Иммунохроматографический метод выявления вирусов

Обновлено: 28.03.2024


В последние годы на мировом рынке появилось большое количество иммунохроматографических тестов для выявления наркотических веществ в слюне. Это связано с тем, что развитые страны начали активно использовать такие тесты, замещая ими наиболее распространенные ранее ИХА-тесты по моче. Выявление наркотических веществ в слюне незаменимо в случаях, когда необходимо установить состояние наркотического опьянения. Например, в настоящее время в Европе тесты по слюне являются единственно приемлемыми для тестирования на дорогах [1]. Это связано, во-первых, с удобством их использования (неинвазивный метод, исключающий вмешательство в личную жизнь, в отличие от тестов по моче). Во-вторых, тестирование по слюне практически исключает возможность фальсификации результатов анализа или подмены образца (что очень распространено при тестировании по моче). И самое главное, в крови и слюне наркотики появляются сразу после употребления, и остаются там только в течение нескольких часов. В моче же наркотики появляются спустя несколько часов после употребления, и сохраняются до 3-х суток, когда человек уже не находится в состоянии опьянения. Результаты тестов по слюне показывают текущее состояние, когда человек находится непосредственно под воздействием наркотиков и неадекватен в поведении, что неминуемо отражается на способности управлять автомобилем (а также другими видами транспорта, сложными устройствами на производствах и т.п.).

В Европе соблюдение прав человека, в том числе права на использование рекреационных ПАВ во время отдыха, толерантность к людям, потребляющим ПАВ, являются очень важным в обществе. Поэтому здесь переход от тестирования по моче к тестированию по слюне явился основополагающим при проверке водителей на дорогах и в других ситуациях, связанных с определением непосредственного состояния опьянения.

Другие биологические образцы (моча, волосы) также считаются перспективными для различных целей: моча – для определения недавнего факта употребления ПАВ, волосы – для выявления истории наркопотребления данного человека [2].

Основными иммунореагентами, полученными в ходе разработки иммунохроматографических тест-систем являлись:

2. Конъюгированные антигены исследуемых веществ с белком-носителем, жестко иммобилизованные в тестовой зоне тест-полоски.

3. Вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко иммобилизованные в контрольной зоне тест-полоски.

В ходе разработки тест-системы на первом этапе осуществлен синтез конъюгированных антигенов производных наркотических веществ (морфина, амфетамина, кокаина и тетрагидроканнабинола) с макромолекулярными носителями (овальбумин, бычий сывороточный альбумин). Указанные наркотические вещества не содержат свободные функциональные группы для связывания с белковой матрицей. Путем ряда сложных химических реакций были поучены модифицированные производные морфина, амфетамина, кокаина и тетрагидроканнабинола, содержащие спейсер с карбоксильной группой. Синтезированы следующие соединения – 6-0-гемисукцинат морфина, d, l-1-фенил-2-карбоксиаминопропан, бензоилэкгонин, дельта-9-тетрагидроканнабинол, модифицированный реакцией азосчетания с п-аминобензойной кислотой. Перечисленные вещества использовали в качестве гаптена для конденсации с белками.

Иммунореагенты были синтезированы, протестированы, подобраны их оптимальные концентрации.

Для создания иммунохроматографической тест-полоски подобраны все необходимые материалы, их размеры и конструкция конечного иммунохроматографического теста. Слюна относится к биообъектам, которые можно собрать в ограниченном небольшом количестве; конструкция такой тест-системы должна позволять использование минимального объема образца. С этой целью используются пластиковые тест-кассеты со встронными в них тест-полосками (рис. 29).

29.tif

В отличие от тестов для мочи, к тест-системам для анализа слюны предъявляются намного более высокие требования. Моча является жидкой средой, в то время как слюна – вязкой. Поэтому тесты для анализа слюны должны обладать отличными от тестов по моче характеристиками: материал составных частей тест-полоски должен давать большую скорость потока для возможности прохождения по полоске вязкой жидкости. В прокладке для образца сорбируют специальные реагенты, снижающие вязкость образца.

Также следует помнить, что кислотность слюны отличается от кислотности мочи, поэтому при производстве тест-полосок для мочи и для слюны используют различные реагенты для создания оптимальных условий иммунохимической реакции.

При использовании в качестве биообъекта слюны процедура отбора и подготовки пробы к анализу имеют принципиальное значение для успешности всего аналитического процесса. Первоначально необходимо обеспечить идентичность объекта исследования, чтобы результаты анализа отражали истинное содержание аналита в исследуемом объекте и состояние организма как источника этого объекта. В противном случае результат исследования не только теряет рациональное значение, но и может вызвать негативные последствия: врачебные ошибки, неправомерные последствия, и т.п.

Конструкция пробоотборника для слюны и материал, из которого сделана адсорбирущая часть пробоотборника, значительно влияют на конечный результат анализа. Для исключения этого нежелательного влияния необходимо выбирать материалы и конструкцию пробоотборника, руководствуюсь следующими характеристиками:

1. Способность пористого материала пробоотборника не адсорбировать определяемые вещества. В противном случае часть анализируемого вещества остается в материале пробоотборника, что отрицательно влияет на чувствительность определения.

2. Конструкция пробоотборника, позволяющая собрать и нанести на тест-кассету количество слюны, достаточное для удачного проведения теста.

Часто в качестве пробоотборника предлагается пластиковая пипетка либо стаканчик для сбора слюны. Это наиболее экономичный вариант, однако такой пробоотборник, как правило, не позволяет собрать достаточное количество слюны. Кроме того, процедура сбора слюны является неудобной для обследуемого.

Наиболее удобным для использования и позволяющим получить достаточное количество биоматериала является пробоотборник в виде губки, прикрепленной на пластиковую ручку и отдельный флакон для отжима и хранения образца (рис. 30). Адсорбирующая губка помещается в рот, отбор слюны происходит в течение 1–2 минут до полного впитывания губки. Затем губка помещается во флакон, жидкость отжимается и наносится на тест-кассету.

30.tif

Рис. 30. Внешний вид пробоотборника и процедура сбора слюны

● пробоотборника: губка цилиндрической формы из адсорбирубщего материала с прикрепленной к ней пластиковой ручкой,

● ёмкости для сбора и хранения образца – ёмкость из бесцветного пластика, состоящая из отделения для хранения образца, перегородки для отжима жидкости ротовой полости и закручивающейся крышки,

● тестового планшета: планшет прямоугольной формы из пластика с двумя тестовыми полосками. В средней части планшета имеется две тестовых зоны прямоугольной формы с маркировками по бокам: К (контроль) и наименованием анализируемых веществ. В нижней части планшета должно находиться два отверстия овальной формы для внесения анализируемого образца (рис. 30).

Схема проведения тестирования показана на рис. 31. Она является простой и не требующей лабораторных условий и квалифицированного персонала. Отбор слюны происходит в течение 1–3 минут, а проведение самого теста занимает не более 10 минут. В итоге, вся процедура тестирования занимает 10–15 минут.

Применение иммунохроматографических экспресс-тестов для выявления наркотических веществ в слюне является единственно возможным методом обследования при освиделельствовании на состояние наркотического опьянения, например, при тестировании водителей на дорогах на постах ГИБДД (по аналогии с освидетельствованием на состояние алкогольного опьянения). Используемые иногда ИХА тесты по моче в этом случае неэффективны, т.к. показывают факт употребления наркотиков, который мог иметь место несколько суток назад.

31.tif

● Экспресс-тесты по слюне удобны: это неинвазивный метод, исключающий вмешательство в личную жизнь, в отличие от тестов по моче.

● Анализ слюны практически исключает возможность фальсификации результатов анализа или подмены образца, что очень распространено при использовании в качестве биопробы мочи.

● Результаты тестов по слюне показывают текущее состояние наркотического опьянения. В то же время выявление ПАВ в моче дает положительный результат в течение нескольких дней после приема наркотиков.

Предел обнаружения тестов определяется как минимальная концентрацию аналита, при которой он может быть достоверно обнаружен. Для качественных иммунохроматографических тестов процедура определения предела обнаружениязаключается в следующем. Для каждого аналита готовили растворы определяемого вещества различных концентраций, близких к предполагаемому значению предела обнаружения. Каждый полученный стандартный раствор исследовали с помощью разработанного ИХА 30 раз. Для каждой концентрации определяли количество положительных и отрицательных результатов теста. Предел обнаружения определяли как концентрацию аналита, при которой процент положительных результатов теста равен или более 50 %. Полученные результаты определения предела обнаружения представлены в табл. 7.

В нашей клинике появилась возможность экспресс - тестирования на выявление антигена SARS-CoV-2 (COVID-19) иммунохроматографическим методом.

В настоящее время можно пройти экспресс-тестирование с помощью двух тест - систем производства Корея:

Тест система BIOCREDIT Covid-19 Ag, производитель RapiGEN

  • Тест система BIOCREDIT Covid-19 Ag, производитель RapiGEN
  • Тест система STANDARD Q Covid-19 Ag, производитель СД Биосенсор

Тест система STANDARD Q Covid-19 Ag, производитель СД Биосенсор

Иммунохроматографический анализ (ИХА) – метод, основанный на реакции между антигеном и соответствующим ему антителом в биологических материалах.

Тест-системы предназначены для качественного выявления антигена SARS-CoV-2 в биологическом материале человека (мазок из носоглотки).
Чувствительность метода с использованием тест - систем : 92,0%. Специфичность метода с использованием тест-систем: 98,0%.

  1. Иммунохроматографический метод выявления антигена SARS-CoV-2 в мазках носоглотки относится к основным этиологическим методам лабораторной диагностики новой коронавирусной инфекции.
  2. Метод иммунохроматографии для выявления антигена SARS-CoV-2 в мазках носоглотки рекомендован в качестве предварительного скринингового обследования.
  3. Подтвержденным случаем COVID 19 считается: положительный результат лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-2 с применением методов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) или антигена SARS-CoV-2 с применением иммунохроматографического анализа вне зависимости от клинических проявлений.

Тест-системы построены на иммунохроматографическом анализе антигена вируса. Исследуется мазок из носоглотки: взятый биоматериал помещают в специальный раствор, после чего 3-4 капли этого раствора наносят на тест-полоску. Результат теста появляется через 5-20 минут. Это хорошая альтернатива и дополнение к ПЦР тестированию.

antigen-test-nsk (1).jpg

16.12.2020

Экспресс-тест на выявление антигена SARS-CoV-2 – быстрый способ диагностики COVID-19 на ранних стадиях заболевания методом иммунохроматографического анализа.

О тестировании

Иммунохроматографический анализ (ИХА) – качественный анализ, основанный на реакции между антигеном (вещество, определяемое организмом как чужеродное) и соответствующим ему антителом в биологическом материале человека.

Другими словами, исследование методом ИХА выявляет белки вируса, распознаваемые иммунной системой человека.

Чувствительность теста: 84.38%

Для чего проводится?

Экспресс-тест на выявление антигена SARS-CoV-2 является вспомогательным методом ранней диагностики SARS-CoV-2 у пациентов с клиническими симптомами ОРВИ.

Обратите внимание!

Результаты экспресс-теста на выявление антигена SARS-CoV-2 не будут приняты для выписки/закрытия больничного, по возвращении из-за границы. Уточните заранее в организации, куда вы планируете предоставлять результат, подходит ли он или требуется результат ПЦР-диагностики.

Чем отличается от ПЦР-диагностики?

Как и ПЦР, экспресс-тест на антиген позволяет определить наличие в организме новой коронавирусной инфекции на ранних стадиях заболевания, только гораздо быстрее – всего за 15-30 минут.

Преимущества:

  • Готовность результата экспресс-теста – в течение 30 минут.
  • Врач прямо на приеме может провести тестирование и в течение того же приема получить результат и сделать корректные назначения.

Необходимый биоматериал

Мазок из носоглотки и ротоглотки.

Подготовка к анализу

До взятия мазков запрещается:

  • За 3 часа орошение ротовой полости лекарствами, рассасывание таблеток, полоскание рта, чистка зубов;
  • За 2 часа есть, пить;
  • За 1 час курить.

Как проводится тестирование?

Забор биоматериала проводится двумя стерильными зондами. Мазки берутся со слизистой нижнего носового хода и из ротоглотки. Взятый биоматериал помещается в раствор на несколько минут, после чего 3 капли выделенного образца наносятся на специальную тестовую кассету. Результат оценивается в течение 15-30 минут.

Где проводится:

Результат анализа

Выявляет инфицирование или отсутствие инфицирования непосредственно на момент проведения тестирования:

  • Отрицательный - инфекции не выявлено;
  • Положительный - инфекция обнаружена.

Стоимость

Экспресс-тест на выявление антигена SARS-CoV-2 в клинике

Экспресс-тест на выявление антигена SARS-CoV-2 на дому

*Цена включает стоимость исследования и забора мазков в амбулатории.

**Цена включает стоимость исследования и забора мазков на дому. Стоимость выезда рассчитывается в зависимости от адреса, дня недели (будний/выходной) и времени (утро/день/вечер) выезда. Окончательную стоимость услуги по вашей заявке уточняйте при записи.

Иммунологический анализ крови – это метод лабораторного исследования, позволяющий оценить состояние общего иммунитета, его напряженность – то есть насколько защитная система организма задействована в момент анализа, определить количество и функцию иммунных клеток крови, присутствие в ней антител. Иммунологический анализ способен выявить первичный и вторичный иммунодефициты, помочь при диагностике аутоиммунных, гематологических, инфекционных и лимфопролиферативных заболеваний.

Когда назначается иммунологический анализ крови?

Иммунологическое исследование проводится:

Изображение 1: Иммунологический анализ крови - клиника Семейный доктор

Иммунологический анализ крови

  • в случае повторяющихся инфекционных заболеваний;
  • в случае если инфекционное заболевание носит тяжёлый и затяжной характер;
  • при подозрениях на врожденный или приобретенный иммунодефицит;
  • при подозрении на аутоиммунное заболевание;
  • при аллергических реакциях;
  • перед серьёзными хирургическими вмешательствами;
  • в случае, если послеоперационный период протекает с осложнениями;
  • в целях контроля за ходом лечения некоторыми группами медикаментов (иммунодепрессантами, иммуномодуляторами и т.п.).

Интерпретация результатов производится врачом-иммунологом, который учитывает данные осмотра, жалобы пациента и результаты других исследований. Наибольшее внимание уделяется значительным отклонениям от нормы (более 20%), меньшие отклонения могут быть вызваны случайными факторами – диетой, стрессами, физическими нагрузками, а также индивидуальными особенностями организма.

Показатели иммунологического анализа крови

Иммунологический анализ включает в себя комплекс показателей, отражающих состав и функциональную активность основных клеток иммунной защиты в разбивке по видам клеток и продукты их деятельности (иммуноглобулины). Развернутый анализ иммунной системы является достаточно сложным, требующим много времени, поэтому в зависимости от цели исследования иммунологический анализ может быть ограничен показателями, представляющими конкретную функцию иммунитета или затрагиваемые конкретной патологией.

Чаще всего исследуются:

  • субпопуляции лимфоцитов – белых кровяных телец, различные виды которых распознают чужеродные структуры (антигены), вырабатывают антитела, направленные против чужеродных агентов, регулируют интенсивность иммунных процессов, распознают и уничтожают изменённые клетки организма (например, раковые клетки);
  • иммуноглобулины – антитела, функцией которых является нейтрализация инфекционных возбудителей и токсинов. Прежде всего, исследуются иммуноглобулины классов A, M, G
    • Иммуноглобулины A (IgA) обеспечивают местный иммунитет слизистых оболочек. Повышенный уровень IgA отмечается при заболеваниях кожи, органов пищеварения и дыхания. Также это характерно при интоксикациях, алкоголизме, патологии печени и почек.
    • Иммуноглобулины M (IgM) активно вырабатываются при первичной защитной реакции организма, поэтому их повышенное количество наблюдаются в начале любого заболевания. Повышенное значение IgM также наблюдается при заболеваниях печени (прежде всего гепатите или циррозе печени).
    • Иммуноглобулины G (IgG) - самый массовый класс иммуноглобулинов. Они являются основной защитой, вырабатываемой в ответ на проникновение в организм инфекции. Их задача – убивать грибок, вирус, патогенные бактерии, обезвреживать вырабатываемые возбудителем инфекции токсины. Именно они отвечают за длительный иммунитет, защищающий нас от повторного поражения инфекцией.
    • Иммуноглобулины Е и D, вырабатываются, в основном, в ответ на паразитарную инфекцию (поражение глистами) или в случае атопической аллергии.

    Для определения чувствительности организма к тем или иным аллергенам проводится специальное исследование – аллергопанель, выявляющее специфические антитела к конкретной группе аллергенов (как правило это иммуноглобулины классов Е или G).

    Подготовка к иммунологическому анализу крови

    Для того чтобы результаты анализа были точными, сдавать кровь следует натощак. Лучше всего это сделать утром. Оптимально пациент должен не есть и не пить ничего, кроме воды в течение 12 часов перед сдачей анализа.

    Накануне анализа не следует принимать алкоголь. В течение часа перед сдачей анализа желательно не курить.

    Непосредственно перед сдачей анализа желательно присесть и находиться в покое 10-15 минут, чтобы исключить влияние физических и эмоциональных нагрузок на результаты исследований.

    Не занимайтесь самолечением. Обратитесь к нашим специалистам, которые правильно поставят диагноз и назначат лечение.

    Читайте также: