Идентификация вируса гриппа а
Обновлено: 17.04.2024
Инфекция вызванная вирусом гриппа: диагностика, лечение, профилактика
Вирус гриппа — оболочечный ортомиксовирус (100 нм), минус-однонитевая РНК которого разделена на восемь частей. Это облегчает процесс рекомбинации возбудителя, позволяя вырабатывать различные поверхностные вирусные антигены. Вирус экспрессирует семь белков, три из которых отвечают за транскрипцию РНК. Нуклеопротеин может быть трёх антигенных типов. В соответствии с этим различают три основные группы вирусов гриппа типов А, В и С.
Вирус типа А и реже типа В периодически подвергается генетической модификации. Матричные белки образуют капсид, расположенный под липидной оболочкой. На его поверхности расположены шиловидные образования (10 нм), экспрессирующие гемагглютинин и неираминидазу, выступающие над оболочкой вируса и вступающие во взаимодействие с клетками организма хозяина. Тип вируса зависит от антигенной структуры гемагглютинина (Н) и нейраминидазы (N).
Эпидемиология гриппа. Ежегодно регистрируют эпидемии гриппа, что связано с точечными изменениями генома вируса (антигенный дрейф). В случае существенных модификаций (антигенный шифт — изменение антигенной структуры вируса с образованием нового штамма) возникают пандемии (каждые 10—40 лет). Как правило, они начинаются с Дальнего Востока и постепенно распространяются на запад. Сначала пандемические штаммы поражают птиц (в том числе домашних) и свиней.
Мутация вируса способствует передаче инфекции от человека к человеку, способствуя возникновению пандемии. Серотипы В и С вызывают заболевания исключительно у людей (без возникновения пандемии).
Инкубационный период 1—4 дня, при этом пациент становится заразным за день до и спустя три дня после возникновения симптомов. Головные и мышечные боли, лихорадка и кашель продолжаются в течение 3—4 дней. Инфекция часто осложняется особенно у пожилых людей и пациентов с сердечно-лёгочными заболеваниями (развитие первичной вирусной или вторичной бактериальной пневмонии).
Диагностика вируса гриппа. Диагностика основана на данных клинической картины. Для быстрой идентификации вируса применяют реакцию прямой иммунофлюоресценции и молекулярно-генетический метод с применением обратной транскриптазы, особенно у больных из группы риска и для снятия (исключение) диагноза птичьего гриппа. Лабораторная диагностика важна для разработки вакцины, так как для этого необходимо выделение определённого штамма вируса.
Координацию этого процесса во всём мире осуществляет Всемирная организация здравоохранения. Кроме того, серологический анализ позволяет установить ретроспективный диагноз.
Лечение, профилактика и контроль за инфекцией вызываемой вирусом гриппа. Лечение симптоматическое. Для терапии вторичной бактериальной инфекции применяют антибиотики. Каждый год из известных штаммов вируса создают инактивированные противовирусные вакцины. Вакцинация в 70% случаев обеспечивает защиту и рекомендована лицам, входящим в группу высокого риска развития осложнений (пациентам с сердечно-лёгочными заболеваниями, бронхиальной астмой).
Для профилактики инфекций, вызванных вирусом типа А, применяют амантадин. Сократить длительность заболевания помогают ингибиторы нейраминидазы — занамивир и осельтамивир. Они рекомендованы пациентам с высоким риском развития тяжёлых осложнений и способствуют снижению смертности и прекращению распространения инфекции.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.
Синонимы русские
Синонимы английские
Influenza serotypes A/B, RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Influenza virus – это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.
Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих "быстрых" диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.
В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.
В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.
При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.
Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.
Типирование Influenza virus A (H1N1, H3N2) – идентификация субтипов вируса гриппа типа А путем качественного выявления в исследуемом материале вирусной нуклеиновой кислоты (РНК).
Синонимы русские
Идентификация субтипов H1N1 и H3N2 вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).
Синонимы английские
Influenza virus A RT-PCR subtyping, Influenza virus reverse transcription PCR test.
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокрота.
Общая информация об исследовании
Вирус гриппа относится к РНКсодержащим вирусам. Род вирусов гриппа включает три типа вирусов: А, В и С. Вирусная частица имеет сферическую форму, в центре которой находится генетический материал вируса – РНК, а в оболочке присутствуют сложные белки – гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N). Для вирусов гриппа типа А характерна постоянная изменчивость этих поверхностных белков: на данный момент известно 15 вариантов гемагглютинина и 9 вариантов нейраминидазы. Их сочетание в определенной комбинации определяет субтип вируса. Вирусы субтипов H1N1 и H3N2 вызывают сезонный грипп человека.
Попадая в организм человека, вирус гриппа проникает в клетки эпителия слизистой оболочки дыхательных путей и размножается в них. Пораженные вирусом клетки дегенерируют, погибают и отторгаются. Таким образом, в отделяемом дыхательных путей (слизь, мокрота и т.п.) присутствуют погибшие эпителиальные клетки вместе с вирусными частицами.
Идентификация субтипа вируса проводится методом полимеразной цепной реакции. Принцип метода основан на обнаружении в материале специфичных фрагментов вирусной РНК, их избирательном синтезе с образованием огромного числа копий, что позволяет их легко детектировать, в том числе визуально. К преимуществам метода ПЦР можно отнести:
прямое определение наличия возбудителя – выявление специфического участка РНК возбудителя дает прямое указание на присутствие вируса;
высокую специфичность – в исследуемом материале идентифицируется уникальный, характерный только для данного вируса фрагмент РНК;
высокую чувствительность – ПЦР позволяет обнаружить возбудитель, даже если его исходная концентрация в исследуемом материале чрезвычайно мала.
Однако стоит отметить, что обнаружение вирусной РНК методом ПЦР не обязательно указывает на обнаружение жизнеспособного вируса или продолжающееся его размножение.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
При нетипичных проявлениях заболевания;
при высоком риске осложнений от гриппа (возраст более 65 и менее 2 лет, беременные, а также женщины в период первых двух недель после родов, лица с хроническими заболеваниями легких, сердца, почек, пациенты с иммунодефицитом или гематологическими заболеваниями);
при идентификации возбудителя у пациентов, заболевших вне эпидемиологического сезона.
Что означают результаты?
Референсные значения: не обнаружено.
Положительный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК обнаружен - инфицирование вирусом гриппа А определенного субтипа.
Отрицательный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК не обнаружен – отсутствие инфекции.
Что может влиять на результат?
Количество дней, прошедшее от начала болезни (после 4 дней возрастает вероятность необнаружения вируса).
Исследуемый образец – при инфекции нижних дыхательных путей вирус может не выявляться в образце, полученном из верхних дыхательных путей (мазки из носа, ротоглотки). В таких случаях необходимо повторить анализ с исследованием отделяемого нижних дыхательных путей.
Важные замечания
- У иммунокомпетентных лиц с неосложненным гриппом вирусовыделение в верхних дыхательных путях, как правило, значительно уменьшается после 4 дней болезни, соответственно, снижается вероятность выделения возбудителя. Поэтому образцы для исследования у таких пациентов должны быть получены в первые четыре дня заболевания, когда выделение вируса максимально. И напротив, у пациентов с ослабленным иммунитетом и при инфекции нижних дыхательных путей (вирусная пневмония) выделение вируса в бронхиальный секрет сохраняется дольше.
- Ожидание результата исследования или отрицательный результат при очевидной клинической картине не должны быть препятствием для назначения противовирусной терапии.
Также рекомендуется
Общий анализ крови с лейкоцитарной формулой
Influenza virus A/H1, РНК [реал-тайм ПЦР]
Mycoplasma pneumoniae, ДНК [ПЦР]
Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Кто назначает исследование?
Инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр, эпидемиолог.
Литература
Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н. Д. Ющука, Ю. Я. Венгерова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 701-710.
Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 649-653.
Guidance for Clinicians on the Use of RT-PCR and Other Molecular Assays for Diagnosis of Influenza Virus Infection by Centers of Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services, 2016.
Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Page 1316.
Свиной грипп – это несколько подтипов вируса гриппа А, способных вызывать заболевание у свиней. Наиболее актуальным в плане эпидемиологической настороженности в настоящее время является подтип А/H1N1.
Так как серотипы и подтипы вируса гриппа отличаются друг от друга по некоторым генетическим последовательностям (например, по гену белка гемагглютинина, H1), с помощью исследования РТ-ПЦР возможно идентифицировать конкретный подтип вируса (Influenza A/H1).
Синонимы русские
Вирус гриппа H1/N1 (свиной грипп) [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].
Синонимы английские
Swine influenza virus, SIV, pH1/N1, pndH1/N1, H1N1v, (swine flu, swine influenza, 2009 flu pandemic), RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Influenza virus A/H1 – один из подтипов вируса гриппа, характеризующийся особой вирулентностью и приводящий к тяжелым формам заболевания и пандемиям. Грипп, вызванный Influenza virus A/H1 (грипп свиней, свиной грипп), отличается от сезонного (эпидемического) гриппа по нескольким характеристикам. Во-первых, возбудитель гриппа свиней – это новый вариант вируса гриппа, возникший в организме свиней в результате мутаций его генетического материала и затем распространившийся в популяции человека. Большинство людей не имеют иммунитета к нему, поэтому заболевание характеризуется очень высокой заразностью. Кроме того, оно чаще протекает в более тяжелой форме с вовлечением нижних отделов респираторного тракта и с осложнениями (в виде пневмонии, дыхательной и почечной недостаточности, энцефалопатии и др.), что обуславливает необходимость раннего и интенсивного лечения. Поэтому диагностика гриппа свиней должна быть произведена в кратчайшие сроки. На основании опыта борьбы с пандемией гриппа Influenza A H1/N1 в 2009 году был сделан вывод, что "золотым стандартом" идентификации этого подтипа вируса является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в отделяемом носоглотки) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Такое исследование позволяет получить максимально точный результат в кратчайшие сроки.
РТ-ПЦР относится к так называемым быстрым методам диагностики гриппа, обеспечивающим возможность постановки окончательного, лабораторно подтвержденного диагноза еще до начала лечения. Это преимущество отличает РТ-ПЦР от выделения вируса в культуре клеток (требует 7-10 дней) и большинства серологических методов (требуют нарастания титра антител, 10-14 дней).
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
- При постановке диагноза "грипп, среднетяжелая/тяжелая форма" и при осложнениях гриппа (пневмония, дыхательная недостаточность, энцефалопатия и др.).
- При постановке диагноза "грипп" у пациента с факторами риска гриппа Influenza A/H1: возраст до 2 лет и старше 65 лет, беременность, хроническая обструктивная болезнь легких, хронические заболевания сердца, почек, печени, сахарный диабет, иммуносупрессия.
- При отсутствии улучшения или при ухудшении состояния в течение 72 часов после постановки диагноза "грипп, легкая форма" у пациента без факторов риска Influenza A/H1.
- При обследовании пациента, контактировавшего с больным с установленной Influenza A/H1-инфекцией.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Причины положительного результата:
Причины отрицательного результата:
Важные замечания
Также рекомендуется
Кто назначает исследование?
Инфекционист, эпидемиолог, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.
Диагностика гриппа. Лечение гриппа. Профилактика гриппа.
Материалы для исследования при гриппе — смывы и мазки из носоглотки, мазки-отпечатки из носовой полости и кровь.
Основные методы диагностики гриппа — вирусоскопические, вирусологические и серологические. К методом экспресс-диагностики гриппа относят определение Аг вируса в мазках-отпечатках из носа и смывов носоглотки в РИФ и ИФА.
Выделение возбудителя гриппа проводят заражением 10-11-суточных куриных эмбрионов или, реже, различных клеточных культур. Вирусы гриппа проявляют слабый цитопатический эффект и чаще определяют феномен гемадсорбции. Типовую принадлежность вирусов идентифицируют в РСК; подтип гемагглютинина — в РТГА (вирусы гриппа агглютинируют эритроциты человека и различных животных); подтип нейраминидазы — в реакции ингибирования активности фермента.
Лечение гриппа
Препараты выбора при лечении гриппа —- амантадин или ремантадин, ИФН и его индукторы, противогриппозный у-глобулин. Терапевтические мероприятия следует начинать как можно раньше.
Профилактика гриппа. Иммунопрофилактика гриппа.
Разработаны методы активной и пассивной иммунопрофилактики гриппа. Для пассивной иммунизации применяют противогриппозный иммуноглобулин человека, приготовленный из крови доноров, иммунизированных гриппозными вакцинами.
Для активной иммунизации против гриппа применяют живые и инактивированные вакцины. Живые аттенуироеанные вакцины проявляют большую иммуногенность. Инактивированные вакцины включают вирионные (приготовлены из высоко-очищенных культур вирусов), субвирионные или расщеплённые (получают обработкой высоко-очищенных культур вирусов детергентами), субъединичные (содержат только гемагглютинин и нейраминидазу) препараты. Вакцинацию осуществляют в периоды наибольшего риска развития эпидемий. Она в большей степени показана лицам младшего и преклонного возраста, страдающим обструктивными лёгочными и сердечно-сосудистыми заболеваниями, а также сотрудникам ЛПУ.
Применение убитых вакцин от гриппа требует ежегодной ревакцинации; их эффективность не превышает 60-70%. Поскольку антигенные вариации возбудителя наблюдают часто, то набор Аг соответствующего вируса для иммунизации может быть определён только после начала вспышки заболевания.
Читайте также: