Что такое неструктурный белок гепатита с

Обновлено: 19.04.2024

Определение в крови иммуноглобулинов IgG к белкам вируса гепатита С, которое используется для диагностики этого заболевания.

Синонимы русские

Антитела к белкам гепатита С;

Синонимы английские

Antibodies to structural and non-structural proteins of HCV;

Antibodies to HCV.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования;
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Гепатит С – вирусное заболевание печени, отличительной чертой которого является бессимптомное течение и высокая частота прогрессии в хронический гепатит, цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. Основной путь передачи гепатита С – через кровь и ее компоненты. Группы риска по заражению ВГС:

Медицинские работники;
Люди, использующие инъекционные наркотики;
Пациенты с ВИЧ;
Люди, которым были сделаны татуировки с помощью нестерильных инструментов;
Пациенты, получившие переливание крови или ее компонентов до 1992 г.;
Пациенты, получившие трансфузию факторов свертывания крови до 1987 г.;
Пациенты, получающие лечение гемодиализом в течение длительного времени;
Дети, рождённые от матерей с ВГС.

Следует отметить, что по крайней мере в 20 % случаев источник заражения установить не удается. В России наблюдается рост заболеваемости гепатитом С: в период с 1999 по 2011 гг. заболеваемость хроническим ВГС выросла в 3 раза. Как правило, пациенты с ВГС не догадываются о своем заболевании.

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-вирус, принадлежащий семейству Flaviviridae. При транскрипции его генома образуется единый белок длиной около 3000 аминокислот, который затем разрезается с помощью пептидаз клетки-хозяина и вирусных пептидаз с образованием структурных и неструктурных белков:

Структурные белки (коровый белок, Е1 и Е2, от англ. envelope glycoproteins – гликопротеины оболочки) необходимы для формирования вирусного капсида;
Неструктурные белки (p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B, от англ. non-structural – неструктурные) выполняют различные регуляторные функции.

В ответ на заражение вирусом гепатита С в организме человека начинают вырабатываться антитела – иммуноглобулины M и G, которые можно исследовать для диагностики гепатита. Следует отметить, что при гепатите С синтез иммуноглобулинов М может наблюдаться на разных стадиях заболевания, как при остром, так и при хроническом гепатите, и поэтому не имеет никакого диагностического значения. Это важное отличие диагностики гепатита С от гепатита В (выявление иммуноглобулинов М при гепатите В наблюдается только в острую стадию). Таким образом, все серологические тесты для диагностики гепатита С основаны на выявлении иммуноглобулинов G к белкам этого вируса.

Структурные и неструктурные белки иммуногенны в разной степени. Показано, что наиболее выраженными иммуногенными свойствами обладают следующие белки (в скобках указан процент пациентов с хроническим гепатитом С, у которых в крови обнаруживаются антитела к указанному белку):

Коровый белок (97 %);
NS4B (86 %);
NS3 (68 %);
NS5A (53 %).

Менее иммуногенны белки E2 (31 %), NS4A(28 %) и E1 (22 %). NS2 и NS5B имеют очень слабые иммуногенные свойства, и антитела к ним у пациентов с ВГС выявляются редко.

Антитела к ВПС могут быть определены в крови приблизительно через 8 недель после первичного заражения. Ложноотрицательные результаты могут наблюдаться у людей с иммунодефицитом (например, ВИЧ-инфицированных), почечной недостаточностью и эссенциальной смешанной криоглобулинемией. Ложноположительные результаты также встречаются.

Вирусы гепатита С неоднородны по генетическому составу. На этом основании выделяют 6 генотипов ВПГ, геномы которых различаются на 30-35 %, и множество подтипов, различающихся на 20-25 %. В восточной Европе и США чаще встречаются генотипы 1a и 1b, тогда как для других стран характерны другие генотипы (например, Египет – генотип 4, Южная Африка – генотип 5). Показано, что иммунный ответ пациентов, инфицированных разными генотипами ВГС, различается. Это особенно справедливо в отношении антител к белкам E1, E2, NS3, NS4A и NS5A.

Качественный и количественный состав антител к ВГС у пациента остается достаточно постоянным в течение заболевания, в том числе и после проведенного лечения.

Антитела к гепатиту С – чувствительный, но недостаточно специфичный метод диагностики этого заболевания. Поэтому серологические тесты – это скрининговые тесты диагностики гепатита. При получении положительного результата исследования антител на гепатит С обязательно проводят подтверждающее исследование – анализ на РНК вируса с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР). Кроме того, при подтверждении диагноза "гепатит С" может понадобиться генотипирование ВГС и гистологическое исследование печени или неинвазивные методы определения состояния печени (такие как ФиброМакс).

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

При профилактическом обследовании, особенно если пациент принадлежит к группе риска по гепатиту С;
в некоторых случаях при устройстве на работу.

Что означают результаты?

Выдается по компонентам:

IgG к антигену core

IgG к антигену NS3

IgG к антигену NS4

IgG к антигену NS5

гепатит С;
ложноположительный результат (чаще у пациентов, не относящихся к группам риска, например доноров крови).

норма;
ложноотрицательный результат (сопутствующая ВИЧ-инфекция, почечная недостаточность, эссенциальная смешанная криоглобулинемия).

Что может влиять на результат?

Время, прошедшее с момента заражения;
Состояние иммунной системы;
Сопутствующие заболевания почек;
Генотип вируса гепатита С.

Важные замечания

Это скрининговый тест. При получении положительного результата необходим дополнительный, подтверждающий тест (определение РНК вируса с помощью ПЦР);
результаты анализа следует интерпретировать с учетом дополнительных клинических, лабораторных и инструментальных данных.

Также рекомендуется

13 Гистологическое исследование гепатобиоптата (биоптата печени) с использованием стандартных методик

Белки и антигены вируса гепатита С. Диагностика ВГС

Сегодня известно минимум 10 структурных и неструктурных белков, кодируемых геномом HCV. К структурным белкам относят core, envelop 1 и envelop 2. Белок core является белком нуклеокапсида, тогда как envelop 1 и envelop 2 — гликопротеины внешней оболочки вируса. В структурной зоне кодируется также белок р7, функция которого не ясна, однако аналогия с другими представителями семейства Flaviviridae позволяет предположить, что его функция связана с высвобождением вириона из инфицированной клетки.
Этот белок отщепляется клеточной пептидазой от envelop 2, но не во всех случаях, что обусловливает существование envelop 2 в виде двух форм более и менее протяженной.

Неструктурная область генома HCV кодирует 6 белков — NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B. Белок NS2 является вирусной металлозависимой протеиназой. Белок NS4A действует как эффектор или кофактор для NSЗ-протеолитической активности в NS4A/NS4B, NS4B/NS5A, NS5A/NS5B сайтах нарезания полипротеина вируса.

В настоящее время фрагменты структурных и неструктурных белков, полученных генноинженерным путем (рекомбинантные белки) или с помощью химического синтеза, используют в качестве антигенов при конструировании иммуноферментных тест-систем. Первое поколение иммуноферментных тест-систем появилось на рынке в 1989 году и было основано на прямом ИФА. В качестве иммуносорбента были использованы фрагменты двух белков, NS3 и NS4, обозначаемых как 5-1-1 и С100-3.

Одновременно были разработаны и подтверждающие тесты на основе иммуноблота с рекомбинантными белками (RIBA). Чувствительность этих тест-систем первого поколения составляла только 64% для ИФА и 55% для иммуноблота. Тест-системы второго поколения появились на рынке в 1991 году. В качестве антигенов, сорбированных на твердой фазе, в этих тест-системах использовали капсидные белки (фрагмент с22-3) и антигены неструктурных регионов NS3 (фрагменты с200 и сЗЗс) и NS4, что позволило повысить чувствительность и специфичность исследований. Поскольку гуморальный иммунный ответ на капсидные антигены (структурные белки) нагинается быстрее, гем на неструктурные белки, период от инфицирования до выявляемой сероконверсии удалось уменьшить до двух месяцев.

Подтверждающие тест-системы на основе иммуноблота позволяли идентифицировать участвующие в реакции антигены. Результаты, полученные при помощи этих тест-систем, интерпретировали как положительные лишь при реакции антител, находящихся в исследуемом субстрате, по крайней мере, с двумя антигенами, тогда как при наличии реакции лишь с одним из антигенов результат считали неопределенным. Было установлено, что специфичность второго поколения тест-систем зависела от источника антигенов. В 1993 году на рынке появилось третье поколение тест-систем. В дополнение к вышеупомянутым антигенам в этих тест-системах используются также антигены, аминокислотная последовательность которых соответствует иммунодоминантным участкам NS5 белков.

В тест-системах первого, второго и третьего поколений в качестве антигенов использовались или рекомбинантные, или синтетические пептиды. В настоящее время можно выделить также тест-системы четвертого поколения, в которых в качестве иммуносорбента используют сочетания рекомбинантных и синтетических пептидов.

Опыт применения тест-систем различных поколений в мире очень большой. Было установлено, что если с помощью тест-систем первого или второго поколения у больных с острым вирусным гепатитом С антитела выявляли на 10-16, а в ряде случаев и 25-30 неделе от начала заболевания, то диагностикумы третьего поколения позволяли сократить этот срок до 2-3 недель. Согласно обобщенным данным чувствительность тест-систем первого, второго и третьего поколений составляет соответственно 70-80%, 92-95% и 97%.

В то же время, по данным С. Colin, 2001, чувствительность тест-систем третьего поколения составила 98,9% у пациентов с хроническими заболеваниями печени и 97,2% на специальных контрольных панелях сывороток. Достижение высокой чувствительности иммуноферментных тест-систем 3 и 4 поколения сопряжено с некоторыми проблемами в обеспечении специфичности исследований, что в ряде случаев может приводить к появлению ложноположительных результатов. В литературе имеются данные о возможных погрешностях в специфичности ELISA 3 тест-систем. Они являются общими для всех ELISA тест-систем, включая тест-системы для диагностики СПИДа.

Ложнопозитивные результаты могут быть следствием повышенного содержания в образцах гамма-глобулинов (сыворотки пациентов африканской расы, миеломная болезнь, ревматоидные факторы), заболеваний печени (цирроз, рак), аутоиммунных заболеваний (коллагенозы, аутоиммунные гепатиты), других вирусных инфекций (ВИЧ, гепатит В) и длительного хранения сывороток в меняющихся температурных условиях. Проведение какой-либо иммунизации также может сопровождаться повышением частоты ложнопозитивных реакций. Рекомендуемые в настоящее время меры по устранению этой проблемы следующие: а) повторная постановка образца в этой же ИФТС; б) повторная детекция anti-HCV в другой ИФТС; в) использование подтверждающих тестов на основе ИФА и иммуноблота.

Однако использование предлагаемых способов подтверждения результатов зачастую приводят к расхождениям в их итоговой трактовке, что показано исследованиями российских и зарубежных исследователей.

В настоящее время производители ИФТС для детекции anti-HCV достигают высокой чувствительности или за счет более полного выявления антител к NS3 или антител к антигенам core. Сравнительные исследования, выполненные на различных группах риска и специальных контрольных панелях показали, что тест-системы, лучше выявлявшие антитела к NS3, оказались несколько более чувствительными, чем тест-системы, лучше выявлявшие антитела к антигенам core. Их чувствительность составляла, соответственно 99,9% и 98,6%.

Диагностика гепатита С и Д. Лабораторная диагностика гепатита G и Е

Ведущим специфическим маркером, определяемым при гепатите С в любой форме, являются анти-ВГС, выявляемые в ИФА при использовании рекомбинантных вирусных белков. В зависимости от количества различных вирусных протеинов, входящих в состав коммерческих тест-систем, они подразделяются на три генерации. В состав диагностикумов 1-й генерации входит один неструктурный белок С-100-3 (кодируется NS-3 областью генома вируса), составляющий лишь 12% полипротеина ВГС и, таким образом, данные определения антител занижены. Тест-системы 2-й генерации включают в себя неструктурные белки С-100-3, С-ЗЗс (кодируемые соответственно областями NS-3 и NS-4 генома вируса), а также структурный белок С-22-3 - внутренний антиген вируса, кодируемый областью Е-1.

Тест-системы 3-го поколения дополнены неструктурным белком С-32 (NS-5 область генома). Чувствительность тест-систем 2-й и 3-й генераций значительно выше, и их использование позволяет диагностировать ГС в 80-90% случаев. Все тест-системы направлены на определение суммарных антител, и их детекция может свидетельствовать как об остром гепатите, так и реконвалесценции. В связи с этим разрабатываются тест-системы на анти-ВГС IgM, присутствие которых говорит в пользу острой стадии заболевания. Этот тест может быть использован при оценке лечебного действия интерферона (влияние на репродукцию вируса).

В качестве подтверждающего данные ИФА-теста используется иммуноблот, в состав которого входят те же рекомбинантные белки вируса, что и в ИФА. В связи с низкой концентрацией (титром) вируса (102-104 частиц/мл сыворотки) выявление антигенов ВГС иммунологическими методами практически невозможно и для детекции возбудителя применяется ПЦР, позволяющая определять вирусную РНК. Частота положительных находок доходит до 90-95% у лиц, имеющих антиВГС по данным ИФА. В ряде случаев РНК находят при отсутствии антиВГС. Определение РНК ВГС имеет большое значение не только при выявлении вирусоносителей, но и при оценке результатов терапии.

Доказано наличие по крайней мере 30 генотипов ВГС, определяемых в ПЦР. Предполагается возможное влияние генотипа ВГС на течение инфекции и чувствительность к действию интерферона.

Гепатит G. В последнее время выявлен еще один тип посттрансфузионного гепатита - TG, диагностика которого осуществляется с помощью ПЦР-определения участков NS-3 и NS-5 РНК вируса. Использование этой реакции позволило отметить большой процент смешанного (ГС и TG) инфицирования контингента.

Гепатит Д. В связи с тем, что возбудитель ГД, являясь дефектным вирусом, нуждается для своей репродукции в вирусе-помощнике, а именно - ВГВ, в материалах больных находят специфические маркеры этих двух вирусов независимо от того, имеется ли двойная острая инфекции (коинфекция), или ГД наслаивается на существующий ГВ (суперинфекция). При коинфекции ГВ/ГД в сыворотке крови обнаруживаются маркеры острого ГВ - HBsAg, анти HBclgM, а также ВГД-Ад и анти-ВГД IgM, определяемые коммерческими ИФА-диагностикумами в конце 1-й, начале 2-й недели инфекции.

Так как в большинстве случаев коинфекция заканчивается выздоровлением, маркеры острой инфекции носят, как правило, транзиторный характер и отмечается сероконверсия на соответствующие антитела класса IgG. Суперинфекция ГД, которая может быть острой и хронической, сопровождается теми же маркерами. В ряде случаев, при ХГ, отмечается периодическое исчезновение и повторное появление анти-ВГД IgM (на фоне анти ВГД IgG), отражающее репродукцию вируса. При суперинфекции, сопровождающейся хронизацией процесса, маркеры репродукции вирусов сохраняются постоянно, с некоторым колебанием их интенсивности.

Гепатит Е. Диагностика ГЕ основана на определении анти-ВГЕ в сыворотках крови, ВГЕ-Ag - в фекалиях, РНК ВГЕ - в фекалиях и сыворотке. В качестве иммунологических тестов используется ИФА с применением рекомбинантных белков или синтетических пептидов вируса. Подтверждающим тестом является иммуноблот. Однако следует указать, что имеющиеся в настоящее время диагностикумы дают высокий процент неспецифических реакций и получаемые с их помощью результаты не всегда адекватны. В связи с этим на данном этапе большое значение имеют клинико-эпидемиологические данные и лабораторное исключение всех других гепатитов.
Поиск методов определения маркеров других предполагаемых вирусов-возбудителей гепатитов человека продолжается.

Anti-HCV – специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С, свидетельствующие о возможной инфицированности или ранее перенесенной инфекции.

Синонимы русские

Суммарные антитела к вирусу гепатита С, анти-HCV.

Синонимы английские

Antibodies to Hepatitis C Virus, IgM, IgG; HCVAb, Total.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) – РНКсодержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (при переливании элементов крови и плазмы, пересадке донорских органов, через нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятна передача вируса при половом контакте и от матери ребенку во время родов, но это происходит реже.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро, с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса, редко оно сопровождается желтухой. У 60-85 % зараженных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Для хронического вирусного гепатита С характерна "волнообразность" с повышением печеночных ферментов и слабовыраженными симптомами. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Специфические иммуноглобулины вырабатываются к ядру вируса (нуклеокапсидному белку core), оболочке вируса (нуклеопротеинам Е1-Е2) и фрагментам генома вируса гепатита С (неструктурным белкам NS). У большинства больных ВГС первые антитела появляются через 1-3 месяца после инфицирования, но иногда могут отсутствовать в крови больше года. В 5 % случаев антитела к вирусу так никогда и не обнаруживаются. При этом о ВГC будет свидетельствовать выявление суммарных антител к антигенам вируса гепатита С.

В острый период болезни образуются антитела классов IgM и IgG к нуклеокапсидному белку core. В период латентного течения инфекции и при ее реактивации в крови присутствуют антитела класса IgG к неструктурным белкам NS и нуклеокапсидному белку core.

Читайте также: