Аденовирусный гепатит с включениями гидроперикардит
Обновлено: 18.04.2024
Изобретение относится к области ветеринарии. Задачей, решаемой в рамках данного изобретения, являлось создание профилактического средства против аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита (АДВГГ) кур, обладающего высокой иммуногенной активностью и стабильностью, в сочетании с безвредностью для птицы. Препарат содержит инактивированный теотропином антиген аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур штамма “Т-12” с активностью не менее 3,5 Lg ИД 50 /мл в смеси с масляным адъювантом, взятые в равных объемах. Препарат обладает высокой иммуногенной активностью и стабильностью, безвреден для птицы, 2 з.п. ф-лы, 2 табл.
Формула изобретения
1. Вакцинный препарат для профилактики аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур, содержащий инактивированный вирусный антиген и адъювант, отличающийся тем, что содержит инактивированный теотропином антиген аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур штамма “Т-12” с активностью не менее 3,5 Lg ИД 50 /мл в смеси с масляным адъювантом, взятые в равных объемах.
2. Вакцинный препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве масляного адъюванта содержит жировую эмульсию типа масло в воде, включающую продукты переработки сои, например инфузолипол, либо его аналоги.
3. Вакцинный препарат по п.1, отличающийся тем, что содержит теотропин в конечной его концентрации в вируссодержащем материале не менее 0,2-0,3%.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к птицеводству, а именно, к вакцинным препаратам против инфекционных заболеваний, а именно, против аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита (АДВГГ) кур.
Имеющиеся научные данные свидетельствуют о том, что аденовивирусная инфекция получила широкое распространение и наносит значительный экономический ущерб птицеводству не только при остром течении заболевания в виде гепатита-гидроперикардита со смертностью от 20 до 70%, но и при субклиническом проявлении болезни, сопровождающемся поражением печени, поджелудочной железы, селезенки и почек.
При заражение птиц возбудителем гепатита с включениями - гидроперикардита происходит внедрение и репликация аденовирусов в иммунокомпетентных клетках лимфоидных органов с последующей их декструкцией. Это отрицательно сказывается на устойчивости инфицированных аденовирусом птиц к возбудителям других заболеваний, на формировании поствакцинального иммунитета, в том числе к ньюкаслской болезни и болезни Гамборо (В.А.Бакулин "Влияние гепатита с включениями - гидроперикардита на вакцинацию цыплят против ньюкаслской болезни." Архив ветеринарных наук, т. 1(48), часть 3).
Вакцинопрофилактика занимает ведущее место в борьбе с этим заболеванием. В последние годы наиболее часто применяют инактивированные вакцины (Afzal M. and Ahmad I. Efficacy of an inactivated vaccine against hydropericardium syndrome. 56//Vet.Rec. - 1990. V.126, p.56).
Известные зарубежные и отечественные средства специфической профилактики гепатита-гидроперикардита, в основном, представляют собой тканевые препараты, изготавливаемые из внутренних органов птиц, зараженных возбудителем гепатита-гидроперикардита. Они достаточно эффективны, но в основном на бройлерах, что связано с особенностями технологии разведения данных кроссов цыплят. На яйценоских птицах их применение часто лишь сдвигает начало проявления болезни на более поздние сроки и изменяет форму ее течения.
Наиболее близкой по технической сущности и достигаемому терапевтическому эффекту к заявляемому вакцинному препарату является инактивированная сорбированная вакцина против синдрома гидроперикардита кур на основе вирусного сырья, полученного из печени инфицированных цыплят после очистки флокулянтом и хлороформом и инактивации димером этиленимина (ДЭИ) в концентрации 0,3% при температуре 35-37С в течение 24 часов и использовании в качестве адъюванта геля гидрата окиси алюминия (ГОА) в сочетании с сапонином (Борисов В.В., Борисов А.В., Сурнев Д.С. “Разработка и производственные испытания инактивированной сорбированной вакцины против синдрома гидроперикардита кур. Роль ветеринарной науки в развитии животноводства: материалы междунар. научно-производ. конференции, посвященной 75-летию Казахского НИВИ. -Алматы, 2000 г., с. 77-79).
Однако в некоторых случаях, при применении сорбированной вакцины на месте инъекции возможно образование небольшой припухлости, исчезающей через 2-3 недели. В связи с чем, убой птицы на мясо разрешается через 20 суток после введения вакцины. При необходимости убоя птицы ранее этого срока тушки подлежат тщательному осмотру, и при обнаружении на месте введения вакцины признаков воспаления или нерассосавшейся вакцины, тушки выбраковывают и утилизируют.
Это может создавать определенные проблемы при специализации хозяйств на разведении цыплят-бройлеров, когда срок выращивания птицы - 40 дней.
Задачей, решаемой в рамках данного изобретения, является создание профилактического средства против аденовирусного гепатита с включениями -гидроперикардита (АДВГГ) кур, обладающего высокой иммуногенной активностью, стабильностью, в сочетании с безвредностью для птицы и не обладающего остаточной реактогенностью.
Указанная задача решается путем создания вакцинного препарата, содержащего инактивированный теотропином антиген аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита (АДВГГ) кур штамма "Т-12" с активностью не менее 3,5 0 Lg ИД 50 /мл в смеси с масляным адъювантом, взятых в равных объемах, причем в качестве масляного адъюванта указанный препарат содержит жировую эмульсию типа масло в воде, включающую продукты переработки сои, например, инфузолипол, либо его аналоги, и содержит теотропин в конечной его концентрации в вируссодержащем материале не менее - 0,2-0,3%.
Инфузолипол - мелкодисперсная жировая эмульсия, применяемая в качестве лекарственного средства для парентерального питания (ФС-42-3955-00 "Инфузолипол для инъекций"). В состав препарата входят масло соевое, лецитин соевый, сорбент и вода для инъекций. Использование инфузолипола в качестве адъюванта дает преимущество быстрого введения вакцинного препарата птицам и точного соблюдения вводимой дозы, повышает иммуногенные и антигенные свойства препарата.
Инактивация вируса теотропином (Препарат А-24) гарантирует полное отсутствие в вакцинном препарате остаточной инфекционности, невозможность репарации генома вирусной ДНК, а при длительном хранении антигена не снижает его активности.
Производственный штамм "Т-12" хранится и поддерживается во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте птицеводства (ВНИВИП).
Штамм "Т-12" хранят в лиофилированном состоянии в герметично запаянных ампулах в холодильнике не более 24 месяцев со дня его высушивания.
Производственный штамм "Т-12" должен удовлетворять следующим требованиям
- быть свободным от контаминации посторонними вирусами, бактериальной и грибковой микрофлорой;
- при заражении 25-30 дневных СПФ цыплят вызывать у них клинику и иметь инфекционный титр не ниже, чем 3,5 Lg ИД 50 /мл. Использование штамма "Т-12" в вакцинном препарате обуславливает его высокую и длительно сохраняющуюся иммуногенную активность.
Вакцинный препарат получают следующим образом. Из матричной расплодки производственного штамма “Т-12” вируса АДВГГ готовят разведение 1:10 на стерильном физиологическом растворе (рН 7,2) с добавлением антибиотиков (100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 50 ед/мл нистатина) и выдерживают для контакта в течение 2 часов при температуре 4-8С. Разведенный материал готовят в объеме, необходимом для заражения данной партии цыплят 25-30 дневного возраста. Зараженных цыплят убивают через 96 часов после заражения, отбирают пробы печени, гомогенизируют их в 0,01 М фосфатно-буферном растворе рН 7,2 в соотношении 1:1 (вес./объем), трижды замораживают в течение 30 минут, собирают вируссодержащую надосадочную жидкость. В полученный вируссодержащий материал добавляют 500 ед/мл пенициллина, 500 мкг/мл стрептомицина и 200 ед/мл нистатин. После контакта при 4-8С из каждого флакона берут пробу вируссодержащей жидкости в объеме 1 мл для контроля на стерильность и контаминацию микоплазмами.
Затем из каждого флакона берут пробу в объеме 1 мл вируссодержащего материала и сливают в один стерильный флакон емкостью 100 мл. Эту взвесь проверяют на биологическую активность производственной расплодки. До получения результатов проверки на биологическую активность вся производственная расплодка вируса хранится в замороженном состоянии при температуре 25-30С. Для приготовления вакцины используют только стерильную в бактериальном отношении вируссодержащую жидкость с титром для вируса АДВГГ не менее 3,5 Lg ИД 50 50/мл.
Для инактивации инфекционных свойств вируса АДВГГ используют препарат теотропин (А-24). При проведении инактивации в плоскодонную емкость с вируссодержащей жидкостью кладут магнит в инертной защитной оболочке и ставят емкость на магнитную мешалку. Затем в емкость постепенно при непрерывном помешивании тонкой струей вносят раствор препарата теотропина “А-24” до его конечной концентрации в вируссодержащем материале 0,2-0,3%. Емкости полученной смесью вместе с магнитной мешалкой помещают в термостат с температурой 37,00,5С на 36 часов, устанавливая при этом скорость вращения магнита 50-60 об/мин, чтобы избежать образования пены. Контроль полноты инактивации вируса проводят в течение 3-х последовательных пассажей на 30 цыплятах 10-20 дневного возраста, которым внутримышечно вводится 0,5 мл антигена, с заражением последующей группы гомогенатом печени цыплят предыдущих групп. Отсутствие патологоанатомических изменений во внутренних органах цыплят, характерных для АДВГГ, а также (при гистологическом исследовании) отсутствие внутриядерных включений в гепатоцитах, свидетельствует о полноте инактивации вируса. Данный контроль можно проводить дополнительно на 9-суточных СПФ эмбрионах кур методом трехкратных последовательных “слепых пассажей”. Доза заражения эмбриона - 0,2 мл испытуемого материала. Срок инкубации (наблюдения) при 37С - 5 дней. После инкубации эмбрионов в указанном режиме экстраэмбриональная жидкость в смеси с гомогенатом ХАО и печенью эмбриона от 1, 2 и 3 пассажей исследуется в РДП с заведомо положительной специфической сывороткой к вирусу АДВГГ. Реакция РДП должна быть отрицательной, что в сочетании с отсутствием патологии у зараженных эмбрионов свидетельствует о полноте инактивации вируса.
Приготовление вакцинного препарата проводится внесением в одну объемную часть готового стерильного масляного адъюванта - инфузолипола (или его аналогов) постепенно - по каплям, при интенсивном перемешивании пропеллерной мешалкой или с помощью гомогенизатора с частотой вращения 4000-5000 об/мин, одной объемной части водного вируссодержащего компонента. После этого перемешивание продолжают еще 5 минут.
Механизм действия препарата основан на выработке у привитых цыплят иммунитета к аденовирусу гепатита с включениями - гидроперикардита кур. На 28 сутки после иммунизации специфические антитела в сыворотке крови должны выявляться в РДП не менее, чем у 80% вакцинированных цыплят. Продолжительность поствакцинального иммунитета составляет не менее 6 месяцев. Вакцинации подлежит клинически здоровая птица промышленных стад в возрасте 10-12 суток, при необходимости в более молодом или старшем возрасте, но не позднее, чем за 14 дней до предполагаемого клинического проявления болезни. Метод вакцинации - внутримышечный, в область бедра или груди, а также подкожный - в область нижней трети шеи. Вакцину вводят в объеме 0,3 мл. Место введения препарата обрабатывают 70% спиртом. За 6-9 часов до применения вакцину достают из холодильника и ставят в помещение с температурой от 20 до 28С. Запрещается нагревание вакцины на водяной бане и на приборах отопления. Вакцину используют в течение 2 часов после вскрытия флакона.
Молодняк родительских стад иммунизируют дважды: первый раз в возрасте 10-12 суток, а второй раз - в возрасте 100-120 суток в удвоенной дозе. Продукты убоя и мясо от вакцинированной птицы реализуют без ограничений независимо от сроков вакцинации.
Сущность и практическая применимость заявленного изобретения характеризуется следующими примерами.
Вакцина прошла проверку на стерильность, полноту инактивации, безвредность, антигенную и иммуногенную активность на цыплятах, полученных с птицефабрики “Роскар” Ленинградской области, благополучной по инфекционным болезням птиц. Было изготовлено две серии вакцины №5 - (от 15.02.01) и №6 (от 16.02.01.). Для проведения контроля на стерильность пробы испытуемых серий вакцины в объеме 0,2 мл высевали на питательные среды: МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, на среду Сабуро по три пробирки каждой среды. Питательные среды с посевами и контрольные выдерживали в термостате при температуре 37С в течение 10 дней, а среду Сабуро с посевами - при температуре 20-22С. В течение указанного срока наблюдения питательные среды оставались стерильными.
Контроль на полноту инактивации вируса проводили в трех последовательных пассажах на 30 цыплятах 17-20 дневного возраста, которым первоначально вводили по 0,5 мл испытуемых серий вакцины, с заражением следующей группы гомогенатом печени цыплят предыдущего пассажа, убитых на 3-и сутки после введения инактивированного антигена. Проводили контроль за клиническим состоянием птицы, гистологические исследования печени цыплят на наличие изменений, характерных для аденовирусной инфекции, а также исследования гомогената печени в РДП с заведомо положительной специфической к аденовирусу гепатита с включениями - гидроперикардита сывороткой птиц.
В течение всех трех пассажей цыплята оставались клинически здоровыми, патологоморфологические изменения в печени, характерные для аденовирусной инфекции не отмечены, результаты исследования гомогената печени в РДП с положительной специфической к аденовирусу гепатита с включениями - гидроперикардита птиц были отрицательными.
Контроль вакцины на безвредность проводили на цыплятах 17-дневного возраста, которым внутримышечно, в область бедра вводили 5-кратную иммунизирующую дозу вакцины в объеме 2,5 мл по 10 голов на каждую серию вакцины. В течение 10-дневного периода наблюдения цыплята оставались живыми и клинически здоровыми, реакция на препарат в месте его введения отсутствовала.
Контроль на иммуногенную активность проводили на цыплятах 17- дневного возраста, введением вакцины в дозе 0,5 мл внутримышечно в область бедра. Через 12 дней после вакцинации проводили контрольное заражение подопытных (вакцинированных) и контрольных (невакцинированных) птиц по 20 голов из каждой группы патогенным штаммом “Т-12” вируса гепатита с включениями - гидроперикардита внутримышечно в объеме 0,5 мл, что соответствовало 1000 ЛД 50.
В обеих подопытных группах птиц, привитых вакциной серии № 5 и № 6 гибель цыплят не наблюдалась, клинические признаки болезни отсутствовали в течение срока наблюдения (10 дней).
Результаты исследований представлены в таблице 1
В группе невакцинированных цыплят клинические признаки болезни отмечались у 90% цыплят, зараженных патогенным штаммом аденовируса.
У большинства птиц на 2-3 сутки после заражения наблюдалось угнетение, взъерошенность оперения. Перед гибелью у цыплят крылья были опущены, отсутствовала реакция на внешние раздражители. Птицы стояли, а чаще сидели, уткнувшись клювом.
Антигенную активность проверяли на цыплятах 17-дневного возраста внутримышечно вакцинированных одной иммунизирующей дозой вакцины (по 20 голов на каждую серию вакцины и 20 голов невакцинированных птиц). Через 21 и 28 дней после вакцинации брали кровь, получали сыворотку крови, которую исследовали в РДП с заведомо положительным антигеном гепатита с включениями - гидроперикардита на наличие преципитирующих антител. Преципитирующие антитела в РДП были обнаружены на 21 сутки после вакцинации в 90% исследованных пробах (обе серии вакцины), на 28 сутки - в 100%. Были также проведены исследования на сохранность антигенных свойств штамма “Т-12” аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита инактивированного теотропином.
Результаты исследований представлены в таблице 2.
Как следует из приведенных результатов, предлагаемый вакцинный препарат стерилен, безвреден, обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью.
1. В.А.Бакулин “Влияние гепатита с включениями - гидроперикардита на вакцинацию цыплят против ньюкаслской болезни”. Архив ветериных наук, т.1 (48), ч. 3.
2. Afzal M. and Ahmad I. Efficacy of an inactivated against hydropericardium syndrome. 56// Vet.Rec. - 1990. V.126, p.56.
3. Борисов В.В., Борисов А.А., Сурнев Д.С. “Разработка и производственные испытания инактивированной сорбированной вакцины против синдрома перикардита кур. Роль ветеринарной науки в развитии животноводства: материалы международной научно-производственной конференции, посвященной 75-летию Казахского НИВИ. -Алматы. 2000 г., с. 77-79.
В.А. Бакулин, д.в.н., профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГУ ВПО С.-Пб.ГАВМ, главный научный сотрудник отдела вирусологи ГНУ ВНИВИП; А.С. Дубовой, главный научный сотрудник отдела вирусологи ГНУ ВНИВИП.
Аденовирусный гепатит с включениями-гидроперикардит (АДВГГ) – широко распространенная болезнь кур, наносящая значительный социально-экономический ущерб промышленному птицеводству и дестабилизирующая эпизоотическую ситуацию по другим инфекционным заболеваниям. Поражение аденовирусом различных жизненно важных систем организма птиц, пагубно влияет на развитии цыплят, повышает их восприимчивость к другим инфекционным заболеваниям и усиливает проявление патологий незаразного происхождения. При экспериментальном парэнтеральном заражении СПФ-цыплят гепатит с тельцами-включениями можно воспроизвести используя любой из 12 известных серотипов аденовирусов птиц первой группы. Научно-обоснованная система и средства диагностики АДВГГ нуждаются в дополнительных исследованиях и постоянной доработке.
В связи с этим перед исполнителями была поставлена следующая задача: усовершенствовать, разработанные во ВНИВИП наборы компонентов для диагностики АДВГГ в реакции дифузионной преципитации и проверить их эффективность их в комиссионных испытаниях.
Схема № 1: парэнтеральное введение живого вируса, через 21–28 дней одно или двухкратная иммунизация инактивированным вирусом в эмульсионной форме. Схема №2: парэнтеральное введение инактивированного вируса (только антигена), через 21-28 дней одно– или двухкратная иммунизация инактивированным вирусом в эмульсионной форме.
Проведено определение титров антигенов и сывороток (по отдельности для каждого серотипа аденовируса), исходя из чего, выбран оптимальный вариант объединения антигенов с одинаковыми титрами, а также и сывороток (с одинаковыми титрами и в равных объемах).
Отработана постановки РДП с объединенными как антигенами 1-го и 4-го серотипов, так и с объединенными гипериммунными сыворотками с целью повышения эффективности разрабатываемого диагностикума.
Выбрана оптимальная схема постановки реакции с полученными компонентами и разработана комплектация набора. Наработан и испытан в Комиссионных внутриинститутских испытаниях (ГНУ ВНИВИП) набор компонентов для диагностики АДВГГ в реакции дифузионной преципитации.
В набор входят:
1. смесь атнигенов аденовируса птиц 1 и 4 серотипов – 3 ампулы объемом 1 мл;
2. смешанная гипериммунная сыворотка к аденовирусам 1 и 4 серотипов – 1 ампула 1 мл;
3. отрицательный антиген – смесь надосадочной жидкости гомогената печени интактного (здорового цыпленка) и аллантоисной жидкости незараженного развивающегося эмбриона 10-дневного возраста;
4. отрицательная сыворотка 1 ампула 1 мл;
5. солевая смесь, состоящая из хлористого натрия – 8 г. и высокоочищенного агара Дифко.
Таким образом, выбран оптимальный режим получения антигенов аденовирусов птиц 1-го и 4-го серотипов в титрах до 1:32 и выше для постановки РДП. Отработаны схемы гипериммунизации цыплят для получения высокоактивных (в титрах до 1:32) специфических сывороток, на аденовирусы как 1-го, так и 4-го серотипов для РДП.
Выбрана оптимальная схема постановки РДП с полученными компонентами и разработана комплектация набора компонентов для диагностики аденовирусного гепатита-гидроперикардита (АДВГГ) кур, в реакции диффузионной преципитации (РДП).
Изготовлены и исследованы в лабораторных условиях две экспериментальные серии набора специфических компонентов для диагностики аденовирусного гепатитагидроперикардита (АДВГГ) кур в (РДП) реакции диффузионной преципитации.
Таймасуков А.А. ОАО "Компания Кубаньптицепром"
Аденовирусный гидроперикардит бройлеров - остропротекающее и высоко контагиозное вирусное заболевание преимущественно бройлеров 3-5-тинедельного возраста, характеризующееся накоплением в перикарде транссудата, гепатитом, асцитом и нефрозо-нефритом. Степень тяжести болезни в естественных условиях зависит от влияния некоторых иммунодепрессивных инфекций, таких как инфекционная бурсальная болезнь (болезнь Гамборо), болезнь Марека и инфекционная анемия цыплят.
В настоящее время, во многих хозяйствах аденовирусный гидроперикардит начинает проявляться у 24-28 - дневных, а иногда у более молодых бройлеров, в свою очередь, провоцируя болезнь Гамборо или ухудшая формирование поствакцинального иммунитета против данного заболевания, а также Ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и других болезней. Источником инфекции является больная и переболевшая птица. Вирус передается аэрогенно, алиментарно и трансовариально. Возбудитель распространяется с воздухом, водой, кормом, предметами ухода, контактно, "с помощью" обслуживающего персонала. Переносчиками возбудителя инфекции могут быть дикие и синантропные птицы, насекомые и иксодовые клещи, а также простейшие микроорганизмы, в том числе кокцидии. Птицы родительского стада могут быть инфицированы аденовирусом перед началом или в процессе яйцекладки, что обуславливает интенсивную трансовариальную передачу возбудителя.
Аденовирусы птиц, по данным профессора В.А.Бакулина, условно дифференцированы на 3 группы. В первую группу входят 12 серотипов аденовирусов кур и других птиц, которые имеют общий группоспецифический преципитирующий антиген, например возбудители "CELO - инфекции", бронхита перепелов, панкреатита цесарок гепатита с включениями - гидроперикардита кур. Ко второй группе относятся аденовирусы, обладающие гемаглютинирующим антигеном и имеющие общий с первой группой преципитирующий антиген, в том числе аденовирус "Синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76)". В третью группу включены аденовирусы с группоспецифическим преципитирующим антигеном, отличающимся от таковых первых двух групп - аденовирусы геморрагического энтерита индеек и болезни "мраморной селезенки" фазанов. В промышленных птицеводческих хозяйствах аденовирусы распространены повсеместно. Любые из имеющихся 13 серотипов аденовирусов в различных сочетаниях могут циркулировать в одном хозяйстве, а также в организме одной внешне здоровой птицы [3].
Инкубационный период при заражении аденовирусом составляет 24-72 часа. Наиболее часто аденовирусный гидроперикардит бройлеров связан с застойными явлениями в сердце и с гидремией, приводящих к анемии. При экспериментальном заражении цыплята угнетены, взъерошены, "не держат крылья", возможна анемия, диарея с выделением фекалий с примесью уратов, отсутствие реакции на внешние раздражители. Максимальная смертность птиц на 2-4 день после заражения. Общая смертность цыплят-бройлеров может достигать до 75-85%. При хроническом или субклиническом течении клинические признаки незначительные или отсутствуют. Смертность составляет 1-7%.
При вскрытии трупов павших бройлеров обнаруживают желтоватое окрашивание подкожной клетчатки и внутреннего жира, очаговые кровоизлияния в мышцах, скопления в сердечной сорочке от 5 до 20 мл. серозного транссудата соломенно-желтого цвета водянистой или желеподобной консистенции. У экспериментально зараженных цыплят иногда наблюдается появление небольшого количества асцитной жидкости.
Сердце деформированное и дряблое, с точечными кровоизлияниями в миокарде, особенно на верхушке сердца и в ушках предсердий. Легкие уплотнены и отечны, в некоторых случаях с наличием серозной жидкости. Печень увеличена, с очагами некроза. Почки увеличены, с точечными кровоизлияниями, мозаичные, иногда с канальцами и мочеточниками заполненными уратами. Селезенка может быть увеличена, мраморная, отмечается атрофия фабрициевой бурсы.
Диагноз на аденовирусный гидроперикардит бройлеров ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатоми-ческих данных, результатов выделения вируса (из печени) на развивающихся эмбрионах кур, в культуре клеток печени, почек, фиброблас-тов эмбрионов кур, а также результатов заражения восприимчивых цыплят 10 дневного возраста [1]. Завершающим этапом в постановке диагноза является идентификация выделенного вируса в реакции нейтрализации, диффузиозной преципитации в агаровом геле (РДП), ПЦР. Ретроспективная диагностика проводится на основании выявления антител к возбудителю в РДП, РН и ИФА.
В настоящее время РНГА считается более предпочтительной, чем тест диффузной преципитации в агаровом геле, так как дает меньше неспецифических реакций.
Аденовирусный гидроперикардит бройлеров необходимо прежде всего дифференцировать от гидроперикардитов другой этиологии. Так, при пастереллезе, стафиллококкозе и стрептококкозе иногда возникает серозный перикардит. Решающим фактором при постановке диагноза служит выделение чистой культуры бактерий, вызывающих эти заболевания, путем посева материала из внутренних органов больных птиц на искусственные питательные среды. Аденовирусный гидроперикардит бройлеров от гидроперикардита, возникшего при острой форме болезни Марека, дифференцируют по наличию при болезни Марека в начальной стадии единичных, а позднее множественных опухолей в мышцах и во внутренних органах. Необходимо исключить инфекционную бурсальную болезнь (болезнь Гамборо), так как она часто сопутствует аденовирусной инфекции. При инфекционном бурсите поражения фабрициевой сумки постоянны и сопровождаются некрозом и псевдоэозинофильной инфильтрацией лимфоидных фолликулов. Для аденовирусной инфекции изменения фабрициевой сумки не характерны. Точечные кровоизлияния размером со спичечную головку по тонкому отделу кишечника, а особенно в двенадцатиперстной кишке необходимо дифференцировать от Ньюкаслской болезни [4].
Парвовирусную анемию цыплят и геморрагический синдром, обусловленные микотоксинами и применением сульфаниламидов также необходимо дифференцировать от аденовирусного гидроперикардита бройлеров. При парвовирусной анемии цыплят внутриядерные тельца-включения в гепатоцитах отсутствуют. При исключении геморрагического синдрома и апластической анемии принимают во внимание анамнестические сведения и результаты анализа кормов и гистологических исследований печени [2].
Для предотвращения возникновения эпизоотии по аденовирусному гидроперикардиту бройлеров необходимо использовать все доступные методы профилактики, в том числе и организационно-хозяйственного и социально-экономического характера. Они включают в себя раздельное кормление и содержание разновозрастных групп птиц, привлечение к работе не контактирующего с птицей в личных подсобных хозяйствах обслуживающего персонала и многие другие вопросы, направленные на охрану птицеводческих хозяйств от заноса инфекции. Защита птицеводческих предприятий должна осуществляться посредством использования програмных мер безопасности, с обязательным соблюдением принципа "все пусто - все занято".
Распространение инфекции может произойти при диагностических исследованиях птицы, поэтому участники проведения вакцинации и диагностических исследований, особенно при работе с вирусвакци-нами, должны строго соблюдать все меры санитарной профилактики.
Аденовирус весьма устойчив к условиям внешней среды и может длительное время сохраняться в помете и подстилке. В качестве более эффективных дезинфектантов рекомендуются йодсодержащие препараты и гипохлорид натрия.
В регионах, неблагополучных по аденовирусному гидроперикардиту, применение только санитарных мер было малоэффективным и в связи с этим возникла необходимость разработки специфических мер профилактики.
В настоящее время в неблагополучных хозяйствах для специфической профилактики аденовирусного гидроперикардита цыплят используются инактивированные гидроокисьалюминиевые или эмульсионные вакцины. Цыплят-бройлеров вакцинируют однократно в 10-17 дневном возрасте, внутримышечно или подкожно. Ремонтный молодняк и кур яйценоских пород вакцинируют дважды: в 10-17 дней и затем при переводе, в удвоенной дозе, не позднее чем за 30 дней до начала яйцекладки. В некоторых хозяйствах, ремонтный молодняк предназначенный для формирования родительских стад, в раннем возрасте вакцинируют дважды с 2-недельным интервалом, а затем третий раз в удвоенной дозе при переводе. Иногда вакцину применяют в суточном возрасте, одновременно с вакциной против болезни Марека. Иммунитет, регистрируемый в РДП, наступает через 14-21 день.
Эффективного специфического лечения и профилактики лекарственными препаратами при аденовирусном гидроперикардите не разработано [1].
Конкретную схему специфической профилактики для каждого птицеводческого хозяйства необходимо выбирать индивидуально, в зависимости от его эпизоотической ситуации.
Более 20 лет прошло с того времени, когда в Пакистане вблизи г.г. Карачи и Лахор, где сконцентрировано крупное бройлерное производство, возникла новая болезнь. Она проявлялась чаще всего у бройлеров в возрасте 3-5 недель, но случаи заражения были также и в стадах ремонтного поголовья. При этом признаки болезни следующие: вялость, скученность, взъерошенность оперения, желтоватая слизь в помете и падеж птицы в первые дни до 20%, а в последующий период он мог возрастать до 70-80%. На вскрытии наблюдали скопление прозрачного транссудата в перикардиальной полости, очаги некроза в печени в виде сероватых пятен, перемежающиеся с кровоизлияниями.
Гистологическим методом выявляли базофильные и эозинофильные внутриядерные тельца-включения в гепатоцитах и дегенеративные изменения в тканях поджелудочной железы, почек и миокарда.
Вскоре был идентифицирован возбудитель – аденовирус I группы (в основном серотипы 4 и 8), который выделяли в культуре клеток печени эмбриона, из самого эмбриона и от цыплят. В связи с наличием телец-включений в печеночных клетках и жидкости перикардиальной полости, болезнь получила название аденовирусный гепатит с включениями – гидроперикардит( синдром гидроперикардита, синдром гидроперикардита кур). Следует отметить, что в этиологии заболевания важная роль отводится иммуносупресивным инфекциям – инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии.
В странах, где синдром гидроперикардита кур регистрируется наиболее часто (Пакистан, Индия, Мексика, Чили, РФ и др.), он наносит значительный экономический ущерб. Поэтому для профилактики болезни следует соблюдать, как общие ветеринарно-санитарные мероприятия (размещать птицу разных возрастов по зонам, обеззараживать корма, осуществлять эффективную дезинфекцию, исключать контаминацию патогенов в применяемых вакцинах), так и проводить специфическую профилактику.
Целью нашей работы было изготовление и испытание в эксперименте вакцины инактивированной эмульсионной против синдрома гидроперикардита кур.
В одном из птицехозяйств РФ, где имел место данное заболевание, был отобран материал от павших птиц с характерными патологоанатомическими признаками, выделен изолят вируса и получена его производственная расплодка.
В качестве биологической модели для накопления производственного штамма вируса использовали цыплят-бройлеров в возрасте 15, 20 и 30 суток, серонегативных по данной инфекции. Их заражали вируссодержащим материалом, в объеме 0,5 см3 в мышцу бедра. От павших птиц с соблюдением всех правил асептики и антисептики получали печень, которую гомогенизировали с последующим центрифугированием. После центрифугирования надосадочную жидкость сливали и инактивировали. Антиген контролировали на полноту инактивации, активность в РДП и стерильность, после чего на его основе были изготовлены опытные серии инактивированных эмульсионных вакцин.
В результате лабораторных испытаний оптимальной оказалась вакцина, изготовленная на основе масляного адъюванта ISA-70. Полученная эмульсионная вакцина по внешнему виду представляет собой однородную эмульсию белого цвета, стерильную, с вязкостью 31 мм2/с, определенной с помощью вискозиметра ВПЖ-2 по ГФ XI вып., стр. 87 и стабильностью 3,0 мм, определенной центрифугированием вакцины при 4000 об/мин в течение 30 минут.
Безвредность вакцины проверяли на цыплятах 14 и 50 суточного возраста, которых вакцинировали в область нижней трети шеи, подкожно, в объеме 2,0 см3. Срок наблюдения – 15 дней. Клинические признаки какой-либо патологии в течение всего периода исследований не отмечались. При вскрытии трупов вынужденно убитых по завершении опыта птиц, установлено, что в месте введения вакцины не было признаков воспалительной реакции, значительная часть вакцины рассосалась и отмечаются в виде единичных вкраплений размером 0,1–1,0 мм под кожей шеи и в области зоба.
С целью определения антигенной и иммуногенной активности вакцины, было сформировано две группы цыплят-бройлеров 14 суточного возраста, серонегативных к синдрому гидроперикардита кур. Цыплят первой группы иммунизировали эмульсионной вакциной подкожно в область нижней трети шеи в объеме 0,5 см3/на голову, однократно. Вторая группа была интактным контролем. Через 15 дней после вакцинации для определения иммуногенности было взято от первой и второй группы по 50% птицы, остальные цыплята остались для определения антигенной активности вакцины. Антигенные свойства опытной серий вакцины оценивали по наличию антител в РДП, а иммуногенность – при контрольном заражении подопытной птиц патогенным изолятом вируса.
Рис. 1. Транссудат в перикардиальной полости цыплят, экспериментально зараженных АДВГГ
Вируспреципитирующие антитела в РДП были установлены в сыворотке крови в титре 1:8– 1:16 у 80% вакцинированных цыплят на 21 сутки и у 100% – на 28 сутки после иммунизации. Контрольное внутримышечное заражение, проведенное патогенным штаммом аденовируса в дозе, составляющей LD50 на цыпленка через 15 дней после иммунизации, показало, что смертность и клиническое проявление болезни у вакцинированных птиц отсутствовали, а в группе контрольных невакцинированных цыплят клинические признаки болезни отмечались в 90% случаев и смертность составила 43%. При патологоанатомическом и гистологическом исследование были обнару жены характерные признаки: транссудат в перикардиальной полости (рис. 1) и базофильные тельца-включения в клетках печени (рис. 2).
Рис. 2. Базофильные включения в гепатоцитах цыплят, экспериментально зараженных АДВГГ
Коровин Владимир Иванович. Патогенез, диагностика аденовирусного гидроперикардита кур и его ассоциированного течения с другими инфекционными болезнями птиц : Дис. . канд. вет. наук : 16.00.03, 16.00.02 СПб., 2005 126 с. РГБ ОД, 61:05-16/155
Содержание к диссертации
1. Обзор литературы 8
1.1. Аденовирусный гепатит с включениями-гидроперикардит 8
1.1.1. Характеристика вируса: морфология, химический состав и устойчивость 10
1.1.2. Выделение, репродукция вируса и экспериментальная инфекция 10
1.1.3. Эпизоотология 14
1.1.4. Клинические признаки 17
1.1.5. Патогенез 19
1.1.6. Патоморфологические изменения 22
1.1.7. Диагностика 25
1.1.8. Профилактика аденовирусного гепатита-гидроперикардита 29
1.2. Ассоциированное течение гепатита с включениями -гидроперикардита с другими инфекционными болезнями птиц 31
1.3. Инфекционный бронхит кур (ИБК). Классификация и биологические свойства вируса 32
1.3.1. Выделение, репродукция вируса ИБК и экспериментальная инфекция 34
1.3.2. Эпизоотология 35
1.3.3. Клинические признаки 35
1.3.4. Патогенез 37
1.3.5. Патоморфологические изменения 37
1.3.6. Диагностика, профилактика ИБК 3 8
1.4. Колибактериоз 40
1.5. Противовирусные препараты 44
2. Собственные исследования 46
2.1. Материалы и методы 46
2.2. Результаты собственных исследований 54
2.2.1. Результаты эпизоотологического обследования птицеводческих хозяйств 54
2.2.2. Восприимчивость птиц различных кроссов к аденовирусной инфекции и патоморфология экспериментальной формы аденовирусного гепатита с тельцами включениями - гидроперикардита 69
2.2.3. Патоморфология спонтанной формы аденовирусного гепатита с тельцами включениями - гидроперикардита 71
2.2.4. Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями -гидроперикардита на развитие ИБК 75
2.2.5. Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями -гидроперикардита на восприимчивость цыплят к инфицированию Е.соИ 83
2.2.6. Лечебно-профилактическая и терапевтическая активность бонафтона при экспериментальном аденовирусном гепатите с тельцами включениями - гидроперикардите кур 84
2.2.7. Влияние бонафтона на естественную резистентность цыплят и устойчивость к аденовирусной инфекции 90
5. Практические предложения список литературы 107
Введение к работе
В современных условиях ведения промышленного птицеводства наибольшую опасность представляют инфекционные заболевания птиц, в том числе аденовирусная инфекция кур. Аденовирусный гепатит с вклю-чениями-гидроперикардит (ГТВ) - высококонтагиозное вирусное заболевание птиц, основными признаками которого являются: гепатит, нефрозонефрит, скопление серозной жидкости в перикарде, нарушение свертываемости крови.
Заболевание получило широкое распространение и наносит значительный ущерб птицеводству не только при остром течении в виде "гепатита-гидроперикардита" со смертностью птиц от 20 до 70%, но и при субклиническом проявлении болезни, также сопроводжающимся поражением печени, поджелудочной железы, селезенки и других внутренних органов (Ибрагимов А.А., Горюнова Т.А., 1987; Бакулин В.А., 1991; Лагуткин Н.А. с сотр., 1992; Алиев А.С. с сотр., 1996; Бакулин В.А. с сотр., 1998; Борисов В.В. с сотр., 2003; Крон Н.В., 2003; Khawaja D.A. et al, 1988; Saifuddin M. D., Wilks C.R., 1990; Cowen B.S., 1992; Ahmad Mansur-Ud-Din, Graham W. Burgess, 2001; Shivaprasad H.L. et al., 2001, Raue R.B. et al., 2002). При комплексной диагностике аденовирусного гепатита с включениями-гидроперикардита, большое значение имеют патоморфологические исследования, которые позволяют понять сущность патологичесого процесса, протекаемого в организме зараженных цыплят, выяснить сопутствующую ему иммунологическую перестройку и объяснить многие функциональные изменения во внутренних органах птиц и обусловленные ими клинические признаки заболевания.
В настоящее время остаются недостаточно изученными вопросы патогенеза и диагностики ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями-гидроперикардита с другими инфекционными и неза разными болезнями птиц. Отсутствуют сведения об эффективности хими-опрепаратов при гепатите-гидроперикардите.
Цель и задачи исследований.
Целью настоящих исследований явилось изучение эпизоотологии и патогенеза аденовирусного гепатита с тельцами включениями - гидроперикардита, характера его ассоциированного течения с некоторыми инфекционными болезнями птиц, выбор наиболее достоверных методов диагностики аденовирусного гепатита с тельцами включениями - гидроперикардита и изучение профилактического действия против возбудителя данного заболевания некоторых антивирусных препаратов.
В соответствии с поставленной целью в задачи наших исследований входило:
1. Провести эпизоотический мониторинг по аденовирусному гепатиту с включениями - гидроперикардиту кур в различных птицеводческих хозяйствах России.
2. Изучить патогенез аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита у кур различных кроссов.
3. Исследовать характер ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита с инфекционным бронхитом у птиц различного возраста.
4. Испытать антивирусное действие некоторых химических препаратов с целью неспецифической профилактики аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита.
Проведено эпизоотологическое обследование птицефабрик различных природно-климатических зон страны на птице различных кроссов и направлений продуктивности. Разработана комплексная система диагностики ГТВ, ИБК, ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита с инфекционным бронхитом кур.
Впервые получены сведения о патогенезе и влиянии аденовирусного гепатита с тельцами включениями-гидроперикардита на характер течения инфекционного бронхита кур. Впервые испытан противовирусный препарат в качестве средства неспецифической профилактики аденовирусной инфекции и предложен для применения в промышленном птицеводстве.
Изучено ассоциированное течение аденовирусной инфекции (ГТВ) и короновирусной инфекции (ИБК), что имеет большое значение в ретроспективной диагностике этих инфекций. Доработанная комплексная система диагностики позволяет в кратчайшие сроки ставить диагноз на ГТВ, ИБК и на их ассоциированное течение, своевременно применять средства специфической и неспецифической профилактики этих заболеваний. Для химиопрофилактики аденовирусной инфекции впервые с положительным эффектом в лабораторных и производственных условиях апробирован противовирусный препарат - бонафтон и предложен для применения в промышленном птицеводстве.
По основным положениям диссертации опубликованы 4 научные работы, в которых изложены основные направления исследований по диссертационной теме.
Структура и объем работы.
Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложение.
Работа иллюстрирована 24 таблицами и 11 рисунками. Список литературы включает 165 источников, в том числе 115 иностранных.
Выделение, репродукция вируса и экспериментальная инфекция
Выделение возбудителя проводят от птиц с характерными клиническими признаками аденовирусного гепатита с тельцами включениями -гидроперикардита, с патологоанатомическими изменениями в печени в виде увеличения органа, с наличием точечных кровоизлияний и очагами некроза, аплазией костного мозга, атрофией тимуса и бурсы. Взятые для вирусологического исследования пробы печени проверяют гистологическими исследованиями на присутствие в гепатоцитах характерных для болезни внутриядерных телец-включений. Выделение вируса проводят на культуре клеток, эмбрионах кур и восприимчивых цыплятах (Kefford В.A., Borland R.C, 1979; Recce R.L. et al., 1986; Christensen N.H., Saifuddin M.D., 1989; Saifuddin M.D., Wilks C.R., 1990).
При вскрытии трупов вынужденно убитых и павших птиц в 1 опыте отмечалось увеличение и желтовато-глинистое окрашивание печени, с единичными точечными кровоизлияниями под капсулой органа. У птиц, павших в период максимального клинического проявления заболевания, находили незначительное уменьшение в размере лимфоидных органов.
При заражении 5-дневных птиц наблюдались увеличение и желтовато-глинистое окрашивание печени, точечные кровоизлияния под капсулой органа. В отдельных случаях выявлялись некротические очаги желтовато-белого цвета, округлой и неправильной формы, размером от 1,5 мм шириной, до 3-5 мм длиной, локализовавшиеся чаще по краям долек печени. Фабрициева сумка, тимус и селезенка были несколько меньше по размеру, чем у контрольных птиц. У отдельных цыплят в селезенке отмечались некротические очаги округлой формы, желтовато-белого цвета, величиной около 1 мм.
При гистологическом исследовании было установлено, что характер и динамика патоморфологических изменений во внутренних органах цыплят одинаковы, как при внутрибрюшинном, так и при интраназальном заражении. У птиц, инфицированных внутрибрюшинно, в начальные сроки несколько интенсивней были поражения печени.
Ассоциированное течение гепатита с включениями -гидроперикардита с другими инфекционными болезнями птиц
Инфекционный бронхит кур (ИБК) - остро протекающая высококонтагиозная болезнь вирусной этиологии. Восприимчивы куры всех возрастов. У цыплят она проявляется респираторным и уремическим синдромами, у кур - поражением репродуктивных органов, что ведет к длительному снижению яйценоскости. Болезнь наносит значительный экономический ущерб, обусловленный снижением привесов у молодняка и яйценоскости у кур, плохой окупаемостью кормов, увеличением выбраковки птицы.
Возбудитель ИБК - вирус из семейства Coronaviridae. Вирус инфекционного бронхита кур (ИБК) выделили Бич и Шалк в США в 1936 году.
Вирус ИБК имеет много серотипов (антигенных вариантов): Массачусетс, Коннектикут, Айова 97, Айова 609, Грей, JMK Армилайнд, Брис-бери, Холт, Индиана, В/Е (Д207/Д3896), С (Д212), Арканзас, Менн, Флорида и другие.
В нашей стране ИБК регистрируется с 1968 г. Есть предположения, что на территории России циркулируют несколько генетически различных групп изолятов вируса ИБК. Первую составляют изоляты, имеющие высокое генетическое сходство со штаммами из серотипа Массачусетс, который является географически наиболее широко распространенным (Song C.S. etal., 1998).
Штаммы вируса, изолированные в нашей стране, имеют в большинстве случаев тесное антигенное родство с серотипом Массачусетс.
Изоляты IBV-6/98, IBV-7/98 и IBV-9/98 значительно отличаются от всех имеющихся в банке данных штаммов. На основе этого можно предположить, что эти изоляты имеют оригинальные антигенные свойства, а низкая степень их гомологии между собой указывает на то, что они могут образовывать свои антигенные группы. Профилактика ИБК затруднена тем, что возбудитель заболевания имеет множество серотипов, отличающихся в антигенном отношении.
В связи с высокой генетической изменчивостью вируса ИБК, не исключается возможность появления новых "вариантных" изолятов.
Вирус передается алиментарно, аэрогенно и при контакте к ИБК восприимчивы куры и цыплята всех возрастов (Сюрин В.Н. и др., 1973). Переболевшие птицы приобретают пожизненный иммунитет. Показана антигенная и иммуногенная вариабельность полевых штаммов ИБК. Большинство штаммов вируса размножаются в культуре клеток почки КЭ, фибробластов КЭ и ВНК-21.
Устойчивость вируса к физико-химическим факторам.
Вирус обладает незначительной устойчивостью к различным физико-химическим воздействиям. Большинство штаммов ИБК инактивируется при 56С за 10 минут. Вирус более устойчив в кислой среде, чем в щелочной. Он сравнительно легко разрушается под действием УФ- лучей. Солнечные лучи инактивируют его при 36-38 С за 3 часа: 1%-ные растворы фенола, формалина, крезола, 70%-ный этиловый спирт и раствор соды обезвреживает в течение 3 минут (Лурия С.С. и др., 1981). Хранение и консервирование вируссодержащего материала. Вирус-сод ержащий тканевой материал в 50%-ном глицерине при 4С сохраняет активность свыше 400 дней, при минус 25С - 530 дней. В качестве стабилизатора при лиофилизации используют 10%-ный раствор глюкозы, лактозу, маннит, сухое молоко и др. Вирус хорошо сохраняется в лиофилизиро-ванном состоянии (Al Tarcha В. et al., 1990).
Выделение, репродукция вируса и экспериментальная инфекция Выделяют вирус на куриных эмбрионах. Идентификация выделенного вируса проводится с помощью серологических реакций: РН и РЗГА -типоспецифические реакции, используются для определения серологического типа вируса; РДП и РНГА - идентифицируют вирус без учета его типовой принадлежности; РСК - позволяет установить штаммоспецифич-ность вируса в пределах одного типа. Для диагностики также применяется иммуноферментный метод и МФА. (Bhattacharjee P.S. et al., 1994; Cavanagh D.K., 1999).
Культивировать вирус удается на развивающихся куриных эмбрионах при заражении в аллантоисную полость, амнион или на ХАО. Инфицированные эмбрионы шарообразной формы, мумифицированы, мельче, чем здоровые. При вскрытии карликовых эмбрионов наблюдается гиперемия и отечность оболочек. Амниотическая оболочка помутневшая, плотно облегает тело эмбриона и препятствует его движению. Тело эмбриона скручено по продольной оси и представляет форму шара, конечности деформированы. На вскрытии эмбрионов наблюдается недоразвитие паренхиматозных органов. Кожа сухая и чаще желтушна, оперение развито слабо. Желточный мешок сморщенный, а его содержимое уплотнено. На вскрытии наблюдается недоразвитие паренхиматозных органов; отмечают отек в области затылка и конечностей, а также застойную гиперемию печени, почек, ХАО, головного мозга и кожи.
Результаты эпизоотологического обследования птицеводческих хозяйств
Результаты исследований проб сывороток цыплят в РДП на наличие антител к возбудителю аденовирусного гепатита с включениями гидроперикардита, представлены в табл.6.
Во всех исследованных пробах отмечена дистрофия и/или воспаление печени с одновременным наличием во многих случаях характерных для аденовирусной инфекции интрануклеарных включений в гепатоцитах, однако, характерные поражения печени с наличием внутриядерных включений могли быть в большем количестве проб, поскольку процесс разрушения был очень интенсивным, вероятно, клетки некротизировались и терялась их специфическая структура. Кроме того, отбор проб печени проводился методом случайной выборки и органы с характерными изменениями могли не попасть в число исследуемых.
По результатам комплексного эпизоотологического анализа, проведенного в АОЗТ "Птицефабрика Пермская" Пермской области на день обследования хозяйства клинического и достаточно хорошо выраженного па-тологоанатомически "гепатита-гидроперикардита" не отмечено. Однако последующие лабораторные исследования во ВНИВИП материала взятого в процессе эпизоотологического обследования показало, что в птицехозяй-стве циркулирует возбудитель данного заболевания, вызывающий в основном субклиническое течение аденовирусного гепатита с включениями-гидроперикардита.
Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями -гидроперикардита на восприимчивость цыплят к инфицированию Е.соИ
При вскрытии трупов вынужденно убитых и павших птиц в 1 группе отмечали гидроперикардит, отек легких, увеличение и желтовато-глинистое окрашивание печени, с единичными точечными кровоизлияниями под капсулой органа. В отдельных случаях выявлялись некротиче ские очаги желтовато-белого цвета, округлой и неправильной формы, размером от 1,5 мм шириной до 3-5 мм длиной, локализовавшиеся чаще по краям долек печени. У птиц, павших в период максимального клинического проявления заболевания, находили незначительное уменьшение в размере лимфоидных органов. Фабрициева сумка, тимус и селезенка были несколько меньше по размеру, чем у контрольных птиц.
На 3-е сутки у птиц всех возрастных групп в печени наблюдались гиперемия, очаговые кровоизлияния, наиболее выраженные в области капсулы органа, вакуолизация цитоплазмы гепатоцитов и формирование микронекрозов, часто выявлялись очаговые лимфоидногистиоцитарные про-лифераты, формирующиеся периваскулярно в непосредственной близости от некротических очагов. В ядрах гепатоцитов встречались включения двух типов: эозинофильные и, несколько реже, базофильные. Первые были гомогенные, розового цвета, округлой, овальной, реже неправильной формы с ободком просветления по периферии включения. Ядерный хроматин в виде глыбок был оттеснен к оболочке ядра. Базофильные включения были интенсивно-синего цвета и, сливаясь с ядерным хроматином, полностью заполняли ядро, которое по размерам было в 2-3 раза больше, чем ядра гепатоцитов, не содержащие включения. Отмечались также дистрофические изменения и десквамация эпителия желчных протоков печени.
В тимусе находили обеднение мозгового и особенно коркового слоя долек лимфоцитами, в селезенке - уменьшение клеточных элементов лим-фоидной ткани, в фабрициевой сумке у цыплят 10-дневного возраста - гипоплазию лимфоидных фолликулов.
На 6-е сутки после заражения изменения в печени наблюдались у цыплят 10-,60- и 120-дневного возраста, но у 10-дневных в печени встречались очаговые кровоизлияния, чаще локализованные около капсулы органа, активизация клеток Купфера, иногда содержавших фагоцитированный материал, вакуолизация цитоплазмы гепатитов и микронекрозы. В селезенке у цыплят 10-,60- и 120-дневного возраста на 6-е сутки наблюдали сильное обеднение лимфоцитами белой пульпы, гиперплазию ретикулярных клеток, гиперемию красной пульпы. В отдельных случаях встречались внутриядерные тельца-включения в ретикулярных клетках.
У птиц, имевших одновременно высокоинтенсивные поражения печени и селезенки, выявлены изменения в поджелудочной железе. При этом наблюдались гиперемия, отек и единичные очаговые кровоизлияния в междольковой и межацинарной ткани, очаговые лимфоидногистиоцитар-ные пролифераты. Встречались дистрофические изменения в железистых клетках и формирование одиночных микро-некрозов. В ядрах некоторых железистых клеток отмечались тельца-включения. Базофильные включения были округлой или неправильной формы, с ободком просветления по периферии, занимали половину либо большую часть ядра, хроматин которого был оттеснен к ядерной оболочке, располагаясь вдоль нее в виде глы-бок. Сами ядра при этом выглядели более светлыми и прозрачными, чем ядра непораженных клеток. Эозинофильные включения могли занимать третью часть ядра либо заполнять его полностью, в отдельных случаях представляли собой эозинофильную, гомогенную, округлую, розового цвета структуру, размер которой в 2-3 раза превышал размер непораженных ядер. Наличие внутриядерных включений часто сочеталось с дистрофическими изменениями в железистых клетках. Тимус был несколько гипопла-зирован, обеднен лимфоцитами, с истонченным корковым и гиперемиро-ванным мозговым слоем долек.
Читайте также: