Как делают тест на коронавирус в россии

Обновлено: 24.04.2024

Сейчас многие тестируются на антитела к "короне": кто-то хочет знать, не переболел ли он бессимптомно, кто-то - оценить состояние после прививки. Лаборатории предлагают разные тесты - и наши, и зарубежные. Как не запутаться и сдать именно тот анализ, какой нужен? На вопросы "РГ-Неделе" ответил глава НЦ молекулярно-генетических исследований ДНКОМ Андрей Исаев.

Для чего сдают тесты на антитела?

Тесты выполняются на наличие антител (иммуноглобулинов) IgA, IgM и IgG.

- Антитела IgA первыми вырабатываются нашей иммунной системой в ответ на вторжение вируса - если тест на них положительный, значит, человек находится в острой фазе заболевания (даже если у него нет симптомов).

- Антитела IgM начинают вырабатываться позже, где-то на 3-4-й день после возникновения симптомов - этот тип антител также является маркером первичной инфекции. Обычно исследование на антитела IgM используется как вспомогательное - для уточнения фазы инфекционного процесса.

- Антитела IgG начинают вырабатываться примерно через 10-14 дней после появления симптомов. Их появление указывает на то, что у человека сформировался долговременный иммунитет. То есть речь идет либо о поздней фазе заболевания, когда больной уже выздоравливает, либо о том, что человек переболел COVID-19 раньше.

Какой тест можно сделать перед прививкой?

Сейчас тесты на антитела IgG чаще всего выполняют люди, которые собираются пройти вакцинацию, чтобы убедиться, что они не перенесли COVID-19 раньше бессимптомно и у них нет иммунитета, полученного естественным путем. Если тест показывает положительный титр антител IgG, вакцинацию можно отложить.

А если человек хочет проверить уровень антител после прививки? Сейчас многие сравнивают свои показатели.

Надо понимать, что тесты, которые используют в лабораториях, разные и шкалы у них используются тоже разные. Поэтому если пытаться сравнивать результаты (хотя большого смысла в этом нет), то надо по меньшей мере быть уверенным, что вы выполняли тестирование одним и тем же тестом.

Что такое "коэффициент позитивности"?

Для определения уровня антител после прививки в большинстве случаев используются полуколичественные тесты. Они не показывают точное количество образовавшихся антител. Но с их помощью можно оценить интенсивность иммунного ответа - по яркости свечения образца, если тест проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Тесты разных производителей имеют разную шкалу. В большинстве случаев в государственных лабораториях используют тест-системы "Вектор-бест", и у них уровень отсечки равен 1. То есть если показатель ниже - антител нет. От 1 до 1,1 - так называемая серая зона. Если же результат выше 1,1 - значит, мы имеем яркую положительную реакцию иммунной системы.

"Коэффициент позитивности" показывает, во сколько раз уровень антител в пробе превышает пороговый уровень их распознавания. Так что, например, показатель 15, о котором недавно сказал президент, - это хороший результат. Примерно такой же и даже больше коэффициент позитивности иммунного ответа имеют большинство привитых "Спутником V" или "КовиВаком".

При этом еще раз отмечу, что у других производителей тестов шкала может быть другой и показатели, соответственно, тоже. При этом, получая результат теста в лаборатории, вы всегда можете увидеть на бланке референсные значения и сравнить результат с ними.

Сергей Мальгавко/ТАСС

Каким тестом можно проверить поствакцинальный иммунитет?

Такой тест называется "Количественное определение антител к RBD домену S1 белка коронавируса (антитела IgG)" (выполняется методом хемилюминесцентного иммуноанализа сыворотки и плазмы крови, Abbot).

Это количественный анализ на IgG-антитела. Он поможет оценить иммунный ответ и в случае заражения (или перенесенного COVID-19), и для контроля поствакцинального иммунитета.

Когда делать:

- на текущую или перенесенную инфекцию не ранее чем через три недели после появления симптомов или получения положительного результата ПЦР-теста;

- для оценки поствакцинального иммунитета через три недели после второй дозы вакцины.

О чем говорят результаты:

антитела к патогену отсутствуют или на очень низком уровне.

Это может быть период ранней инфекции или у пациента не исключены нарушения функций иммунной системы.

≥ 50.0 AU/mL положительно:

есть иммунный ответ на инфекцию либо сформировался поствакцинальный ответ.

Нужны ли повторные исследования?

Со временем напряженность иммунитета и в случае перенесенного заболевания, и после вакцинации уменьшается. По мнению инфекционистов, чем выше уровень антител, тем ниже риск повторного заражения, а также вероятность тяжелого течения и осложнений при COVID-19.

При этом делать повторный тест, чтобы оценить, как падает уровень антител, рекомендуется не чаще чем раз в полгода.

Сергей Карпухин/ТАСС

Есть тесты на антитела, которые не показывают поствакцинальный иммунитет?

Да. Это, например, тест на "Антитела к нуклеокапсидному белку (N) коронавируса IgG (выполняется методом хемилюминесцентного иммуноанализа сыворотки и плазмы крови, Abbot).

Этот тест не используется для оценки иммунного статуса после прививки. Дело в том, что антитела к нуклеокапсидному белку (N) вируса SARS-CoV-2 вырабатываются только после перенесенного заболевания. Вакцинация выработку этих антител не стимулирует, поэтому этот тест бесполезно применять для оценки поствакцинального иммунитета.

Этот тест назначают:

для оценки предполагаемого иммунного статуса пациента после перенесенного или на поздней фазе (выздоровление) заболевания COVID-19;
для оценки иммунного статуса пациента, в качестве вспомогательного метода диагностики коронавирусной инфекции, совместно с результатами других лабораторных исследований и клинических данных о пациенте.

О чем говорят результаты

отрицательно < 1,4- negative (антитела не обнаружены);

положительно > 1,4 - positive (антитела обнаружены).

Для чего нужно сдавать ПЦР-тест на COVID-19?

Этот тест сдается, чтобы проверить, болен ли человек или, возможно, является носителем вируса (даже если у него нет никаких симптомов нездоровья), выделяет ли он в настоящий момент вирус из верхних дыхательных путей, то есть является источником инфекции для окружающих.

Это единственный и ставший уже стандартным тест для туристов: при въезде практически все страны требуют предъявить справку о тесте, сданном перед отъездом. После возвращения из поездки тест придется сдать еще дважды и результат загрузить на портал госуслуг.

Кроме того, можно сдать ПЦР-тест, чтобы убедиться, что вы здоровы, то есть исключить бессимптомное течение заболевания. Это может понадобиться, если, например, вам предстоит встреча с пожилыми родственниками и вы не хотите рисковать их здоровьем. Кроме того, с помощью такого тестирования можно проверить, не заразились ли вы коронавирусом, если вы точно знаете, что контактировали с заболевшим.

Как правильно сдавать тесты?

Для теста ПЦР: берется мазок биоматериала со слизистой носоглотки. Анализ сдается натощак либо через три часа (или позже) после еды. За три часа до взятия мазка нельзя чистить зубы, полоскать рот, пить, жевать жевательную резинку, применять антисептические таблетки, полоскания и спреи.

Для теста на антитела: берется кровь из вены. Сдавать кровь нужно натощак утром или днем не менее чем через четыре часа после последнего приема пищи.

Для однозначной и финальной постановки диагноза “коронавирусная инфекция” заболевшему человеку делается тест на коронавирус, возбудителем которого является SARS-CoV-2. Анализ делается людям всех возрастов.

Тесты делают либо бесплатно в государственных инфекционных больницах либо по желанию за плату в медицинских лабораториях, которые имеют право проводить тестирование.

В августе 2021 года коммерческий тест на коронавирус делается в Москве, Подмосковье, Санкт-Петербурге, Екатеринбурге, Новосибирске.

В связи с ограниченными возможностями лабораторий и большим количеством желающих сдать тест, нередко возле лабораторий выстраиваются огромные очереди, что является небезопасным, так как не соблюдается дистанция и повышается риск заболеть от людей, которые потенциально имеют вирус и пришли его подтвердить.

Принимать решение о сдаче анализа нужно взвешенно.

Кому нужно делать тест на коронавирус

Обязательный бесплатный тест на коронавирус делается всем, кто обратился за медицинской помощью по симптомам этой инфекции и кто вернулся из-за границы в течение последних 14 дней.

Также тесты на коронавирус в России делают:

У госпитализированных пациентов с подтвержденной COVID-19 инфекцией осуществляется повторный забор образцов из верхних дыхательных путей и нижних дыхательных путей с целью выявления/демонстрации вирусного клиренса (скорости очищения биологических жидкостей или тканей организма).

Частота сбора образцов будет зависеть от местных эпидемических характеристик и наличия ресурсов. Для выписки из больницы у клинически выздоровевшего пациента рекомендуется получить два отрицательных результата теста с интервалом не менее 24 часов.

Если вы самостоятельно решили провериться, то помните, что тест имеет смысл проводить при явном подозрении на коронавирус, то есть когда у вас есть симптомы.

Понапрасну не подвергайте себя риску заболеть, стоя в очереди потенциально инфицированных людей, которые пришли в лабораторию. Есть тесты на коронавирус на дому: их привозят медработники (например, специалисты Центра молекулярной диагностики Роспотребнадзора), вы сами берете мазок из зева, потом они забирают пробирки и увозят в лабораторию на исследование.

В России платный анализ на коронавирус сдается по предварительной записи, строго по паспорту, делают его только лаборатории с правом проведения таких видов тестирования.

В случае положительного результата о нем сообщают в Роспотребнадзор. В Роспотребнадзоре результат перепроверят, при этом повторно вам туда приходить не нужно, они возьмут из лаборатории образцы биологического материала.

В случае очередного положительного результата уже из Роспотребнадзора связываются с пациентом. В Москве планируется создать единую электронную базу данных, в которой будут занесены все данные тестирования на коронавирус. А также включать проведение анализа на коронавирус в России в программу обязательного медицинского страхования (ОМС).

Кого тестируют в первую очередь?

На данный момент существуют следующие приоритеты на тестирование Covid-19:

Приоритет 1

Обеспечивает оптимальные варианты лечения для всех госпитализированных пациентов, снижает риск инфекций, связанных со здравоохранением, и поддерживает целостность системы здравоохранения.

В первую очередь тестируются:

Госпитализированные пациенты
Работники медицинского учреждения с симптомами

Приоритет 2

Гарантирует, что люди с высоким риском осложнений инфекции быстро идентифицируются и соответствующим образом сортируются.

Пациенты в учреждениях длительного ухода (дома престарелых и т.п.) с симптомами
Пациенты 65 лет и старше с симптомами
Обычные пациенты с симптомами

Приоритет 3

Если позволяют ресурсы, проверяются люди, которые сейчас работают.

Работники с симптомами, которые обеспечивают работоспособность общественной инфраструктуры
Лица, которые не соответствуют ни одной из вышеуказанных категорий с симптомами
Работники учреждений здравоохранения и лица, оказывающие первую помощь, в том числе волонтеры
Люди с легкими симптомами в сообществах, испытывающих большое количество госпитализаций с COVID-19

Неприоритетные

Где проходят тест на Covid-19 в России

Купить в аптеке какой-либо тест на коронавирус нельзя. Однако ожидается, что тесты ИФА можно будет делать даже в домашних условиях и они будут стоить недорого (прототип тест-системы от Biotech будет готов к концу апреля).

На данный момент экспресс-тестами на коронавирус оснащены все центры гигиены и эпидемиологии в России, расположенные в крупных городах. Самостоятельно обратиться в центры Роспотребнадзора для сдачи анализов на коронавирус нельзя – нужно направление от врача. В случае госпитализации или подозрении медиков на COVID-19 врач сам назначит анализ, и его проведут бесплатно.

Платные тесты ПЦР делают клиники Гемотест, Хеликс, Медси, Литех, LabQuest, Ситилаб. Скоро можно будет сдать тест в Инвитро. Средняя стоимость анализа на 12 апреля 2020 года в Москве составляет 2000 рублей, экспресс-тест от 5000 рублей.

Можно ли сдать обычный ОРВИ-скрин на ряд инфекций?

Если речь идет о тестах, которые купил, протестировал себя сам (как, например, набор самотестирования на ВИЧ по слюне) и получил результат дома, то таких тестов пока не существует.

Если речь идет о тесте, когда сбор материала вы осуществляете у себя дома, а потом передаете его курьеру или медработнику для доставки в лабораторию, где получат результат, то да, такие тесты есть и стоят они от 5000 рублей.

Виды тестов

Ниже приведены все существующие тесты на коронавирус в 2021 году.

Тест на вероятность заболеть

Тест на склонность, предрасположенность к коронавирусу не существует.

Тесты при подозрении на коронавирусную инфекцию

На данный момент тестирование на коронавирусную болезнь происходит следующими способами:

ПЦР (полимеразная цепная реакция) с обратной транскрипцией для обнаружения нуклеиновых кислот (РНК)
Серологические тесты – иммуноферментный анализ (ИФА), иммуно-хроматографический анализ (ИХА), хемилюминесцентный иммуноанализ
Метод петлевой изотермальной амплификации нуклеиновых кислот (РНК) (LAMP)

Точность и прогнозные значения тестирования на SARS-CoV-2 систематически не оценивались, и чувствительность , вероятно, зависит от точности данных, а также от качества полученного образца биологического материала.

Нестандартные тесты

Компьютерная томография (КТ) грудной клетки – при подозрении на пневмонию. КТ грудной клетки помогает поставить диагноз, но никаких признаков, позволяющих надежно исключить или подтвердить диагноз COVID-19, нет.

У пациентов с COVID-19 наблюдались следующие отклонения лабораторных показателей:

Общий анализ крови: нормальный уровень лейкоцитов, лейкопения, лимфопения (80% +), тромбоцитопения.
Биохимический анализ крови: повышенный индекс отношения азота мочевины к креатинину, повышенный уровень АСТ, АЛТ и общего билирубина.
Маркеры воспаления: нормальный или низкий уровень прокальцитонина, высокий уровень C-реактивного белка и ферритина. 4) Другое: повышенный D-димер, интерлейкин-6 и лактатдегидрогеназа.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на антитела

Существуют тест-системы для выявления у человека антител к коронавирусу. Они позволяют понять, был ли у человека контакт с коронавирусом, переболел ли человек коронавирусной инфекцией. У людей ответ организма на вторжение вируса проявляется в виде выработки иммуноглобулина в острой стадии. В течение семи-десяти дней в организме выявляется иммуноглобулин M, а дальше иммуноглобулин G.

В тестовые наборы включены иммуноферменты – берется капля крови, добавляется специальный раствор и на тестовой полоске определяют, есть в крови иммуноглобулины или нет. Если их нет, значит, человек не перенес инфекцию или диагностика оказалась слишком ранней. Если иммуноглобулин М – значит, пациент в острой фазе, то есть инфекция есть прямо сейчас или только-только закончилась.

Если иммуноглобулин M и G или только G, значит, инфекция перенесена и выработан определенный иммунитет, есть антитела. В более широком смысле эти системы позволяют оценить коллективный иммунитет народонаселения и смотреть, насколько эффективны будут вакцины.

Тем не менее, остаются сомнения относительно полезности доступных тестов на антитела и того, насколько они заслуживают доверия для принятия клинических решений.

Данный тип тестов представлен в двух форматах: экспресс-тесты на антитела (ИХА), которые разрабатывает, например, компания DRD Biotech, и обычный иммуноферментный анализ (ИФА), который с одной стороны определяет, встречался ли человек с вирусом (есть ли антитела), с другой стороны, показывает, что у него может быть иммунитет.

Как проходят тест на коронавирус?

Берется кровь из вены или пальца. Тест проходит в течение 2-х раз. Интервал не менее 14 дней с момента последнего анализа.

ПЦР с обратной транскрипцией на наличие РНК Covid-19

В данные тестах для выявления вирусной РНК используется ПЦР с обратной транскрипцией. Процедура анализа основана на методе ПЦР – полимеразной цепной реакции. Это метод молекулярной биологии.

Для проведения анализа клетки, присутствующие в пробе, разрушаются (экстракция РНК), и из них высвобождаются фрагменты генетического материала – ДНК (происходит обратная транскрипция, то есть перевод РНК в ДНК).

Отобранную часть копируют и размножают для того, чтобы отследить конкретные фрагменты ДНК коронавируса. Если он найден, значит, в пробе присутствовал вирус. Также можно определить количество возбудителя болезни. Точность такого теста, например, от компании Generium составляет 94%.

Как проходит сдача биоматериала

Берется мазок из ротоглотки (зева), также, по желанию, из носоглотки (в США Центр по контролю заболеваемости рекомендует брать анализ из носоглотки). Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
Также могут взять пробы из нижних дыхательных путей в случае ложноотрицательного результата (у больных с продуктивным кашлем собирают мокроту. Провоцирование мокроты не рекомендуется. У интубированных пациентов берут аспират из нижних дыхательных путей или бронхоальвеолярный).

Основные правила подготовки к анализу

При сдаче мазка из ротоглотки перед сдачей анализа нужно 24 часа не пить алкоголь, 3 часа не есть, не пить и не курить, под запретом даже жвачки. Запрещено чистить зубы, полоскать горло, обрабатывать его лекарствами и антисептиками до исследования (нельзя рассасывать таблетки и леденцы) – это может дать ложный результат.

Исследование рекомендуется проводить до начала противовирусного лечения. При сдаче мазка из носоглотки рекомендуется за несколько суток не применять растворы, капли и мази для носа, которые содержат антибиотики.

В некоторых лабораториях отмечается, что можно сдать тест на коронавирус только в том случае, если у вас нет симптомов заболевания: высокой или повышенной температуры, сухого кашля, одышки. Если они есть, рекомендуется обращаться в государственную клинику по месту проживания или на горячую линию по коронавирусу.

Как проводится

Мазок из ротоглотки: Процедура получения образца биологического материала максимально проста и безболезненна, но неприятна. Ватную палочку вводят в рот и осторожно прижимают к поверхности задней стенки глотки и миндалин.
Мазок из носоглотки: Ватную палочку вводят в ноздри человека и осторожно прижимают ее к их стенкам.

Сроки анализа на коронавирус Covid-19

В связи с ажиотажным спросом на тестирование результаты анализов могут приходить с задержкой. Если тест делается в платной лаборатории, то его результат можно получить по электронной почте.

Чистое время, которое затрачивается на анализ составляет:
РНК-скрин методом петлевой изотермальной амплификации (LAMP) делается примерно от 15 минут до часа
ИФА тесты показывают наличие антител к коронавирусу примерно за 2 часа
Тесты ПЦР занимают от 2 часов до 2 дней

Положительный тест на SARS-CoV-2 обычно подтверждает диагноз COVID-19, хотя возможны ложноположительные результаты тестов – это когда результат показывает, что вирус есть, но на самом деле его нет. Также зафиксированы и ложноотрицательные результаты тестов – когда вирус есть, но он не обнаружен тестом.

К вышеобозначенному времени нужно прибавить время на доставку анализов в лаборатории, подготовительные работы, заведение результата теста в электронную систему, рассылку на электронную почту клиентов.

Вывод

Тестирование на Covid-19 в России не является обязательной процедурой для здоровых людей, у которых нет симптомов коронавируса. Проходить такой текст или нет, решать в любом случае вам.

Если у вас остались какие-либо вопросы по теме, задавайте в комментариях. Постараемся помочь.

Более десятка российских компаний уже зарегистрировали или находятся в процессе регистрации в Росздравнадзоре тест-систем на коронавирусную инфекцию.

Некоторые из тестов, как заявляют производители, дают предварительные результаты за 10–15 минут, другим же требуется несколько дней.

Одни стоят несколько тысяч, другие обойдутся в 100 рублей. По оценкам экспертов, когда эпидемия коронавируса в России достигнет пика, ежедневно будет необходимо проводить более миллиона тестов. Насколько российские производители готовы к таким объемам и как работают тесты — подробнее в нашем материале.

Тест-системы бывают двух видов. Первый и основной метод исследования на коронавирус, используемый в России сейчас, — это ПЦР (полимеразная цепная реакция), определяет генетический материал вируса. Тест можно проводить на образцах, взятых из дыхательных путей человека, полученных различными методами, включая мазок из носоглотки или образец мокроты. Тестирование занимает от нескольких часов до двух дней.

Тесты ПЦР выпускаются уже многими компаниями, и это то, что сейчас делается в лабораториях, когда доставляется образец и анализируется так называемая ОТ-ПЦР (обратная транскрипция полимеразной цепной реакции). ОТ-ПЦР-тест, проведенный с мазками из горла, надежен только в первую неделю болезни. Позже вирус может исчезнуть в горле, в то время как он продолжает размножаться в легких.

Для инфицированных людей, прошедших тестирование на второй неделе, в качестве альтернативы можно использовать материал из глубоких дыхательных путей, взятый с помощью всасывающего катетера, или же отхаркивающий материал (мокрота).

ПЦР с обратной транскрипцией

Одноцепочечную молекулу РНК в ходе реакции обратной транскрипции превращают в комплементарную ДНК и амплифицируют уже одноцепочечную молекулу ДНК, используя традиционную ПЦР. Метод ПЦР основан на многократном избирательном копировании определённого участка нуклеиновой кислоты ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Точность тестов определяется качеством выбранных реагентов. Разные производители выбирают из последовательности РНК вируса некоторый участок, который является специфичным для COVID-19 и по нему проводят реакцию.

FDA одобрило новый тест Abbott Labs, в котором вместо ОТ-ПЦР используется технология петлевой изотермальной амплификации нуклеиновых кислот (LAMP). Поскольку для этого не требуется длительных циклов чередования температур, этот метод может дать положительные результаты всего за 5 минут и отрицательные результаты за 13 минут.

В настоящее время в США насчитывается около 18 тысяч приборов для проведения LAMP, и Abbott планирует увеличить производство до 50 тысяч тестов в день.

Второй тип тестов направлен на выявление антител – то есть на ответ организма на вторжение вируса.

У нас ответ проявляется в виде выработки иммуноглобулина в острой стадии. В течение семи-десяти дней в организме выявляется иммуноглобулин M, а дальше иммуноглобулин G. Сейчас в эти наборы включены иммуноферменты — берется капля крови, добавляется буфер и на такой полоске определяют, есть в крови иммуноглобулины или нет.

Если их нет, значит, человек не перенес инфекцию или диагностика оказалась слишком ранней. Если иммуноглобулин М — значит, пациент в острой фазе, то есть инфекция есть прямо сейчас или только-только закончилась. Если иммуноглобулин M и G или только G, значит, инфекция перенесена и выработан определенный иммунитет, есть антитела.

Сегодня во всем мире насчитывается более 1,2 млн заболевших. В России, по оценкам экспертов, пик эпидемии придется на вторую половину апреля. Именно в этот период потребность в тестах будет максимально высока.

25 компаний, работающих в том числе в рамках HealthNet, уже предложили свои решения в борьбе с коронавирусной инфекцией. Среди них:

Как выявляют вирус в организме

"Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста".

Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — "чистый". Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.

Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.

В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным.

Тонкости метода

В ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.

"Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть", — отмечает ученый.

Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.

Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что пишут авторы статьи в журнале "Вестник Росздравнадзора": "В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей". Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам.

Ключевой этап — подготовка к исследованию. "За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля", — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям "Гемотеста".

Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.

"Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими", — уточняет представитель "Гемотеста".

О точности диагностики

В России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. "Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше", — подчеркивает Тамара Силкина.

"Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. "ДНК-технология" заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях", — добавляет медик.

Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.

Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.

Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они изучили записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.

"Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра "Лаборатория". — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет".

Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, "погода в доме" и так далее.

"Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о "ковидной" природе заболевания или летального исхода", — утверждает Айрат Мавзютов.

Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков "нежизнеспособных" вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках.

"Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже "мертвым", человек здоров и никому не опасен", — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.

Альтернатива ПЦР-диагностике

В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. "Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их", — считает он.

В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.

"С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР", — объясняет исследователь.

Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.

Читайте также: