Как провести выявление вирусов

Обновлено: 18.04.2024

Лабораторные исследования при инфекционных заболеваниях. Методы

Отбор проб для анализа при инфекционных заболеваниях. Для микробиологического исследования может быть отобрана любая ткань или физиологическая жидкость организма.

Выделение чистой культуры способствует увеличению количества бактерий и их точной идентификации. Для этого используют питательные среды. Если в образце присутствует нормальная микрофлора, то применяют избирательные (селективные) среды, позволяющие создать условия, неблагоприятные для роста непатогенных микроорганизмов и способствующие росту патогенной микрофлоры.

Для получения точных результатов следует выбрать оптимальный метод отбора проб и подойти к этому процессу с должной аккуратностью. При несоблюдении правил асептики контаминация проб крови микроорганизмами извне может привести к назначению неправильного лечения.

Большинство бактерий не способны существовать вне организма хозяина: облигатные анаэробы погибают под действием кислорода воздуха, а некоторые возбудители очень чувствительны к высыханию (Neisseria gonorrhoeae). Именно поэтому анализируемые образцы сразу после отбора должны быть помещены на подходящие среды или посеяны на среды для транспортировки.

Лабораторные методы исследования при инфекционных заболеваниях

Образцы могут быть проанализированы невооружённым глазом (например, для определения взрослых гельминтов в фекалиях или крови в мокроте). Микроскопия — быстрый и недорогой метод исследования, но требует высокого технического мастерства, характеризуется низкой чувствительностью: для точного определения необходимо присутствие большого количества возбудителей.

Кроме того, очень часто условно-патогенные микроорганизмы принимают за патогенные, что связано с недостаточной специфичностью метода.

Для определения возбудителя могут быть использованы различные красители (например, аурамин или окрашивание по Цилю—Нильсену для идентификации микобактерий). Уротропиновый серебряный окрашивает хитин клеточной стенки грибов и Pneumocystis jiroveci. Краситель Гимза применяют для окрашивания возбудителей малярии, лейшманий и других паразитов.

В основе иммунофлюоресцентного метода лежит применение специфических антител, помеченных флюоресцентными маркёрами. Микроскопию осуществляют в ультрафиолетовом свете, при этом возбудитель и связанные с ним антитела светятся ярко-зелёным цветом.

Лабораторные исследования при инфекционных заболеваниях

Выделение чистой культуры возбудителя при инфекционных заболеваниях

Иногда, даже при выраженных клинических симптомах, возбудитель может присутствовать в очаге инфекции в количестве, недостаточном для микроскопического определения. В этом случае выделение чистой культуры позволяет увеличить численность микроорганизмов в исследуемом субстрате.

Существует два способа выращивания микроорганизмов: на жидких (увеличивается количество возбудителей) и твёрдых (исследуют отдельные колонии, в том числе и на чувствительность к антибиотикам) питательных средах. Большинство возбудителей инфекций человека достаточно требовательны к условиям культивирования. Именно поэтому питательные среды для их выращивания должны содержать белки, сахарозу и нуклеиновые кислоты (присутствующие в крови и сыворотке).

Кроме того, необходимо поддерживать соответствующий газовый состав: для культивирования анаэробов необходимо отсутствие кислорода, в то время как для облигатных аэробов (Bordetella pertussis) — наоборот. Оптимальная температура выращивания большинства патогенных микроорганизмов составляет 37 °С; культивирование некоторых фибов осуществляют при 30 С.

Идентификация возбудителя инфекционного заболевания

Симптомы заболеваний зависят от вида возбудителей, вызвавших их. Именно поэтому идентификация микроорганизма позволяет предположить клиническую картину вызываемого им заболевания (например, симптомы инфекции, вызванной Vibrio cholerae, отличны от таковых при заражении Shigella sonnei). Большое значение имеет выделение Neisseria meningitidis именно из спинномозговой жидкости. Идентификация микроорганизмов основана на:
• изучении морфологических свойств их колоний в агаре;
• различной окраске по Граму;
• способности возбудителей к образованию спор;
• изучении биохимических свойств (каталазный или коагулазный тесты).

Точное определение штамма обычно зависит от результатов биохимического анализа (например, уреазный тест) или обнаружения продуктов жизнедеятельности бактерий (индол). Возбудителей, которые не могут быть выращены на питательных средах, идентифицируют при помощи молекулярно-генетического метода ДНК и секвенирования (например, Trophyrema whippelii).

Определение чувствительности возбудителя инфекционного заболевания к антибиотикам

Если для эрадикации микроорганизмов достаточно стандартной дозы антимикробного препарата, то их считают чувствительными, если необходимо увеличение дозы лекарственного средства — относительно устойчивыми. Абсолютно устойчивыми (резистентными) называют возбудителей, в отношении которых антибиотикотерапия неэффективна. Существует широкий спектр различных методов определения чувствительности к антимикробным препаратам.

Методы Британской ассоциации антимикробной химиотерапии (British Society of Antimicrobial Chemotherapy — BSAQ и Института клинических лабораторных стандартов (Clinical Laboratory Standards Institute — С LSI) основаны на определении диаметра зоны слабого роста микроорганизмов на твёрдой питательной среде при применении антимикробного препарата.

Минимальную подавляющую концентрацию антибиотика измеряют с помощью Е-теста, растворения препарата в питательном бульоне или нанесения его на плотный агар. В последнем случае на засеянный исследуемыми микроорганизмами агар наносят бумажные диски, пропитанные различными антибиотиками (метод бумажных дисков).

Уровень чувствительности зависит от диаметра зоны пониженного роста бактерий. Однако тестирование in vitro предоставляет лишь приблизительные данные, так как в клинической практике многое зависит от состояния больного.

Серологический анализ при инфекционном заболевании

Различные виды инфекций можно идентифицировать с помощью определения иммунного ответа, возникающего при внедрении возбудителя. Для этого существует большое количество различных методов: реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК), реакция нейтрализации (РН) и иммуноферментный анализ (ИФА). Диагноз устанавливают на основании:
• определения уровня антител (IgM) в ответ на попадание в организм чужеродного белка (антигена);
• определения антигена.

Молекулярный анализ при инфекционном заболевании

Южный блоттинг и метод гибридизации нуклеиновых кислот. Методы основаны на связывании меченой ДНК с анализируемым образцом, при условии, что он имеет определённую последовательность аминокислот. Связанный комплекс определяют по активности метки. Это достаточно быстрый и надёжный способ, который, тем не менее, уступает по чувствительности молекулярно-генетическим методам.

Метод молекулярно-генетический (NAAT)

Для диагностики инфекционных заболеваний используют несколько молекулярно-генетических методов. Механизм выделения патогенной ДНК или РНК в количестве, достаточном для постановки диагноза, для каждого метода индивидуален. Так, при молекулярно-генетическом методе ДНК возбудителя разделяют на отдельные цепи, затем синтезируют праймеры для связывания с целевыми последовательностями. Образование новой ДНК катализирует полимераза.

Основное преимущество — достижение результата даже при наличии всего лишь одной копии ДНК. Благодаря автоматизированным системам и большому выбору специальных наборов эти методы стали доступны большинству диагностических лабораторий. Новые аппараты способны выдавать результат в режиме реального времени. Генетические методы позволяют идентифицировать микроорганизмы, выращивание которых отличается сложностью или сопряжено с риском для человека (например, Mycobacterium tuberculosis и Chlamydia trachomatis).

Кроме того, их можно использовать для определения генов, кодирующих устойчивость к действию антибиотиков (например, мутационный ген rpoВ, обеспечивающий устойчивость М. tuberculosis к рифампицину). Это позволяет заранее выбрать альтернативный путь лечения инфекционных заболеваний.

Иногда необходимо проводить типирование микроорганизмов в случае их распространения в больницах или в окружающей (внебольничной) среде.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Лабораторные методы при диагностике вирусных инфекций включают:
• выделение и идентификацию возбудителя;
• обнаружение и определение титров противовирусных AT;
• обнаружение Аг вирусов в образцах исследуемого материала;
• микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.

Забор материала для выявления вирусов

При заборе материала для исследований необходимо выполнять следующие условия:
• образцы следует отбирать как можно раньше либо с учётом ритма циркуляции возбудителя;
• материал следует отбирать в объёме, достаточном для всего комплекса исследований;
• образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно (!), при относительно кратковременной транспортировке (не более 5 сут) образцы сохраняют на льду, при более длительной — при температуре -50 С.

Выделение и культивирование вирусов

Выделение и идентификация возбудителя — золотой стандарт в диагностике вирусных инфекций.

Культуры клеток для выявления вирусов

Вирусы размножаются только в живых клетках, и выделение возбудителя в заражённой культуре клеток — один из основных методов диагностики вирусных инфекций. Поскольку большинство патогенных вирусов отличает тканевая и типовая специфичность, то почти к каждому вирусу можно подобрать соответствующие клеточные или тканевые чультуры, а также создать стандартные условия культивирования (наличие клеток одного типа). Размножение вируса обеспечивают чувствительные (пермиссивные) клетки. Поэтому при выделении неизвестного возбудителя проводят одномоментное заражение 3~4 культур клеток, предполагая, что одна из них может оказаться пермиссивной. Культуры клеток получают диспергированием соответствующих органов и тканей, но чаще используют эмбриональные ткани (человека и животных) либо трансформированные опухолевые клетки. При помещении на соответствующую плоскую поверхность клеточные культуры обычно растут в виде монослоя. Первично-трипсинизированные культуры. Суспензии клеток получают гомогенизированием соответствующих тканей, предварительно обработанных трипсином. Культуры часто представлены клетками смешанного типа и не подлежат повторному культивированию. Жизнеспособность таких культур составляет 2-3 нед.

Полуперевиваемые линии клеток представлены диплоидными клетками человека и животных. Культуры ограниченно пригодны к повторному диспергированию и росту (как правило, не более 20-30 пересевов), сохраняя при этом жизнеспособность и не подвергаясь спонтанной трансформации.

Перевиваемые линии клеток (гетероплоидные культуры) представлены клетками, подвергнутыми длительному культивированию и спонтанным трансформациям. Культуры способны к многократному диспергированию и перевиванию. Работа с ними менее трудоёмка по сравнению с приготовлениями первичных культур; перевиваемые клетки относительно одинаковы по своей морфологии и стабильны по свойствам.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Количественное определение вирусов. Определение инфекционности вирусов. Выявление вирусных антигенов ( Аг ). Выявление вирусных частиц. Морфология вирусов.

Количественное определение вирусов проводят двумя путями — изучением инфекционности и количественным определением вирусных Аг. Определение титра инфекционности вирусов в значительной степени зависит от метода количественного исследования; у бактериофагов отношение инфекционность-частица составляет приблизительно 1 (то есть каждая вирусная частица способна вызвать инфекцию), для вирусов животных данное отношение составляет 1:10 (иногда выше из-за вирусингибирующего действия факторов резистентности).

Определение инфекционности вирусов

Выявление вирусных антигенов ( Аг ). Выявление вирусных частиц

Наиболее распространённый метод - реакция количественной гемагглютинации. Метод основан на способности вирусов сорбироваться на поверхности эритроцитов животных и человека. Количественную электронную микроскопию применяют для подсчёта общего числа вирусных (но не инфекционных) частиц в исследуемом объекте (например, культуральной жидкости).

Морфология вирусов

Изучение морфологии вирусов возможно лишь при помощи электронной микроскопии, однако чаще всего этот метод недоступен из-за отсутствия столь дорогого и сложного прибора. Более того, многие возбудители морфологически сходны, что снижает ценность этого метода. Наиболее распространён метод микроскопии содержимого везикул и тканевых экстрактов, обработанных красителями (негативное контрастирование), с последующим подсчётом ДНК- или РНК-содержащих вирусов. Электронная микроскопия позволяет быстро обнаружить орто- и парамиксовирусы в отделяемом дыхательных путей, герпесвирусы в жидкости везикул и рота-вирусы в фекалиях.

Правильная настройка и выполнение антивирусной проверки на вашем компьютере является одной из наиболее эффективных стартовых мер по защите вашей системы от вредоносного ПО.

В наше время, когда вредоносные программы (почтовые вирусы и подозрительные веб-сайты, которые могут заразить ваш компьютер) активно применяются злоумышленниками, сильная защита начинается с выбора антивирусного решения для и понимания того, как извлечь из него максимальную выгоду.

Что происходит во время антивирусной проверки

В качественном антивирусном продукте есть инструменты, которые помогут вам составить график автоматической антивирусной проверки вашего компьютера.

Она будет контролировать вашу систему и проверять ее на наличие вирусов, которые попадают туда через вложения в электронной почте или вследствие вашей интернет-активности, например, когда вы нажимаете ссылки для скачивания.

Программа генерирует отчеты о состоянии вашего компьютера, в которых предоставлена информация о том, что обнаружено в процессе проверки, и, если это окажется возможным, попытается устранить ущерб, нанесенный вирусом.

Комплексный антивирусный продукт автоматически загружает и устанавливает последние определения вирусов перед выполнением проверки, что гарантирует вам защиту от всех известных в настоящее время интернет-угроз.

Эта проактивная защита распознает вредоносное поведение, которое может являться сигналом о попытке заражения вашего компьютера, и нейтрализует эти попытки с самого начала.

Советы по выполнению антивирусной проверки

Современное вредоносные программы – это ПО долгосрочного действия, способное прятаться в реестрах или сервисах запуска и повторно заражать компьютер при перезагрузке, если оно не полностью уничтожено.

Поэтому частью антивирусной проверки является ваша готовность к тому, что вредоносное ПО может долго находиться в системе, и понимание того, как лучше бороться с ним. Вот несколько советов:

Начните с резервного копирования файлов вашего компьютера. Полезно выполнять регулярное резервное копирование по расписанию, чтобы в случае заражения особенно разрушительным вирусом, у вас была чистая копия, к которой можно откатиться.

И все-таки перед восстановлением любого файла следует всегда очищать резервные файлы с помощью антивирусной проверки.

Если вы хотите оценить возможности антивирусного решения, начните с бесплатной пробной версии. Она дает вам время, чтобы ознакомиться с инструментами и уровнем защиты, предлагаемыми продуктом.

Перед установкой антивирусного решения проведите быструю проверку основных компонентов системы, таких как реестр и сервисы запуска.

Если проблема обнаружена, выполните пошагово все действия по полному устранению проблемы, прежде чем пытаетесь завершить установку антивирусного решения.

Если компьютер уже заражен, многие антивирусные продукты не могут быть установлены или обновлены до полного удаления вредоносного ПО. Наиболее продвинутые программы проверяют критические компоненты системы во время начальной загрузки и удаляют любые вредоносные программы до установки программного обеспечения.

Будьте готовы отключить Интернет-соединение, если ваш компьютер подвергся заражению. Это не позволит вредоносной программе, попавшей на ваш компьютер, связаться с удаленной системой, которая будет продолжать нарушать работу вашего компьютера.

Теперь, когда ваша система проверена и очищена, установите выбранное антивирусное решение.

Убедитесь, что все обновления безопасности загружены и выполните полную проверку на вирусы. Сюда входит проверка жестких дисков, съемных носителей, системной памяти, электронной почты и пр.

Перед восстановлением данных из резервной копии сначала очистите их, выполнив проверку на вирусы.

Обязательно произведите настройки. Не останавливайтесь на одной полной проверке системы, настройте будущие автоматические антивирусные проверки. Важно проводить регулярные проверки по расписанию, чтобы обеспечить защиту вашего компьютера.

Периодически просматривайте отчеты о проверке. Этого можно не делать, но отчеты являются хорошим источником информации об уязвимости и вирусах. Следуйте инструкциям по обработке или удалению помещенных в карантин элементов.

Защита вашего компьютера от вирусов и вредоносного ПО поддерживает целостность системы и препятствует заражению других систем с вашего компьютера, но без вашего ведома. Хорошее антивирусное решение – не большая цена за защиту того, что вы храните в своем компьютере.

Статьи и ссылки по теме:

Продукты:

Как правильно провести проверку компьютера на вирусы

Правильно выполненная проверка компьютера на вирусы - одна из наиболее эффективных мер защиты системы от вредоносных программ и других угроз. Узнайте, как сделать это правильно.

Избранные статьи

Режим инкогнито и режим конфиденциального просмотра: что это такое и как ими пользоваться?

Как снизить пинг и оптимизировать скорость онлайн-игр

Как очистить кеш и удалить файлы cookie в различных браузерах

Что представляют собой отдельные законы об интернете и безопасности данных?

Соблюдение кибергигиены поможет обеспечить безопасность в сети

Продукты для дома

Наши передовые решения помогают защитить то, что для вас ценно. Узнайте больше о нашей удостоенной наград защите.

Бесплатные утилиты

Наши бесплатные утилиты помогают обеспечить защиту ваших устройств на базе Windows, Mac и Android.

Связаться с нами

Наша главная цель - обеспечить вашу безопасность. Мы всегда готовы ответить на ваши вопросы и оказать техническую поддержку.

О компании

Узнайте больше о том, кто мы, как мы работаем и почему наша главная цель - сделать цифровой мир безопасным для всех.

Пробные версии

Попробуйте наши решения. Всего за несколько кликов вы можете скачать бесплатные пробные версии нашего продукта и проверить их в действии.

Сувенирный портал Lab Shop

Вас беспокоит, что на вашем компьютере может быть вирус? Если ваш компьютер заражен, то важно знать, как избавиться от компьютерного вируса.

Из этой статьи вы узнаете все, что нужно знать о том, как работают компьютерные вирусы и о том, как удалять компьютерные вирусы.

Краткий план статьи:

Как избавиться от компьютерного вируса.
Что такое компьютерный вирус.
Как определить компьютерный вирус на вашем компьютере.
Может ли ваш компьютер заразиться вирусом через электронную почту.
Как защитить компьютер от вирусов.

Как избавиться от компьютерного вируса

В этом разделе мы обсудим, как удалить компьютерный вирус с компьютера Windows и с компьютера Mac.

Удаление компьютерного вируса с компьютера с ОС Windows

Компьютерные вирусы почти никогда не видимы. Без антивирусной защиты вы можете и не знать о существовании вируса на вашем компьютере. Вот почему важно установить антивирусную защиту на всех ваших устройствах.

Если на вашем компьютере операционной системой Windows есть вирус, вам нужно выполнить следующие десять простых шагов, чтобы избавиться от него:

Шаг 1: Загрузить и установить антивирусный сканер

Загрузите антивирусный сканер или решение класса Internet Security. Мы рекомендуем использовать Kaspersky Internet Security. Процесс его установки показан в следующем видео:

Шаг 2: Отключиться от интернета

При удалении вируса с компьютера желательно отключаться от интернета, чтобы исключить дальнейшее распространение угрозы: некоторые компьютерные вирусы распространяются через интернет.

Шаг 3: Перезагрузите компьютер в безопасном режиме

Для защиты компьютера при удалении вируса, перезагрузите компьютер в Безопасном режиме. Если вы не знаете, как это сделать, то ниже дается инструкция.

Шаг 4: Удалите все временные файлы

Следуйте следующим шагам:

Некоторые вирусы начинают действовать при перезагрузке компьютера. Удаление временных файлов может удалить вирус. Однако, полагаться только на это не надежно. Чтобы убедиться, что ваш компьютер свободен от вирусов, рекомендуем выполнить следующие шаги.

Шаг 5: Запустите сканирование на вирусы

Теперь пора открыть ваш антивирус или решение класса Internet Security и запустить сканирование на вирусы. Если вы используете Kaspersky Internet Security, выберите и нажмите на кнопку ‘Запустить проверку’ (Scan).

Шаг 6: Удалите вирус или поместите его в карантин

Шаг 7: Перезагрузите компьютер

Шаг 8: Поменяйте все пароли

Чтобы защитить компьютер от дальнейших атак, поменяйте все пароли на тот случай, если они скомпрометированы. Это обязательно, только если у вас есть причина считать, что ваши пароли украдены вредоносной программой, но перестраховаться не мешает в любом случае.

Функционал вируса вы всегда можете проверить на веб-сайте производителя вашего антивируса или связавшись с их группой технической поддержки.

Шаг 9: Обновите ваше ПО, браузер и операционную систему

Обновление ПО, браузера и операционной системы снизит риск эксплуатации киберпреступниками брешей в старом коде для установки вредоносных программ на вашем компьютере.

Удаление компьютерного вируса с компьютера Mac

Если у вас компьютер Mac, вам может казаться, что ваш компьютер не может заразиться вирусом. К сожалению, это заблуждение. Для Mac, по сравнению с Windows, создается меньше вирусов, но они существуют.

Некоторые Mac-вирусы маскируются под антивирусные продукты. Если вы случайно скачали один из таких вирусов, то ваш компьютер может быть заражен. Вот три примера вирусов такого типа: ‘MacDefender’, ‘MacProtector’ и ‘MacSecurity’.

Если вам кажется, что на вашем компьютере Mac завелся вирус, нужно выполнить следующие шесть шагов, чтобы удалить его:

Чтобы проверить, что вы ничего не пропустили, и убедиться в защите вашего Mac, рассмотрите вариант установить и запустить антивирусное решение, если его у вас уже нет. Мы рекомендуем использовать комплексное решение класса Internet Security, такое как Kaspersky Total Security.

Что такое компьютерный вирус?

Компьютерный вирус – это вид вредоносного ПО, отличительной чертой которого является его самовоспроизведение – он копирует себя на любой носитель, который подключается к компьютеру.

Компьютерные вирусы так называются из-за того, что, по аналогии с настоящими вирусами, они способны самовоспроизводиться. После того, как вирус заражает ваш компьютер, он распространяет себя таким образом. При заражении вирусом компьютер может начать работать медленнее, возможны перебои в его работе.

Существует три основных пути, которыми ваш компьютер может заразиться компьютерным вирусом.

Во-первых, компьютер может заразиться через съемные носители, такие как USB-флешки. Если вы вставите в компьютер флешки или диск, полученный от неизвестных источников, то он может содержать вирус.

Иногда хакеры оставляют зараженные флешки или диски на рабочих столах людей или в публичных местах, например, в кафе, с расчетом распространить таким образом компьютерный вирус. Люди, которые совместно используют USB-носители, также могут переносить таким методом файлы с зараженного компьютера на незараженный.

Другой способ заражения компьютера вирусом – это скачать вирус из интернета.

Если вы загружаете ПО или приложения на ваш компьютер, обязательно берите их из доверенных источников, таких как Google Play или App Store у Apple. Не загружайте ничего из всплывающих окон или с веб-сайтов, о которых ничего не знаете.

Признаки того, что на вашем компьютере есть вирус

Есть несколько признаков того, что на вашем компьютере завелся вирус.

Во-первых, вас должно насторожить, если ваш компьютер стал тормозить. Если задачи выполняются дольше, чем обычно, то возможно, ваш компьютер заражен.

Во-вторых, будьте внимательны при появлении на компьютере подозрительных приложений или программ, о которых вы ничего не знаете. Если вы заметили, чтобы на компьютере появилось приложение или программа, которую вы не скачивали, будьте осторожны.

Желательно удалить все программы на компьютере, которые вам неизвестны, а затем запустить сканирование в антивирусе или защитном устройстве класса Internet Security, чтобы проверить компьютер на наличие угроз. Если при закрытии браузера возникают всплывающие окна – это верный признак того, что компьютер заражен вирусом. Если вы заметите такое, сразу же примите меры, чтобы удалить вирус. Для этого следуйте инструкциям, данным выше.

Еще один признак возможного заражения компьютера вирусом – это странности в работе приложений или программ. Если программы стали завершаться аварийно по непонятной причине, то, возможно, на вашем компьютере завелся вирус.

И наконец, зараженный компьютер может начать перегреваться. Если вы заметите такое, проверьте компьютер на вирусы, запустив антивирус или защитное решение класса Internet Security.

Как компьютер может заразиться вирусом через электронную почту?

Как защитить компьютер от вирусов

Вот основные способы, которые позволят вам защитить компьютер от вирусов:

Как работают компьютерные вирусы?

На вашем компьютере обнаружился вирус? Узнайте, как избавиться от компьютерного вируса, как проверить, не заражен ли ваш компьютер вирусами, и можно ли получить компьютерный вирус через почту.

Избранные статьи

Риски безопасности и конфиденциальности в виртуальной и дополненной реальности

TrickBot – многоцелевой ботнет

Основные атаки программ-вымогателей

Что такое глубокий и теневой интернет?

Как защитить детей в интернете во время коронавируса

Продукты для дома

Бесплатные утилиты

Наши бесплатные утилиты помогают обеспечить защиту ваших устройств на базе Windows, Mac и Android.