Что такое тцд вирусов

Обновлено: 24.04.2024

Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция (РСВИ) занимает важное место в патологии органов дыхания, как у детей, так и у взрослых. Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) - наиболее частая причина поражения Нижних дыхательных путей (НДП) у детей раннего возраста, причем заболевание может привести к летальному исходу. У детей старшего возраста и взрослых РСВ вызывает более легкое поражение респираторного тракта, проявляющееся ринофарингитом, бронхитом, включая обострение хронического бронхита, пневмонией.

Этиология и эпидемиология

РСВ входит в состав семейства Paramyxoviridae, являясь представителем рода Pneumovirus. Свое название вирус получил в результате характерного цитопатического действия в культуре клеток, ведущего к образованию синцития и симпластов. РСВ не содержит гемагглютинина и нейраминидазы.

РСВИ является, по существу, эндемичной, и в отдельные периоды происходит подъем заболеваемости. Вспышки наблюдаются в различное время года, чаще осенью и зимой. Подъем заболеваемости РСВИ нередко совпадает с эпидемией гриппа, и тогда у детей можно диагностировать микст-инфекцию. Как и грипп, РСВИ увеличивает количество осложнений и летальность от гриппа и пневмонии.

Продолжительность эпидемического подъема заболеваемости ограничивается 3-5 месяцами. Такие вспышки, как правило, имеют место ежегодно в одной и той же местности. В это время РСВ вызывает не только бронхиолиты и пневмонии, но также и легкие заболевания верхних дыхательных путей (ВДП) у детей. Вспышки РСВИ могут протекать в виде ограниченных локальных эпидемий в учреждениях для детей раннего возраста.

Источником инфекции являются больные и вирусоносители. Вирусы выделяются вместе с секретом слизистой оболочки ВДП во время разговора, кашля, чихания, и передача возбудителя здоровым осуществляется воздушно-капельным путем. Опасность заражения от больного человека сохраняется в течение 5-7 дней. Восприимчивость к РСВ очень высока, особенно у детей раннего возраста.

О распространении РСВИ среди различных возрастных групп населения позволяют судить серологические исследования. У большинства новорожденных имеются антитела, полученные от матери. Однако врожденный пассивный иммунитет довольно быстро утрачивается, и уже у детей 4-6-месячного возраста антитела не удается обнаружить. В этот период дети становятся высоко восприимчивыми к РСВ, заболеваемость возрастает, в результате чего увеличивается число детей, которые приобрели антитела, а вместе с ними и иммунитет. У детей в возрасте 5-10 лет антитела к РСВ обнаруживаются у 63-68% обследованных. Примерно такой же результат был получен и при обследовании здоровых взрослых (67%). Заболевания, вызванные РСВ, наблюдаются и среди взрослых различного возраста, при этом у большинства из них имеет место реинфекция, так как болезнь возникает несмотря на наличие нейтрализующих и комплементсвязывающих антител.

Клиника и патогенез

Инкубационный период длится не менее 3 дней, чаще 4-5 дней. Начинается заболевание как остро, так и подостро. У детей грудного возраста чаще наблюдается вовлечение в процесс НДП, в то время как у старших детей и у взрослых изменения обычно ограничиваются областью ВДП и протекают в виде ринита, фарингита, ларингита. Ринит отмечается у большинства пациентов, выделения из носа необильные серозно-слизистые. В ротоглотке может наблюдаться умеренная гиперемия слизистой. Наиболее частый симптом РСВИ - кашель, вначале непродуктивный, затем на 3-4 день болезни появляется мокрота.

Через 2-3 дня от начала болезни, а иногда и в более поздние сроки, обнаруживаются признаки поражения НДП с развитием бронхита, бронхиолита или бронхо-бронхиолита, обусловливающие возникновение БОС. Появляется одышка с втяжением уступчивых мест грудной клетки, обычно экспираторного типа. Дыхание шумное, свистящее.

При бронхите у большинства пациентов на фоне жесткого дыхания выслушивается большее или меньшее количество сухих свистящих хрипов, у части больных - средне- и крупнопузырчатые влажные хрипы. Выдох удлинен. Для бронхиолита характерно обилие мелкопузырчатых влажных и крепитирующих хрипов, выслушиваемых по всей поверхности обоих легких, обычно в конце вдоха. Из-за вздутия легких при перкуссии грудной клетки определяется коробочный звук.

Одним из важных признаков, характеризующих БОС, является цианоз. У детей первых месяцев жизни с бронхиолитом отмечается общий цианоз, дети становятся чугунного цвета. Поражение органов дыхания происходит на фоне лихорадки, которая в отдельных случаях может и отсутствовать.

При рентгенологическом обследовании наиболее характерным признаком РСВИ является повышение прозрачности легочных полей, расширение межреберных промежутков, усиление легочного рисунка за счет расширения крупных сосудистых стволов и обогащения его мелкими линейными тенями. Наблюдается перестройка всего легочного рисунка по сетчато-трабекулярному типу.

В крови в первые дни болезни может обнаруживаться лейкоцитоз за счет гранулоцитов, однако чаще имеет место нормоцитоз или, реже, лейкопения. СОЭ обычно повышена.

Общая продолжительность РСВИ составляет от 5-7 дней до 3-х недель.

У новорожденных и детей второго месяца жизни, особенно недоношенных, при РСВИ могут возникать приступы апноэ. Такие приступы, хотя часто повторяются во время острой инфекции, обычно купируются самостоятельно и, как правило, не сопровождаются неврологическими или системными повреждениями, но требуют наблюдения.

У детей старшего возраста и взрослых РСВИ обычно протекает в стертой форме или проявляется только как афебрильное заболевание ВДП, но может иметь и клиническую симптоматику гриппа. Полагают, что РСВ служит причиной 15% обострений хронического бронхита.

Особого внимания заслуживают тяжелые формы РСВИ у детей раннего возраста, проявляющиеся бронхиолитом или бронхо-бронхиолитом с бронхообструктивным синдромом (БОС), требующие неотложной помощи и могущие привести к летальному исходу. Половина больных этой группы приходится на детей первых 3 месяцев жизни, начиная с раннего неонатального периода. Бронхиолиты в изолированном виде обычно наблюдаются у детей первых месяцев жизни, однако в большинстве случаев, наряду с бронхиолитом, имеются клинические признаки поражения и крупных бронхов. Клинически эту группу больных характеризует выраженная дыхательная недостаточность, определяющая тяжесть болезни, в то время как явления интоксикации выражены слабо или в умеренной степени.

Клиническая диагностика РСВИ представляет определенные трудности ввиду сходства с другими респираторными заболеваниями. И все же некоторые клинические особенности отличают РСВИ от других ОРВИ. Для РСВИ в типичных случаях характерно поражение НДП с развитием бронхита или бронхиолита и возникновением БОС. Дифференциальная диагностика у детей первого полугодия жизни должна включать все другие причины острых заболеваний НДП - вирусы парагриппа, особенно 3 типа, аденовирусы, вирусы гриппа, риновирусы, а также Chlamydia trachomatis. Последняя вызывает интерстициальную пневмонию с кашлем, и, в некоторых случаях, затрудненное дыхание, хотя лихорадка обычно отсутствует. У детей с иммунодефицитом должна быть принята во внимание возможность инфекции Pneumocystis carinii. При бактериальной пневмонии шумного выдоха обычно не бывает, а симптомы общей интоксикации более выражены.

Для диагностики РСВИ имеют значение и эпидемиологические данные. Если это семейный очаг, то взрослые и дети старшего возраста переносят обычное, легкое респираторное заболевание, в то время как у детей раннего возраста наблюдается тяжелое течение, и у них часто возникает бронхит или бронхиолит.

Таким образом, имеющихся клинико-эпидемиологических данных нередко бывает достаточно для предположительного диагноза. Для окончательной верификации диагноза РСВИ используются различные лабораторные методы диагностики.

В практической работе в настоящее время наиболее широко используют экспресс-методы, направленные на определение антигена РСВ в материалах от больных. Антиген РСВ можно обнаружить методом иммунофлюоресценции либо ИФА. Оба метода достаточно специфичны и чувствительны и, по существу, имеют равновеликую ценность. Ответ получают через несколько часов.

Образцы для исследования лучше забирать при аспирации, устанавливая катетер над входом в гортань. Материал можно также получить из полости носа, используя сухой ватный тампон на металлическом стержне, реже пользуются носоглоточными смывами. Взятие материала из НДП для рутинного диагноза не является необходимым, хотя это может повысить результативность диагностики.

У умерших детей исследуют ткань легких, трахеи и бронхов на антиген РСВ или они используются для выделения вируса.

Специфический антиген выявляют методом иммунофлуоресценции в цитоплазме эпителиальных клеток носа с первых дней болезни и в последующие 10 дней. Однако при тяжелых формах болезни мы обнаруживали антиген РСВ до 29-49 дней от начала болезни.

При легких формах РСВИ, которые широко распространены, применяются симптоматические средства, и они не требуют каких-либо специфических мер.

При тяжелых формах заболевания, сопровождающихся БОС, необходима госпитализация детей. Лечение тяжелых форм РСВИ с поражением НДП носит неотложный характер. Первоочередными являются следующие мероприятия:

Несомненно, что главной задачей терапии является обеспечение адекватной оксигенации крови, что достигается как прямой ингаляцией кислорода, так и воздействием на различные механизмы БОС. Уже такое простое мероприятие, как своевременное удаление с помощью электроотсоса слизи, накапливающейся в ВДП, может привести к улучшению дыхательной функции.

При БОС показано применение средств, уменьшающих отек слизистой дыхательных путей, гиперсекрецию и бронхоспазм. Применяются бронходилятаторы и муколитики.

В связи с возникновением тяжелых, иногда критических состояний при БОС в качестве неотложной терапии показано применение глюкокортикоидов, которые применяют в сочетании с бронхолитиками. Преднизолон или гидрокортизона гемисукцинат вводят внутривенно, а затем переходят на пероральный прием. Преднизолон назначается из расчета 2-3 мг/кг, а гидрокортизона гемисукцинат 5-6 мг/кг в сутки.

Патогенетически обосновано применение диуретиков быстрого действия (фуросемид) в лечении обструктивного синдрома, если он обусловлен бронхиолитом. Фуросемид вводится в разовой дозе 1 мг/кг внутривенно или внутримышечно. Повторное введение фуросемида следует проводить с осторожностью, и чаще всего в его повторном введении в ближайшие 24 часа нет необходимости. Бикарбонат натрия для коррекции декомпенсированного ацидоза у детей с БОС не применяется.

Оптимальным вариантом поддержания функционального состояния слизистой дыхательных путей является пребывание ребенка в условиях кислородного аэрозоля (тумана) и применение медикаментозных аэрозольных ингаляций. Получение тумана достигается с помощью производителя аэрозолей эжекционного типа. Аэрозоль направляют под тент-палатку ДКП-1 или под колпак кювеза (для детей первых месяцев жизни). В камере создается кислородный аэрозольный туман с 50-60% содержанием кислорода и высокой влажностью (100%). С помощью производителя аэрозолей распыляют обычную воду, 2% раствор бикарбоната натрия, физиологический раствор, которые оказывают муколитическое действие и способствуют отхождению мокроты и снижению потери жидкости.

Постоянная ингаляционная терапия позволяет достичь, прежде всего, удовлетворительной оксигенации крови. При этом улучшаются и другие показатели газового состава крови и кислотно-щелочного состояния, особенно уменьшается метаболический компонент ацидоза.

С целью поддержания гомеостаза почти всем детям проводится инфузионная терапия, тем более, что полноценное энтеральное кормление часто не может быть обеспечено из-за тяжести состояния, однако она осуществляется в небольших объемах (20-25 мл/кг массы) и кратковременно. Обычно вводится 10% раствор глюкозы с электролитами.

В терапии БОС, особенно при выраженном бронхо-спазме, могут быть использованы бронходилятаторы короткого действия из группы b2-агонистов. Например, сальбутамол (0,2 мг/кг в день) при бронхиолите у детей в возрасте 1-9 месяцев.

Из средств этиотропной терапии для лечения РСВИ у детей раннего возраста в настоящее время в мире препаратом выбора является рибавирин, который является синтетическим нуклеозидом и принадлежит к противовирусным препаратам широкого спектра действия. Условием назначения рибавирина является лабораторно подтвержденный диагноз и ранние сроки заболевания. Показаниями для ингаляций рибавирина являются тяжелые формы РСВИ у детей раннего возраста и больные с врожденными пороками сердца. Применяется в виде длительных ингаляций аэрозолей в дозе 10 мг/кг в сутки. Длительность курса лечения 3-5 дней.

Применение рибавирина приводит к уменьшению тяжести клинической картины заболевания, сокращению длительности БОС, быстрой элиминации возбудителя, ускорению выздоровления.

При применении рибавирина следует самым строгим образом учитывать предупреждения о возможных токсических проявлениях.

Создание вакцин против РСВИ имеет долгую и поучительную историю. Более чем за 30 лет были получены инактивированные, живые аттенуированные и субъединичные РСВ-вакцины. Однако все они оказались неэффективными. Более того, после применения инактивированной вакцины естественное заражение РСВ приводило к более тяжелому течению заболевания. Тем не менее, усилия по созданию новых вакцин против РСВИ не ослабевают, и есть надежда, что эффективная вакцина будет разработана.

1. Медицинская микробиология (под ред. В.И. Покровского и О.К. Поздеева). М.: Гэотар Медицина,1998.

2. Simoes E.A. Respiratory syncytial virus infection. Lancet 1999; 354: 847-52.

4. Rodriguez W.J. Management strategies for respiratory syncytial virus infections in infants. J Pediatr 1999; 135: 45-50.

5. Ottolini M.G., Hemming V.G. Prevention and treatment recommendations for respiratory syncytial virus infection. Background and clinical experience 40 years after discovery. Drugs 1997; 54: 867-84.

6. Hussell T.; Openshaw P. Recent developments in the biology of respiratory syncytial virus: are vaccines and new treatments just round the corner? Curr Opin Microbiol 1999; 4: 410-4.

Study in vitro antiviral properties Myramistin ® for Herpes simplex virus types 1 and 2

Среди вирусных заболеваний герпетическая инфекция, обусловленная вирусами простого герпеса (ВПГ) 1-го и 2-го типов, занимает одно из ведущих мест. У большинства здоровых людей ВПГ-1 и ВПГ-2 вызывают широкий спектр заболеваний, причем как острую первичную инфекцию, так и рецидивирующие заболевания кожи и слизистых оболочек. У новорожденных и лиц с иммунодефицитами инфекция может протекать особенно тяжело и заканчиваться летальным исходом.

Для профилактики и терапии ВПГ-инфекции предложено много средств, однако препаратами выбора остаются нуклеозидные аналоги (например, ацикловир), которые обладают селективной антигерпесвирусной активностью, обусловленной подавлением репликации вируса и инактивации вирусной ДНК-полимеразы. С 1982 года стали регистрироваться штаммы ВПГ, устойчивые к действию ацикловира (АЦВ), а за последние 10 лет, когда АЦВ стал основным противогерпетическим средством, частота выделения таких штаммов резко возросла, особенно от иммунокомпрометированных лиц [5].

По данным разных авторов, АЦВ-резистентные штаммы ВПГ встречаются в 4-14% случаев у онкологических больных, ВИЧ-инфицированных и лиц, перенесших трансплантацию органов и тканей или получающих длительную иммуносупрессивную терапию. В этой связи актуальной задачей является поиск и изучение новых противогерпетических средств с альтернативным механизмом противовирусного действия.

Мирамистин относится к группе катионных поверхностно активных веществ, а именно к четвертичным аммониевым соединениям. Многочисленными научными и клиническими исследованиями доказана высокая активность мирамистина в отношении бактерий, грибов, вирусов и простейших, включая госпитальные полирезистентные штаммы и микробные ассоциации, также доказана способность мирамистина повышать местный иммунитет, усиливать процессы регенерации, при этом подтверждено отсутствие повреждающего действия на ткани человека.

Препарат обладает широким спектром антимикробного действия, включая госпитальные штаммы, резистентные к антибиотикам. Оказывает выраженное бактерицидное действие в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, аэробных и анаэробных бактерий, спорообразующих и аспорогенных бактерий, в виде монокультур и микробных ассоциаций, включая госпитальные штаммы с полирезистентностью к антибиотикам.

Мирамистин оказывает противогрибковое действие на аскомицеты рода Aspergillus и рода Penicillium, дрожжевые грибы (Rhodotorula rubra, Torulopsis gabrata и т.д.) и дрожжеподобные (Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei и т.д.), дерматофиты (Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton verrucosum, Trichophyton schoenleini, Trichophyton violacent, Epidermophyton Kaufman-Wolf, Epidermophyton floccosum, Microsporum gypseum, Microsporum canis т.д.), а также на др. патогенные грибы, например, Pityrosporum orbiculare (Malassezia furfur), в виде монокультур и микробных ассоциаций, включая грибковую микрофлору с резистентностью к химиотерапевтическим препаратам.

Имеются данные о противовирусном действии мирамистина в отношении ретровирусов (ВИЧ), парамиксовирусов (кори, паротита) и некоторых других вирусов [1, 2]. Также обладает действием против простейших (хламидии, трихомонады и др.). Необходимо отметить, что мирамистин повышает чувствительность бактерий, грибов и простейших к действию антибиотиков. Синергизм действия мирамистина с антибиотиками и другими препаратами позволяет сократить длительность лечения и значительно повысить эффективность терапии. Препарат обладает избирательностью действия, т.е. эффективно действует на патогенные микроорганизмы, не оказывая при этом отрицательного действия на ткани организма человека. Кроме того препарат обладает рядом других эффектов, а именно:

— повышает местный иммунитет, стимулируя защитные реакции в месте применения, за счет активации поглотительной и переваривающей функции фагоцитов;

— потенцирует активность моноцитарно-макрофагальной системы, нормализуя транспортную функцию мерцательного эпителия (мукоциллярный клиренс);

— усиливает процессы регенерации, стимулируя эпителизацию и репаративные процессы в ране, что ускоряет заживление;

— обладает противовоспалительным действием за счет активизации процесса фибринолиза в очаге воспаления.

При этом препарат не всасывается и не оказывает повреждающего действия на слизистые оболочки и кожные покровы, не обладает местно-раздражающим и аллергизирующим действием.

Обнаружено, что мирамистин проявляет активность на ранних этапах инфекционного процесса, в основе его действия лежит предотвращение адсорбции и пенетрации вируса в клетки хозяина. Учитывая, что механизм противовирусного действия мирамистина отличается от действия АЦВ, можно предположить, что использование мирамистина для профилактики и комплексной терапии ГИ позволило бы снизить не только частоту появления штаммов ВПГ, резистентных к действию ацикловира и его аналогов, но и снизить распространенность вируса среди лиц групп риска, а также повысить эффективность противогерпетического лечения.

Целью исследования было изучение in vitro противовирусной активности мирамистина на модели экспериментальной герпесвирусной инфекции, обусловленной ВПГ 1-го и 2-го антигенного типов, в культуре клеток Vero-B.

Материалы и методы

Дизайн исследования. После полного формирования в лунках планшета монослоя клеток Vero-B (в течение 24 ч.) ростовую среду удаляли, клетки троекратно отмывали средой Игла и вносили в лунки в составе поддерживающей среды мирамистин (в максимально переносимых и меньших концентрациях) по одной из нижеприведенных схем. Противовирусную активность препаратов (ПАП) оценивали общепринятыми методами по их способности предотвращать развитие индуцируемого вирусами цитопатического действия (ЦПД) и ингибировать репродукцию вирусов в культуре клеток, а также по наличию вирулицидного действия [7, 8].

Для профилактики герпесвирусной инфекции широко применяются вирулицидные препараты, оказывающие непосредственное разрушающее действие на вирусные частицы (например, оксолиновая мазь). Оценку вирулицидного действия проводили для того, чтобы выяснить, посредством какого механизма мирамистин проявляет свою активность в отношении вируса простого герпеса: ингибиции репродукции вируса или в результате разрушения или повреждения им вирусных частиц.

Определяли ЦТД₅₀ препарата, которая соответствовала концентрации, вызывающей видимые нарушения морфологии у 50% клеток монослоя и максимально переносимую концентрацию (МПК) — наиболее высокую дозу препарата, не вызывающую видимых изменений клеточного монослоя, по сравнению с контролем. Для дальнейшего исследования применяли концентрации препаратов, не превышающие МПК.

Оценку вирус-индуцированного ЦПД и противовирусной активности препаратов в культуре клеток проводили ежедневно при световой микроскопии по степени изменения морфологии клеточного монослоя [7]. Учет результатов проводили при наличии 100% ЦПД в лунках с контролем вируса — через 72-96 ч. от момента инфицирования (в случае ВПГ-1 или ВПГ-2 соответственно).

С целью изучения влияния различных концентраций мирамистина на репродукцию вируса на 3–4-е сутки после инфицирования отбирали соответствующие пробы вируса и определяли его остаточную инфекционность. Пробы отбирали в микропробирки с крышкой (Eppendorf) и сохраняли при минус 70°С. Перед постановкой опыта пробы подвергали троекратному замораживанию-оттаиванию. Затем клеточный дебрис удаляли центрифугированием, готовили серийные 10-кратные разведения проб, которыми в дальнейшем инфицировали отмытый монослой клеток Vero-B. Планшеты инкубировали 1 ч., затем суспензию вируса удаляли, трехкратно отмывали клетки от не связавшегося вируса и вносили в лунки свежую питательную среду. Планшеты выдерживали в течение 96 ч. в указанных ранее условиях. Результаты титрования оценивали по общепринятой методике.

Противовирусную активность препарата оценивали по 50%-ной ингибиторной концентрации (ИК₅₀), т.е. минимальной концентрации препарата, при которой ЦПД вируса уменьшалось наполовину по сравнению с контролем.

Статистическую обработку результатов исследования проводили методом вариационной статистики с использованием прикладных программ Excel-5.0. Достоверность разности полученных результатов оценивали с помощью критерия t Стьюдента, различия признавали достоверными при p

Результаты и обсуждение

Вначале в серии экспериментов изучено цитотоксическое действие мирамистина (по схеме 1 в диапазоне концентраций 5-1000 мкг/мл) на перевиваемую линию клеток Vero-B. Установлено, что степень выраженности цитотоксического эффекта зависит от использованной концентрации мирамистина. Так, в концентрации 1000 мкг/мл препарат вызывает практически полную гибель клеток через 24 ч. после контакта с ними, а в концентрации 500 мкг/мл вызывает изменение у 50% клеток монослоя (ЦТД₅₀). МПК мирамистина для клеток Vero-B составила 100 мкг/мл. По данным теста с трипановым синим, процент жизнеспособных клеток через 96 ч. инкубировання в присутствии 5-100 мкг/мл мирамистина практически не отличался от такового в контроле. Показатель ЦТД₅₀ зовиракса составил 750 мкг/мл, МПК — 500 мкг/мл.

Изучение активности мирамистина по схеме 2 в концентрациях 5-5000 мкг/мл показало, что препарат проявляет прямое дозозависимое вирулицидное действие в отношении ВПГ-2 и ВПГ-1 (табл. 1).

Определение прямого вирулицидного действия мирамистина на вирионы ВПГ-1 и ВПГ-2

Примечание: * менее 0,25 lg ТЦД₅₀/мл; ** различия с контролем статистически недостоверны (p>0,05)

Как видно из данных, представленных в таблице 1, вирулицидное действие мирамистина в отношении вирионов ВПГ-2 было немного активнее. Так, в концентрации 50 мкг/мл препарат способствовал уменьшению количества жизнеспособных вирионов ВПГ-1 более чем в 10 000 раз и при этом инактивировал все вирионы ВПГ-2.

Изучение профилактического эффекта применения мирамистина на модели инфекции, вызванной ВПГ-2 и ВПГ-1 в культуре клеток Vero-B, позволило установить следующее.

Оценка профилактического действия мирамистина на вирионы ВПГ-1 и ВПГ-2 in vitro при заражении культуры ткани Vero-B

Примечание: * менее 0,25 lg ТЦД₅₀/мл; ** различия с контролем статистически недостоверны (p>0,05)

Мирамистин в концентрациях 100-500 мкг/мл проявлял высокую профилактическую активность, которая не зависела от типа вируса простого герпеса или схемы применения препарата. При концентрациях 12-50 мкг/мл противовирусный эффект зависел от дозы препарата и в целом был более выражен в отношении ВПГ-2. Так, по схеме 4 (экстренно-профилактической) полная инактивация ВПГ-2 отмечалась при концентрации мирамистина 25 мкг/мл (по схемам 3 и 5 — при концентрации 50 мкг/мл). Полная инактивация ВПГ-1 по схеме 4 отмечена при концентрации 50 мкг/мл, по двум другим схемам — 100 мкг/мл или выше. В присутствии 12-25 мкг/мл мирамистина, применяемого по схемам 3 или 5, инфекционность ВПГ-2 снижалась в 10-56 раз (что соответствует снижению титра вируса на 1,00-1,75 lg). Вместе с тем эффективность мирамистина при внесении в культуру ткани была существенно ниже, чем та, которая выявлена при оценке прямого вирулицидного действия препарата на ВПГ-1, но не на ВПГ-2. По-видимому, это связано с различиями в динамике взаимодействия использованных штаммов вирусов с клетками данной линии. Так, при концентрации 50 мкг/мл мирамистина, применяемого по схеме 3, титр ВПГ-1 составил 5 lg ТЦД₅₀/мл (при оценке вирулицидного действия — 1 lg ТЦД₅₀/мл). Из полученных данных следует, что по противогерпетической эффективности в отношении ВПГ-2 использованные схемы применения мирамистина можно расположить так: схема 4 > схема 3 > схема 5, а в отношении ВПГ-1 — схема 4 > схема 5 > схема 3.

Препарат сравнения (зовиракс) в широком диапазоне концентраций обеспечивал полное блокирование ЦПД вируса в течение 96-часового периода наблюдения не только при низкой, но и при высокой множественности инфицирования. Следует отметить, что при внесении на ранних этапах после заражения (через 1 час после адсорбции вируса) этот препарат с высокой степенью достоверности снижал инфекционность испытанных вирусов (табл. 3). Эффективность его действия по мере снижения концентрации плавно снижалась. МПД50 препарата по отношению к ВПГ-2 составляет 0,2 мкг/мл, по отношению к ВПГ-1 — 0,7 мкг/мл.

Снижение титра относительно контроля,

Примечание: Н.и. — не исследовали.

При использовании разных профилактических схем обработки препарат обладал выраженной противовирусной активностью в отношении ВПГ-2 и менее выраженной активностью — в отношении ВПГ-1. Для выяснения отличий в действии мирамистина на ВПГ-1, шт. ЕС, требуется проведение дополнительных исследований с использованием других штаммов ВПГ-1. В целом полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности использования мирамистина в комплексной терапии герпетической инфекции.

Выводы:

1. Мирамистин обладает выраженной противовирусной активностью в отношении вируса простого герпеса, проявляет вирулицидные свойства и обладает способностью тормозить репликацию вирусов в инфицированных культурах клеток, что приводит к существенному снижению титров инфекционной активности ВПГ.

2. При использовании разных профилактических схем обработки препарат проявляет выраженную противовирусную активность в отношении ВПГ-2 и менее выраженную — в отношении ВПГ-1.

3. Противогерпетическая активность мирамистина в отношении ВПГ находится в прямой зависимости от концентрации препарата.

И.М. Кириченко, И.Ф. Баринский, Л.М. Алимбарова

НИИ вирусологии имени Д.И. Ивановского РАМН

Литература:
1. Изучение in vitro антивирусных свойств Мирамистина ® в отношении вирусов кори и паротита // А.П. Агафонов, М.О. Скарнович, В.А. Петрищенко и соавт. Антибиотики и химиотерапия, 2005. — Вып. 50. — № 5-6. — С. 17-19.
2. Криворутченко Ю.Л. Дозозависимая инактивация мирамистином внеклеточного вируса иммунодефицита человека // Вопр. вирусол., 1998. — № 3. — С. 122-124.
3. Ларкин Г.Ф. В кн.: Биометрия. — М., 1980. — С. 106-107.
4. Пшеничников В.А., Семенов Б.Ф., Зезеров Е.Г. Стандартизация методов вирусологических исследований. — М., 1974. — С. 123-126.
5. Bacon Т.Н., Levin M.J., Leary J.J., Sarisky R.T. and Sutton D. Herpes simplex virus resistance to acyclovir and penciclovir after two decades of antiviral therapy. Clinical Microbiology Reviews, 2003. — V. 16. — № l. — P. 114-128.
6. Cotarelo M., Catalan P., Sanchez-Carrillo C., Menasalvas A., Cercenado E. et al. Cytopathic effect inhibition assay for determining the in vitro susceptibility of herpes simplex virus to antiviral agents. J. Antimicrob. Chemother., 1999. — V. 44. — P. 705-708.
7. De Clerg E., Descamhs J., Verkelst G. et al. J. Inf. Dis., 1980. — V. 141. — № 5. — P. 563-574.
8. Kruppenbacher J.P., Klass R. and Eggers H.J. A rapid and reliable assay for testing acyclovir sensitivity of clinical herpes simplex virus isolates independent of virus dose and reading time. Antiviral Res., 1994. — V. 23. — P. 11-22.

Респираторно-синцитиальная инфекция – заболевание вирусной этиологии, характеризующееся воспалением нижних отделов дыхательных путей, умеренным катаральным и интоксикационным синдромом. Клинические проявления респираторно-синцитиальной инфекции включают субфебрильную температуру, познабливание, слабость, упорный сухой, приступообразный кашель, экспираторную одышку. Диагноз респираторно-синцитиальной инфекции подтверждается путем выделения вируса из смывов носоглотки и серологической диагностики. Лечение, как правило, амбулаторное, препаратами интерферона, отхаркивающими и муколитическими средствами.

Общие сведения

Респираторно-синцитиальная инфекция (РС-инфекция) – ОРВИ, протекающая с преимущественным поражением нижних дыхательных путей в виде бронхита, бронхиолита и интерстициальной пневмонии. Название заболевания отражает место размножения вируса в организме (респираторный тракт) и цитопатогенные эффекты, вызываемые в культуре клеток образование обширных синцитиальных полей (слияния клеток). В структуре различных ОРВИ на долю респираторно-синцитиальной инфекции приходится 15-20% всех случаев. Наиболее уязвимы перед лицом инфекции дети первого года жизни и раннего возраста. В связи с этим особое внимание респираторно-синцитиальной инфекции уделяется со стороны педиатрии.

Причины респираторно-синцитиальной инфекции

Респираторно-синцитиальный вирус принадлежит к роду Pneumovirus, семейству Paramyxoviridae. Вирионы имеют округлую или нитевидную форму, диаметр 120-200 нм, липопротеидную оболочку. Отличительной особенностью РС-вируса служит отсутствие в оболочке гемагглютинина и нейраминидазы. Во внешней среде вирус быстро инактивируется при нагревании и использовании дезинфицирующих средств, однако хорошо переносит низкие температуры и может до нескольких часов сохраняться в капельках слизи.

Респираторно-синцитиальная инфекция относится к вирусным болезням с воздушно-капельным путем передачи. Вирус способны распространять как больные люди, так и его носители. Для респираторно-синцитиальной инфекции характерны семейные и коллективные вспышки; регистрируются случаи внутрибольничной инфекции, особенно в педиатрических стационарах. Распространенность инфекции повсеместная и круглогодичная с вспышками заболеваемости в зимне-весеннее время. Наибольшая восприимчивость к респираторно-синцитиальной инфекции отмечается среди недоношенных, детей в возрасте от 4-5 месяцев до 3-х лет. Как правило, в раннем возрасте большая часть детей переболевает респираторно-синцитиальной инфекцией. Ввиду нестойкости приобретенного иммунитета нередки повторные случаи возникновения РС-инфекции, которая на фоне остаточного иммунитета протекает в более стертой форме. Однако при полном исчезновении из организма специфических секреторных антител (IgA) вновь может развиться манифестная форма респираторно-синцитиальной инфекции.

Симптомы респираторно-синцитиальной инфекции

В зависимости от преимущественной заинтересованности тех или иных отделов респираторного тракта, РС-инфекция может протекать в форме назофарингита, бронхита, бронхиолита или пневмонии. Обычно первые симптомы респираторно-синцитиальной инфекции появляются спустя 3-7 дней после заражения. Развитие заболевания постепенное: в первые дни беспокоят субфебрилитет, познабливание, умеренная головная боль, скудные серозно-слизистые выделения из носа. В некоторых случаях появляются признаки конъюнктивита, инъекция сосудов склер. Характерным симптомом респираторно-синцитиальной инфекции служит упорный сухой кашель.

Наиболее тяжело респираторно-синцитиальная инфекция протекает у детей первого года жизни. При этом отмечается высокая лихорадка, возбуждение, судорожный синдром, постоянный кашель, рвота, кашицеобразный или жидкий стул. Летальные исходы регистрируются в 0,5% случаев.

Диагностика и лечение респираторно-синцитиальной инфекции

Лечение легких и среднетяжелых случаев респираторно-синцитиальной инфекции проводится амбулаторно; детям первого года жизни и пациентам с осложненным течением заболевания необходима госпитализация. В остром периоде показаны постельный режим, полноценная щадящая диета, кислородотерапия, щелочные ингаляции. Назначаются препараты противовирусного действия (акридонуксусная кислота, умифеновир, кагоцел), отхаркивающие средства и бронхолитики, при наличии обструктивного синдрома – глюкокортикоиды. При развитии бактериальных осложнений назначаются антибиотики.

Прогноз и профилактика респираторно-синцитиальной инфекции

В большинстве случаев прогноз благоприятный; в госпитализации нуждаются около 2% пациентов. Летальные исходы возможны среди недоношенных и новорожденных, детей с врожденными пороками сердца, легких, иммунодефицитом. Перенесенный в раннем детстве бронхиолит, связанный с респираторно-синцитиальной инфекцией, является фактором риска развития бронхиальной астмы у детей в будущем.

Профилактические мероприятия направлены на предупреждение внутрибольничных и коллективных вспышек респираторно-синцитиальной инфекции путем изоляции больных, дезинфекции и частого проветривания помещений. Вакцина против респираторно-синцитиальной инфекции находится на стадии разработки; в качестве меры специфической иммунопрофилактики может применяться иммуноглобулин против РС-вируса.

Ключевые слова: вирус простого герпеса, ВПГ, клеточная культура, масляный экстракт водорослей, противовирусное действие, in vitro.

Для цитирования: Львов Н.Д., Мельниченко А.В., Алимбарова Л.М., Никитина А.А. Ингибиторный эффект препарата на основе масляного экстракта водорослей на репродукцию вируса герпеса в культуре клеток in vitro. РМЖ. 2019;1(II):51-55.

Drug inhibitory effect, based on algae oil extract, on the herpes virus reproduction in cell culture in vitro

N.D. Lvov, A.V. Melnichenko, L.M. Alimbarova, A.A. Nikitina

Gamalei National Research Center for Epidemiology and Microbiology, Moscow

Keywords: herpes simplex virus, HSV, cell culture, algae oil extract, antiviral effect, in vitro.
For citation: Lvov N.D., Melnichenko A.V., Alimbarova L.M., Nikitina A.A. Drug inhibitory effect, based on algae oil extract, on the herpes virus reproduction in cell culture in vitro. RMJ. 2019;1(II):51–55.

В статье представлены результаты оригинального исследования, посвященного изучению влияния препарата на основе масляного экстракта морских водорослей на репродукцию вируса простого герпеса 1, 2 в эксперименте in vitro на чувствительной модели — клеточной культуре.

Введение

Материал и методы

ОП опытных лунок = (ОП среды/ОП контр. лунок – ОП среды) ×100%,
где ОП — оптическая плотность.

Результаты и обсуждение

Определение цитотоксичности МЭВ

На первом этапе исследования необходимо было определить цитотоксичность препарата, т. е. возможность использования препарата без повреждающего действия на клетки и максимально переносимую концентрацию.
Данные представлены в таблице 1. Для адекватной статистической обработки материала на каждую концентрацию препарата отводилось 3–4 лунки, опыты воспроизводились в 3 повторах.

В результате проведенных исследований обнаружено, что препарат МЭВ в концентрации 0,1% оказывает выраженное цитопатическое действие на клетки в первые сутки (нарушение морфологии клетки, снижение жизнеспособности более чем на 90%), а в концентрации 0,001% не оказывает токсического влияния на физиологическое состояние клеток, показатели равнялись контрольным. МЭВ в концентрации 0,01% слаботоксичен, при этом отмечается снижение темпов роста культуры и процента жизнеспособных клеток на 54%. В случае воздействия 1,0 и 0,1% раствором препарата наблюдался выраженный цитотоксический эффект, что отражалось на первые сутки наблюдения статически достоверным снижением как плотности клеточной суспензии, так и жизнеспособности клеток (р <0,0017).
Установлено, что 50% тканевая цитотоксическая доза
ТЦД₅₀/мл составила 0,0055% раствора препарата МЭВ.
В митохондриальном тесте были определены эффективные концентрации препарата, вызывающие 50% ингибирование выживаемости клеток (IC 50). Значения абсорбции представлены в относительных единицах. Для контроля (без препарата, 1% ДМСО) значения линий составляют 0,904±0,05 и 1,03±0,08 (рис. 1).

В дальнейших исследованиях использованы только концентрации препарата МЭВ 0,01–0,00001%, т. к. более высокие концентрации (1,0–0,1%) использовать нецелесообразно, поскольку они оказывалют выраженный цитотоксический эффект на клетки.

Исследование противовирусного действия препарата МЭВ на репродукцию вируса простого герпеса in vitro в культуре клеток

где ТЦД₅₀ (тканевая цитотоксическая доза, вызывающая морфологические изменения ткани и снижающая жизнеспособность клеточной культуры на 50%)
составила 0,0055, ТЦИД₅₀ (ИД 50) (тканевая цитотоксическая доза, ингибирующая репродукцию вируса на 50%) составила 0,001.
Если препарат имеет ХТИ8, то препарат обладает сильным противовирусным действием. По данным литературы, также рассматривается снижение титра вируса при действии препарата не менее чем на 1,25–2,0 lgТЦИД₅₀/мл вирусной активности в условиях одноциклового исследования.
По результатам проведенных исследований ХТИ для препарата МЭВ составил 5,5, что свидетельствует о противовирусной активности препарата.

Исследование инфекционной активности ВПГ в иммуноферментном анализе

На дальнейшем этапе определения противовирусного действия МЭВ проводили ИФА для оценки активности ВПГ в культуре клеток. Результаты представлены в таблице 3.

В результате исследования было выявлено, что при концентрации препарата 0,001%, внесенного за 1 ч до инфицирования вирусом (в условиях эксперимента), отмечается наиболее значительное снижение инфекционной активности вируса (титр вируса составил 1:300 по сравнению с контролем — 1:656 100).

Заключение

Таким образом, препарат МЭВ оказывает максимальное противовирусное действие против ВПГ в концентрации 0,001% при внесении за 1 ч до появления вируса (профилактическая схема) и менее выраженное противовирусное действие по лечебной схеме (после инфицирования вирусом). ХТИ для препарата МЭВ составил 5,5, что свидетельствует о противовирусной активности препарата. МЭВ является новым перспективным препаратом с механизмом действия, отличным от механизма известных лекарств (препараты ряда ациклогуанозина), в лечение ВПГ-инфекции.
Данные исследования представляют собой начальную фазу наших экспериментов в этом направлении, и уже первые шаги показали перспективность МЭВ как антигерпетического препарата.

Читайте также: