Анализ пцр на гепатит с качественный отрицательный что это значит
Обновлено: 18.04.2024
Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.
При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.
Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.
Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.
При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.
Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.
HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.
При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении - санации организма.
Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:
для диагностики острого гепатита В:
- инкубационный период;
- острый период заболевания;
- ранняя стадия реконвалесценции;
для диагностики хронического вирусного гепатита В;
- персистирующем хроническом гепатите;
- циррозе печени;
для скрининга и выявления больных в группах риска:
- больные с частыми гемотрансфузиями;
- больные с хронической почечной недостаточностью;
- больные с множественным гемодиализом;
- больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.
Оценка результатов исследования
Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.
Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В JgG (анти- HBcAg JgG )
В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.
Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.
В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.
Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.
Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.
Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.
Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.
Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.
Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.
Критериями наличия хронического гепатита В являются:
Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (качественно)
Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.
Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.
Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.
Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.
Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:
Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии
Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (количественно)
Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.
Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.
- Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
- менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
- от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
- более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.
Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.
Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).
Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.
Как работает ПЦР-анализ?
У каждого болезнетворного микроорганизма есть свой, уникальный порядок построения цепочки ДНК, поэтому его невозможно спутать с ДНК человека.
При проведении теста ПЦР используют фрагмент чужеродного генетического материала, добытый из образца, и размножают много раз с помощью белка-фермента. За несколько часов количество копий увеличивается в несколько миллиардов раз. Это позволяет получить такое количество ДНК, которого достаточно для успешного определения его природы.
В лабораториях используют определенный набор реактивов для каждого конкретного микроорганизма, поэтому пациентам назначают не общий ПЦР-анализ, а тест на конкретный микроорганизм (например, на вирус гепатита С).
Полимеразная цепная реакция проводится качественно и количественно. Качественный тест позволяет определить, есть ли в образце генетический материал микроорганизма (вируса или бактерии), который ищет врач. Количественный тест дает информацию о том, в каком количестве содержится материал.
Преимущества ПЦР-анализа
К достоинствам этого диагностического метода относят:
- Универсальность. ПЦР-тест обнаруживает любые ДНК и РНК, даже в тех случаях, если другие диагностические методы не дали результата.
- Эффективность. Полимеразная цепная реакция позволяет диагностировать некультивируемые, трудно культивируемые и латентно существующие формы патогенных микроорганизмов.
- Высокую чувствительность. Даже если в исследуемом материале присутствует всего один фрагмент генетического материала возбудителя, тест все равно показывает его.
- Высокую специфичность метода, достигающую 100%. В ходе диагностики выявляют уникальную последовательность нуклеотидов в цепочке ДНК, характерную только для конкретного патогенного микроорганизма, провоцирующего развитие заболевания.
- Высокую скорость выполнения. Для установки реакции достаточно несколько часов. Пациент получает результаты анализа на следующий день после сдачи.
ПЦР-тест направлен на определение возбудителя заболевания, а не на реакцию на его проникновение со стороны организма.
Показания к проведению ПЦР-теста
Анализ проводят при инфекционных заболеваниях для определения природы их возбудителя. Также его назначают при:
- необходимости точно установить конкретный болезнетворный микроорганизм;
- диагностике лейкоза и других злокачественных новообразований;
- диагностике некоторых генетически обусловленных заболеваний;
- исследовании образцов биопсии, которые невозможно изучить с помощью других методов.
С помощью ПЦР-анализа выявляют различные заболевания:
- инфекционные (ВИЧ, гепатит, ТОРЧ-инфекции и т.д.);
- передающиеся половым путем (хламидии, микоплазмы, кандиды);
- внутриутробные инфекции (вирусы краснухи, герпеса, токсоплазмы);
- респираторные (в настоящее время ПЦР-тест является золотым стандартом в диагностике вируса Ковид-19);
- генетические.
С помощью ПЦР можно провести тест на определение отцовства.
Типы ПЦР
Диагностика на основе полимеразной цепной реакции имеет несколько разновидностей. Она может быть:
- инвертированной;
- с обратной транскрипцией;
- количественной;
- вложенной;
- ступенчатой.
Наиболее надежный метод — ПЦР в режиме реального времени. Это количественный или полуколичественный способ диагностики, который предусматривает постоянное наблюдение образца генетического материала датчиком. Последний регистрирует сигналы на каждом цикле реакции.
Подготовка к анализу
При подготовке к ПЦР-анализу нужно соблюдать несколько правил:
- За 10-14 дней до назначенного теста прекратить прием любых препаратов и отказаться от проведения лечебных процедур, включая физиотерапевтические. Если прием лекарственных средств жизненно необходим, об этом нужно предупредить врача заранее.
- В случае забора мазка на выявление заболеваний, передающихся половым путем, нужно в течение суток перед исследованием отказаться от спринцеваний, использования тампонов и лечебных суппозиториев, применения антисептических средств. Также в этот период необходимо воздерживаться от половых актов. За 2 часа до забора мазка нельзя мочиться.
- Если выполняется забор мазка из зева, за 3 часа до анализа нельзя чистить зубы, пить, полоскать рот (даже простой водой).
- За трое суток до сдачи материала на ПЦР-исследование нужно полностью отказаться от употребления алкоголя.
- За двое суток до проведения теста нужно исключить повышенные физические нагрузки.
Материалы для ПЦР-анализа
В зависимости от направленности теста ПЦР, в качестве материала для исследования используют:
- кровь (сыворотка или плазма);
- соскобы эпителиальных клеток (с кожных покровов, слизистой оболочки уретры, цервикального канала);
- различные биологические жидкости (околоплодная, суставная, спинномозговая жидкости, секрет предстательной железы);
- мазок из зева;
- различные биологические выделения (слюна, моча, мокрота);
- биоптат (материал, полученный путем проведения биопсии).
Расшифровка результатов ПЦР-тестирования
Результат ПЦР-анализа либо положительный, либо отрицательный. Положительный указывает на то, что у человека присутствуют фрагменты ДНК возбудителя заболевания, то есть, что человек заражен и ему необходимо лечение. Отрицательный результат ПЦР-анализа свидетельствует об отсутствии следов ДНК патогена. В таком случае человек здоров.
В некоторых случаях ПЦР-тест дает положительный результат, хотя человек не ощущает недомогания и специфических симптомов заражения. Это значит, что заболевание выявлено на ранней стадии развития. Для уточнения диагноза назначают дополнительные исследования, а затем, с учетом их результата, начинают курс лечения.
Антитела к вирусу гепатита С — защитные белки, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на внедрение этого патогенного микроорганизма. Они указывают на то, что иммунная система организма знакома с вирусом и выработала защитные антитела к нему.
Анализ на выявление таких антител проводится для того, чтобы определить в крови специфические маркеры инфицирования — суммарные антитела к вирусу гепатита С (IgG, IgM) и вирусную РНК. Для исследования выполняют забор венозной крови у пациента.
Основная информация об исследовании
Вирус гепатита С относится к группе РНК-содержащих микроорганизмов. Он поражает клетки печени и становится причиной развития гепатита. Вирус гепатита С размножается в клетках крови. Он характеризуется большим количеством вариаций, а также высокой мутационной активностью. Последнее качество позволяет вирусу избегать защитных механизмов иммунитета человека.
Антитела к вирусу гепатита С представляют собой специфические иммуноглобулины классов IgG и IgM к белкам антивируса. Если они присутствуют в крови человека, то это указывает на возможное инфицирование вирусом гепатита С либо на перенесенную ранее инфекцию.
Единственный достоверный критерий выявления присутствия вируса гепатита С в организме человека — определение вирусной РНК. Она определяется уже в первые недели заболевания, а антитела появляются только через 8 недель (в среднем).
Показания к проведению анализа
Анализ на антитела к вирусу гепатита С проводят при:
- подготовке пациента к проведению операции;
- частом проведении оперативных вмешательств или выполнении стоматологических манипуляций;
- планировании беременности и в период беременности;
- подготовке к сдаче крови в целях донорства;
- подготовке пациента к переливанию крови;
- наличии симптомов вирусного гепатита;
- повышении уровня печеночных ферментов (АСТ и АЛТ);
- хронических болезнях печени и желчевыводящих путей.
Также анализ назначают после контакта пациента с кровью, которая, возможно, инфицирована вирусом гепатита С.
Анализ на антитела к вирусу гепатита С также проводится детям, которые родились от инфицированной матери.
Характеристика антител IgM и IgG
Иммуноглобулины IgM и IgG — антитела, которые вырабатываются иммунной системой организма в ответ на инфицирование. Это наиболее крупные антитела из всего семейства иммуноглобулинов.
Антитела класса IgМ — иммуноглобулины, которые указывают на возможное инфицирование либо на реактивацию процесса. Они являются маркером ранней стадии инфекции и указывают на острое течение. Такие антитела вырабатываются в организме инфицированного через 6 недель после заражения.
Антитела класса и IgG — основной тип антител, которые позволяют определить инфицирование вирусом гепатита С. Они указывают на хроническую инфекцию. Этот иммуноглобулин является вторичным иммунным ответом. Антитела IgG вырабатываются через 3 месяца после возникновения заболевания.
Как подготовиться к анализу?
К анализу на определение антител к вирусу гепатита С необходимо правильно подготовиться, чтобы не исказить результаты. Подготовка включает такие моменты:
- Питание. Кровь для выявления антител к вирусу гепатита С сдают натощак, с 8 до 11 утра. Между процедурой забора крови и последним приемом пищи должно пройти не менее 8 и не более 14 часов. За сутки до анализа нужно отказаться от употребления слишком жирной и сладкой пищи. В качестве ужина перед процедурой подойдут нежирный творог, каша на воде, макаронные изделия из твердых сортов пшеницы, овощной суп.
- Физическая активность. За сутки до сдачи анализа нужно отказаться от физических нагрузок, включая занятия в бассейне и тренажерном зале. Также нужно ограничить половую активность.
- Употребление спиртного. Алкоголь нужно исключить за 3-5 дней до назначенного анализа.
- Прием медикаментов. Многие лекарственные препараты могут исказить результаты анализа на гепатит С. Перед его проведением по возможности нужно отказаться от приема любых медикаментов как минимум за 3 дня до этого. Если лекарства жизненно необходимы и их нельзя отменить, об этом нужно предупредить лечащего врача.
- Курение. Как минимум за час до анализа нужно отказаться от сигарет.
- Проведение инструментальных диагностических исследований (ректальные манипуляции, биопсия, УЗИ, МРТ). Между проведенной процедурой и забором крови на гепатит С должно пройти не менее 7 дней.
- Тепловые процедуры (посещение бани, сауны). В течение суток, предшествующих сдаче анализа, нужно воздержаться от них.
Женщинам рекомендуется сдавать анализ вне периодов менструаций.
Как проходит сдача крови на гепатит С?
Для выявления антител к вирусу гепатита С выполняют забор венозной крови в локтевом сгибе. У детей кровь могут брать из яремной, лобной или височной вены.
Анализ крови выполняется натощак, с утра не рекомендуется даже чистить зубы, а также использовать жевательную резинку.
Непосредственно перед сдачей крови нужно спокойно посидеть несколько минут и наладить дыхание: волнение и стрессовое состояние также отрицательно сказываются на результатах анализа.
При необходимости пациенту назначают повторный анализ на антитела к вирусу гепатита С.
Оценка результатов исследования
Результат анализа на определение антител к вирусу гепатита С выражается качественно и интерпретируется как отрицательный или положительный. Отрицательный результат означает, что в сыворотке крови отсутствуют суммарные антитела IgM и IgG. Результат является положительным, если были выявлены суммарные антитела IgM и IgG. В таком случае речь идет о:
- начальной стадии острого вирусного гепатита типа С;
- остром периоде инфекции;
- ранней стадии восстановления организма после инфекционного процесса;
- перенесенном вирусном гепатите С (в острой или хронической форме).
При обнаружении суммарных антител к вирусу гепатита типа С проводят дополнительные исследования для подтверждения диагноза и исключения вероятности ложноположительного результата анализа. Для этого применяют ПЦР-метод. С его помощью можно выявить наличие РНК вируса гепатита С в крови — как качественно, так и количественно. Это наиболее информативный метод диагностики гепатита С.
Так как этот вирус поражает преимущественно клетки печени, при его обнаружении необходимо провести обследования органа. Это УЗИ печени и комплексный анализ крови для диагностики фиброза и определения активности разрушительных процессов.
После проведения терапии пациенты должны еще раз сдать кровь на анализ для выявления антител к вирусу гепатита С.
Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке в норме отсутствуют
Суммарные антитела к вирусу гепатита С представляют собой антитела классов IgM и IgG, направленные к комплексу структурных и неструктурных белков вируса гепатита С.
Это исследование является скрининговым для выявления пациентов с ВСГ. Суммарные антитела к вирусу гепатита С можно выявить в первые 2 недели заболевания, и их присутствие свидетельствует о возможной инфицированности вирусом или перенесенной инфекции.
Однозначный ответ на основании результатов данного теста получить невозможно, так как тест определяет суммарные антитела IgM и IgG. Если это ранний период острого вирусного гепатита С, то об этом свидетельствуют антитела IgM, а если это период реконвалесценции или состояние после перенесенного ВГС, то на это указывают антитела IgG.
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, перенесенном вирусном гепатите С или хроническом вирусном гепатите С.
Однако обнаружение суммарных антител к ВГС недостаточно для постановки диагноза ВГС и требует подтверждения для исключения ложноположительного результата исследования. Поэтому при получении положительного результата скринингового исследования на суммарные антитела к ВГС в лаборатории проводится подтверждающий тест. Окончательный результат определения суммарных антител к ВГС выдается совместно с результатом подтверждающего теста.
Антитела к вирусу гепатита С JgM
Антитела к вирусу гепатита С JgM в сыворотке в норме отсутствуют. Наличие антител класса JgM к ВГС в крови пациента позволяет верифицировать активную инфекцию. Антитела класса JgM могут выявляться не только при остром ВГС, но и при хроническом гепатите С.
Антитела класса JgM к ВГС появляются в крови пациента спустя 2 недели после развития клинической картины острого вирусного гепатита С или обострения хронического гепатита и обычно исчезают спустя 4-6 месяцев. Снижение их уровня может свидетельствовать об эффективности лекарственной терапии.
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител JgM к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител JgM к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции или активном хроническом вирусном гепатите С.
Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (качественно)
Вирус гепатита С в крови в норме отсутствует.
В отличие от серологических методов диагностики ВГС, где обнаруживают антитела к ВГС, ПЦР позволяет выявить наличие непосредственно РНК ВГС в крови как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих служит консервативный участок генома гепатита С.
Обнаружение только антител к ВГС подтверждает лишь факт инфицирования пациента, но не позволяет судить об активности инфекционного процесса (о репликации вируса), о прогнозе заболевания. Кроме того, антитела к вирусу ГС обнаруживают как в крови больных острым и хроническим гепатитом,так и у тех пациентов, кто болел и выздоровел, а нередко антитела в крови появляются только спустя несколько месяцев после появления клинической картины заболевания, что затрудняет диагностику. Обнаружение вируса в крови методом ПЦР – более информативный метод диагностики.
Качественное выявление ВГС методом ПЦР в крови свидетельствует о виремии, позволяет судить о размножении вируса в организме и является одним из критериев эффективности противовирусной терапии.
Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 50-100 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выделение ДНК-пробы, специфичность – 98%. Обнаружение РНК вируса гепатита С с помощью ПЦР на ранних этапах развития вирусной инфекции (возможно уже через 1-2 недели после заражения) на фоне полного отсутствия каких-либо серологических маркеров может служить самым ранним свидетельством инфицирования.
Однако изолированное выявление РНК вируса гепатита С на фоне полного отсутствия каких-либо других серологических маркеров не может полностью исключить ложноположительный результат ПЦР. В таких случаях требуется всесторонняя оценка клинических, биохимических и морфологических исследований и повторное неоднократное подтверждение наличия инфекции ПЦР.
Согласно рекомендациям ВОЗ для подтверждения диагноза вирусного гепатита С необходимо троекратное выявление РНК вируса гепатита С в крови пациента.
Обнаружение РНК вируса гепатита С методом ПЦР используется в целях:
Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (количественно)
Количественный метод определения содержания РНК вируса гепатита С в крови дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. Аналитическая чувствительность метода составляет от 5.102 копий/мл вирусных частиц в сыворотке крови, специфичность – 98%.
Уровень виремии оценивают следующим образом: при содержании РНК ВГС от 10^2 до 10^4 копий/мл – низкий; от 10^5 до 10^7 копий/мл – средний и выше 10^8 копий /мл – высокий.
Количественное определение содержания РНК ВГС в сыворотке крови методом ПЦР имеет важное значение для прогноза эффективности лечения интерфероном-альфа. Показано, что наиболее благоприятный прогноз заболевания и наибольшую вероятность положительного ответа на противовирусную терапию имеют лица с низким уровнем виремии. При эффективном лечении уровень виремии снижается.
Генотипирование вируса гепатита С - определение генотипа
Метод ПЦР позволяет не только выявить РНК ВГС в крови, но и установить его генотип. Наиболее важное значение для клинической практики имеют 5 субтипов ВГС – 1а, 1b, 2а, 2b и 3а. В нашей стране наиболее часто встречается субтип 1b, далее идут 3а, 1а, 2а.
Определение генотипа (субтипа) вируса имеет важное значение для прогноза течения ВГС и подбора пациентов с хроническим ВГС к проведению лечения интерфероном-альфа и рибавирином.
При инфицировании пациента субтипом 1b хронический ВГС развивается примерно в 90% случаев, при наличии субтипов 2а и 3а – в 33-50%. У пациентов с субтипом 1b заболевание протекает в более тяжелой форме и часто заканчивается развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. При инфицировании субтипом 3а у больных более выражен стеатоз, поражение желчевыводящих путей, активность АЛТ и менее выражены фиброзные изменения в печени, чем у пациентов с субтипом 1b.
Показаниями к лечению хронического ВГС интерфероном–альфа являются:
При лечении интерфероном-альфа больных вирусным гепатитом С с субтипом 1b эффективность терапии отмечается в среднем в 18% случаев, у инфицированных другими субтипами – в 55%. Использование комбинированной схемы лечения (интерферон-альфа + рибавирин) повышает эффективность терапии. Стойкий ответ наблюдается у 28% больных с субтипом 1b и у 66% - с другими субтипами ВГС.
Читайте также: