Вектор бест диагностика клещевого энцефалита
Обновлено: 19.04.2024
Маркёр текущей или бывшей инфекции вируса клещевого энцефалита.
Вирус клещевого энцефалита – РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae. Он входит в группу арбовирусов, то есть вирусов, передающихся насекомыми. Переносчики заболевания и резервуар вируса клещевого энцефалита в природных условиях - иксодовые клещи. Дополнительный резервуар - связанные с клещами птицы, грызуны, хищники. Основной путь инфицирования человека - укус клеща. Возможна также передача инфекции при употреблении сырого молока от инфицированных этим вирусом коз и коров.
Вирус является возбудителем клещевого энцефалита – острого заболевания, поражающего центральную нервную систему. Заболевание встречается в таёжной и лесостепной местности, характерна выраженная весенне-летняя сезонность. Попадая в кровь, способен проникать в центральную нервную систему, размножаться и повреждать нервные клетки, вызывая парезы и параличи.
Особый клинический вариант представляет вирусный клещевой энцефалит с двухволновым течением, при котором через 1 - 2 недели после прекращения первой волны лихорадки следует вторая волна заболевания, которая протекает тяжелее и длится дольше, чем первая. Болезнь может протекать только с общетоксическими проявлениями или как менингоэнцефалит или с лёгкими общими инфекционными симптомами без значительных очаговых поражений. При тяжёлой энцефалитной форме с очаговыми симптомами поражения ЦНС период выздоровления длительный, до 2 лет. Развившиеся атрофические параличи мышц восстанавливаются частично. Иногда заболевание протекает хронически.
Вирусный клещевой энцефалит нередко протекает и в лёгких и стёртых формах с коротким лихорадочным периодом, отсутствием или почти незаметными оболочечными и очаговыми симптомами. Соотношение количества случаев, протекающих без поражения ЦНС к протекающим с поражением ЦНС, оценивается примерно как 3:1, хотя могут быть региональные различия, связанные с вирулентностью различных штаммов вируса.
Лабораторная диагностика. В лабораторной диагностике вирусного клещевого энцефалита используют методы серологического тестирования с определением специфических IgM и IgG антител (в лаборатории ИНВИТРО тесты № 267, № 268). ПЦР-исследований для диагностики этой инфекции нецелесообразно, поскольку в IgM-позитивной фазе заболевания в большинстве случаев оно даёт отрицательный результат. Данные серологического исследования оценивают в комплексе с клиническими и эпидемиологическими критериями, характерными для этого заболевания.
Специфические антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита обнаруживаются на 10 - 14 день и даже ранее. Высокого уровня они достигают к концу месяца и сохраняются на таком уровне в течение 2 - 6 месяцев после инфицирования. Через 2 - 3 года, даже у людей, перенёсших острую форму заболевания, антитела уже редко выявляются. Специфические IgG антитела выявляются также и после вакцинирования против клещевого энцефалита. Некоторый процент общей популяции здоровых людей может иметь циркулирующие IgG антитела к вирусу клещевого энцефалита вследствие не имевшего существенных клинических проявлений контакта с вирусом в прошлом. Число таких лиц больше в эндемичных областях. В комплексе с обнаружением IgM антител выявление факта сероконверсии IgG (появление в динамике заболевания специфических антител при их первоначальном отсутствии) говорит в пользу подтверждения клинического диагноза вирусного клещевого энцефалита.
Вирус клещевого энцефалита – РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae. Он входит в группу арбовирусов, то есть вирусов, передающихся насекомыми. Переносчики заболевания и резервуар вируса клещевого энцефалита в природных условиях - иксодовые клещи. Дополнительный резервуар - связанные с клещами птицы, грызуны, хищники. Основной путь инфицирования человека - укус клеща. Возможна также передача инфекции при употреблении сырого молока от инфицированных этим вирусом коз и коров.
Вирус является возбудителем клещевого энцефалита – острого заболевания, поражающего центральную нервную систему. Заболевание встречается в таёжной и лесостепной местности, характерна выраженная весенне-летняя сезонность. Попадая в кровь, способен проникать в центральную нервную систему, размножаться и повреждать нервные клетки, вызывая парезы и параличи.
Особый клинический вариант представляет вирусный клещевой энцефалит с двухволновым течением, при котором через 1 - 2 недели после прекращения первой волны лихорадки следует вторая волна заболевания, которая протекает тяжелее и длится дольше, чем первая. Болезнь может протекать только с общетоксическими проявлениями или как менингоэнцефалит или с лёгкими общими инфекционными симптомами без значительных очаговых поражений. При тяжёлой энцефалитной форме с очаговыми симптомами поражения ЦНС период выздоровления длительный, до 2 лет. Развившиеся атрофические параличи мышц восстанавливаются частично. Иногда заболевание протекает хронически.
Вирусный клещевой энцефалит нередко протекает и в лёгких и стёртых формах с коротким лихорадочным периодом, отсутствием или почти незаметными оболочечными и очаговыми симптомами. Соотношение количества случаев, протекающих без поражения ЦНС к протекающим с поражением ЦНС, оценивается примерно как 3:1, хотя могут быть региональные различия, связанные с вирулентностью различных штаммов вируса.
Лабораторная диагностика. В лабораторной диагностике вирусного клещевого энцефалита используют методы серологического тестирования с определением специфических IgM и IgG антител (в лаборатории ИНВИТРО тесты № 267, № 268). ПЦР-исследований для диагностики этой инфекции нецелесообразно, поскольку в IgM-позитивной фазе заболевания в большинстве случаев оно даёт отрицательный результат. Данные серологического исследования оценивают в комплексе с клиническими и эпидемиологическими критериями, характерными для этого заболевания.
Специфические антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита обнаруживаются на 10 - 14 день и даже ранее. Высокого уровня они достигают к концу месяца и сохраняются на таком уровне в течение 2 - 6 месяцев после инфицирования. Через 2 - 3 года, даже у людей, перенёсших острую форму заболевания, антитела уже редко выявляются. Специфические IgG антитела выявляются также и после вакцинирования против клещевого энцефалита. Некоторый процент общей популяции здоровых людей может иметь циркулирующие IgG антитела к вирусу клещевого энцефалита вследствие не имевшего существенных клинических проявлений контакта с вирусом в прошлом. Число таких лиц больше в эндемичных областях. В комплексе с обнаружением IgM антител выявление факта сероконверсии IgG (появление в динамике заболевания специфических антител при их первоначальном отсутствии) говорит в пользу подтверждения клинического диагноза вирусного клещевого энцефалита.
Вирус клещевого энцефалита – РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae. Он входит в группу арбовирусов, то есть вирусов, передающихся насекомыми. Переносчики заболевания и резервуар вируса клещевого энцефалита в природных условиях - иксодовые клещи. Дополнительный резервуар - связанные с клещами птицы, грызуны, хищники. Основной путь инфицирования человека - укус клеща. Возможна также передача инфекции при употреблении сырого молока от инфицированных этим вирусом коз и коров.
Вирус является возбудителем клещевого энцефалита – острого заболевания, поражающего центральную нервную систему. Заболевание встречается в таёжной и лесостепной местности, характерна выраженная весенне-летняя сезонность. Попадая в кровь, способен проникать в центральную нервную систему, размножаться и повреждать нервные клетки, вызывая парезы и параличи.
Особый клинический вариант представляет вирусный клещевой энцефалит с двухволновым течением, при котором через 1 - 2 недели после прекращения первой волны лихорадки следует вторая волна заболевания, которая протекает тяжелее и длится дольше, чем первая. Болезнь может протекать только с общетоксическими проявлениями или как менингоэнцефалит или с лёгкими общими инфекционными симптомами без значительных очаговых поражений. При тяжёлой энцефалитной форме с очаговыми симптомами поражения ЦНС период выздоровления длительный, до 2 лет. Развившиеся атрофические параличи мышц восстанавливаются частично. Иногда заболевание протекает хронически.
Вирусный клещевой энцефалит нередко протекает и в лёгких и стёртых формах с коротким лихорадочным периодом, отсутствием или почти незаметными оболочечными и очаговыми симптомами. Соотношение количества случаев, протекающих без поражения ЦНС к протекающим с поражением ЦНС, оценивается примерно как 3:1, хотя могут быть региональные различия, связанные с вирулентностью различных штаммов вируса.
Лабораторная диагностика. В лабораторной диагностике вирусного клещевого энцефалита используют методы серологического тестирования с определением специфических IgM и IgG антител (в лаборатории ИНВИТРО тесты № 267, № 268). ПЦР-исследований для диагностики этой инфекции нецелесообразно, поскольку в IgM-позитивной фазе заболевания в большинстве случаев оно даёт отрицательный результат. Данные серологического исследования оценивают в комплексе с клиническими и эпидемиологическими критериями, характерными для этого заболевания.
Специфические антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита обнаруживаются на 10 - 14 день и даже ранее. Высокого уровня они достигают к концу месяца и сохраняются на таком уровне в течение 2 - 6 месяцев после инфицирования. Через 2 - 3 года, даже у людей, перенёсших острую форму заболевания, антитела уже редко выявляются. Специфические IgG антитела выявляются также и после вакцинирования против клещевого энцефалита. Некоторый процент общей популяции здоровых людей может иметь циркулирующие IgG антитела к вирусу клещевого энцефалита вследствие не имевшего существенных клинических проявлений контакта с вирусом в прошлом. Число таких лиц больше в эндемичных областях. В комплексе с обнаружением IgM антител выявление факта сероконверсии IgG (появление в динамике заболевания специфических антител при их первоначальном отсутствии) говорит в пользу подтверждения клинического диагноза вирусного клещевого энцефалита.
Внешний вид упаковки и препарата может отличаться от изображённого на фотографии
Инструкция по применению
Описание
Состав
Набор реагентов ИФА ТС АГ ВКЭ Тест-система иммуноферментная для выявления антигена вируса клещевого энцефалита (Комплект № 1) включает следующие реагенты для проведения прямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА):
ИГ - иммуносорбент – иммуноглобулин класса G (крысиный) против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) – аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабоопалесцирующая бесцветная жидкость.
КА+ - контрольный положительный образец – антиген ВКЭ, экстрагированный из ткани мозга мышей, инфицированных ВКЭ, инактивированный бетапропиолактоном -аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесци-рующая светло-желтого цвета жидкость.
КА– - контрольный отрицательный образец – антиген из ткани мозга неинфицированных мышей, аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая светло-желтого цвета жидкость.
Конъюгат (концентрат) – иммуноглобулин класса G против ВКЭ (крысиный), конъюгированный с пероксидазой хрена, аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость.
КББ×20 - 20-кратный концентрат карбонатно-бикарбонатного буферного раствора для разведения ИГ – прозрачная бесцветная жидкость.
ФСБ-Т×25 – 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор для промывания планшетов и приготовления раствора РР – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов бело-го цвета, растворимых в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС.
БСА - бычий сывороточный альбумин – стабилизатор – аморфный порошок от белого до светло-желтого цвета, после растворения в ФСБ-Т – прозрачная или слабо опалесциру-ющая светло-желтого цвета жидкость.
ЦБР - буферный раствор с перекисью водорода – раствор для разведения ТМБ – про-зрачная бесцветная жидкость.
ТМБ - концентрат тетраметилбензидина – хромоген – прозрачная бесцветная жид-кость.
Планшеты полистироловые 96-луночные монолитные для ИФА.
Комплект № 1 рассчитан на одновременное проведение 192 определений, включая контрольные.
Показания для применения
Режим дозирования и способ применения
Подготовка исследуемого материала.
Обработка клещей.
Для испытания в ИФА пригодны лишь неповрежденные клещи. Клещей однократно промывают 70 % спиртом этиловым и 2-3 раза 0,9 % раствором натрия хлорида. Каждого клеща помещают в пробирку для микропроб вместимостью 0,5-1,5 мл, маркируют и хранят до исследования при температуре не выше минус 20 ºС не более 2 недель. Перед испытани-ем в ИФА готовят 10 % суспензию клеща: его растирают металлическим стержнем в той же пробирке, добавляют 0,2 мл РР (см. п. 4.4). Клеща, насосавшегося крови, растирают, добавляя РР в количестве, равном его объёму. Для ИФА берут 0,1 мл суспензии, остаток пробы хранят в той же пробирке и тех же условиях, что и клещей не более 2 недель.
Подготовка мозговой суспензии.
Для исследования мозга инфицированных животных (или мозговой ткани людей, взятой в случае летального исхода) необходимо приготовить 1 % мозговую суспензию на РР. Суспензию центрифугируют при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин, надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку, маркируют и хранят до исследования также как пробы крови. В ИФА проверяют как неразведенную суспензию, так и в разведении 1:10 и выше.
Подготовка культуральной жидкости.
Культуральную жидкость зараженных клеточных культур перед испытанием в ИФА освобождают от клеток центрифугированием при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин. В ИФА исследуют как неразведенные пробы, так и в разведении 1:2 и более.
Подготовка растворов и реагентов (для проведения анализа на одном планшете).
Набор перед использованием необходимо выдержать не менее 30 мин при температу-ре от 18 до 25 °C.
Раствор для разведения ИГ (КББ).
0,5 мл КББ×20 разводят в 9,5 мл воды очищенной или дистиллированной (далее воды). Хранение: неиспользованный концентрат КББ×20 хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.
Иммуносорбент (ИГ).
Рабочее разведение ИГ указано на ампуле.
Содержимое ампулы с ИГ растворяют в 1 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 оС), затем разводят в КББ (см. п. 4.1) до разведения, указанного на ампу-ле (например: 1:20 – 0,5 мл ИГ и 9,5 мл КББ).
Хранение: неиспользованный растворенный ИГ хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 7 сут.
Раствор для промывания планшетов и приготовления РР (ФСБ-Т).
Содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т×25 разводят в 480 мл воды. В случае вы-падения осадка концентрат ФСБ-Т×25 предварительно прогревают в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС до полного растворения осадка.
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 2 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 14 сут.
Рабочий раствор (РР) для разведения образцов, конъюгата, КА+, КА–.
В 50 мл ФСБ-Т (см. п. 4.3) растворяют навеску 0,5 г стабилизатора БСА (время рас-творения 20 мин при помешивании при температуре 20-25 ºС).
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.
Подготовка контрольных образцов.
Содержимое ампул с КА+ и КА– растворяют в 0,5 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем готовят рабочее разведение каждого контрольного образ-ца в РР (см. п. 4.4) так, как указано на ампуле (например: 1:200 – 0,01 мл антигена и 2 мл РР).
Хранение: неиспользованные растворенные контрольные образцы хранят при темпе-ратуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут (рекомендуется разлить на аликвоты в микропробирки для исключения повторного замораживания-оттаивания).
Рабочее разведение конъюгата.
Содержимое ампулы с конъюгатом растворяют в 0,5 мл воды (время растворения
1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем разводят на РР (см. п. 4.4) так, как указано на ам-пуле (например: 1:40 – 0,25 мл конъюгата и 9,75 мл РР). Рабочее разведение конъюгата го-товят не ранее чем за 30 мин до использования.
Хранение: оставшийся не использованным растворенный конъюгат хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут.
Проведение иммуноферментного анализа.
Внесение конъюгата.
В каждую лунку планшета, кроме 12А, вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении. Планшет закрывают и помещают на 45-60 мин при температуре (37±1) ºС, затем отмывают 5 раз, остатки влаги удаляют (см. п.5.1).
Меры предосторожности при применении
Читайте также: