исследованиями в следующих коневодческих фермах:

Диагноз подтверждали микроскопическими и серологическими исследованиями. Материалом для микроскопического исследования служили соскобы со слизистой оболочки вагины (кобылы) и мочеиспускательного канала (жеребца), а также экссудативные выделения из отеков и бляшек. Соскобы брали уретральной ложкой (жеребцы) или при помощи шпателя и предметного стекла (кобылы). Всего просмотрено 55 мазков из соскобов половых органов лошадей.

Результаты проведенных исследований показали определенную зараженность животных простейшими – трипаносомами вида Trypanosoma e q uiperdum из класса Zoomastigophora .

На рисунке 1 представлены результаты исследований лошадей на случную болезнь.

Рисунок 1. Распространенность случной болезни (трипаносомоза) у лошадей

Таким образом, из результатов клинических, микроскопических и серологических исследований лошадей, проведенных в некоторых хозяйствах Северо-Казахстанской области, видно, что отмечается зараженность трипаносомами вида Trypanosoma equiperdum из класса Zoomastigophora . Поэтому необходим постоянный мониторинг эпизоотической обстановки по случной болезни лошадей.

Лечение больных лошадей. За время прохождения практики мною было исследовано 163 лошади, проведено лечение 4 больных лошадей.

Животным вводили препарат Хинотрипгло подкожно или внутримышечно в дозе 1 мл на 40 кг на массы тела в виде 10%-ной суспензии разведенной на физиологическом растворе, приготовленной непосредственно перед применением. Повторно препарат вводили в той же дозе через 2-3 месяца с профилактической целью. Все лошади выздоровели.

Три лошади, которым лечение своевременно не было проведено, были вынужденно забиты (Таблица 1).

Таблица 1 - Результаты лечения лошадей препаратом Хинотрипгло при случной болезни

1 Тюменский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации, Тюмень, Россия.

Введение. Трипаносомы — род паразитических одноклеточных семейства трипаносомовые, которые паразитируют на различных хозяевах и вызывают многие заболевания, среди которых сонная болезнь и болезнь Шагаса. Естественным резервуаром трипаносом, в основном, являются млекопитающие, переносчиком — насекомые. Трипаносомы – гетеротрофные паразитические простейшие, которые неспособны длительное время находиться вне организма хозяина, поскольку их паразитизм облигатен. Для человека является крайне опасным паразитом, поскольку может спровоцировать летальный исход.

Систематика.

Тип: Protozoa (Одноклеточные или простейшие животные)

Класс: Flagellata (Жгутиковые)

Морфологическиехарактеристики. Одноклеточный организм со средними размерами от 12 до 70 мкм. Органеллой движения является жгутик. Если трипаносомы паразитируют в теле основного хозяина, жгутик может отсутствовать, на этапе жизни в промежуточном – присутствует. Строение паразита достаточно простое: прочная гликопротеиновая оболочка окружает цитоплазму тела, в которой находится одна митохондрия (даёт энергию для движения жгутика) и одно ядро, несущие в себе генетическую информацию. Выделяют различные клеточные формы трипаносом:

амастиготная форма — овальная или круглая, обычно встречается без жгутика;

промастиготная форма — продолговатой формы, кинетопласт и кинетосома находятся в передней части клетки;

эпимастиготная форма — продолговатой формы, кинетопласт и кинетосома находятся в задней части клетки;

трипомастиготная форма — кинетопласт и кинетосома находятся сзади ядра, однако, в отличие от предыдущей формы, ундулирующая мембрана широкая и длинная;

инвазивная или метацикличная форма — характерное отсутствие свободного жгутика.

Род трипаносом интересен наличием механизма защиты от иммунной системы хозяина. После проникновения в организм и обнаружения иммунной системой у трипаносом включаются гены, ответственные за синтез гликопротеинов, в результате находящиеся на поверхности мембраны гликопротеины сменяются на другие, и иммунная система не может распознать паразитов, что дает им больше времени для размножения.

Жизненные циклы. Практически у всех трипаносом наблюдается смена хозяев в жизненном цикле, а, следовательно, и изменение морфологических форм, которое образовалось в следствии приспособлений к условиям внутренней среды организма разных носителей. Так, они могут принимать формы, свойственные близким родам Leishmania, Leptomorias, Crithidia. Исходная форма – так называемая промастиготная или лептомонадная, продолговатой формы, у неё кинетопласт и кинетосома находятся в передней части клетки, ундулирующая мембрана отсутствует и жгутик остается свободным. Наиболее близко к собственно трипаносомной форме подходит форма критидии или эпимастигинная форма, отличающаяся тем, что у нее блефаробласт расположен впереди ядра, соответственно, ундулирующая мембрана оказывается более короткой. Встречается так же амастигинная форма, которая теряет жгутик и ундулирующую мембрану, она оставляет за собой от первоначальной трипаносомной формы только кинетопласт и базальное тельце, принимает круглую или овальную форму.

Размножение трипаносом происходит путем деления. Половой процесс для трипаносом не установлен. Делению ядра обычно предшествует деление блефаробласта, причем жгут остается за одной из половин базального зерна с примыкающей половиной парабазального тела, а от второй половинки блефаробласта начинает отрастать новый жгут, идущий параллельно старому и скоро достигающий той же длины. Деление ядра происходит митотическим путем. За ним следует продольное расщепление тела. В некоторых случаях наблюдается ряд повторных делений ядра и блефаробласта с образованием множественных особей. В разные периоды инфекции размножение трипаносом протекает с разной интенсивностью.

У трипаносом довольно сложный жизненный цикл. Основным переносчиком являются беспозвоночные. Преобладает трансмиссивный путь передачи возбудителя. Но известны несколько видов передачи трипаносом:

1) контактный путь – непосредственная передача от животного к животному при контакте слизистых оболочек;

2) контаминативный путь – через поедание животным промежуточного хозяина или испражнений последнего, содержащих вирулентные стадии трипаносом;

3) трофичнокулятивный путь – через укус промежуточного хозяина, вводящего в кровь животного заразные стадии трипаносом. Промежуточное положение между вторым и третьим способом составляет заражение через внедрение в ранку.

Например, трипаносома вида Trypanosoma rotatorium, паразитирующая в крови лягушек (прудовой – Rana esculenta, и травяной R. temporaria), переноситься пиявкой Hemiclepsis marginata, а T. cruzi – триатомовыми клопами.

Рассмотрим жизненный цикл на примере возбудителя сонной болезни – T. bruceigambiense. Резервуарным хозяином трипаносомы является африканская антилопа, в её крови трипаносома находится в трипомастиготной форме. После того, как резервуарного хозяина кусает муха цеце (Glossina palpalis), у него в желудке (а после и в слюнных железах), паразит размножается в эпимастиготной стадии. В кровь укушенного мухой человека попадает возбудитель, где снова возвращается в трипомастиготную форму. Трипаносомы живут в плазме крови, лимфе и спинномозговой жидкости, вызывая сонную болезнь. Но, несмотря на это, паразитизм трипаносом не обязательно имеет такие тяжелые последствия для хозяина, так T. lewisi свободно сживается с крысами, не нанося им значительного ущерба, а T. melophagium – с овцами. У трипаносом сложный жизненный цикл, что в свою очередь, в эволюционном процессе, привело к появлению ундулирующей мембраны и кинетопласта.

Виды трипаносом, опасные для жизни человека.

Trypanosoma brucei gambiense. Является самой распространённой причиной возникновения сонной болезни. Распространена она в основном на территории Западной Африки. Оба вида Trypanosoma brucei переносятся мухами из семейства Glossinidae, более известными как мухи Цеце.

Trypanosoma brucei rhodesiense. Родезийская трипаносома, в отличие от гамбийской, является возбудителем не более 10% случаев африканского трипаносомоза. Отчасти это связано с тем, что данная форма сонной болезни протекает значительно тяжелее и быстрее, быстро убивая заражённых людей. Встречается в основном в Восточной Африке.

Клиника. Все виды трипаносом патогенны для млекопитающих, у человека вызывают трипаносомозы. Трипаносомы – внутриклеточные паразиты. Стратегия трипаносом, как и многих других паразитов, коварна – незачем сразу убивать хозяина. Она поселяется в его клетках, меняя форму, непрерывно тасуя поверхностные белки и, тем самым, искусно избегая иммунологической атаки. Род трипаносом интересен наличием механизма защиты от иммунной системы жертвы. У человека трипаносомы вызывают сонную болезнь (T. b. gambiense и T.b. rhodesiense) и болезнь Шагаса (T. cruzi), так называемые африканский и американский трипаносомозы. При сонной болезни поражается центральная нервная система, развивается менингоэнцефалит, обычно приводящий больного к гибели по истечении нескольких месяцев или лет. Болезнь Шагаса – тяжелое заболевание, поражающее внутренние органы, сердечную мышцу, головной мозг. В СНГ могут выявляться только завозные случаи трипаносомозов.

Trypanosoma equiperdum вызывает случную болезнь коней. Она передается без переносчиков, а непосредственно от особи к особи при контакте слизистых оболочек во время случки, распространена эта болезнь на юге Украины. T. brucei brucei вызывает нагану – болезнь домашних животных, характеризующуюся лихорадкой и отёками T. evansi вызывает болезнь под названием суару.

Заключение. Трипаносома внутриклеточный паразит. Трипаносомы – паразиты человека и животных, вызывающие тяжёлые заболевания (трипаносомозы) типа сонной болезни и болезни Шагаса у людей, и случной болезни у животных. У трипаносом сложный жизненный цикл с чередованием нескольких хозяев.

Список использованной литературы

1. Воробьев А.А. Микробиология и иммунология. М.: Медицина, 1999 г. 464 с.

Читайте также: