Анализ крови кошек на герпес

Обновлено: 17.04.2024

Цель исследования: качественный анализ для выявления ДНК вируса ринотрахеита кошек (Feline herpes virus)
Герпесвирус кошек (FHV), возбудитель вирусного ринотрахеита кошек, распространен – повсеместно. Описан только один серотип, однако вируленность отдельных штаммов вируса может отличаться.

В клетках кошки FHV реплицируется (размножается) в эпителиальных клетках конъюнктивы и верхних дыхательных путей, в нейронах. Инфицирование нейронов объясняет пожизненное вирусоносительство после первичного инфицирования.

Домашние кошки – основной хозяин FHV, но этот вирус также был выделен от гепардов и львов.

Опасность для человеческого здоровья: нет фактов, подтверждающих восприимчивость к данной инфекции человека

Устойчивость герпес-вируса во внешней среде: при 4⁰С сохраняется около 5 мес, при 25⁰С – около 1 месяца
вирус инактивируется за 3 часа при 37⁰С и за 5 мин при 56⁰С, чувствителен к большинству коммерческих дезинфектантов, антисептиков и детергентов.

Передача инфекции:
Передача через объекты окружающей среды – не является источником распространения, если речь не идет о совместном содержании кошек в группах более 4-5 особей (питомники/приюты).

Основной источник инфекции: кошки в острой стадии и носители в стадии обострения клинических симптомов. Трансплацентарная передача потомству – отсутствует. Восприимчивость котят раннего возраста к инфекции зависит от уровня материнских антител.

Виды течения герпес-вирусной инфекции:

Острая стадия заканчивается через 10-14 дней после инфицирования, при этом выделение вируса через слизистую глаз и носа начинается через 24 часа после инфицирования и длится 1-3 недели. Классическая острая форма – поражение слизистых оболочек в виде ринитов, конъюнктивитов, изъязвление роговицы.Наиболее тяжелое течение отмечается у котят.
Начальные симптомы: саливация, слезотечение, кашель, подъем температуры, отказ от корма, депрессия; серозные или серозно-геморрагические истечения из глаз/носа, гиперемия конюънктивы.

Аборты, в отличие от герпес вирусной инфекции у других видов животных, для кошек не типичны.

Хроническая стадия характерна для некоторых переболевших кошек и характеризуется более глубоким вовлечением в патологический процесс верхних дыхательных путей и тканей глаза и развитием иммуно-опосредованных поражений в них (стромальный кератит, хронический риносинусит).
Переход в латентную форму инфекции после острой фазы объясняется проникновением вируса по сенсорным нервам в нейроны (особенно в тройничный ганглий), и характеризуется периодической реактивацией вируса с выделением во внешнюю среду через слизистые. Практически все кошки, перенесшие острую фазу, становятся пожизненными латентными вирусоносителями. Выделение вируса можно инициировать примерно в 70 % случаев с помощью лечения глюкокортикоидами. Другими факторами, индуцирующими повышение секреции эндогенного кортизола и реактивацию инфекции, будут лактация (40 %) и переезд в новое помещение (18 %)
Лабораторная диагностика герпес-вирусной инфекции:

ПЦР диагностика – предпочтительный метод диагностики герпес-вирусной инфекции на острой стадии, основанный на выделении ДНК FHV из смывов с конюънктивы, носоглотки, соскобов с роговицы.
Не существует никаких прямых методов диагностики герпес-вирусной инфекции (с обнаружением ДНК или антигенов) на хронической и тем более латентной стадии.
Применение серологического тестирования ограничено по следующим причинам. Первое, антитела вырабатываются к 20-30 дню после первичной инфекции. Второе, уровень антител может быть низкий, независимо от того в какой стадии, острой или хронической, находится животное. Третье, из-за широкого распространения в природе герпес-вируса и применения вакцинации, многие кошки серопозитивны (т.е. имеют положительный титр специфических АТ).

Подготовка к исследованию

Требования к пробе: Обратите внимание. Перед сбором материала для ПЦР нельзя использовать флюоресцин и местные анестетики, так как они влияют анализа (ингибируют процесс амплификации НК). - наиболее информативен смывы с коньюктив глаз. - при отсутствии поражений в ротовой полости рекомендуем воздержаться от сбора материала из рта! Общие правила взятия смывов: - смывы с конъюнктивы глаз берется с использовнаием стерильных зондов с ватными тампонами и стерильных пробирок объемом типа Эппендор на 1,5 мл, содержащие 300-500 мкл стерильного физиологического раствора. При наличии на веках корочек или гноя предварительно убрать их стерильной салфеткой смоченной физиологическим раствором. Зонд смочить в жидкости и отжать влагу, прислоняя ватный наконечник к внутренней стенке пробирки. Оттянув веко животного, провести зондом по слизистой века по направлению к носу обмывая глазное яблоко. Тщательно прополоскать зонд в пробирке и аккуратно отжать лишнюю влагу, прижимая наконечник к внутренней стенке пробирки. Тем же ватным зондом повторить процедуру с каждым веком обоих глаз, собирая материал в одну и ту же пробирку. Зонд утилизировать, пробирку плотно закрыть крышкой до щелчка. - Смывы с носовой и ротовой полости берутся аналогично. Для смывов из ротовой полости при отсутствии эррозий предпочтение отдается верхнему своду (небу), так как нижняя челюсть, подъязычная область обсеменены бактериальной микрофлорой. Избегать попадание слюнной жидкости в пробирку с транспортной средой. КАТЕГОРИЧЕСКИ запрещено: оставлять ватные зонды в пробирке при предоставлении проб в лабораторию Хранение и доставка: Материал для анализов доставляется в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при +2-+8⁰С. FHV инфекция часто представлена в комбинации с калицивирусной инфекцией и/или инфекцией Chlamydophila felis, Bordetella bronchiseptica, Mycoplasma spp., поэтому рекомендуется одновременное исследование с этими патогенами. Другие микроорганизмы, включая Staphylococcus spp. и Escherichia coli, могут приводить к так называемой мультиагентной вторичной инфекции респираторного тракта.

Требование к биоматериалу

1. Чтобы избежать ложноположительных результатов необходимо после вакцинации выдержать минимум 2-3 недели перед сдачей анализа. 2. Чтобы избежать ложноположительных результатов необходимо выдержать 2-3 недели после лечения перед сдачей анализа. Контроль за болезнью Для домашних кошек, живущих в группе или в приюте: Всех новых кошек с характерными клиническими симптомами необходимо тестировать методом ПЦР, так как высока опасность распространения инфекции. Экспериментально доказано, что при введении в группу особей выделяющих вирус в количестве 4 % от общей численности всей группы, через 1 неделю количество кошек, выделяющих вирус увеличится до 50 %. Поэтому для вновь прибывших необходим карантин – как минимум 3 недели. Для клинически здоровых кошек предписана вакцинация. При возникновении вспышки инфекции необходимо провести дифференциальную диагностику герпес вирусной инфекции (FHV) от калицивирусной инфекции (FCV) Для владельцев питомников: Наибольший риск инфицирования и развития болезни у котят до отъема – 4-8 недель, когда падает материнский иммунитет. Источник инфекции – кошки-латентные носители инфекции, в которых прошла реактивация вируса на фоне лактации. Однако, кошки с достаточным уровнем защитных АТ (тестирование на определение титра АТ) передадут защитный уровень материнских АТ с молозивом, что гарантирует сопротивляемость организма котят к герпесвирусной инфекции на первых неделях жизни. ВАЖНО! 1. Чтобы избежать ложноположительных результатов необходимо выдержать 2-3 недели после лечения перед сдачей анализа. 2. Положительный результат при отсутствии клинической картины заболевания может означать бактерио-/вирусоносительство.

Герпесвирус кошек FHV-1 (Feline Herpes Virus type 1) — это крупный оболочечный ДНК-содержащий вирус, который встречается у животных повсеместно.

Существует только один серотип FHV-1, изоляты вируса генетически сходны, однако разные штаммы отличаются вирулентностью. По результатам исследований методом вирусологического посева, вирус обнаруживается у 39% кошек, хотя в некоторых питомниках его распространенность может быть выше. Его встречаемость у кошек с острой инфекцией верхних дыхательных путей может достигать почти 100%. У клинически здоровых кошек выделение вируса наблюдается в 10% случаев. Практически у всех заболевших животных развивается латентная инфекция, первоначально поражающая тройничный ганглий. ДНК FHV-1 также обнаруживается в роговице и тканях носовой полости. Реактивация выделения вируса, при котором клинические признаки инфекции верхних дыхательных путей могут наблюдаться или отсутствовать, происходит менее чем у половины кошек с латентной инфекцией в течение 4–12 дней после перенесенного стресса, например, при транспортировке, лактации, наличии сопутствующих заболеваний или использовании иммуносупрессивных препаратов, таких как глюкокортикоиды. Продолжительность выделения вируса после реактивации составляет от 1 до 13 дней (в среднем 7 дней). При выделении вируса во время лактации происходит инфицирование котят.

FHV-1 может сохранять жизнеспособность во внешней среде в течение максимум 18 часов при комнатной температуре и быстро инактивируется высушиванием и большинством дезинфектантов. Передача вируса происходит, главным образом, при непосредственном контакте с инфицированным животным, хотя контаминированные предметы также являются важным фактором передачи инфекции. Воздушно-капельный путь передачи инфекции имеет меньшее значение. Имеются данные о возможности трансплацентарной передачи вируса.

Вначале репликация FHV-1 происходит в клетках слизистой оболочки верхних дыхательных путей, конъюнктиве и миндалинах. Инкубационный период для герпесвирусной инфекции составляет в среднем от двух до шести дней. Выделение вируса начинается на ранней стадии болезни и обычно продолжается в течение 1–3 недель.

Неспецифическими признаками острой инфекции FHV-1 являются лихорадка, угнетение и анорексия. При язвенном рините вначале наблюдаются серозные выделения из носа, которые после развития вторичной бактериальной инфекции становятся слизисто-гнойными. Часто обнаруживается поражение придаточных пазух носа, костей носовых раковин и подлежащей хрящевой ткани, ведущее к развитию хронического ринита. При репликации вируса в роговице возникают блефароспазм, фотофобия, выделения из глаз, дендритные язвы. Язвообразование слизистой оболочки ротовой полости может быть выраженным и вызывать анорексию, болезненность ротовой полости и птиализм. В некоторых случаях развивается интерстициальная пневмония. Смерть больных животных наступает в результате анорексии, дегидратации и вторичных бактериальных инфекций.

Нетипичными симптомами инфекции FHV-1 являются аборты и эозинофильный язвенный дерматоз морды.

Хотя существует несколько причин чихания у кошек, при его персистировании в течение более 48 часов необходимо подозревать наличие вирусной инфекции верхних дыхательных путей, особенно у невакцинированных кошек, и животных, у которых отмечается вышеупомянутый симптом.

Возможна изоляция вируса FHV-1 в культуре клеток с использованием мазков из ротоглотки и с конъюнктивы. Однако данный метод исследования редко используется ввиду длительности выполнения и отсутствия стандартизации.

ПЦР позволяет обнаружить ДНК FHV-1 в соскобах с конъюнктивы, образцов секвестров роговицы и других тканей. Данный метод исследования более чувствителен, чем изоляция вируса и считается предпочтительным. Однако, ввиду высокой чувствительности данного метода, возможно обнаружение ДНК, не имеющей отношения к болезни, а также ДНК вакцинного вируса. Поэтому положительный результат ПЦР может свидетельствовать о низком уровне выделения вируса, наличии латентной инфекции, проведенной вакцинации и должен интерпретироваться с учетом результатов других исследований.

Сроки исполнения: 2 дня (плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: эпителий слизистой оболочки носовой полости.

Метод исследования: ПЦР в режиме Real - time.

Подготовка пациента: биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов; при наличии гнойного отделяемого необходимо предварительно его удалить при помощи чистой марлевой салфетки, смоченной 0,9% физиологическим раствором (NaCl).

Показания: чихание, кашель, выделения из носа, обследование животных перед выставками и после, перед вязкой и перед продажей.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: соскоб эпителиальных клеток слизистой носовой полости с помощью урогенитального зонда.

Преаналитика:

Урогенитальный зонд аккуратно ввести на глубину 0.1-0.3 см в носовой проход и вращательными движениями набрать клеточный материал со слизистой оболочки.
Перенести зонд в микропробирку 2 мл с транспортной средой, вращательными движениями "смахнуть" биоматериал в жидкость, зонд утилизировать.
Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.
Микропробирку маркировать Ф.И.О. владельца, кличкой животного, указать локализацию.
Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
Температурный режим транспортировки в лабораторию -2℃…-8℃ (синий пакет)

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Формат выдачи результата: качественный метод. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Feline herpesvirus-1 (FHV-1).

Нетипичными симптомами инфекции FHV-1 являются аборты и эозинофильный язвенный дерматоз морды.

Сроки исполнения: 2 дня (плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: биоптат ткани (плацента; печень, почка неонатала).

Метод исследования: ПЦР-Real time.

Подготовка пациента: не требуется.

Показания: аборт у беременных кошек, мертворожденные плоды.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: кусочек ткани (плаценты, почки, печени неонатала) отбирается с помощью пинцета и скальпеля в микропробирку с транспортной средой.

Преаналитика: Важно! Патматериал отбирается не позднее 2-х часов с момента гибели неонатала или абортирования плода. Размер ткани, помещенной в микропробирку с транспортной средой, не должен превышать размеры: 0,5х0,5х0,5 см.

Порядок действий:

Провести операционную/аутопсийную вырезку фрагмента ткани.
Поместить биоптат в микропробирку с транспортной средой и плотно закрыть ее крышкой до щелчка.
Заморозить микропробирку в вертикальном положении при -17°С…-23°С.
Заполнить все графы направительного бланка.
Сохранность образца 1 месяц при -17°С…-23°С.
Температурный режим транспортировки в лабораторию –17°С. -23°С (красный пакет).

Герпесвирус кошек (Feline Herpes Virus type 1) — это крупный оболочечный вирус, который встречается у животных повсеместно.

Существует только один серотип , изоляты вируса генетически сходны, однако разные штаммы отличаются вирулентностью. По результатам исследований методом вирусологического посева, вирус обнаруживается у 39% кошек, хотя в некоторых питомниках его распространенность может быть выше. Его встречаемость у кошек с острой инфекцией верхних дыхательных путей может достигать почти 100%. У клинически здоровых кошек выделение вируса наблюдается в 10% случаев. Практически у всех заболевших животных развивается латентная инфекция, первоначально поражающая тройничный ганглий. ДНК также обнаруживается в роговице и тканях носовой полости. Реактивация выделения вируса, при котором клинические признаки инфекции верхних дыхательных путей могут наблюдаться или отсутствовать, происходит менее чем у половины кошек с латентной инфекцией в течение 4–12 дней после перенесенного стресса, например, при транспортировке, лактации, наличии сопутствующих заболеваний или использовании иммуносупрессивных препаратов, таких как глюкокортикоиды. Продолжительность выделения вируса после реактивации составляет от 1 до 13 дней (в среднем 7 дней). При выделении вируса во время лактации происходит инфицирование котят.

может сохранять жизнеспособность во внешней среде в течение максимум 18 часов при комнатной температуре и быстро инактивируется высушиванием и большинством дезинфектантов. Передача вируса происходит, главным образом, при непосредственном контакте с инфицированным животным, хотя контаминированные предметы также являются важным фактором передачи инфекции. путь передачи инфекции имеет меньшее значение. Имеются данные о возможности трансплацентарной передачи вируса.

Вначале репликация происходит в клетках слизистой оболочки верхних дыхательных путей, конъюнктиве и миндалинах. Инкубационный период для герпесвирусной инфекции составляет в среднем от двух до шести дней. Выделение вируса начинается на ранней стадии болезни и обычно продолжается в течение 1–3 недель.

Неспецифическими признаками острой инфекции являются лихорадка, угнетение и анорексия. При язвенном рините вначале наблюдаются серозные выделения из носа, которые после развития вторичной бактериальной инфекции становятся . Часто обнаруживается поражение придаточных пазух носа, костей носовых раковин и подлежащей хрящевой ткани, ведущее к развитию хронического ринита. При репликации вируса в роговице возникают блефароспазм, фотофобия, выделения из глаз, дендритные язвы. Язвообразование слизистой оболочки ротовой полости может быть выраженным и вызывать анорексию, болезненность ротовой полости и птиализм. В некоторых случаях развивается интерстициальная пневмония. Смерть больных животных наступает в результате анорексии, дегидратации и вторичных бактериальных инфекций.

Нетипичными симптомами инфекции являются аборты и эозинофильный язвенный дерматоз морды.

Проводить тестирование на наличие ретровирусов необходимо всем кошкам, здоровым и больным. Ретровирусные инфекции могут замедлять выздоровление при вирусных респираторных болезнях.
Возможна изоляция вируса в культуре клеток с использованием мазков из ротоглотки и с конъюнктивы. Однако данный метод исследования редко используется ввиду длительности выполнения и отсутствия стандартизации.

ПЦР позволяет обнаружить ДНК в соскобах с конъюнктивы, образцов секвестров роговицы и других тканей. Данный метод исследования более чувствителен, чем изоляция вируса и считается предпочтительным. Однако, ввиду высокой чувствительности данного метода, возможно обнаружение ДНК, не имеющей отношения к болезни, а также ДНК вакцинного вируса. Поэтому положительный результат ПЦР может свидетельствовать о низком уровне выделения вируса, наличии латентной инфекции, проведенной вакцинации и должен интерпретироваться с учетом результатов других исследований.

Для исследования доступны следующие тесты:

AN 328 НОС — соскоб эпителиальных клеток носовой полости;
AN 328 РОТ — соскоб эпителиальных клеток слизистой ротовой полости;
AN328 ГЛЗ — соскоб эпителиальных клеток конъюнктивы.
Соскобы помещают в микропробирку с транспортной средой. Стабильность такого биоматериала при температуре +2.+8 ℃ до 10 дней;
AN 328БТК — берут кусочек ткани, помещают в микропробирку с транспортной средой и замораживают (-17. — 23 ℃) . Сохранность биоматериала до месяца.

Преаналитика:

Урогенитальный зондом набрать клеточный материал со слизистой оболочки ротовой полости.
Перенести зонд в микропробирку 2 мл с транспортной средой, вращательными движениями "смахнуть" биоматериал в жидкость, зонд утилизировать.
Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.
Микропробирку маркировать Ф.И.О. владельца, кличкой животного, указать локализацию.
Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
Температурный режим транспортировки в лабораторию -2℃…-8℃ (синий пакет)

Интерпретация:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Результат исследования:

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Feline Herpes Virus (FHV).

Герпесвирусная инфекция кошек, или ринотрахеит (FHV)- заболевание, вызванное вирусом герпеса.

Ринотрахеит – широко распространенное респираторное заболевание кошачьих, вызываемое вирусом герпеса кошек тип 1. Заболевание видоспецифичное и не представляет угрозы для других видов животных и человека. Протекает в острой и хронической форме.

Источник инфекции:

больные животные с острой формой инфекции/
переболевшие кошки - носители: являются скрытыми (латентными), т.е. без симптомов болезни, носителями вируса в нервных клетках, особенно тройничного нерва, длительность носительства в среднем составляет 6 мес, но может быть пожизненной.
кошки с хронической формой инфекции в стадии обострения.

Заражение вирусом происходит через выделения из носа, рта, глаз больных животных: при непосредственном контакте с больной кошкой, через инфицированный воздух, предметы ухода, корма, а также через обувь и одежду людей, контактировавших с источником инфекции. Внедрение и размножение вируса (репликация) в организме кошки происходит в основном в слизистых оболочках носоглотки и миндалин, но помимо этого часто в патологический процесс включается конъюнктива глаз, лимфоузлы и пр.; заражение невакцинированных беременных кошек приводит к внутриутробному инфицированию плодов ( и как следствие- аборты, рождение мертвых или нежизнеспособных плодов).

Выделение вируса в окружающую среду начинается через 24 часа после заражения и продолжается до 3 недель. Устойчивость вируса: вирус погибает при 37С в течение 3 часов, при 56С – в течение 5 мин; остается жизнеспособным при 25С в течение 1 мес, при 4С -5 месяцев. Чувствителен к большинству дезинфектантов и антисептиков.

Вирус герпеса кошек приводит, как правило, к острому респираторному заболеванию. Инкубационный (скрытый) период заболевания обычно 2-6 дней.

Клинические признаки заболевания:

Угнетение и отсутствие аппетита.
Чихание и выделения из носа и глаз, сначала прозрачные (серозные), а при продолжительном течение болезни становятся слизисто-гнойными.
Повышение температуры тела.
Может быть кашель, одышка.
Иногда появляются язвы языка, что клинически напоминает другую инфекционнную болезнь кошек - кальцивироз. Чаще всего этот симптом наблюдается у кошек с хроническим течением герпеса в стадии обострения.
Поражение роговицы: язвы и глубокий кератит.
Может быть слюнотечение (обычно наблюдается при язвах в ротовой полости).
Очень редко - язвы на носу, коже морды.
Часто ринотрахеит протекает совместно с другими инфекциями: хламидиоз, кальцивироз, микоплазмоз, бордетелла бронхосептика (Bordetella bronchiseptica).

Несмотря на то, что данная болезнь может приводить к тяжелому состоянию, уровень смертности невысокий, за исключением очень маленьких котят и кошек с сильно ослабленным иммунитетом. Смерть бывает наиболее часто вследствие обезвоживания, вторичной бактериальной инфекции, приводящей к бронхопневмонии. В среднем симптомы болезни наблюдаются в течение 7-10 дней.

После переболевания острой герпесвирусной инфекцией около 80% кошек остаются вирусоносителями (т.е. внешне выглядят совершенно здоровыми) и примерно 50% из них выделяют вирус в окружающую среду. Выделение вируса может происходить спонтанно, но в основном это случается после стресса: переезд на другое место жительства, посещение выставок, роды, лактация, использование глюкортикостероидов (например, преднизолон, дексаметазон), оперативные вмешательства и др.
Кошки могут стать вирусоносителями и без проявления каких-либо симптомов, т.е. кошка, заразившись, может оказаться носителем даже несмотря на то, что сама никогда не проявляла признаков болезни или была полностью вакцинирована.
Также для ринотрахеита характерен переход в хроническую (латентную, или скрытую) форму: в этом случае вирус поступает в окружающую среду только в период обострения, т.е. когда проявляются симптомы заболевания. Хроническая (латентная) герпесвирусная инфекция наиболее часто переходит в острую стадию из-за стресса: переезд, выставки, оперативные вмешательства и др.

Диагностика:

Несмотря на то, что у кошек встречаются и другие инфекции, сопровождающиеся респираторными симптомами (такие как кальцивироз, хламидиоз и др.), в большинстве случаев для постановки диагноза достаточно имеющихся клинических признаков.

Для диагностики в России чаще всего используют метод ПЦР, для этого берутся мазки из носа и конъюнктивы глаз. При первичной герперсвирусной инфекции вирус обнаруживается максимум в течение 7 дней от начала клинических проявлений, при повторной инфекции- максимум в течение 4 дней, во время латентной фазы в обычных мазках с конъюнктивы вирус не выявляется, т.к здесь его уже нет, а локализуется он в клетках нервной ткани.

Читайте также: