Гепатит с мутация и резистентность

Обновлено: 27.03.2024

Метод определения полимеразная цепная реакция (ПЦР), секвенирование по Сэнгеру. Выявляют и идентифицируют кодонные замены в геномных регионах NS3, NS5A и NS5 вируса гепатита С. Регистрируют клинически значимые мутации резистентности, с порогом >15% популяции.

Выявление полиморфизмов NS3/NS5A/NS5B геномных регионов вируса гепатита С, ассоциированных с возможной резистентностью к терапии препаратами прямого противовирусного действия (для пациентов с генотипом вируса 1a, 1b или 3).

Вирусный гепатит C (ВГС) – инфекционное заболевание печени, вызываемое РНК-содержащим вирусом, склонное к длительному хроническому течению с риском развития цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы. В терапии этого заболевания за последние годы достигнуты прорывные успехи – она стала эффективнее, проще, с меньшим числом побочных эффектов.

Терапией выбора при ВГС являются препараты прямого противовирусного действия (ПППД), воздействующие непосредственно на ферменты вируса, способные приводить к его полной элиминации. ПППД делятся на 3 основных класса – ингибиторы протеазы региона NS3/4A (участвует в посттрансляционной модификации вируса), ингибиторы белка NS5A (компонент репликационного комплекса вируса) и ингибиторы фермента NS5B (РНК-полимераза вируса). Действие таких лекарственных средств приводит к остановке деления вируса и препятствует заражению новых клеток. Однако, несмотря на высокую эффективность этих препаратов, примерно у 5% больных лечение с применением ПППД оказывается неэффективным. Установлена важная роль в этом ассоциированных с лекарственной резистентностью мутаций вируса.

Наиболее часты мутации в регионе NS5A при генотипах вируса 1а и 3. Степень резистентности к препарату может варьировать в зависимости от позиции полиморфизма. Клиническое значение выявленной мутации резистентности соотносится с определенным классом ПППД, иногда - конкретным препаратом, а также генотипом вируса, клиническими характеристиками пациента (по факту предыдущего лечения, наличию цирроза) и планируемым режимом комбинированной терапии.

Для клинической интерпретации полученных результатов следует ориентироваться на текущие рекомендации экспертных сообществ по лечению ВГС и информацию о значимых мутациях в рекомендациях по применению соответствующего препарата. Резистентность к одному препарату может компенсироваться активностью другого при использовании лечения комбинациями ПППД разных классов или увеличением длительности лечения. В условиях свободного доступа к разным режимам терапии, позволяющим оптимизировать лечение для лиц групп повышенного риска лекарственной резистентности, проводить исследования связанных мутаций вируса обычно не требуется. Однако, в условиях ограниченной доступности препаратов такие исследования могут быть полезны для выбора тактики терапии (EASL 2016, 2018).

Исследование проводится только пациентам с вирусным гепатитом С генотипов 1а, 1b или 3. Требуется заранее определить и указать выявленный генотип вируса гепатита С (протокол регистрации результатов исследования мутаций резистентности будет зависеть от указанного генотипа).

При уровне вирусной РНК в крови ниже 50 000 МЕ/мл проведение исследования невозможно - следует иметь представление о текущей вирусной нагрузке*.

Метод определения полимеразная цепная реакция (ПЦР), секвенирование по Сэнгеру. Выявляют и идентифицируют кодонные замены в геномных регионах NS3, NS5A и NS5 вируса гепатита С. Регистрируют клинически значимые мутации резистентности, с порогом >15% популяции.

Выявление полиморфизмов NS3/NS5A/NS5B геномных регионов вируса гепатита С, ассоциированных с возможной резистентностью к терапии препаратами прямого противовирусного действия (для пациентов с генотипом вируса 1a, 1b или 3).

Вирусный гепатит C (ВГС) – инфекционное заболевание печени, вызываемое РНК-содержащим вирусом, склонное к длительному хроническому течению с риском развития цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы. В терапии этого заболевания за последние годы достигнуты прорывные успехи – она стала эффективнее, проще, с меньшим числом побочных эффектов.

Терапией выбора при ВГС являются препараты прямого противовирусного действия (ПППД), воздействующие непосредственно на ферменты вируса, способные приводить к его полной элиминации. ПППД делятся на 3 основных класса – ингибиторы протеазы региона NS3/4A (участвует в посттрансляционной модификации вируса), ингибиторы белка NS5A (компонент репликационного комплекса вируса) и ингибиторы фермента NS5B (РНК-полимераза вируса). Действие таких лекарственных средств приводит к остановке деления вируса и препятствует заражению новых клеток. Однако, несмотря на высокую эффективность этих препаратов, примерно у 5% больных лечение с применением ПППД оказывается неэффективным. Установлена важная роль в этом ассоциированных с лекарственной резистентностью мутаций вируса.

Наиболее часты мутации в регионе NS5A при генотипах вируса 1а и 3. Степень резистентности к препарату может варьировать в зависимости от позиции полиморфизма. Клиническое значение выявленной мутации резистентности соотносится с определенным классом ПППД, иногда - конкретным препаратом, а также генотипом вируса, клиническими характеристиками пациента (по факту предыдущего лечения, наличию цирроза) и планируемым режимом комбинированной терапии.

Для клинической интерпретации полученных результатов следует ориентироваться на текущие рекомендации экспертных сообществ по лечению ВГС и информацию о значимых мутациях в рекомендациях по применению соответствующего препарата. Резистентность к одному препарату может компенсироваться активностью другого при использовании лечения комбинациями ПППД разных классов или увеличением длительности лечения. В условиях свободного доступа к разным режимам терапии, позволяющим оптимизировать лечение для лиц групп повышенного риска лекарственной резистентности, проводить исследования связанных мутаций вируса обычно не требуется. Однако, в условиях ограниченной доступности препаратов такие исследования могут быть полезны для выбора тактики терапии (EASL 2016, 2018).

Исследование проводится только пациентам с вирусным гепатитом С генотипов 1а, 1b или 3. Требуется заранее определить и указать выявленный генотип вируса гепатита С (протокол регистрации результатов исследования мутаций резистентности будет зависеть от указанного генотипа).

При уровне вирусной РНК в крови ниже 50 000 МЕ/мл проведение исследования невозможно - следует иметь представление о текущей вирусной нагрузке*.

ГлавнаяHelixbook Генодиагностика резистентности к терапии гепатита С типов 1a, 1b, 3 (NS3, NS5A, NS5B)

Хронический гепатит С – это заболевание, вызываемое вирусом гепатита С и являющееся основной причиной развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Заболевание излечимо с применением препаратов прямого противовирусного действия, однако мутации самого вируса гепатита С могут приводит к развитию устойчивости к терапии.

Синонимы русские

Лекарственная резистентность гепатита С.

Синонимы английские

Hepatitis C drug resistance.

Название гена

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Препараты прямого противовирусного действия (ПППД) произвели революцию в лечении гепатита C – применение современных безинтерфероновых схем лечения способно полностью элиминировать вирус из организма. Однако до 30 % всех случаев применения ПППД оканчиваются неудачей, несмотря на правильно подобранную терапию и соблюдаемый режим приема. Этот феномен связывают с наличием в геноме самого вируса мутаций резистентности к лекарственной терапии. Такие изменения приводят к устойчивости к терапии ПППД, но не влияют на жизнеспособность инфекционного агента, таким образом обуславливая персистенцию вируса в организме.

Различают три региона генома вируса, ассоциированные с лекарственной резистентностью: NS3 (кодирует белки пострансляционной обработки компонентов вируса), NS5A (отвечает за осуществление репликации вирусных частиц) и NS5B (несет последовательность фермента РНК-полимераза). В зависимости от локализации мутации приобретается устойчивость к соответствующей группе препаратов – ингибиторов NS3, NS5A и NS5B регионов. Стоит отметить, что степень влияния на эффективность конкретного препарата варьируется в зависимости от положения, в котором возникла аберрация (позиция аминокислотной замены). Наиболее часто встречаются мутации в регионе NS5A вирусов 1a и 3 типов. Также исследование внесено в современные международные клинические рекомендации по диагностике и лечению хронического вирусного гепатита C и рекомендовано к назначению при первичном подборе терапии ПППД и в случае неудавшейся предшествующей терапии.

Когда назначается исследование?

  • Подбор схемы лечения хронического гепатита c препаратами прямого противовируного действия;
  • Модификация терапии в случае развития первичной резистентности к терапии ПППД (отсутствие устойчивого вирусологического ответа в течение 12-24 недель после начала лечения).
  • Изменение схемы лечения ПППД в случае развития вторичной лекарственной резистентности (возобновление репликации вируса после достижения устойчивого вирусологического ответа).
  • Прогноз эффективности лечения хронического гепатита C препаратами прямого противовирусного действия.

Что означают результаты?

Название исследования и компоненты

Референсные значения

Резистентность к Асунапревиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Асунапревиром не выявлено

Резистентность к Боцепревиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Боцепревиром не выявлено

Резистентность к Воксилапревиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Воксилапревиром не выявлено

Резистентность к Велпатасвиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Велпатасвиром не выявлено

Резистентность к Глекапревиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Глекапревиром не выявлено

Резистентность к Гразопревиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Гразопревиром не выявлено

Резистентность к Даклатасвиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Даклатасвиром не выявлено

Резистентность к Дасабувиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Дасабувиром не выявлено

Резистентность к Ледипасвиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Ледипасвиром не выявлено

Резистентность к Омбитасвиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Омбитасвиром не выявлено

Резистентность к Паритапревиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Паритапревиром не выявлено

Резистентность к Пибрентасвиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Пибрентасвиром не выявлено

Резистентность к Симепревиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Симепревиром не выявлено

Резистентность к Софосбувиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Софосбувиром не выявлено

Резистентность к Телапревиру (генотипы 1a, 1b гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Телапревиром не выявлено

Резистентность к Элбасвиру (генотипы 1a, 1b, 3 гепатита С)

Мутаций резистентности к терапии Элбасвиром не выявлено

Наличие мутации резистентности предрасполагает к повышенному риску развития лекарственной резистентности к препарату прямого противовирусного действия. В зависимости от позиции аминокислотной замены и региона, в котором она располагается, вероятность развития устойчивости может разниться.

Отсутствие мутаций резистентности к препарату ПППД не гарантирует его эффективности, однако повышает вероятность успешности его применения.

Что может влиять на результат?

Несмотря на то что генетические исследования – точный метод лабораторной диагностики, время клинических проявлений заболевания (пенетрантность болезни) зависит от внешней среды, формы заболевания и индивидуальных генетических факторов.

Лекарственная устойчивость (резистентность) – природная или приобретенная способность возбудителя болезни сохранять жизнедеятельность при воздействии на него лекарственных средств. Как правило, лечение ХГВ проводится с применением аналогов нуклеозидов/нуклеотидов – ингибиторов РНК-зависимой ДНКполимеразы (обратной транскриптазы), которая кодируется Р-геном ВГВ. Противовирусный препарат встраивается в вирусный геном в процессе обратной транскрипции, и конкурентно ингибирует вирусную репликацию, т. о. эти лекарственные препараты эффективно снижают вирусную нагрузку у больных ХГВ. При возникновении некоторых точечных мутаций в Р-гене ВГВ аналоги нуклеозидов/нуклеотидов теряют способность встраиваться в растущую цепь ДНК вследствие конформационного изменения локуса связывания обратной транскриптазы. Мутации лекарственной устойчивости подразделяются на:

  • основные (первичные) – мутации, снижающие чувствительность к противовирусному препарату;
  • компенсаторные (вторичные) – мутации, которые компенсируют функциональные дефекты активности полимеразы, связанные с появлением первичной мутации.

Мутации устойчивости определяются по номеру позиции аминокислоты в домене обратной транскриптазы, причем аминокислота дикого типа указывается слева от номера аминокислоты, вариант мутации устойчивости – справа. Например, M204I – замена метионина, аминокислоты дикого типа, в 204 положении домена обратной транскриптазы на аминокислоту изолейцин, наличие которой в данной позиции ассоциировано с возникновением мутации лекарственной устойчивости.

Информация о наличии мутаций лекарственной устойчивости в геноме ВГВ необходима при выборе препаратов противовирусной терапии у пациентов, ранее получавших аналоги нуклезидов/нуклеотидов.

Показания к обследованию

Исследование предназначено для больных ХГВ в определенных случаях перед началом противовирусной терапии и во время приема противовирусных препаратов (Табл. 8).

Критерии назначения исследований для определения устойчивости ВГВ к противовирусным препаратам

Стадия ПВТ Характеристика пациента Назначение исследования
До начала ПВТ Пациент лечения ранее не получал Нет
Ранее прерванное лечение Да
Неудачное лечение Да
Во время приема ПВП Первичная резистентность
(12 неделя ПВТ)
Да*
Вирусологичесий рецидив Да

*Если пациент сохраняет приверженность к лечению.

Материал для исследования Плазма крови.

Методы лабораторных исследований

В клинической диагностике определение мутаций устойчивости вируса гепатита В к противовирусным препаратам включает ПЦР-амплификацию ревертазного домена Р-гена ВГВ и последующий анализ специфичных нуклеотидных последовательностей методами:

  • прямого секвенирования амплифицированного фрагмента. Данный метод способен выявлять мутации устойчивости, если доля популяции вируса с мутацией составляет более 20%. Метод позволяет идентифицировать все мутации, включая дополнительные потенциальные компенсаторные и новые неизвестные;

Особенности интерпретации результатов

В результате проведенного исследования врач получает информацию по каждой аминокислотной позиции, ассоциированной с мутацией лекарственной устойчивости, и клиническую интерпретацию результатов исследования:

Читайте также: